兴奋性氨基酸对体外培养大鼠皮质神经元的影响及氟桂利嗪对其干预的实验研究

目的：探讨兴奋性氨基酸对体外原代培养神经元的影响及氟桂利嗪在其保护机制中的作用。方法：原代培养小鼠皮质神经元，建立兴奋性氨基酸毒性损伤细胞模型，通过检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率和形态学观察了解兴奋性氨基酸对神经元的毒性作用；用台酚蓝排斥实验测定细胞活力，并观察氟桂利嗪对神经元的保护作用。结果：经谷氨酸处理的神经元较对照组损伤明显加重，氟桂利嗪干预组较损伤组神经元死亡明显减轻。结论：兴奋性氨基酸对皮质神经元有明显的毒性作用，氟桂利嗪对兴奋性氨基酸毒性损伤神经元有保护作用。     

氟桂利嗪阻滞小鼠皮质神经元胞浆钙离子内流的实验研究

目的　研究缺血状态下神经元胞浆内游离钙离子的变化及氟桂利嗪阻滞钙离子内流的作用。方法　用Flu 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的小鼠皮质神经元标记物 ,应用激光共聚焦技术检测缺血条件和加用氟桂利嗪后细胞内荧光强度 (△FI)的变化。结果　给予缺血处理 10min后 ,神经元胞浆内钙离子△FI明显升高(17.5 2± 3.16 ) ;经氟桂利嗪预处理后 ,可以明显抑制钙离子的△FI(9.5 5± 2 .10 ) ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 1) ,氟桂利嗪对无钙培养液缺血神经元胞浆内的钙离子浓度亦有抑制作用。结论　缺血状态下 ,神经元内钙离子明显升高 ,氟桂利嗪抑制胞浆内钙离子的升高 ,除通过阻断胞膜的电压敏感性钙通道外 ,可能还影响细胞内钙池的钙释放功能。     

氟桂利嗪联合普萘洛尔预防偏头痛128例

目的 观察氟桂利嗪联合普萘洛尔预防偏头痛的临床疗效.方法 128例偏头痛病人随机分为治疗组和对照组,治疗组用氟桂利嗪加普萘洛尔治疗,对照组用谷维素治疗,60 d后观察两组头痛指数的变化.结果 治疗组及对照组的头痛指数与治疗前比较均有下降(P<0.05或P<0.01),且治疗组治疗效果更为显著(P<0.01).结论 氟桂利嗪联合普萘洛尔是预防偏头痛的有效方法.     

氟桂利嗪与血塞通联合治疗老年偏头痛患者的效果

目的探讨氟桂利嗪联合血塞通用于老年偏头痛患者的效果。方法该院于2011年5月至2013年5月收治的老年偏头痛患者90例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组45例。对照组给予氟桂利嗪,观察组加用血塞通。比较两组治疗前后偏头痛发作次数、持续时间、疼痛程度及血液流变学指标,并评价疗效。结果观察组总有效率为95.56%(43/45),对照组为77.78%(35/45),差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后发作次数、持续时间、疼痛程度、红细胞压积、全血比黏度、血浆比黏度、纤维蛋白原均较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组明显低于对照组(P<0.05)。两组均未发生明显不良反应。结论相比单用氟桂利嗪,氟桂利嗪联合血塞通用于老年偏头痛患者能显著改善血液流变学指标。     

文拉法辛联合氟桂利嗪治疗偏头痛45例临床研究

目的文拉法辛联合氟桂利嗪治疗偏头痛的疗效与安全性。方法将偏头痛患者90例随机分为文拉法辛联合氟桂利嗪治疗组与单用氟桂利嗪组,观察4周,比较两组的疗效与安全性。结果经过4周治疗,研究组显效、有效、无效分别为24、16、5例,有效率89％;对照组分别为11、22、12例。有效率73％．两组间比较差异有统计学意义（χ2=8．658,P=0．013）。结论氟桂利嚎联合新型抗抑郁剂文拉法辛治疗偏头痛,能提高有效率,不增加不良反应。     

乌灵胶囊联合氟桂利嗪预防偏头痛发作的疗效观察

<正>偏头痛是一种常见的慢性神经血管性疾病,对日常生活影响较大,世界卫生组织把严重偏头痛定为最严重的慢性功能障碍性疾病之一,易反复发作,频繁发作可出现抑郁、焦虑等情绪改变,而抑郁、焦虑又是偏头痛的重要诱因,两者相互影响,恶性循环,因此,有效的抗抑郁治疗也是预防偏头痛发作的重要环节。     

氟桂利嗪对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的影响及其机制的初步研究

目的　利用氟桂利嗪 (FNZ)研究钙离子拮抗剂对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的作用及其作用机制。方法　利用体外培养的海马神经元 ,通过去除培养液中的糖和氧气来模拟脑缺血缺氧 ,观察不同浓度FNZ对缺血缺氧海马神经元的形态学、乳酸脱氢酶 (LDH)和细胞存活率的影响 ,并观察FNZ对Bcl 2、BDNF蛋白表达的影响。结果　在一定浓度范围之内 ,FNZ可对缺血缺氧神经元起到保护作用 ,过高浓度不但没有保护作用 ,反而加重损伤。缺血缺氧可使Bcl 2蛋白表达明显下降 ,BDNF蛋白表达明显上升 ,FNZ(5 0 μmol/L)可使缺血缺氧神经元Bcl 2表达明显升高 ,BDNF表达下降。结论　在一定浓度范围之内FNZ可保护缺血缺氧神经元 ,可能与诱导Bcl 2蛋白表达和抑制BDNF蛋白表达有关 ;过高浓度FNZ有可能存在某种潜在毒性。     

氟桂利嗪单用及联用血塞通治疗老年偏头痛患者的疗效比较

偏头痛是临床常见的慢性神经血管性疾患,系由多种原因引起的血管舒缩功能障碍所致,患病率约为5％ ～ 10％,其中60％左右的患者有家族遗传背景[1].发病时患者头部常以搏动性疼痛为主要表现,可单侧或双侧发病,常反复发作并逐渐加重,精神因素、强烈光照、疲劳、低血糖等都可诱发偏头痛.据统计,65岁以上男性老年人偏头痛发病率为7％,女性偏头痛发病率为12％[2].该病目前尚无特异性疗法,治疗该病多以缓解头痛为主要目标.本文拟比较氟桂利嗪单用及联用血塞通治疗老年偏头痛患者的临床疗效.     

氟桂利嗪对复杂部分性发作癫痫患者脑脊液NO的影响

目的 探讨氟桂利嗪治疗复杂部分性发作癫痫（CP）患者的辅助疗效及其对CSF中一氧化氮（NO）变化的影响。方法 采用荧光分光光度法测定30例氟桂利嗪治疗组（A组）和30例常规治疗对照组（B组）治疗前后CSF中NO水平与癫痫发作次数改善。结果 两组患者CSF中NO水平治疗前无显著差异（P＞0.05)。治疗后差异显著（P＜0.05)，氟桂利嗪组癫痫发作明显减少。结论 氟桂利嗪辅助治疗复杂部分性发作癫痫患者有良好临床效果，值得临床推广使用。     

氟桂利嗪对缺血再灌注后沙土鼠CA1区迟发性神经元死亡的保护作用

目的　探讨迟发性神经元死亡(DND)发生的机制及氟桂利嗪对海马CA1区神经元的保护作用。方法　将实验动物随机分为脑缺血再灌注组、给药组及假手术组。采用免疫组织化学染色及电镜下观察脑组织病理变化的方法观察缺血再灌注后海马各亚区谷氨酸及神经生长因子的表达变化及氟桂利嗪的神经保护作用。结果　脑缺血再灌注第1天和第2天海马各亚区谷氨酸表达增高,与药物组及对照组比较差异显著(P <0 .0 1) ,其第2天表达增高最为显著,与第1天比较P <0 .0 1;脑缺血再灌注第1天和第2天海马CA1区神经生长因子表达增高,与药物组及对照组比较P <0 .0 1,其第2天表达增高最为显著,与第1天比较P <0 .0 5 ;脑缺血再灌注第7天见海马CA1区神经元广泛性脱失,胶质细胞大量增生,缺血再灌注组和给药组海马CA1区存活的神经元均少于对照组(P <0 .0 1) ,但给药组存活的神经元数目又明显多于缺血再灌注组(P <0 .0 1)。结论　氟桂利嗪可以阻止谷氨酸的持续性高表达及神经生长因子的表达下降,从而对DND的发生起到保护作用。     

Na^＋ Channels Activation Recovery from Use-dependent Block in Human Embryonic Kidney Cells and Effects of Gansong Volatile Oil on Na^＋ Current Recovery

Objectives This experiment used whole-cell patch-clamp technique to investigate the course of recovery from use- dependent block of Na ＋ channels （Nav 1.5） in human embryonic kidney （HEK） cells, on which to verify the effects of volatile oil of Nardostachy chinesis Batal （Gansong）. Methods Two pulses generated by computer followed by a recovery pulse and a test pulse, the interval duration between the two pulses varied from 16 ms to 1 s, and holding potential is -80 mV to - 140 inV. The peak Na^＋ current for a given recovery time was normalized to the tully recovered peak current, and the normalized value was the plot as a function of the recovery time to study the effects of 3 ppm concentration Gansong volatile oil on recovery from use-dependent block of Navl. 5 in HEK. Results It showed that Gansong group, comparing with control group, delayed the time courses of recovery from use-dependent block [ （33.2± 5.77 ） ms for control group and （52.5± 6.08 ） ms for 3 ppm Gansong group, P 〈 0.05 ] In the presence of Gansong, inhibition of the Na^＋ current was enhanced by increasing frequency of depolarizing pulse from 56.5 ms to 16 ms. In the control group, the time course of recovery showed that recovery started at 19.5 ms and finished by 36.5 ms. In the presence of Gansong, the time course of recovery showed that recovery started at 36.5 ms and finished by 56.5 ms. Na^＋ currents recovered from the use-dependent block varying with holding potential （holding potential-dependent）. Conclusions The results suggested that Na ＋ currents recovered from the use-dependent block correlated with persistent time, holding potential. The Gansong volatile oil has inhibitive effect on the Na^＋ current recovery.     

砷对原代培养海马神经细胞凋亡的研究

目的 观察砷对海马神经细胞凋亡的影响。方法 采用光学显微镜、流式细胞术和免疫细胞化学方法检测砷致海马神经细胞凋亡。结果 随着砷剂量加大，作用时间延长，海马神经细胞逐渐出现凋亡的形态学改变。流式细胞术检测，砷可使亚二倍体峰的高度增高，面积增大。免疫细胞化学和图像分析显示海马神经细胞浆内Bax表达上调。结论 砷在一定剂量和作用时间内可致海马神经细胞的凋亡。     

埋线配合放血疗法治疗偏头痛临床疗效及脑血流动力学观察

目的 探讨穴位埋线及放血疗法治疗偏头痛的临床疗效及作用机制.方法 将80例患者随机分为两组.A组为治疗组,采用穴位埋线及放血疗法治疗;B组为药物组,采用口服西比灵治疗.两组患者分别在治疗前及治疗后采用偏头痛诊断、疗效评定标准进行评分,判定治疗效果.同时采用经颅多普勒超声对治疗前后的大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)、大脑后动脉(PCA)平均脑血流速度进行检测.结果 穴位埋线及放血疗法能有效缓解偏头痛的症状,改善头痛发作次数、头痛程度、持续时间及伴随症状,并对颅内血流动力学产生影响.两组患者治疗效果具有统计学意义(P<0.05).结论 穴位埋线及放血疗法可提高偏头痛临床治疗效果,能对颅内血流动力学产生影响.     

二十二碳六烯酸对大鼠心室肌细胞钠通道和瞬时外向钾通道的影响

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠心室肌细胞钠通道电流(INa)和瞬时外向钾通道电流(Ito)的动力学影响.探讨DHA抗心律失常的机制.方法 采用膜片钳技术在全细胞模式下,记录20、40、60、80、100和120μmol/L DHA对大鼠心室肌细胞INa和Ito的影响.结果 (1)DHA对INa呈浓度依赖性阻滞,使稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长,对稳态激活曲线无影响.在指令电压-30 mV,上述浓度DHA对INa阻滞分别为(1.51±1.32)%、(21.13±4.62)%、(51.61±5.73)%、(67.62±6.52)%、(73.49±7.59)%和(79.95±7.62)%(P<0.05,n=20),DHA对INa的半效作用浓度为(47.91±1.57)μmol/L.(2)DHA对Ito呈浓度依赖性阻滞,使稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长,对稳态激活曲线无影响.在指令电压+70 mV,上述浓度DHA对Ito阻滞分别为(2.61 ±0.26)%、(21.79±4.85)%、(63.11±6.57)%、(75.52 ±7.26)%、(81.82 ±7.63)%和(84.33±8.25)%(P<0.05,n=20),DHA对Ito的半效作用浓度为(49.11±2.68)μmol/L.结论 DHA对钠通道和瞬时外向钾通道的抑制作用可能是其抗心律失常机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of docosahexaenoic acid(DHA)on sodium channel current(INa)and transient outward potassium channel current(Ito)in rat ventricular myocytes and to evaluate potential anti-arrhythmic mechanisms of DHA.Methods INa and Ito of individual ventricular myocytes were recorded by patch-clamp technique in whole-cell configuration at room temperature.Effects of DHA at various concentrations(0,20,40,60,80,100 and 120 μmol/L)on INa and Ito were observed.Results (1) INa was blocked in a concentration-dependent manner by DHA,stably inactivated curves were shifted to the left,and recover time from inactivation was prolonged while stably activated curves were not affected by DHA.At-30 mV,INa was blocked to(1.51 ±1.32)%,(21.13±4.62)%,(51.61 ±5.73)%,(67.62 ±6.52)%,(73.49±7.59)%and(79.95±7.62)%in the presence of above DHA concentrations(all P<0.05,n=20),and half-effect concentration(EC50)of DHA on INa was(47.91±1.57)μmol/L(2) Ito were also blocked in a concentration-dependent manner by DHA,stably inactivated curves were shifted to the left,and recover time from inactivation was prolonged with increasing concentrations of DHA,and stably activated curves were not affected by DHA.At+70 mV,Ito was blocked to(2.61 ±0.26)%,(21.79±4.85)%,(63.11 ±6.57)%,(75.52 ±7.26)%,(81.82 ±7.63)%and(84.33±8.25)%,respectively,in the presence of above DHA concentrations(all P<0.05,n=20),and the EC50 of DHA on Ito was(49.11±2.68)μmol/1.Conclusion The blocking effects of DHA on APD and Ito may serve as one of the anti-arrhythmia mechanisms of DHA.     

过量碘化物诱导原代培养的大鼠仔鼠皮层神经元细胞凋亡的实验研究

目的观察过量碘化物对原代培养的大鼠仔鼠皮层神经元细胞凋亡的诱导作用，并对其机制作初步探讨。方法取新生0～1d的大鼠仔鼠皮层神经元培养24h后，加入不同浓度的碘化钾，采用光镜及荧光显微镜观察细胞的形态改变；流式细胞术分析DNA的降解；分光光度法检测细胞的一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性。结果实验组加入过量碘化物12h可见细胞形态发生改变，经荧光染色后可见凋亡细胞，染色质浓集，呈致密的斑块状或新月状，并可见凋亡小体及核碎片，48h左右达到高峰。流式细胞术分析细胞凋亡率随碘化物浓度的升高而升高。实验组细胞的NO含量及NOS活性较正常对照组增高。结论过量碘化物可以诱导原代培养的大鼠仔鼠皮层神经元细胞凋亡，并呈剂量依赖关系，其机制可能与NOS活性及NO含量增高有关。     

咪达普利对舒张性心力衰竭大鼠心房肌细胞L型钙通道电流及相关基因蛋白表达的影响

目的探讨咪达普利对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠心房肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)和ICa-L相关基因Cav1.2蛋白表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组、DHF组、低、中、高剂量组,每组6只。后4组采用腹主动脉缩窄建立DHF模型,对照组和DHF组予等量生理盐水,低、中、高剂量组依次给予咪达普利1.5、3和6mg/(kg.d)干预。各组干预4周后,采用心脏超声检测心功能,急性酶解法获得单个大鼠心房肌细胞和标准全细胞膜片钳技术记录通道电流,凝胶电泳法记录心房肌细胞ICa-L相关基因Cav1.2的蛋白表达。结果与对照组比较,DHF组大鼠心房肌细胞ICa-L电流密度峰值和Cav1.2蛋白表达明显减少;与DHF组比较,低、中、高剂量组大鼠心房肌细胞ICa-L峰值电流密度和Cav1.2蛋白表达明显增加,该作用随着咪达普利剂量增加而增加。结论咪达普利明显抑制DHF大鼠心房肌ICa-L下调,此作用与增加心房肌Cav1.2蛋白表达水平有关。     

硫化氢对离体大鼠心室肌细胞ATP依赖的钾通道外向电流的影响

目的 观察内源性及外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对大鼠离体心室肌细胞ATP依赖的钾通道(KATP)外向电流的影响,以探讨H2s对心窜肌细胞的作用.方法 对大鼠离体心脏采用胶原酶酶解法得到单个心室肌细胞,采用膜片钳全细胞技术记录DL-propargylglycine(PPG)及不同浓度硫氢化钠(NaHS,外源性H2S的供体)干预前后的KATP什电流.结果 经PPG(200 μmol/L)干预后,KATP峰电流密度(+70 mV)显著减小[干预前后分别为(5.3258±0.7556)pA/pF比(3.7856±0.4312)pA/pF,P＜0.01],且具有时间依赖性.经NaHS(9.375、18.75、37.5、75、150μmoL/L)干预后,KATP峰电流密度呈浓度依赖性增大,至150 μmol/L时峰电流密度明显增大[(6.6310±0.6092)pA/pF比(9.0949±1.0259)pA/pF,P＜0.01].结论 内源性及外源性H2s均可以开放大鼠离体心室肌KATP通道,使KATP电流增加.