NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）对角膜移植大鼠角膜组织的影响

目的　探讨核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）对角膜移植大鼠角膜组织的影响。方法　取14只Wistar大鼠为供体鼠，提供双眼角膜；28只SD大鼠为受体鼠，均以左眼为术眼，右眼设为正常对照，在显微镜下进行同种异体角膜移植术。手术完成后将28只SD大鼠随机分为3组，对照组（10只）以生理盐水滴左眼，实验组（10只）以1 mg·mL^-1 PDTC滴左眼，均为每天3次，每次1滴，空白组（8只）不做任何处理。术后第1天起，每组分别在术后第5天、第15天、第25天在裂隙灯下观察角膜新生血管的情况并进行评分。对各组角膜植片进行病理学及免疫组织化学染色观察，分析各组大鼠NF-κB及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在角膜植片的表达情况。结果　对照组、实验组、空白组角膜移植排斥反应发生的时间分别为（10.80±1.40）d、（23.40±2.30）d、（11.20±2.06）d，实验组排斥反应发生的时间较对照组明显延长，差异有统计学意义（P<0.01）。对照组新生血管一般术后第3~5天出现，并很快进入植片周边，沿缝线处向角膜植片中央粗大生长。实验组新生血管一般术后第5~7天出现，生长速度较慢，血管稀疏。术后不同时间实验组新生血管数、新生血管面积及排斥反应指数均小于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。角膜移植术后，实验组大鼠角膜上皮基底细胞内出现较多空泡，角膜基质层内出现间质水肿；炎症细胞浸润，并见新生的毛细血管；缝线及切口周围见大量淋巴细胞浸润，部分植片中央发生散在的炎症细胞浸润、角膜上皮部分脱落。对照组角膜植片水肿及炎症细胞的浸润程度较实验组明显增加，且对照组角膜植片显著增厚，基质结构疏松、紊乱；实验组角膜植片相对基质板层结构排列有序，新生血管数在相同时间内明显减少。免疫组织化学染色显示，NF-κB阳性细胞数，实验组为每400倍视野（4.236±0.856）个，较对照组［（18.451±1.234）个］明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）；空白组大鼠角膜内鲜有阳性表达。VEGF阳性细胞数，实验组为每400倍视野（2.631±0.238）个，较对照组［（6.254±0.721）个］明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）；空白组大鼠角膜内鲜有阳性表达。结论　大鼠进行同种异体角膜移植术后，NF-κB抑制剂PDTC可在一定程度上减少角膜新生血管的生成，抑制角膜移植排斥反应的发生。     

10g·L-1聚维酮碘对大鼠眼表结构和泪膜稳定性的影响

目的 评估聚维酮碘对大鼠眼表结构和泪膜稳定性的影响.方法 30只SD大鼠左眼使用生理盐水滴眼为A组,右眼使用10 g·L-1聚维酮碘滴眼为B组,均为每天2次,分别在干预前和干预后2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d用裂隙灯观察角膜形态,并计算泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌量、角膜荧光素染色评分和炎症指数以评...     

Bevacizumab对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的 观察bevacizumab对角膜新生血管的抑制作用.方法 选取鼠龄6～8周、体质量(180±10)g的雄性Wistar大鼠40只,建立碱烧伤角膜新生血管模型;将大鼠随杌分为3个不同剂量药物治疗组(实验组)和1个对照组,每组10只(20眼),大鼠角膜碱烧伤后分别给予结膜下注射不同剂量(0.5 mg、1.0 mg、2.0 mg)的bevacizumab,对照组注入生理盐水;然后进行角膜新生血管的各项数据观察,观察期为16 d,主要观察项目包括各组角膜新生血管的生长情况;计算角膜新生血管的生长面积;碱烧伤后第7天和第16天后采集角膜,标本行组织病理学检测和免疫组织化学检测,第16天,计算平均OD值;评价药物对角膜新生血管的抑制效果.结果 碱烧伤后第7天、第14天,实验组与对照组新生血管面积比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05);组织病理学检测发现各实验组炎性细胞浸润、新生血管形成均明显轻于对照组.对照组血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)染色明显增强,实验组的表达明显减弱.碱烧伤后第16天,实验组与对照组比较,VEGF染色阳性细胞数和VEGF平均OD值差异均有统计学意义(均为P＜0.05).碱烧伤后第7天、第16天大鼠角膜CD34的免疫组织化学检测结果及新生血管密度计数方面,实验组和对照组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 结膜下注射一定浓度的bevacizumab对大鼠角膜碱烧伤后的新生血管生长有抑制作用.     

间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎视网膜中白细胞介素17表达的影响

背景 研究显示Th17细胞是实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发病的重要致炎细胞群,而白细胞介素17( IL-17)作为Th17细胞的标志性因子参与了EAU的发生与发展.间充质干细胞(MSCs)作为一种免疫调节剂在多种自身免疫性疾病中对Th17具有抑制作用. 目的 研究MSCs对EAU的治疗作用以及对IL-17在大鼠视网膜表达的影响.方法 从10只SPF级Wistar大鼠股骨骨髓中分离、培养MSCs并进行传代,第3～5代细胞用于实验.54只SPF级6～8周龄Lewis大鼠按随机数字表法分为实验组48只和正常对照组6只.光感受器间维牛素A类结合蛋白(IRBP)与含有结核杆菌素HR37a的2.5 g/L弗氏完全佐剂(CFA)等体积混合后行实验组大鼠单后足垫皮下注射建立EAU动物模型,然后按照分层随机原则分为模型对照组和MSCs治疗组,每组24只大鼠.MSCs治疗组于造模的同时行1 ml MSCs尾静脉注射(5×106个／ml),连续注射3d,模型对照组以同法注射等体积PBS.注射后每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部炎症反应,并根据Caspi临床分级进行评分.分别于造模后9、12、15、20 d随机选取模型对照组和MSCs治疗组各6只大鼠制备视网膜切片,采用组织病理学方法观察大鼠视网膜形态学改变和炎症反应,参照Caspi组织学分级法进行评分.采用免疫组织化学染色法检测造模后9、12、15、20d大鼠视网膜中IL-17的表达.结果 培养的细胞呈梭形生长,漩涡状排列,经流式细胞术鉴定CD29、CD44表达阳性,CD45、CD34表达阴性.MSCs治疗组造模后9、12、15、20 d眼前节炎症反应评分均低于模型对照组(U=2.815,P=0.005;U=2.768,P=0.006;U=2.900,P=0.004;U=2.855,P=0.004),视网膜组织学检测炎症评分均低于模型对照组,差异均有统计学意义( U=2.345,P=0.019:U=2.559,P=0.011;U=2.166,P=0.030;U=2.373,P=0.018).免疫组织化学染色显示,MSCs治疗组造模后9、12、15、20d大鼠视网膜IL-17蛋白阳性表达的平均吸光度(A)值分别为26.47±5.68、77.78±9.65、47.02±6.68和26.59±5.94,明显低于模型对照组的45.34±4.63、105.95±10.74、64.11±9.76和37.02±6.51,差异均有统计学意义(t=6.305,P=0.000:t=4.799,P=0.001:t=3.540,P=0.005;t=2.900,P=0.016).结论 MSCs能减轻EAU的程度并抑制EAU的进展,降低了1L-17在眼组织中的表达.     

实验性自身免疫性葡萄膜炎眼球中自然杀伤细胞的致炎作用及其机制

背景 实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)是葡萄膜炎常见的动物模型,自然杀伤(NK)细胞是一种强烈的致炎细胞,但其在EAU中的作用及其机制仍有待研究. 目的 探讨EAU模型大鼠不同发病阶段视网膜组织中NK细胞的定位和分布及其机制.方法 将36只SPF级Lewis大鼠应用随机数字表法随机分成对照组和造模后第6、9、12、16、21天组,每组各6只.造模后第6、9、12、16、21天组大鼠采用光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)联合5 mg/ml结核杆菌和完全福氏佐剂(CFA)乳化液双后足垫皮下注射,然后腹腔内注射400 ng百日咳毒素免疫大鼠建立EAU大鼠模型.对照组大鼠双后足垫皮下注射生理盐水与等容量CFA乳化液,然后腹腔内注射400 ng百日咳毒素.造模后每天用裂隙灯显微镜观察大鼠眼前段炎症反应过程,根据Caspi方法进行眼部炎症症状评分.分别于造模后第6、9、12、16、21天摘取各组大鼠眼球,采用苏木精-伊红染色法检测各组大鼠视网膜炎症反应和组织结构形态学改变;采用免疫荧光双标法检测大鼠视网膜中NK细胞的分布及浸润情况.另取25只Lewis大鼠应用随机数字表法随机分为造模后第0、3、6、9和12天组,每组5只大鼠,电动匀浆机破裂组织并匀浆为眼内液,采用实时荧光定量PCR法检测大鼠眼内液中NK细胞趋化因子CXCL10 mRNA和CXCL12 mRNA的表达. 结果 对照组大鼠眼前节未发现炎症反应.造模后第6天组大鼠虹膜血管扩张,随着造模后时间延长虹膜血管扩张明显,前房逐渐出现渗出或积脓,造模后第12天炎症反应达峰.视网膜组织病理学检查显示,对照组大鼠视网膜组织结构排列整齐,各EAU模型组大鼠造模后随时间延长均出现不同程度的视网膜结构排列紊乱,外核层细胞分离,层间组织松散,视细胞水肿且有炎性细胞浸润,以造模后第12天组最为严重.免疫荧光双标记显示对照组仅见蓝色标记的细胞核,视网膜各层细胞排列规则;造模后第6天组开始可见大鼠视网膜内层大量NK细胞浸润,呈红色荧光,随时间延长逐渐增加,造模后第9天组NK细胞浸润达峰.造模后第9天组大鼠视网膜中CXCL10 mRNA相对表达量为34.298±16.689,明显高于造模后第3、6、12天组的1.390±0.660、3.359±2.581和4.711±1.387,差异均有统计学意义(均P＜0.01);各组大鼠视网膜中CXCL12 mRNA相对表达量的总体比较差异无统计学意义(F=2.851,P＞0.05). 结论 EAU大鼠发病早期视网膜中NK细胞浸润,其严重程度和视网膜中CXCL10的表达动态与EAU炎症发展过程相吻合,提示NK细胞在EAU的早期炎症过程中发挥重要作用,CXCL10是NK细胞的主要趋化因子.     

羟基磷灰石眶内植入物血管内皮细胞生长因子的表达

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)眶内植入物纤维血管化形成的相关性,以及地塞米松抑制羟基磷灰石植入物纤维血管化的机制。方法:家兔20只随机分为实验组与对照组,每组10只;各组均采用HA植入物植入兔眼眶。术后滴妥布霉素滴眼液4次/d,实验组术后48h起隔日球周注射地塞米松0·5mg和实验结束,并观察两组的结膜生长情况;实验组与对照组分别于术后3,7,14,21,28d摘取2只HA植入物行免疫组织化学检测VEGF阳性表达情况。结果:羟基磷灰石植入物纤维血管化与VEGF的表达存在显著的相关性。术后14d,实验组HA炎性细胞浸润明显减少,实验组VEGF表达明显低于对照组。结论:羟基磷灰石植入物纤维血管化与炎症反应密切相关,VEGF可能参与了纤维血管化形成过程,地塞米松可能通过抑制植入物的炎症反应及VEGF的表达。     

IL-17在实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠模型眼部的表达

目的研究IL-17阳性细胞在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠模型眼部的表达。方法用光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）和氟氏完全佐剂等量混合注射于20只Lewis大鼠的右后足底部为实验组,于建模后第7、10、11、12、13、14、21、28天用裂隙灯显微镜进行眼前节检查,并根据de Smet的标准对炎症进行分级。用0.3 mL肝素（5 000 U/mL）注射至左心室以抗凝血,然后取眼球制作冰冻切片。免疫组织化学染色观察IL-17多克隆抗体在眼组织中的表达,5只正常Lewis大鼠作为对照。结果用IRBP免疫Lewis鼠后第10天,裂隙灯显微镜下可见眼前节炎症表现,免疫后第7、14、21、28天各组大鼠眼部炎症平均得分为0.4、3.2、1.6和0.2。实验组大鼠眼组织切片的苏木精-伊红染色可见炎性细胞浸润和光感受器细胞破坏。免疫组织化学染色发现,实验组虹膜、睫状体和视网膜部位可见IL-17蛋白表达,而正常组未见IL-17蛋白表达。第7、14、21、28天各组大鼠眼部组织切片染色的平均得分分别为0.6、4、2、0.4。EAU大鼠眼部炎症表现的严重程度与IL-17的表达量呈正相关（r=0.968,P〈0.01）。结论IL-17蛋白在Lewis大鼠EAU模型中呈高表达,表明IL-17阳性表达细胞在EAU的发病过程中起一定作用。     

氟桂嗪对大鼠视网膜光化学损伤NO水平的影响

目的通过检测氟桂嗪对大鼠视网膜光损伤一氧化氮(nitric oxide,NO)水平的影响来探讨视网膜光损伤的发病机制及药物防护.方法40只S.D(Sprague Dawley)健康大鼠,体重200～220 g,随机分成对照组及实验组、对照组20只平均分配到光照前及光照后24h,6 d,10 d 4个时间点,实验组20只大鼠采取同样的分配方法.光照前12 h对照组大鼠耳缘静脉注入40%聚乙二醇,实验组大鼠耳缘静脉注入氟桂嗪20mg/kg(溶于40%聚乙二醇),光照开始前两组再次分别注入相同剂量的上述两种药物后光照开始,两组共30只大鼠经手术显微镜灯泡连续照射1 h,于光照前及光照后三个时间点急性处死大鼠进行视网膜NO含量的检测.结果对照组视网膜光损伤后NO水平在各时间点均较光照前增高,差异有显著性意义(t=13.17,12.21,11.98,均P＜0.01),实验组视网膜光损伤后各时间点亦较光照前增高,但增高缓慢,光照前24h及6 d差异有显著意义(t=7.03,10.74;均P＜0.01),10 d时差异亦有意义(t=2.90;P＜0.05),实验组与对照组比较,光照前两组差异无意义(t=0.58;P＞0.05),光照后两组间同一时间点比较实验组较对照组NO含量降低,差异有显著意义(t=8.13,5 76,8.88;均P＜0.01).结论氟桂嗪可抑制光化学损伤后NO含量的升高,这对视网膜的光化学损伤可能起到改善作用.     

基质金属蛋白酶抑制剂GM-6001对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用

目的:研究基质金属蛋白酶抑制剂GM-6001对大鼠角膜碱性烧伤后角膜新生血管的抑制作用。方法:取健康成年Wistar大鼠20只,随机分成实验组和对照组,每组10只。两组均建立大鼠角膜碱性烧伤模型。实验组滴用GM-6001滴眼液、氧氟沙星滴眼液和硫酸软骨素滴眼液;对照组滴用氧氟沙星滴眼液和硫酸软骨素滴眼液;各种滴眼液每日点眼4次,共7d。裂隙灯下观察角膜溃疡和角膜新生血管生长情况。结果:碱烧伤后实验组和对照组出现新生血管的时间无显著差异(P>0.05)。新生血管的生长长度与生长面积,在伤后1d和3d,实验组和对照组无显著差异(P>0.05);在伤后5d和7d,实验组和对照组有显著差异(P<0.05)。结论:基质金属蛋白酶抑制剂GM-6001点眼对角膜新生血管的生长有抑制作用。     

肉毒杆菌B诱导大鼠干眼模型中泪腺炎症因子表达研究

目的: 建立肉毒杆菌B诱导大鼠炎症干眼模型,通过观察泪腺炎症因子表达变化为干眼病实验研究提供实验依据。方法: 健康8周龄雌性SD大鼠,30只,随机分为2组,20只为实验组,10只为对照组。右侧泪腺注射肉毒杆菌B0.1mL(20mU),生理盐水0.1mL。分别于实验前1d及实验后第3d;1,4,6wk,观察基础泪液分泌量、角膜荧光染色,并且酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泪腺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)变化。结果: 术后实验组从第3d时出现泪液分泌减少,4wk达到高峰,6wk后恢复;角膜荧光染色第3d时出现,持续6wk;泪腺组织IL-1β从第3d开始出现增加,持续6wk;TNF-α表达水平未增加,MIF检测从第4wk开始表达增加,持续6wk。结论: 泪腺注射肉毒杆菌B可以成功诱导大鼠炎症干眼模型,炎症因子的表达变化具有一定的特征性,为干眼病实验提供较理想的动物模型。     

Treatment of retinal detachment of the course of retinopathy of prematurity

Cryo- and laser therapy of stage 3 have reduced, but not eliminated the occurrence of retinal detachment in stages 4a, 4b and 5 of ROP. In this disease the treatment of these stages is still the greatest challenge to the ophthalmologist. Therefore, the aim of this paper is to present our up-to-date possibilities of treatment of different kinds of retinal detachments in ROP, including segmental scleral buckling, encircling scleral buckling, scleral resection, vitrectomy and its modifications in ROP. Guidelines of surgery of retinal detachment in active stage 4 and 5 of retinopathy of prematurity have been described.     

Analysis of some of the possible neonatal risk factors of development of retinopathy of prematurity

PURPOSE: The aim of the study was to evaluate some of the possible risk factors for retinopathy of prematurity (ROP) treated with laser photocoagulation or cryocoagulation. MATERIAL AND METHODS: The study comprised 71 preterm infants with ROP needing treatment and 118 prematures without ROP or with ROP requiring no treatment, as a control group. All infants were born with gestational age < or = 32 weeks and birth weight < or = 1500g. The perinatal variables, including some of clinical data, the length of mechanical ventilation as well as continous positive airway pressure (CPAP), duration of total parenteral nutrition and some of laboratory data were analyzed, to evaluate their correlation with the development of ROP. RESULTS: Gestational age before 28 weeks (OR = 5.11), episodes of convulsiones (OR = 2.15), mechanical ventilation for more than 20 days (OR = 5.86) and > 30 days (OR = 7.47), CPAP for more than 5 days (OR = 4.15) and > 10 days (OR = 2.84), total parenteral nutrition for more than 10 days (OR = 7.84) and > 20 days (OR = 9.02) and elevated peak of alanine aminotransferase (AIAT) levels (OR = 3.17) were significant risk factors for ROP requiring treatment. CONCLUSIONS: The opthalmic examination for retinopathy of prematurity requiring laser photocoagulation or cryocoagulation should be obligatory for prematures born < or = 32 weeks of gestational age, with birth weight < or = 1500 g.The frequency of the consecutive ophthalmic examinations depends on the severity of prematurity and on the presence and intensification of the risk factors for ROP.     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。