TNP-470抗人涎腺腺样囊性癌裸鼠肺转移作用的实验研究

肿瘤生长需依赖新生血管生成以维持其营养及代谢要求 ,抗肿瘤血管生成可成为控制肿瘤生长和转移新的治疗途径。我们观察血管生成抑制物TNP 4 70不同应用时间对肺高转移性涎腺腺样囊性癌 (ACC M )在裸鼠体内生长和转移的抑制作用 ,探讨其作用机理 ,为临床试验提供参考依据。1 材料与方法 :①动物实验 :ACC M细胞 (上海第二医科大学附属第九人民医院口腔外科肿瘤生物实验室建立并提供 )经裸鼠尾静脉注射形成肿瘤肺转移动物模型。 4 5只裸鼠随机被分成接种后第 1、7、14天用药组及对照组。用药组动物分别给予皮下注射 30mg/kg的TNP 4 70 …     

紫杉醇抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究

目的　观察紫杉醇对涎腺腺样囊性癌细胞远处转移的作用及其对转移灶肿瘤细胞凋亡的影响。方法　用ACC -M裸鼠肺转移模型观察紫杉醇体内抗转移效果 ,原位杂交法检测转移灶肿瘤细胞凋亡。结果　对照组与紫杉醇治疗组相比 ,二者之间转移率 (90 %和 4 0 % )及瘤结节数均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;对照组与治疗组凋亡指数分别为 6 .0 3± 3.36与 2 5 .4 7± 4 .78,二者对比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　紫杉醇对涎腺腺样囊性癌肺转移有较好的抑制效果 ,诱导凋亡可能是其抗ACC -M裸鼠肺转移的作用机制之一。     

血管生成抑制剂TNP-470抑制腺样囊性癌转移的实验研究

目的观察血管生成抑制剂TNP-470对人涎腺腺样囊性癌肺转移的抑制作用.方法将腺样囊性癌ACC-M细胞接种于裸鼠尾静脉(1×106/鼠).将20只裸鼠随机分成对照组和治疗组,自第2天起分别给予溶剂(3%酒精)和TNP-470(40mg/kg),隔天给药1次,共用4周.接种后6周末处死动物,检测对照组和治疗组的肺转移率及含转移灶的肺重量,观察转移情况.结果对照组和治疗组肺转移率分别为90%和40%(P＜0.025);含转移灶的肺重量分别为0.2138g±0.0667g和0.1685g±0.0445g(P＜0.05).结论血管生成抑制剂TNP-470能明显抑制腺样囊性癌的肺转移.     

染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究

目的　研究染料木黄酮抗涎腺腺样囊性癌 (ACC)实验性肺转移的作用。方法　分别用ACC M细胞及经染料木黄酮处理的ACC M细胞对 2 0只裸鼠尾静脉接种形成肺转移模型 ,6周后处死动物 ,比较治疗组与对照组裸鼠ACC肺转移率、瘤结节数目 ;观察肺转移灶血管内皮生长因子 (VEGF)、基质金属蛋白酶 (MMP 9)的表达及凋亡情况。结果　染料木黄酮治疗组瘤结节数目明显少于对照组(分别为 9 2 9± 1 80和 2 7 4 4± 13 5 5 ,P <0 0 5 ) ;治疗组转移灶凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ( 15 37±3 96及 6 0 3± 3 36 ,P <0 0 5 ) ;治疗组VEGF及MMP 9表达明显弱于对照组 (P <0 0 5 )。结论　染料木黄酮有一定的抗ACC M远处转移的作用 ,这可能是多种机制作用的结果     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

VEGF-C和CD34在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的 研究VEGF-C和CD34在涎腺腺样囊性癌（SACC）中表达及其与临床病理的关系，探讨ACC转移机理。方法 采用免疫组化SP法，检测42例ACC中VEGF-C和CD34表达情况，并计算微血管密度（MVD），采用SPSS软件行统计学分析。结果VEGF-C的表达和MVD与ACC组织类型有关（P=0．000；P=0．001）；MVD和VEGF-C表达间无相关性（P=0．165）。结论VEGF-C和MVD可作为ACC分化的指标之一；VEGF-C可能与ACC淋巴结转移有关。     

腺样囊性癌肺转移相关蛋白质的筛选鉴定

目的　初步筛选和鉴定人涎腺腺样囊性癌肺转移相关蛋白质。方法　利用腺样囊性癌细胞株 (ACC 2 )及其肺高转移细胞株 (ACC M) ,通过蛋白质组学方法 ,差减处理 ,发现两细胞株间蛋白质表达的差异 ,并对差异蛋白质点进行分析鉴定。结果　发现ACC 2和ACC M细胞系之间有 12个蛋白质点表达水平明显不同。其中转酮醇酶、v Ha ras蛋白等在ACC 2中低表达 ,在ACC M中高表达 ;肿瘤坏死因子超家族成员 4 (配合基 )在ACC 2中高表达 ,在ACC M中低表达 ,Pirin仅在ACC 2中表达。结论　 12个差异蛋白质可能通过不同途径参与腺样囊性癌肺高转移 ,为研究腺样囊性癌肺转移提供新的线索     

涎腺腺样囊性癌裸鼠肺转移灶细胞时相分析及定量形态学研究

本研究利用流式细胞仪及Ｖｉｄａｓ自动图象分析系统，检测了涎腺腺样囊性裸鼠肺转移灶细胞周期时相分布及其定量形态学参数，结果表明：肺转移灶细胞Ｓ期明显低于皮下移植癌细胞（Ｐ＜０．０１），而Ｇ０／Ｇ１期高于皮下移植癌；肺转移灶细胞之核浆比、核面积、核周长、等效径、形态因子等定量形态学参数提示肺转移灶细胞趋向高分化。本研究结果对于解释涎腺腺样囊性癌临床生物学行为及制定临床治疗计划均有重要意义。     

细胞外基质与涎腺腺样囊性癌的远处转移

目的 研究涎腺腺样囊性癌与细胞外基质的关系。方法 通过肿瘤手术标本的免疫组化染色和超微结构观察、细胞系体外粘附实验及人工重组基底膜侵袭实验，并采用整合素受体抑制剂精氨酸-天冬氨酸进行体外及荷瘤动物体内实验，观察其预防及治疗肺转移的效果。结果 肿瘤团索周围的基膜样物质呈多层、溶解或断裂现象。出现腺样囊性癌远处转移患者的肿瘤标本组织蛋白酶D免疫组化阳性反应率(75％)明显高于无转移患者(43．8％)。肺高转移涎腺腺样囊性癌细胞株对人工重组基膜的侵袭细胞数明显高于其相应的非高转移细胞系。精氨酸-天冬氨酸在体外能抑制肺高转移涎腺腺样囊性癌细胞对人工重组基膜的侵袭，在体内能显著延长涎腺腺样囊性癌实验性肺转移动物的生存期。结论 涎腺腺样囊性癌的远处转移与细胞外基质有密切关系。     

NF-κB(p65)蛋白核转位与唾液腺腺样囊性癌侵袭和转移关系的研究

目的检测NF-κB p65蛋白在唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）临床组织标本中的表达水平和转位情况,分析其与ACC侵袭和转移之间的关系。方法应用免疫组织化学法,检测58例唾液腺腺样囊性癌石蜡标本中p65蛋白的表达和细胞定位,分析p65蛋白的表达、转位与ACC转移和其他临床病理参数的关系。结果在转移和非转移的ACC组,p65细胞表达阳性率无显著差异（P=0.2641）;而p65蛋白的核阳性表达率ACC转移组明显高于非转移组（P=0.0261）,并且与ACC神经浸润相关（P=0.0244）。结论 NF-κB通路的激活可能在唾液腺腺样囊性癌侵袭和转移中发挥重要作用。     

阿斯匹林抗ACC-M裸鼠肺转移的实验研究

目的 应用ACC-M裸鼠肺转移模型研究阿斯匹林对腺样囊性癌细胞转移的抑制作用。方法 裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞前后各7天连续服用分别含1mg％、10mg％和50mg％阿斯匹林饮用水或消毒饮用水14天,接种肿瘤后6周处死动物,比较各实验组与对照组的裸鼠肺重量和肺转移灶面积比。结果 服用含1mg％和 50mg％阿斯匹林饮用水的实验组与对照组相比较,两项指标的差别均有显著性（P<0.05）。结论 阿斯匹林对腺样囊性癌细胞ACC-M裸鼠肺转移有抑制作用。     

The biological behaviour of human adenoid cystic carcinoma cells transduced with interleukin-2-gene

Adenoid cystic carcinoma (ACC) of the salivary glands is a highly infiltrative malignant tumour with a tendency for lung metastasis. Gene therapy could be a potentially effective therapy for ACC and its metastasis. The aims of the study were: To transduce interleukin-2 (IL-2) gene into an ACC cell line with predisposition for lung metastasis (ACC-M); to compare the bioactivity of the gene-transduced cells and the parent cell line in vitro and in vivo. The IL-2 gene was transduced via a bicistronic retroviral vector into the ACC-M cells. The growth rate and DNA cell cycles of the parent ACC-M, the control viral vector AmGCEN, and the gene transduced AmIL-2 cell cultures were compared quantitatively and by flow cytometry, respectively. The tumourigenic ability of the three cell lines was verified by inoculation in athymic nude mice. The tumours developed were extracted and compared quantitatively and histologically. There was no difference in the growth rate and the DNA count between the ACC-M, AmGCEN, and AmIL-2 cell cultures. In the animal experiment, both the ACC-M and AmGCEN cells stimulated lung metastasis in all the mice, whereas there was no tumour found in the 1 x 10(6) AmIL-2 cells inoculation. On 3 x 10(6) AmIL-2 cells stimulation, three out of six mice developed tumours but the mass and volume of the tumours were smaller than the other two groups. Under light microscopy, the ACC-M tumours were mainly poorly differentiated with minimal cellular matrix, whereas the AmIL-2 tumours were well differentiated with ample matrix. The transduction of IL-2 gene can reduce the tumourigenicity of ACC-M cells and induces tumour cell differentiation in mice. The IL-2 gene can be a potential effective gene for the treatment of adenoid cystic carcinoma of salivary glands and its lung metastasis.     

miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究

目的 探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用。方法 利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平。过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变。Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达。通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞。SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平升高。裸鼠肺转移模型miR-181a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组（P<0.05）。结论 miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移。     

减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用。方法:4周龄BALB/Cnunu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期。结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长。结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用。联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用。     

腺病毒介导HSV-TK/GCV与IL-2基因对人涎腺腺样囊性癌的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-TK/GCV）与白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）基因联合应用对涎腺腺样囊性癌的抑制和杀伤作用。方法将0.2 ml细胞浓度为2×107/ml的涎腺腺样囊性癌高转移细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma cell line withhigh tendency of lung metastasis,ACC-M）的细胞悬液接种于20只裸鼠皮下,建立涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型。随机将20只荷瘤裸鼠分为A组：HSV-TK/GCV和IL-2联合基因治疗组（TK（IL-2组）;B组：HSV-TK/GCV组（TK组）;C组：空病毒组（EGFP组）;D组：ACC-M组;每组5只。分别于瘤体内注射TK（IL-2;TK;EGFP和无菌生理盐水。注射48小时后,对A、B、C组裸鼠每日腹腔注射GCV,D组每日腹腔注射生理盐水,连续10天。最后一次给药后第二天处死裸鼠,观察各组裸鼠的肿瘤体积和瘤重的变化,计算肿瘤生长抑制率;对移植瘤进行组织病理学观察;应用流式细胞仪检测移植瘤的细胞凋亡情况。结果在A组和B组中,ACC-M的生长均受到显著抑制。治疗后体积数减少,与ACC-M组比较差别有极显著性（P〈0.01）。A组和B组抑瘤率分别为91%和76%;光镜下观察A组和B组均出现了明显的细胞凋亡;流式细胞仪检测A组和B组有明显的凋亡峰出现,凋亡率分别为30.55±0.23和13.53±0.32;C组凋亡率为10.07±0.31,D组凋亡率为8.34±0.41%。除C、D组之间差别无明显性外,其余各组之间差别均有极显著性（P〈0.01）。A组和B组的细胞S期比例明显增加,G2/M期比例明显降低。结论 HSV-TK/GCV联合IL-2基因对ACC-M移植瘤有明显抑制作用,抑瘤效果优于单独应用HSV-TK/GCV系统。     

涎腺腺样囊性癌自杀基因治疗的实验研究

为 检测单纯疱疹病毒胸革激酶基因／无环鸟苷自杀基因治疗系统对高转移性涎腺腺样囊性癌细胞的体内治疗作用。方法 将肿瘤细胞接种于裸鼠两肋下,腹腔给予线日５０ｍｇ＝ｋｇ体重,２次／ｄ,连用１４ｄ。结果 实验组均不致瘤,而对照组均致瘤。用 原注射治疗移植瘤,可明显抑制肿瘤生长,抑制作用有较明显的旁杀伤效应,但远处旁杀伤效应不十分明显,结论ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ地体积较小的肿瘤有较发的作用,而对体积较大的 欠     

金属蛋白酶抑制剂BB-94抑制腺样囊性癌侵袭转移的实验

目的观察金属蛋白酶抑制剂BB-94对涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞侵袭、转移能力的抑制作用.方法癌细胞体外侵袭能力用重组基底膜侵袭实验测定,聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel     

nm23基因在涎腺腺体囊性癌中的表达及其与肺转移的关系

为探讨肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３与涎腺腺性囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｉｔｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＣＣ）的关系，应用ＬＳＡＢ免疫组化染色方法，研究ｎｍ２３表达产物二磷酸核苷激酶（ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｄｉｐｈｏｓｐａｔｅｋｉｎａｓｅ，ＮＤＰＫ）在ＡＣＣ中的表达，结果：ＮＤＰＫ／ｎｍ２３在ＡＣＣ中较高表达，阳性率为６４．０％（１６／２５）；其中，在肺转移者阳性率为１２．５％（１／８）无肺转移阳性率为８８     

TNP-470联合顺铂抗腺样囊性癌生长和肺转移的实验研究

目的　研究血管生成抑制剂TNP 470联合顺铂 (CDDP)对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法　分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株 (ACC M)细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉 ,建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第 3周开始 ,于裸鼠对侧皮下注射TNP 470 30mg/kg,隔日 1次 ,共7次。CDDP分别在第 3周和第 4周腹腔给药各 1次 ,剂量为 5mg/kg。停药后第 2d处死裸鼠。测量肿瘤大小 ,称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后 ,计数皮下瘤块血管密度。结果　与单用TNP 470相比 ,TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强 ,但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论　TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。