ATP结合盒转运子调节细胞内胆固醇流出及对动脉粥样硬化的影响

ATP结合盒转运子是细胞内胆固醇流出至贫脂或无脂的高密度脂蛋白前体载脂蛋白AⅠ的调节子，在高密度脂蛋白合成和胆固醇逆转运过程中起重要作用。ATP结合盒转运子基因表达受核受体的高度调节。通过对ATP结合盒转运子调节，增加高密度脂蛋白浓度和胆固醇的逆转运，为预防和治疗动脉粥样硬化提供新思路和新方法。     

核因子-κB对血管紧张素Ⅱ诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响及在胆固醇流出中的作用。方法:THP-1源性泡沫细胞分别给予10-5mol/LAngⅡ(AngⅡ组)、10μmol/LNF-κB特异性抑制剂TPCK预孵(TPCK组)。采用夹心酶联免疫分析法检测泡沫细胞内NF-κB的活化程度。通过透射电镜和荧光分光光度计、酶化学法,检测泡沫细胞内胆固醇含量的变化。利用闪烁计数法测量泡沫细胞内胆固醇流出率。用逆转录-聚合酶链反应法和免疫印迹法半定量分析泡沫细胞ABCA1的表达。结果:TPCK组NF-κB活化核易位则无明显高峰,维持在较低的水平。TPCK组泡沫细胞内胆固醇含量较AngⅡ组降低24.1%(P<0.05),胆固醇流出率较AngⅡ组显著升高41.1%(P<0.05),ABCA1mR-NA和蛋白表达较AngⅡ组升高30%和19%(P<0.05)。结论:AngⅡ可经NF-κB介导下调THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达,致泡沫细胞内胆固醇流出减少,增加泡沫细胞内胆固醇含量,加速动脉粥样硬化。     

血管内皮细胞中三磷酸腺苷-结合盒转运子A1对炎性细胞因子表达的影响

目的研究在公认的ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)诱导因素8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)刺激下,人血管内皮细胞ECV304中ABCA1基因对炎性细胞因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞化学趋向蛋白-1(MCP-1)及白介素-1β(IL-1β)的调节作用。以阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)发生中的作用机制。方法培养人血管内皮细胞株ECV304,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12及24 h,以荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA表达量,Western blot蛋白印迹法和酶联免疫吸附测定法检测ABCA1I、CAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质表达量;ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染人血管内皮细胞,给予上述的8-Br-cAMP,同样的方法测定上述指标的改变。结果人血管内皮细胞ECV304在给予8-Br-cAMP刺激6、12 h后,ABCA1I、CAM-1、MCP-1的mR-NA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后36、h ABCA1I、CAM-1、MCP-1mRNA的表达降低,122、4 h ABCA1I、CAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低。结论在8-Br-cAMP作用下,血管内皮细胞中ABCA1可增加炎性因子的表达,从而在AS早期的发生中发挥作用。     

新发现的中国人ATP结合盒转运子A1基因M233V 单核苷酸多态性及其家系调查

目的对112例中国冠心病患者行ATP结合盒转运子A1（ABCA1）基因筛选以发现新的单核苷酸多态性（SNP）,并对先证者家系进行调查确定其意义。方法用聚合酶链反应（PCR）．单链构象多态性分析（SSCP）-DNA测序及限制性酶切发现ABCA1基因新的SNP,进一步对先证者家系的16位成员进行血脂检查、基因组DNA提取及限制性酶切分析。结果N233V是一个新发现的ABCA1基因SNP,此位点在外显子7,cDNA位置为A1092G,并导致233位氨基酸由甲硫氨酸转变为缬氨酸（N233V）。16位家族成员中发现5例存在N233V SNP位点改变,且均为AG型改变。结论中国人中存在新发现的ABCA1基因N233V SNP,家系调查显示N233V SNP中AA型分布频率最高,AG型次之,AG型SNP的发生具有家族倾向性。     

新疆维吾尔族ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心病的关系

目的：探讨ATP结合盒转运子A1基因（ATP binding cassette transporter1,ABCA1）R219K多态性在新疆维吾尔族人群中的分布及其与冠心病（CHD）的关系。方法：采用病例对照研究。用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR～RFLP）方法测定ABCA1基因多态性。结果：新疆维吾尔族ABCA1基因的多态性位点存在RR、RK、KK型三种基因型。冠心病组KK型基因频率、K等位基因频率低于对照组（P〈0．05～〈0．01）。K等位基因与冠心病的患病风险呈负相关．OR值为0．640（95％CI0．459-0．893）,该等位基因可能为冠心病的保护因素。K等位基因携带者的高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）水平高于RR基因型（P〈0．05）。多因素Logistic回归分析显示．性别、血清总胆固醇、吸烟、高血压、糖尿病为研究对象发生冠心病的独立危险因素。结论：研究显示K等位基因可能通过作用于血脂间接影响新疆维吾尔族冠心病的患病风险．但不是其免于发生冠心病的独立保护因素。     

冠心病患者ATP结合盒转运子1基因R219K变异的研究

目的 探讨ATP结合盒转运子1基因(ATP-binding cassette transporter 1,ABCA1)R219K变异与我国冠心病发病风险的关系。方法 采用病例-对照研究,对236例冠心病患者和251例正常对照组进行研究。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定ABCA1基因多态性。结果 在中国湖南汉族人群ABCA1R219K变异的三种基因型中,RK型发生频率最高,RR型次之,KK型发生频率最低。冠心病组中KK基因型频率(12.3％)明显低于对照组(19.1％)(P<0.05)。KK基因型的HDL-C水平明显高于RR型(P<0.05),KK型甘油三酯水平虽然低于RR型,但差异无显著性(P>0.05)。多因素logistic回归分析冠心病患者中KK基因型的OR值为0.559(95％ CI 0.322～0.972,P=0.039)。结论 ATP结合盒转运子1基因R219K变异KK型产生有益的临床血脂谱,可能是冠心病患者的低危遗传标记。     

丙泊酚对脂多糖诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨丙泊酚能否通过抑制核因子(NF)-κB活化下调脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。方法将BV2细胞分为4组即对照组、丙泊酚组、丙泊酚+LPS组和LPS组。在干预0 h和24 h时使用MTT法检测BV2细胞活性。在干预24 h后使用RTPCR法和Western印迹法对BV2细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用Western印迹法对细胞NF-κB p65磷酸化水平(phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值)进行分析。结果在给予LPS干预24 h后BV2细胞活性明显降低(P均0.05);但丙泊酚+LPS组细胞活性较LPS组增加(P均0.05),同时对照组和丙泊酚组细胞活性无统计学差异(P均0.05)。与对照组相比较,在LPS干预24 h后BV2细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达水平以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高(P均0.05);但LPS组较丙泊酚+LPS组TNF-α表达的升高以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值的增加更加显著(P均0.05);同时对照组和丙泊酚组TNF-α表达水平和phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值无统计学差异(P均0.05)。结论丙泊酚可能通过抑制NF-κB的激活下调了BV2细胞TNF-α合成和释放。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对泡沫细胞中胆固醇流出的影响及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对泡沫细胞中胆固醇流出的影响及其机制。方法人单核细胞白血病细胞诱导分化为巨噬细胞再转化为泡沫细胞,将细胞分为对照组,低、中和高剂量组,每组1.5×10~6个细胞,分别用0,10,30,100μmol/L EGCG干预后,胆固醇检测试剂盒检测细胞中胆固醇含量,液体闪烁计数仪检测载脂蛋白A-Ⅰ介导的泡沫细胞胆固醇流出,蛋白质印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)蛋白质表达,实时荧光定量PCR检测ABCA1mRNA的表达。结果与对照组比较,低、中和高剂量组泡沫细胞ABCA1mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01),胆固醇流出率升高[(7.04±0.21)%、(7.75±0.17)%、(8.53±0.18)%vs(3.37±0.16)%,P0.01],胆固醇含量降低[(419.33±19.75)mg/g、(352.58±14.23)mg/g、(312.62±17.45)mg/g vs(520.51±20.62)mg/g,P0.01],且中剂量组和高剂量组胆固醇流出率、胆固醇含量和ABCA1蛋白表达均较低剂量组变化明显(P0.05)。结论 EGCG通过上调ABCA1的转录与表达,促进胆固醇流出,减轻细胞中胆固醇负荷。     

B类I型清道夫受体过表达对J774细胞胆固醇转运以及肿瘤坏死因子α表达的影响

目的通过构建人B类Ⅰ型清道夫受体真核表达载体、使细胞瞬时过表达B类Ⅰ型清道夫受体，观察其对肿瘤坏死因子（tmnor neerosis factor,TNF）α和单核细胞趋化因子1（monocyte chemoattractant protin MCPI）表达的影响，初步探讨单核-巨噬细胞B类Ⅰ型清道夫受体抗动脉粥样硬化的作用机制，     

肿瘤坏死因子-α对单核细胞妊娠相关血浆蛋白A表达的影响及调节机制

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人外周血单核细胞妊娠相关血浆蛋白(PAPP)-A蛋白和mRNA表达的影响及其机制。方法采用密度梯度离心法分离及培养人外周血单核细胞,采用Western印迹法和实时荧光定量PCR法观察TNF-α诱导单核细胞PAPP-A蛋白和mRNA表达的时间及剂量效应。采用TransAMTM技术检测TNF-α对单核细胞NF-κB活性的影响。此外观察给予核转录因子κB(NF-κB)抑制剂BAY11-70682预处理后,TNF-α对单核细胞PAPP-A表达的影响。结果 TNF-α(100 ng/ml)刺激单核细胞后,PAPP-A的蛋白和mRNA表达分别在8 h和2 h达高峰,且呈剂量依赖性诱导单核细胞的PAPP-A表达。TNF-α可显著增加单核细胞的磷酸化NF-κB p65水平,在给与BAY11-70682预处理后,TNF-α诱导PAPP-A表达的作用受到抑制。结论促炎因子TNF-α通过激活NF-κB途径上调单核细胞PAPP-A的蛋白和基因表达,这可能是急性冠脉综合征(ACS)患者血清PAPP-A升高的机制之一。     

细菌脂多糖诱导人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α的合成及核因子-κB的活化

为研究细菌脂多糖对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α合成和核因子-kB活化的影响，采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，经细菌脂多糖刺激后，应用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α水平随刺激剂量和时间的变化，应用免疫细胞化学方法观察核因子-Kb在单核细胞的激活随刺激时间的变化。发现核因子-kB在接受刺激15min-1h之间，随刺激时间的延长逐渐从胞质向胞核转移，1h达高峰。细菌脂多糖呈浓度依赖性（1-1000μg/L）诱导肿瘤坏死因子α合成，肿瘤坏死因子α在刺激后1h出现，6h达到高峰，其合成出现在核因子-kB的活化后。以上提示细菌脂多糖通过激活单核细胞内核因子-kB来诱导炎性细胞因子肿瘤坏死因子α的合成。     

染料木黄酮对支气管哮喘患者核因子κB和肿瘤坏死因子α的影响

支气管哮喘 (简称哮喘 )急性发作时患者体内产生活性氧过多导致氧化应激 ,核因子κB(NF κB)表达增强致前炎因子释放。异黄酮类抗氧化剂染料木黄酮 (5 ,7,4 三羟基异黄酮 )可抑制多种细胞产生活性氧自由基。我们的研究旨在探讨染料木黄酮对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMCs)NF κB表达及肿瘤坏死因子α(TNF α)分泌的影响。对象与方法　哮喘组 32例 ,男 2 0例 ,女 12例 ,平均年龄(4 9± 19)岁 ,均为兰州医学院第一附属医院呼吸科确诊的门诊及住院患者 ,诊断符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制定的“支气管哮喘防治指南”诊断标准[…     

布拉酵母菌对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察布拉酵母菌(亿活)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子(NF)-κB与肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法健康Wistar大鼠30只随机分为对照组、模型组、美沙拉秦(莎尔福)组、亿活组、联合治疗组各6只。对照组:大鼠2 ml生理盐水灌肠;模型组、莎尔福组、亿活组、联合治疗组均需要制备UC模型;莎尔福组、亿活组、联合治疗组采用相应治疗,运用酶联免疫吸附试验检测各组大鼠肠组织中NF-κB和TNF-α的表达情况。结果莎尔福组、亿活组及联合治疗组NF-κB与TNF-α水平均明显低于模型组(均P<0. 05)。联合治疗组NF-κB与TNF-α水平明显低于莎尔福组及亿活组(均P<0. 05)。结论亿活与莎尔福均抑制NF-κB与TNF-α活性,起到抗感染治疗作用,联合用药效果更佳。     

ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心病的关系

目的:检测冠心病患者及健康对照者ATP结合盒转运子A1(ABCA1)R219K基因多态性,探讨其与中国人冠心病以及血脂水平的关系。方法:选择234例冠心病患者(冠心病组)和198例正常对照者(对照组)为研究对象,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法研究R219K基因多态性与冠心病和血脂水平的关系。结果:与对照组比较,冠心病组RR基因型频率(46·2%)明显高于对照组(33·8%)(P<0·05),而KK型频率(8·9%)显著低于对照组(15·2%)(P<0·05);与RR型患者相比,KK基因型患者血浆高密度脂蛋白(HDL)水平较高。基因型与血脂水平Logistic回归分析结果表明,三酰甘油、HDL、载脂蛋白A1与基因型相关。结论:ABCA1基因R219K变异可能具有动脉硬化保护作用。     

脂多糖和甲基磺酰苯丙氨酰氯甲酮对巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出和ATP结合盒转运体A1表达的影响

目的观察脂多糖和核因子κB抑制削甲基磺酰苯丙氨酰氯甲（tosyl-phenylalanine chloromethyl-ketone，TPCK）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出和ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响，以探讨脂多糖是否通过Toll样受体4-核因子κB途径影响ABCA1的表达。方法THP-1细胞经佛波酯诱导转化为巨噬细胞，再加入ox-LDL培养使其转化为泡沫细胞，     

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子G1的调控作用及途径

目的 探讨Ghrelin对人单核细胞系(THP-1)源性泡沫细胞ATP结合盒转运子G1(ABCG1)表达的调控作用及其可能途径.方法 体外培养THP-1,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,继而在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞,油红O染色法鉴定泡沫细胞形成.运用RT-PCR法和Western印迹法分别检测Ghrelin干预后及封闭过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)后ABCG1 mRNA与蛋白表达.采用酶法,通过荧光分光光度计检测胆固醇含量及胆固醇流出率.结果 Ghrelin可明显减少细胞内脂滴的形成,增加胆固醇流出,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCG1 mRNA水平和蛋白表达,此作用呈浓度依赖性.封闭PPARγ后,Ghrelin抑制泡沫细胞形成的效应被阻断,且PPARγ拮抗剂浓度越高,该阻断作用越明显.结论 Ghrelin可能通过上调ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生,且该效应可能通过PPARγ途径发挥作用.     

肿瘤坏死因子α对血管平滑肌基质Gla蛋白表达的调节作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)如何通过核因子κB(NF-κB)信号通路调节血管平滑肌基质Gla蛋白(MGP)的表达。方法给予人主动脉平滑肌细胞(HVSMCs)TNF-α(10μg/L)刺激,或者借助于病毒载体过表达或敲低NF-κB水平,通过实时PCR分析MGP mRNA水平,克隆人MGP基因启动子,以荧光素酶作为报告基因,观察TNF-α对MGP启动子的调节作用。结果 TNF-α和NF-κB的p65亚基过表达都明显下调MGP表达,而p65-shRNA可阻断TNF-α对MGP的抑制作用,此外TNF-α通过抑制MGP基因启动子活性,在转录水平调节MGP表达。过表达MGP抑制平滑肌细胞骨形态发生蛋白2(BMP-2)的表达。结论炎症因子TNF-α通过激活NF-κB信号抑制钙化保护因子MGP的表达,并促进BMP-2表达,调节细胞的成骨分化。     

哮喘患者外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α转换酶的表达

肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ α)是支气管哮喘炎症过程中重要的前炎因子 ,具有生物活性的可溶性ＴＮＦ α是由肿瘤坏死因子α转换酶 (ＴＡＣＥ)蛋白水解其无活性的膜结合前体而来[1] 。我们的研究观察了哮喘患者外周血单个核细胞(ＰＢＭＣｓ)ＴＡＣＥｍＲＮＡ和蛋白的表达 ,及其培养上清ＴＮＦ α的水平 ,同时观察了吸入糖皮质激素对ＴＡＣＥｍＲＮＡ和ＴＮＦ α的影响 ,旨在探讨ＴＡＣＥ在哮喘发病中的可能作用地位。对象与方法　哮喘组 16例 :男 5例 ,女 7例 ,平均年龄(32± 5 )岁 ,为本院呼吸科门诊患者并符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组…     

肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对内皮细胞妊娠相关血浆蛋白A表达的影响

目的 观察肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对内皮细胞妊娠相关血浆蛋白A表达的影响并探讨其机制.方法原代培养大鼠主动脉内皮细胞,选择生长良好的第3～4代细胞用于实验.实验分组:①空白对照组;②10、20、40、60及100μg/L肿瘤坏死因子α培养细胞24 h组;③1、5、10、20及50μg/L白细胞介素1β培养细胞24 h组;④60μg/L肿瘤坏死因子α培养细胞2、4、8、16、24及48 h组;⑤20μg/L白细胞介素1β培养细胞2、4、8、16、24及48 h组;⑥核因子κB抑制剂BAY11-7082干预组:预先用核因子κB抑制刺BAY11-7082(20 μmol/L)与内皮细胞共同孵育60 min后,再加入60 μg/L肿瘤坏死因子α或20μg/L白细胞介素1β作用48 h.实验结束后收集细胞及培养上清液,用乳酸脱氢酶试剂盒检测各组培养上清液中乳酸脱氢酶活性,用逆转录聚合酶链反应测定细胞中妊娠相关血浆蛋白A mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测上清液中妊娠相关血浆蛋白A蛋白水平.结果 不同浓度肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β作用24 h后,大鼠内皮细胞妊娠相关血浆蛋白A mRNA及上清液中妊娠相关血浆蛋白A蛋白表达水平随肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β浓度的增加而升高(P<0.05);60μg/L肿瘤坏死因子α和20μg/L白细胞介素1β作用于大鼠内皮细胞不同时间,妊娠相关血浆蛋白A表达水平显著高于空白对照组(P<0.05),且随刺激时间的延长,妊娠相关血浆蛋白A的表达逐渐升高;核因子κB抑制剂BAY11-7082作用后,妊娠相关血浆蛋白A表达水平明显降低(P<0.05).结论 肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β上调内皮细胞妊娠相关血浆蛋白A的表达,而核转录因子的活化是其对内皮细胞妊娠相关血浆蛋白A表达上调的主要机制.     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.