补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒作用的初步研究

目的：初步探讨补肾健脾方的抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法：通过补肾健脾方作用于体外培养的2．2．15细胞，观察其对2．2．15细胞两抗原分泌的影响，初步评价其抗HBV作用。结果：补肾健脾方作用于2．2．15细胞10d后，药物对2．2．15细胞的半数毒性浓度为37．80g/L，对HBsAg、HBeAg的半数抑制浓度分别为19．05g/L和9．55g/L，治疗指数分别为1．98和3．96。结论：补肾健脾方在体外细胞培养中对HBeAg的分泌有较好的抑制作用。     

叶下珠复方Ⅱ号抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 评价叶下珠复方Ⅱ号体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法观察不同浓度叶下珠复方Ⅱ号对体外培养的2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响。结果叶下珠复方Ⅱ号对2．2．15细胞的半数毒性浓度（TC50）为16．94mg／ml,对HBsAg和HBeAg的半数有效浓度（IC50）分别为7．82、7．60mg／ml,治疗指数分别为2．17、2．23。结论叶下珠复方Ⅱ号对2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg有较好的抑制作用。     

黄芪提取物的体外抗乙肝病毒作用

目的 研究黄芪提取物抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法 采用ELISA法观察两种黄芪提取物黄芪总苷(AST)、黄芪多糖(ASP)对HBV—DNA转染的HepG2-2．2．15细胞分泌表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)影响，同时用^3H—TdR掺人法检测HepG2-2．2．15细胞增殖。结果 AST(40、80、160mg／L)、ASP(256、512mg／L)对HBsAg、HBeAg分泌有抑制作用，ASP(128mg／L)还可以抑制HBsAg分泌。AST(40、80、160mg／L)、ASP(128、256、512mg／L)可抑制HepG2-2．2．15细胞的增殖。抑制HepG2-2．2．15细胞分泌HBeAg、HBsAg和细胞增殖的半数有效浓度(EC50)，AST为88．14、92．07、32．81mg／L，ASP为350．59、354．38、139．55mg／L。结论 AST、ASP在体外实验中有抗HBV和抑制HepG2-2．2．15细胞增殖的作用，AST作用优于ASP。     

叶下珠复方在体外细胞培养中抗HBV活性的研究

目的体外观察叶下珠复方抗HBV作用。方法以不同．农度的药物作用HePG2．2．15细胞，收集培养上清，用ELISA法测定HBsAg、HBeAg，并计算药物对抗原的抑制率、半数有效浓度（IC50）和治疗指教（TI），用荧光定量PCR测定HVB—DNA。结果在半数毒性浓度下，叶下珠复方浓度为250μg／ml、125μg／ml、62．5μg／ml、31．25μg／ml、15．6μg／ml时对HePG2．2．15细胞分泌HBsAg的抑制率分别为54．8％、43．6％、37．4％、26．7％、14．6％，其Ⅱ值为6．1；对HBeAg的抑制率分别为78．6％、72．9％、67．1％、56．8％、51．5％，其11值为24．6。叶下珠复方对HePG2．2．15细胞分泌的HBV—DNA有直接抑制作用，随着药物浓度的增加，HBV—DNA定量逐渐降低。结论叶下珠复方在体外显示具有抗HBV作用。     

小叶榕水提物对HBsAg和HBeAg体外抑制作用的实验研究

目的：观察小叶榕水提物对2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响,探讨小叶榕水提物体外抗HBV作用。方法：通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察小叶榕水提物对2．2．15细胞的影响,采用ELISA法检测分析小叶榕水提物对2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用。结果川、叶榕水提物对2．2．15细胞的半数毒性浓度为0．263mg／ml,该浓度对HBsAg、HBeAg的抑制率分别达87．7％、93．6％,治疗指数分别为2．25和2．31。结论：小叶榕水提物有较好的体外抑制HBV作用,具有潜在的抗HBV开发前景。     

苦参碱脂质体抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的评价苦参碱脂质体的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法通过苦参碱脂质体、苦参碱作用于体外培养的2.2.15细胞,观察和比较二者对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响及药物的细胞毒性,初步评价苦参碱脂质体的抗HBV作用。结果苦参碱脂质体、苦参碱作用于2.2.15细胞11 d后,对细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为7.29mg/ml和1.33rage/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(IC50)分别为0.078 mg/ml、3.35mg/ml、<0.078mg/ml和>10mg/ml,苦参碱脂质体对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为93.46和2.17,高于苦参碱的治疗指数。结论苦参碱脂质体在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,可以提高苦参碱的抗HBV作用。     

抑毒调平液抗乙型肝炎病毒体外实验研究

目的：研究抑毒调平液在2．2．15细胞培养中抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法：用2．2．15细胞体外培养，对抑毒调平液抗HBV活性进行评价。结果：抑素调平液对2．2．15细胞HBsAg和HBeAg分泌的抑制率分别在19．64％－57．93％和21．31％－60．22％之间，该抑制呈剂量依赖性。药物对HBsAg、HBeAg的治疗指数分别为3．27、3．64。药物处理的2．2．15细胞培养上清液HBV DNA量明显降低，亦呈剂量依赖性。结论：抑毒调平液在体外细胞培养中对HBsAg、HBeAg及HBV DNA的分泌均有较好的抑制作用。     

徐长卿水提物抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的初步探讨徐长卿水提物的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用.方法通过徐长卿水提物作用于体外培养的2.2.15细胞株,观察其对2.2.15细胞株分泌HBsAg和HBeAg的影响,以初步评价其抗HBV作用. 结果徐长卿水提物作用于2.2.15细胞株12d后,对2.2.15细胞株的半数毒性浓度为62.65g/L,对HBsAg的半数抑制浓度小于0.78 g/L、对HBeAg的半数抑制浓度为10.13 g/L;对HBsAg治疗指数大于80.32,对HBeAg治疗指数为6.18.结论徐长卿水提物在体外细胞培养中对两抗原的分泌有较好的抑制作用.     

黄芪提取物对乙型肝炎病毒抗原表达的抑制作用

目的探讨黄芪提取物对乙型肝炎病毒（HBV）病毒抗原表达的抑制作用。方法用MTT法测定黄芪提取液在不同浓度下对HepG2．2．15细胞的细胞毒性,ELISA法检测黄芪提取物对HepG2．2．15细胞分泌HBsAg、HBeAg颗粒的影响。结果黄芪提取物对HepG2．2．15细胞4d和8d的半数毒性浓度（TC50）分别为88．914μg／ml和85．209μg／ml（P〉0．05）,对HBeAg4d和8d的治疗指数（TI）分别为1．018和1．342（P〉0．05）,对HBsAg4d和8d的治疗指数分别为0．065和0．089（P〉0．05）。结论黄芪提取物抑制HepG2．2．15细胞分泌HBeAg的作用为低效有毒,黄芪提取物对HBsAg抗原分泌无明显抑制作用。     

黄芪甲甙体外抗乙型肝炎病毒的作用

目的：探讨黄芪甲甙对乙型肝炎病毒（HBV）的体外抑制作用．方法：以HepG2．2．15细胞株为细胞模型,分别加入不同浓度的黄芪甲甙和拉米夫定,于培养第3,6和9日收集培养上清液．通过MqT法观察药物对HepG2．2．15细胞株的影响,采用ELISA法及荧光定量PCR法,分析药物对细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg及HBVDNA含量的影响．结果：黄芪甲甙具有一定程度的抗HBV的作用．黄芪甲甙给药9d,其HBsAg的50％抑制浓度（Ic50）为22．1mg／L,治疗指数（TI）为4．4;HBeAg的IC50为26．2mg／L,TI为3．72;细胞外HBVDNA的IC50为13．2mg／L,TI为7．4．拉米夫定也有抑制HBV的作用,但抑制作用较弱．结论：黄芪甲甙体外对HBV有抑制作用．     

复方叶下珠胶囊体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

目的研究复方叶下珠胶囊的体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法将HepG2.2.15细胞分为空白对照组、阳性对照组和不同浓度的复方叶下珠胶囊组,用CCK-8检测细胞毒性,酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBsAg和HBeAg;荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞内、外的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）。结果复方叶下珠胶囊有明显的抗HBV作用,尤其当浓度为50mg/mL时,减少血清中的HB-sAg作用与拉米夫定组相当;当浓度为25 mg/mL,50mg/mL,和100mg/mL时,减少血清中HBeAg作用优于拉米夫定组;但是降低细胞内外的HBV DNA含量方面,与拉米夫定组无明显差别。结论体外试验中,复方叶下珠胶囊具有抗HBV作用。     

仙草抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的：观察仙草体外抗乙型肝炎病毒（HBⅥ的活性。方法：以HepG2．2．15细胞株为模型,用微粒酶免疫测定技术（MEIA）检测细胞培养上清液中FIBsAg、HBeAg含量,用PCR荧光定量技术检测细胞上培养上清液中HBVDNA的变化,以MTT比色法观察药物的细胞毒性。结果：仙草对HepG2．2．15细胞的Tc50为37．45mg／mL,对抑制HepG2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的治疗指数分别为14．71和39．42。对HBV—DNA仅有微弱抑制作用。结论：仙草在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。     

复方叶下珠滴丸体外抗乙肝病毒的初步实验研究

目的观察复方叶下珠滴丸体外的抗乙肝病毒作用。方法将复方叶下珠滴丸试药稀释后,分别加入HepG2．2.15细胞培养液和HBsAg阳性人血清中,于37℃5％CO2培养箱孵育后,收取上清液,采用ELISA法及荧光定量PCR法,分析药物对细胞培养上清液和人血清培养液中HBsAg、HBeAg及HBVDNA含量的影响。结果复方叶下珠滴丸体外对HBsAg、HBeAg和HBVDNA有不同程度的抑制作用,抑制效果最好浓度为120mg／mL,时间为72h。结论实验结果证明复方叶下珠滴丸具有明显的．体外抗乙肝病毒作用。     

拉米夫定等六种药物的体外抗乙型肝炎病毒作用

目的：观察拉米夫定（3TC）等6种药物对抗乙型肝炎病毒（HBV）体外药效评价及不同指标之间的关系。方法：利用乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2．2．15细胞,检测细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg)及乙肝病毒DNA（HBV－DNA）的含量作为药物抗HBV效果的观察指标。结果：（1）6种药物在一定浓度范围内对2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg抑制作用很弱或无抑制;（2）HBV－DNA定量检测拉米夫定和2′3′－二脱氧－3－氟鸟苷（FLG）对HBV DN水平有明显抑制作用,其半数有效剂量（IC50）分别为0．31μmol/L,0．53μmol/L,阿昔洛韦（ACV）和α－干扰素（α-IFN）之IC50分别为0．33mmo/L、96．18U／ml,膦甲酸钠（PFA）和利巴韦林（RBV）最大无毒浓度无任何抑制作用。结论：抑制HBsAg与HBeAg的病毒蛋白表达活性与抑制HBV DNA活性无一致相关性,以HBV DNA指标更能反映化合物的抑制作用。     

乙型肝炎病毒 P区RNA干扰抑制2.2.15细胞乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原分泌的实验研究

目的观察针对乙型肝炎病毒（HBV）P区基因的RNA干扰（RNAi）表达载体pGE—HBVP在HepG2．2．15（2．2．15）细胞中抑制HBV表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）的分泌效应,以阐明HBVP区小干扰RNA（siRNA）抑制HBV复制和蛋白表达的影响。方法构建并鉴定pGE—HBVP,将此载体转染至完整HBV复制模型2．2．15细胞,用化学发光免疫检测法检测并分析转染后不同时间段细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量变化,并用免疫细胞化学方法观察转染后细胞中HBsAg的表达变化。结果成功构建了5个针对HBVP区的RNAi表达载体pGE—HBVP1～pGE—HBVP5,其中pGE—HBVP1和pGE—HBVP2具有明显的HBsAg和HBeAg分泌抑制效应和表达抑制效应。抑制率最高的pGE—HBVP2在转染2．2．15细胞效率为30％～40％的基础上,转染后24、48、72和96h培养上清中的HBsAg分泌抑制率分别为28．88％、32．28％、29．10％和18．42％,HBeAg的分泌抑制率分别为38．33％、27．50％、33．41％和12．60％。细胞免疫细胞化学结果显示,pGE-1空载体转染后2．2．15细胞的HBsAg的表达阳性率约为82％,而pGE—HBVP2转染后2．2．15细胞的HBsAg的表达阳性率约为50％,和pGE-1空载体相比阳性率显著下降。结论针对HBVP区的RNAi可以抑制HBV病毒抗原的分泌和表达。     

干扰素对HepG2.2.15细胞表达HBVM及p53蛋白影响的实验研究

目的：观察α-2b干扰素对细胞培养上清中HBsAg和HBeAg、HBV—DNA水平和对p53蛋白的影响作用。方法：分别用酶联免疫吸附实验和荧光定量PCR法测定培养HepG2．2．15细胞悬浮液中HBV—DNA,HBsAg和HBeAg含量变化;免疫组化法观察p53蛋白在培养细胞中的含量和分布;计算α-2b干扰素对HBV及相关抗原的抑制率。结果：α-2b干扰素在1000IU／mL-5000IU／mL浓度范围内呈剂量相关性抑制。当浓度达3000IU／mL,作用至第5d时,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别达89,32％、87．23％和82．66％,并趋于稳定。免疫组化染色,治疗组p53蛋白颗粒增多,与细胞核相联,胞浆颗粒稀少。结论：α-2b干扰素可抑制HepG2．2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg、HBV—DNA,并能影响p53蛋白的表达和分布,提示α-2b干扰素在治疗慢性乙型肝炎和防治慢性HBV感染诱发原发性肝癌的价值。     

新型稀土杂多化合物对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的：研究稀土杂多化合物(PTW-6)体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：MTT法检测PTW-6对Hep G2 2.2.15细胞的毒性,乙型肝炎病毒e（s）抗原诊断试剂盒检测上清液中HBeAg、HBsAg的含量,Southern blotting 法检测PTW-6对细胞内HBV DNA复制的抑制作用。荧光定量PCR分析PTW-6对细胞内HBV mRNA和上清液中HBV DNA含量的影响。结果：PTW-6对2.2.15细胞的半数中毒浓度为1590.46 mg•L^-1, PTW-6各浓度实验组对HBeAg和HBsAg的抑制率均高于对照组（P<0.05）;随着PTW-6浓度的增高,PTW-6对2.2.15细胞内外HBV DNA的抑制率增加,PTW-6对2.2.15细胞外HBV DNA和细胞内HBV mRNA半数抑制浓度分别为51.1和63.6 mg•L^-1。结论：PTW-6体外毒性较低, 且对HBV复制有较好的抑制作用。     

补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒作用的血清药理学研究

【目的】采用血清药理学方法探讨补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。【方法】补肾健脾方低、中、高剂量(分别为30.2、60.4、120.8 g.kg-1)灌胃正常大鼠制备血清,将含药血清直接添加于体外培养的2.2.15细胞中,培养10 d,观察含药血清对2.2.15细胞HBV表面抗原(HBsAg)、HBV e抗原(HBeAg)分泌的影响。【结果】补肾健脾方经体内代谢后能抑制2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的分泌,并呈一定的量效与时效关系。低剂量组服药后3 h 1:4稀释度含药血清的HBeAg抑制率最高,为97.91%;而中剂量组服药后3 h 1:2稀释度的含药血清则达到抑制HBsAg的饱和量,其抑制率为86.84%。【结论】补肾健脾方具有一定的体外抗HBV作用。     

丁香多总皂对HBV转染细胞表达功能的影响

目的：观察丁香多总皂对HepG2．2．15细胞分泌HBeAg和HBsAg的影响．方法：采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清中HBeAg和HBsAg表达的变化并以抑制率来表示．结果：丁香多总皂对HBeAg和HBsAg的分泌具有抑制作用，该作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。结论：丁香多总皂对HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。     

应用RNA干扰技术抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究

目的 构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区的siRNA表达载体pSIHBV／C,观察其对HBV复制和表达的影响。方法 将构建成功的pSIHBV／C与1．3倍HBV真核表达质粒pHBV1．3共转染HepG2细胞,转染后24、48、72h,用Abbott试剂检测细胞上清中HBsAg和HBeAg,并用免疫荧光染色法观察细胞内病毒核心抗原和表面抗原的表达。结果 成功构建了针对HBV核心区的siRNA表达载体pSIHBV／C,并发现它能明显抑制HBsAg和HBeAg的分泌,转染后第2天抑制率达高峰,分别为92％、85％,而随机序列的siRNA无此作用。免疫荧光染色结果也证实转染24b后,随pSIHBV／C比例的升高,其对HBV抗原表达的抑制作用也随之增加,当pSIRNA／C与pHBV1．3比例为1：20时,pSIHBV／C对细胞内HBsAg和HBcAg表达的抑制作用最强。结论 乙型肝炎病毒核心区的siRNA具有显著和特异的抗HBV复制和表达的作用。