丙泊酚抑制GRP78/PERK/CHOP通路改善PE诱导H9C2细胞凋亡的研究

目的:研究丙泊酚对苯肾上腺素(phenylephrine, PE)诱导H9C2心肌细胞的影响及机制。方法:H9C2细胞均分为5组,PE诱导细胞凋亡模型,用0.5,1,1.5 mmol·L^-1丙泊酚预处理。采用流式细胞术检测凋亡率;RT-qPCR检测GRP78/PERK/CHOP通路的mRNA表达;蛋白质印迹检测GRP78/PERK/CHOP通路蛋白、caspase-12、caspsae-3、SERCA2a的表达;定磷法检测SERCA2a活性。结果:PE诱导心肌细胞凋亡率升高,GRP78/PERK/CHOP通路mRNA及蛋白表达升高,caspase-12、caspsae-3表达升高,SERCA2a蛋白表达及活性降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。中、高浓度的丙泊酚可明显逆转PE诱导的上述指标变化,且差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:丙泊酚通过恢复SERCA2a的活性及表达量、抑制GRP78/PERK/CHOP通路,降低PE诱导的心肌细胞凋亡。     

黄芪多糖对严重烧伤大鼠心肌损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖对严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松(5 mg/kg)组和黄芪多糖10、20、40 mg/kg组,每组20只。采用92℃水浴18 s的方法制备大鼠30%总体表面积占比(TBSA)III度烧伤模型。各治疗组均ip给药1 m L/kg;对照组、模型组均ip给予生理盐水1 m L/kg。24 h后,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况并计算凋亡指数,测定血清中心肌酶天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸磷激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白T(c Tn T)水平,测定心肌组织中抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法检测心肌组织中AKT mRNA、bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值;Western blotting法检测心肌组织中caspase-3、NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,黄芪多糖组大鼠心肌细胞凋亡数量明显减少。与模型组比较,黄芪多糖20、40 mg/kg治疗24 h能够显著降低严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡指数;AST、CPK、LDH、c Tn T水平显著降低;SOD、CAT、MPO活性显著升高,MDA含量显著降低;AKT mRNA、bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax比值显著升高;显著降低caspase-3、NF-κB蛋白表达量(P0.05、0.01)。结论黄芪多糖对严重烧伤大鼠心肌损伤具有保护作用,其作用机制可能与黄芪多糖能够有效降低氧化应激损伤和调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

CPU86017及其手性异构体CPU86017-RS对异丙肾上腺素引起心肌细胞中FKBP12.6和SERCA2a下调的改善作用

目的：探讨对氯苄基四氢小檗碱类化合物CPU86017及其手性异构体CPU86017-RS对异丙肾上腺素（ISO）引起心肌细胞中FKBP12.6和SERCA2a异常表达的改善作用。方法：将原代培养72小时的SD乳鼠心肌细胞随机分为9组：正常组,ISO组,普萘洛尔（10-6mol·L^-1）组,CPU86017低、中、高剂量组（剂量分别为10-7、10-6、10-5mol·L^-1）及CPU86017-RS低、中、高剂量组（剂量分别为10-7、10-6、10-5mol·L^-1）,除正常组外,在其余各组的培养基中均另加ISO,使其浓度为10-6mol·L^-1。继续培养24小时后,用RT-PCR和Western Blot法分别测定各组FKBP12.6和SERCA2a的mRNA及蛋白表达水平。结果：与正常组相比,ISO组FKBP12.6和SERCA2a的mRNA和蛋白表达明显下调（P＆lt;0.01）。不同浓度的CPU86017和CPU86017-RS均呈剂量依赖性地逆转ISO引起的FKBP12.6和SERCA2a的下调,且CPU86017-RS的作用强于CPU86017（P＆lt;0.05,P＆lt;0.01）。结论：CPU86017和CPU86017-RS对ISO诱导的心肌细胞FKBP12．6和SERCA2a异常表达具有改善作用。     

CaMKⅡ信号通路在黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大中的作用

目的从钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-de-pendent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)信号通路角度探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,应用Iso 10μmol·L-1诱导心肌细胞肥大,观察β受体阻断剂普萘洛尔及不同浓度APS对肥大心肌细胞的影响。用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;Bradford法测心肌细胞总蛋白含量;ELISA法检测细胞外液中IL-6和TNF-α的含量;RT-PCR法检测ANP mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞CaMKⅡδ蛋白的表达。结果普萘洛尔(propranolol,PRO)和APS均能有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为体积减小、总蛋白含量降低及ANP mRNA表达降低,并能有效减少炎症反应,表现为细胞外液中IL-6、TNF-α的含量明显减少,CaMKⅡδ蛋白含量减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导的乳鼠心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能与抑制CaMKⅡ信号通路及减少炎症反应有关。     

黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用Iso 10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的黄芪多糖及L型钙通道阻滞剂维拉帕米(Verapamil,VER)对心肌肥厚的影响。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;RT-PCR法检测心肌细胞ANP的mR-NA表达;以Fluo-3/AM为荧光探针,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化。结果 APS和VER均能够有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为蛋白质含量降低,体积减小,ANP mRNA表达降低和细胞内钙离子浓度降低,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]i有关。     

钙蛋白酶抑制剂对缺血-再灌注心肌肌浆网钙泵功能及其蛋白水平的影响

目的研究钙蛋白酶抑制剂ALLN对缺血-再灌注(I-R)大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA)功能的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常灌注组(对照组)、I-R组、ALLN+I-R组和二甲亚砜+I-R组(DMSO+I-R组),分别检测再灌注15min时冠状动脉流出量(CF)和冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;荧光分光光度计测定荧光强度来反映钙蛋白酶活性;分别采用改良p-NPP法和Millipore过滤技术测定SERCA的活性和ATP依赖的SERCA45Ca2+摄取率,免疫印迹法检测心肌细胞SERCA蛋白表达水平。结果与I-R组相比,ALLN+I-R组CF、SERCA蛋白表达水平、SERCA的活性和45Ca2+摄取率显著增高(P<0.01),而LDH漏出量和钙蛋白酶活性显著降低(P<0.01)。结论 ALLN对离体大鼠心脏I-R损伤有保护作用,与其抑制钙蛋白酶活性,一定程度减轻I-R损伤对SERCA功能及蛋白表达水平的影响有关。     

黄芪多糖通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的旨在从TLR4-NF-κB信号转导通路角度探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,以LPS 1mg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度APS及IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对肥大心肌细胞的影响。以计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液TNF-α的含量。结果 APS及BAY11-7082均能有效抑制LPS诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量降低,体积减小;并能有效减少炎症反应,表现为TLR4 mRNA表达降低,IκBα的蛋白含量升高,细胞外液中TNF-α明显减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

前胡丙素对大鼠缺血-再灌注心肌肌浆网钙泵功能及其蛋白水平的影响

目的研究前胡丙素对大鼠缺血-再灌注(I-R)心肌肌浆网钙泵(SERCA)的影响及机制。方法 24只雄性SD大鼠随机均分为正常对照组、I-R组、前胡丙素+I-R组和聚乙二醇400+I-R组。检测再灌注15min时冠状动脉流出量(CF)和冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用改良对硝基苯酚棕榈酸酯(p-NPP)法和Millipore过滤技术测定SERCA的活性和三磷酸腺苷依赖的SERCA45 Ca2+摄取率,Western blot法检测心肌细胞SERCA蛋白表达水平。结果与I-R组相比,前胡丙素+I-R组CF、SERCA蛋白表达量、SERCA的活性和45 Ca2+摄取率增高(P<0.01),LDH漏出量降低(P<0.01)。结论前胡丙素对离体大鼠心脏I-R损伤有保护作用,可能与其减轻I-R损伤引起的心肌SERCA功能和蛋白表达抑制有关。     

黄芪多糖对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的减缓作用及其机制研究

目的研究黄芪多糖对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的减缓作用及可能机制。方法将100只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、野百合碱组、黄芪多糖低剂量组和黄芪多糖高剂量组。除正常对照组外,其余组大鼠按60 mg/kg单次腹腔注射野百合碱。黄芪多糖低剂量组及高剂量组大鼠在给药后的第2~28天分别按200 mg/kg及400 mg/kg腹腔注射黄芪多糖,每日1次。每组25只大鼠各取15只进行研究,检测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心肥厚指数(RVHI),观察其肺动脉及心肌细胞形态变化,检测其肺组织中白细胞介素17(IL-17)mRNA及蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,野百合碱组及黄芪多糖各剂量组大鼠mPAP、RVHI均显著升高(P<0.01),肺组织中IL-17的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),肺动脉及心肌细胞有明显病理改变;与野百合碱组比较,黄芪多糖各剂量组大鼠mPAP、RVHI均显著降低(P<0.01),肺组织中IL-17的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),肺动脉及心肌细胞病理变化有改善;与黄芪多糖低剂量组比较,黄芪多糖高剂量组大鼠上述指标水平及病理改变的改善更明显。结论黄芪多糖能降低野百合碱诱导大鼠的肺动脉高压,并改善肺动脉结构及心肌病理改变,推测其机制可能与下调大鼠肺组织中IL-17的表达有关。     

H2S减少H2O2诱发H9c2心肌细胞内质网应激的机制研究

目的 探讨硫化氢(H2S)减少过氧化氢(H2O2)诱发H9c2心肌细胞内质网应激的作用机制.方法 H2O2 150 μmol/L诱发制备H9c2心肌细胞内质网应激模型后分为三组,A组为模型对照组,B组和C组分别采用硫氢化钠25 μmol/L和S-炔丙基半胱氨酸25 μmol/L处理;另设空白对照(D)组.CCK-8法检测细胞生存率,Hoechst染色法检测凋亡细胞,荧光分析法检测Caspase-12活性,Western blot检测转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)、受磷蛋白(PLN)和心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)表达,免疫共沉淀法检测CaMK Ⅱ与PLN以及SERCA2a与PLN的结合.结果 A组细胞存活率低于D组,而B组和C组高于A组(P＜0.05).A组凋亡细胞数多于D组,而B组和C组均少于A组(P＜0.05).A组 Caspase-12活性、PLN 磷酸化水平、CHOP、BiP、CaMK Ⅱ 以及 CaMK Ⅱ与PLN结合表达均高于D组,B组和C组则均低于A组(P＜0.05).A组SERCA2a与PLN结合的表达低于D组,B组和C组则均高于A组(P＜0.05).结论 H2S可以通过CaMK Ⅱ/PLN/SERCA2a途径减少内质网应激,对H2O2诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用.