睾丸组织异体异位移植研究进展

自从2002年《自然》杂志发表了第1篇用同种或异种睾丸组织移植进行的生精细胞体外发育研究以来,该技术被广泛应用于不同种类动物(包括人类)睾丸组织的体外成熟的探讨。这种采用免疫缺陷动物作为受体,同种或异种睾丸组织为供体的技术与其他生精细胞体外成熟方法相比具有环境条件较易控制、重复性较好等优点。迄今为止,在用小鼠、仓鼠、猫、兔、猪、山羊、牛和恒河猴等动物睾丸组织进行的移植研究中,未成熟生精细胞在作为受体的裸鼠体内均发育到精子阶段,并通过卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)技术,用发育成的小鼠、兔精子分别产生了下一代。本文总结了供体组织的种类和年龄,受体的性别、完整性、免疫状况和移植部位以及移植时间对移植物发育的影响,概述了近几年来采用该技术所进行的睾丸组织移植研究发展现状,并对该技术的应用以及存在的问题进行了讨论。     

大鼠胚胎卵巢异体异位移植的研究

为了解胚胎卵巢异体异位移植后的存活和生长发育情况 ,将大鼠胚胎卵巢分别移植到去势雌鼠颈部皮下或肾被膜下 ,HE染色观察。移植后第 1 0天时移植物周围有结缔组织包裹 ,内有原始卵泡 ;移植后第 2 5天开始 ,移植物内可见大量发育卵泡及黄体与间质腺 ,移植卵巢中有丰富的血管。移植后平均 2 2天阴道上皮细胞出现周期性改变。细胞化学及免疫组织化学反应显示 :移植 3 5天后卵巢的卵泡膜内层细胞 3 -β羟甾脱氢酶呈阳性反应 ,卵巢血管内皮细胞碱性磷酸酶和 ATP酶为阳性 ;雌 ,孕激素及其受体反应强度与正常对照无明显差异。放射免疫法测定血清雌激素 ,孕激素 ,卵泡刺激素 (FSH)及黄体生成素 (L H)显示 ,移植 3 5天后 ,FSH和 L H的浓度接近正常。以上结果说明胚胎卵巢能在异体异位存活、生长发育并具有内分泌功能     

大鼠胚胎脑组织4℃保存与同种异体移植

以台盼蓝染色方法观察了大鼠胚胎脑组织在五种保存液中的保存效果，初步结果提示无血清ＤＭＥＭ培养液是一种较好的胎脑组织保存液，保存胎脑组织５天时平均细胞存活率达７０％以上。将于ＤＭＥＭ液中保存５天的胎鼠大脑组织植入同种大鼠脑内，６￣８周后进行组织学观察，结果发现移植物有存活，但其存活质量明显不如新鲜组织移植。     

大鼠原位异体睾丸移植模型的建立

目的 应用显微外科技术建立大鼠原位异体睾丸移植模型。方法 带供睾动脉的腹主动脉与受体腹主动脉端侧吻合，供睾静脉应用Cuff管技术与受体左髂总静脉端端吻合，供、受体输精管作端端吻合。结果 在施行的20例手术中，19例移植成功。结论 此种模型建立原位异体睾丸移植横至的方法是可行的。     

成龄大鼠睾丸间质细胞同种异体移植的实验研究

成龄大鼠睾丸间质细胞同种异体移植的实验研究高新，詹炳炎我们于１９９２年４月开始，进行了成龄大鼠睾丸间质细胞同种异体移植，获得成功。现报告如下：将７０只ＳＤ大鼠随机分成３组。对照组１０只单纯去势，不移植睾丸间质细胞（Ｌｅｙｄｉｓ细胞）；移植组４０只为去...     

cuff管套入法建立大鼠同种异体睾丸移植模型

目的:探索应用cuff管套入法建立大鼠同种异体睾丸移植模型的新方法。方法:60只健康雄性近交系W istar大鼠分别作为供、受体,显微镜下(×10),连同左侧供睾的动、静脉一起截取与其相连的腹主动脉段和左髂总静脉段,以丝线结扎左髂总静脉段的远断端,其余3断端分别套上cuff管后袖套状翻转并以丝线环扎之,然后分别将外套cuff管的动、静脉嵌入切开的受鼠的腹主动脉内和左髂总静脉内后再环扎,端端吻合受、供体输精管,摘除受鼠双侧睾丸。结果:30只大鼠正式手术,27只长期存活直至处死,2只死于麻痹性肠梗阻伴感染,1只因术中大出血死亡。27只长期存活的受体中,4、4、5例于术后14 d、28 d、56 d探查植睾,血供情况良好,关腹存活至处死;余14只用于其他实验。受体左下肢术后无明显水肿、淤血和坏死。结论:应用cuff管技术建立的大鼠睾丸移植模型具有操作简便、成功率高、效果可靠等优点,可作为睾丸移植的研究模型。     

大鼠睾丸Leydig细胞同种移植后的形态学观察

将体外培养的１月龄雄性ＳＤ大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞移植于去势２周抽种大鼠后腿深筋下，于移植后１、３、４和６个月取出移植物作组织化学染色，光镜、电镜观察。发现移植后４个月内，移植物中有大量具有３β－羟类固醇脱氢酶活力的Ｌｅｙｄｉｇ细胞，伴有较多新生毛细血管，无免疫细胞浸润，Ｌｅｙｄｉｇ细胞具有丰富的滑面内质网结构，提示睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞移植后可在４个月内保持良好存活，并具有功能。     

异体睾丸移植的研究进展

异体睾丸移植是治疗男性不育或性腺功能减退的有效方法之一。自18世纪开展第一例实验睾丸移植至今已经历了近3个世纪,有关这方面的研究在不同领域都取得了长足进展,但涉及其中的诸多问题依然值得关注。现结合众多文献资料,就睾丸移植的历史、现状及展望作较全面的阐述。     

成年大鼠睾丸间质细胞同种异体移植的实验研究

本实验在远交系大鼠间行睾丸间质细胞同种异体移植，为临床移植提供实验依据。将７０只成年雄性大鼠阉割。睾丸间质细胞分离、提纯后，作体外培养；培养第７天，将细胞移植到去势大鼠体内，定期测试受鼠血清睾酮。实验结果显示：细胞体外培养１８天仍能分泌睾酮；０．１ｍｏｌ／Ｌ二甲基亚砜能明显提高细胞睾酮分泌量；细胞移植后４个月，受鼠血清仍可测到较高水平的睾酮，而对照组大鼠血清睾酮低于测试下限。作者认为，体外培养和睾丸间质细胞分离后可能出现的主要组织相容性（ＭＨＣ）免疫原性的改变是细胞移植后存活较长的原因。     

大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型的建立与改进

目的建立并改进大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型,探讨其可行性及安全性。方法对100只Wistar大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型的麻醉方法、供心灌注切取、受体血管准备、吻合方法等进行了改良,术后统计手术时间及手术成功率。结果供体准备、供心摘取时间共（13±3）min,受体血管准备时间（8±2）min,受体腹主动脉吻合时间（10±2）min,受体下腔静脉吻合时间（7±3）min,供心冷缺血时间（30±6）min。手术成功大鼠恢复血供到开始心室纤颤时间（5±2）s,心室纤颤期为（10±3）s。100只中,成功94只,成功率为94%,死亡6只,包括术中麻醉意外死亡3只,术中误伤心耳出血死亡2只,肺血管结扎处出血死亡1只。结论大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型的操作方法经过改进后,降低了手术难度,手术成功率较高。     

大鼠同系与同种肾移植的慢性排斥反应机制的研究

目的　研究大鼠肾移植后非免疫因素在慢性排斥反应发病机制中的作用。方法　对双肾切除的大鼠进行原位同系和同种肾移植 ,并设自体移植对照组。移植术后连续 5 2周对各组的尿蛋白含量、组织形态学和免疫组织化学进行观察。结果　同系移植组 2 4周时尿蛋白逐渐增多 ,小血管周围和肾小球周围出现持续性的单核细胞浸润 ;32周时 ,小管萎缩加重 ,因中膜平滑肌增生而出现小叶间动脉和皮质动脉内膜肥厚病灶 ;5 2周时 ,>30 %的肾小球发生节段性或完全的硬化 ,且几乎所有的动脉出现管腔狭窄 ,小管萎缩与间质纤维化亦非常明显。同种移植组在 12周时即有 >30 %的肾小球硬化 ;32周时 >40 %的肾小球出现完全或节段性的硬化 ,并间质纤维化。同系和同种移植组与自体移植组比较 ,差异均有极显著性 (P <0 .0 1)。结论　非免疫因素引起的同系移植肾功能和形态的变化与同种移植肾慢性排斥反应的早期表现相似 ,对前者而言 ,移植肾的初期损害和有功能的肾组织量是慢性排斥反应发病机制中的重要因素。     

三袖套血管吻合法行大鼠异位小肠移植

目的改进大鼠小肠移植血管吻合术式,以缩短移植肠缺血时间,简化手术操作,提高手术成功率。方法动脉吻合采用供者带肠系膜上动脉的腹主动脉段两端与受者的腹主动脉袖套吻合,静脉吻合采用供者的门静脉与受者的左肾静脉袖套吻合,即三袖套吻合法。结果共进行70次手术,成功65次,手术成功率92.9%;整个手术用时2～3h,其中动脉吻合用时(5±2)min,静脉吻合用时(2±1)min,动静脉吻合用时(8±2)min。结论三袖套血管吻合法可简化大鼠小肠移植手术,缩短手术时间。     

同种异体肢体移植配型的初步探讨

目的 研究组织配型的同种异体肢体移植中的意义和潜力。方法 对准备接受同种异体手移植的10例单手或双手缺失准备接受异体手移植的患者和潜在的供者进行ABO血型和Rh血型、群体反应抗体（PRA）检测及混合淋巴细胞培养试验，采用聚合酶链反应（PCR）方法测定人类白细胞抗原（HLA）。结果 为其中2例患者各找到1名ABO血型（A-A、O-O）、Rh血型相符，PRA和混合淋巴细胞培养试验均为阴性，人类白细胞抗原（HLA）配型半相合的供者。手术后联合应用免疫抑制剂，移植手顺利成活，免疫监测和皮肤活检证实无排斥反应发生。结论 理想的组织配型是避免异体手移植发生排斥反应的前提条件；异体手移植理想的组织配型条件是ABO血型、Rh血型相符，淋巴细胞毒性交叉配合试验为阴性；PRA水平越低、HLA位点配合的越多，越能提高异体手移植的成功率和存活率。     

环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长大鼠移植心脏存活时间

目的：探讨环孢素A（CsA）联合供者骨髓细胞（DBMC）输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响。方法：制作Lewis大鼠到BN大鼠的异位（腹部）心脏移植模型，并按对受者处理的不同分为四组，对照组不进行特别处理，CsA组术后连续7d给予CsA5mg·kg^-1·d^-1，联合处理组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC，术后连续7d给予CsA5nag·kg^-1·d^-1，DBMC组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC；另设BN大鼠间的心脏移植作为对照（BN对照组）。观察移植心脏的存活时间，观测术后第6天血清白细胞介素2（IL-2）、移植心脏组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达以及组织学改变，流式细胞仪检测术后第6、12、18天时受者外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3^＋ CD25^＋细胞、CD4^＋ CD25^＋细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达、CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-等。结果：联合处理组移植心脏存活时间为（21．6±3．2）d，明显长于对照组和DBMC组（P〈0．05），其血清IL广2为（313±95）pg／ml，心肌组织中TNF-α mRNA的表达量为0．12±0．10，均明显低于对照组和DBMC组（P〈0．05），排斥反应程度轻于其它3个移植组。联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制；术后6、12d，联合处理组的CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-比值低于对照组和DBMC组，CD3^＋ CD25^＋细胞百分比也低于对照组和DBMC组；接受DBMC输注者外周血中供者来源的有核细胞明显多于未接受DBMC者。结论：短疗程CsA联合DBMC输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度，延长移植心脏存活时间。     

同种异体皮质骨移植的生物力学研究

目的探讨不同力学环境下同种异体皮质骨的生物力学性能变化。方法以４０只家兔前肢尺骨中段骨移植后造成不同受力状态的动物模型,左前肢承受正常生理载荷,右前肢承受低载荷,对植骨区标本进行三点弯曲破坏载荷、骨密度值、骨孔隙率的测试。结果同种异体皮质骨植入后,移植骨－宿主骨界面间的连接强度持续上升,而移植骨自身的生物力学性能呈较快下降再缓慢上升的趋势;从骨移植后第８周开始,正常载荷侧的移植骨－宿主骨界面间的连接强度明显高于低载荷侧,到第１６周时,正常载荷侧移植骨自身的生物力学强度改善也更为明显。结论同种异体皮质骨植入以后的生物力学性能呈较快下降再缓慢上升的趋势;生理载荷的刺激有利于同种异体皮质骨生物力学性能的恢复与改善     

人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究

目的：新鲜同种异体神经免疫排斥反应的标靶是细胞、髓鞘。发展新的化学处理方法,清除人类周围神经中的细胞和髓鞘 ,萃取粗大和长段的去细胞神经移植物。方法：切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经,以triton X-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜;免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层;行半薄切片及超薄切片透射电镜检查,观察超微结构。结果：去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留;许旺细胞基底板层保留完好;去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论：Triton X-100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经;该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了许旺细胞基底板层及板层素。     

化学去细胞同种异体神经移植的实验研究

目的探讨化学去细胞同种异体神经的免疫学特性及其修复灵长类动物神经缺损的能力。方法(1)分别获取SD大鼠的坐骨神经和猕猴的正中神经,经4.0%TritonX-100和72mM脱氧胆酸钠溶液重复消化处理,制备SD大鼠和猕猴的化学去细胞神经。在Wistar近交系大鼠的皮下植入化学去细胞同种异体神经和新鲜SD近交系大鼠的神经,检测植入部位组织内T淋巴细胞及其亚群的浸润程度。(2)用化学去细胞同种异体神经移植修复猕猴5cm长的正中神经缺损,通过功能观察、神经电生理检测、神经再生组织学、S-100免疫组织化学染色和运动终板染色观察神经移植后的效果。结果化学去细胞异体神经植入体内后,移植神经周围组织浸润的CD3+、CD4+和CD8+细胞数量明显少于新鲜同种异体神经移植的对照组。去细胞同种异体神经可以修复猕猴5cm长的周围神经缺损,在移植术后5个月患肢功能均有不同程度的改善。移植术后6个月神经电生理检测显示,刺激可以通过移植段神经到达远端的效应器,在神经支配区肌肉可以记录到运动诱发电位,跨过移植神经段的传导速度已达(40.5±6.8)m/s。神经再生组织学检查显示有再生的神经纤维通过移植段神经,在去细胞异体神经移植段内分布纵行排列的雪旺细胞,在支配区肌肉可以检测到重建的运动终板。结论化学去细胞同种异体神经的抗原性明显降低,可修复高等哺乳类动物的周围神经损伤。     

冬虫夏草提取物抑制大鼠移植物血管病的实验研究

目的 探讨冬虫夏草提取物抑制大鼠移植动脉硬化的效果及其机制.方法 制备大鼠腹主动脉移植模型,分为4组进行实验:同系对照组供、受者均为Lewis大鼠,生理盐水灌胃60d;同种对照组,以Brown-Norway大鼠(BN大鼠)为供者,Lewis大鼠为受者,生理盐水灌胃60d;低剂量实验组,以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,以冬虫夏草提取物(1.5 g·kg-1·d-1)灌胃60 d;高剂量实验组,以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,以冬虫夏草提取物(3.0g·kg-1·d-1)灌胃60d.于移植后60 d取移植动脉,HE染色,进行病理学观察;免疫组织化学和蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)在移植动脉中的表达.酶联免疫吸附试验检测受鼠血清中VEGF和PDGF- BB含量.结果 同系对照组移植动脉形态正常;同种对照组移植动脉呈移植物血管病表现,血管内膜显著增厚;2个实验组移植动脉呈内膜炎症改变,内膜厚度与同种对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).同种对照组移植动脉中VEGF和PDGF-BB的表达高于同系对照组(P＜0.05);2个实验组移植动脉中VEGF和PDGF-BB的表达低于同种对照组(P＜0.05).同系对照组受鼠血清中几乎无VEGF和PDGF-BB;同种对照组血清中VEGF和PDGF-BB浓度高于同系对照组(P＜0.05);和同种对照组相比较,2个实验组血清VEGF和PDGF-BB浓度较低(P＜0.05).结论 冬虫夏草提取物能明显抑制动脉内膜的增生,可缓解慢性排斥反应所致的移植动脉硬化,这种保护作用可能与下调VEGF和PDGF-BB表达有关.     

经辐照的同种异体血管在肝移植中的应用

目的研究经辐照的同种异体大隐静脉在肝移植中替代门静脉移植后其形态学和免疫学的改变。方法研究分为经辐照的同种异体大隐静脉移植组（n=11）（A组）、新鲜同种异体大隐静脉移植组（n=9）（B组）和新鲜自体大隐静脉移植组（n=14）（C组）进行大隐静脉移植。于移植后1周、2周、1个月、2个月、3个月5个时间点用彩色多普勒超声和免疫组织化学法观察移植大隐静脉的通畅情况及形态学变化,同时观察移植早期CD4^＋、CD8^＋T细胞浸润情况。结果A组大隐静脉无组织学改变,肉眼观察外形无明显变化。移植后3个月3组移植大隐静脉的通畅例数分别为9例、3例和12例。A组和C组移植后2周,移植的大隐静脉内膜出现内皮细胞,移植后2个月,血管内膜的内皮细胞覆盖完整;B组移植早期有淋巴细胞和炎性细胞浸润及明显的大隐静脉结构破坏,移植大隐静脉内膜未见内皮细胞覆盖;A组早期CD4^＋、CD8^＋T细胞比例明显低于B组,略高于C组。结论经辐照的同种异体大隐静脉符合理想的血管移植物的条件,同时具有较弱的抗原性,术后检测CD4^＋、CD8^＋T细胞的变化可作为同种异体血管移植后急性免疫排斥反应的免疫学监测指标。