缺血预处理对糖尿病在体大鼠心肌环磷酸腺苷及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶表达的影响

目的 探讨糖尿病大鼠心肌缺血预处理（IPC）后环磷酸腺苷（cAMP）及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶（PKA）表达的变化.方法 选取糖尿病与非糖尿病SD大鼠各30只,分为3组（n=10）：假手术（Sham）组,缺血再灌注（I/R）组及IPC组.比较各组血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌梗死面积（MI）及心肌cAMP、PKA含量的变化.电镜标本观察心肌线粒体.结果 非糖尿病大鼠中,IPC组与I/R组比较,CK减少[（2428.32±170.19）vs（6324.06±356.26） U/L,P＜0.05],LDH减少[（1698.98±129.65）vs（4660.15±115.84） U/L,P＜0.05],CK-MB减少[（1450.43±23.56）vs（3280.90±71.33）U/L,P＜0.05],MI减少[（5.63±9.32）％vs（17.75±7.36）％,P＜0.05].糖尿病大鼠中,IPC组与I/R组比较,CK、LDH、CK-MB、MI未见明显缩小[（5962.63±145.22）vs（6012.13±124.08） U/L,（5998.44±123.40）vs（6023.54±89.01）U/L,（4011.13±81.09）vs（4380.71±76.21）U/L,（18.54±2.39）％vs（15.25±4.33）％,P＞0.05].非糖尿病大鼠中,IPC组与I/R组比较,cAMP增加[（0.61±0.07）vs（0.32±0.06） pmol/g,P＜0.05],PKA含量增加[（17.05±1.75）vs（12.68±1.13） pmol/（mg·min）,P＜0.05],糖尿病大鼠IPC组cAMP、PKA含量无明显增加[（0.35±0.04）vs （0.37±0.08） pmol/g,（12.14±2.15）vs（11.79±1.16） pmol/（mg·min）,P＞0.05].非糖尿病大鼠IPC组线粒体的损伤减轻,而糖尿病大鼠IPC组线粒体损伤未见减轻.结论 非糖尿病大鼠IPC可保护心肌.糖尿病抑制IPC的心肌保护作用,其机制可能与糖尿病大鼠心肌cAMP信号系统表达受抑制有关.     

二氮嗪恢复缺血预处理对老年大鼠心肌的保护作用

目的 探讨二氮嗪(DZ)对经缺血预适应(IPC)后的老年大鼠缺血再灌注(I/R)心肌的影响及可能机制.方法 取老年和青年Wistar大鼠,建立离体心脏Langendorff灌注模型,分7组(每组8只):青年对照组、青年I/R组、青年IPC组、老年对照组、老年I/R组、老年IPC组、老年DZ组.对照组全心灌流90 min.I/R组心脏灌流30 min后,缺血30 min,再复灌30 min.IPC组灌流10 min,经2次缺血5 min再灌注5 min后,缺血30 min,再复灌30 min.DZ组灌流10 min,给予含DZ(100 μmol/L)的K-H液灌注20 min,余同IPC组.比较各组复灌30 min后心排血量(CO)、左室发展压 (LVDP)、左室内压最大上升和下降速率 (±dp/dtmax) 的恢复率;检测缺血前及复灌30min后冠脉流出液中肌酸激酶 (CK) 活性及一氧化氮(NO)含量和心肌中丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD) 的含量.结果 青年大鼠中,IPC组与I/R组比较,CK生成明显减少,NO含量明显增加,MDA含量明显降低,SOD含量明显增加,CO、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax恢复率明显增加(P＜0.01).而在老年大鼠中,IPC组与I/R组比较上述指标无明显统计学差异(P＞0.05),DZ组与I/R组比较有明显统计学差异 (P＜0.05或P＜0.01).结论 IPC对老年大鼠I/R心肌保护作用减弱,其机制可能与NO信号通路表达受抑制有关,DZ可恢复IPC对老年大鼠I/R心肌保护作用.     

心肌缺血预处理糖尿病大鼠细胞相关因子的变化

目的通过观察大鼠心肌梗塞面积和细胞相关因子的变化,探讨缺血预适应(IP)对缺血-再灌注(I/R)糖尿病大鼠心肌的保护作用.方法向健康SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(60mg/kg)制造糖尿病大鼠模型.2天后,随机测定血糖,将血糖≥11.1 mmol/L定为糖尿病大鼠39只.2周后,麻醉大鼠,开胸结扎冠状动脉(冠脉)左前降支(LADCA)复制IP和I/R模型.将39只糖尿病大鼠分为IP糖尿病大鼠组(IP组)、非IP糖尿病大鼠组(NIP组)、糖尿病大鼠对照组(C组)各13只.记录Ⅱ导联心电图.测定心腔血清肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α).心肌组织丙二醛(MDA)、Cu-Zn超氧化物岐化酶(Cu-ZnSOD)含量.取心脏切片大体染色,计算心肌缺血范围和心肌坏死范围.结果IP组和NIP组间心肌缺血范围无显著性差异(P>0.05).IP组心肌坏死范围较NIP组减少49.7%(P<0.01).再灌注期IP组室性心律失常减少,尤其是心室颤动(室颤)较NIP组显著减少52.9%(P<0.01).IP组CK-MB、IL-8和TNF-α及MDA显著低于NIP组(均P<0.05),IP组Cu-Zn SOD高于NIP组(P<0.05).结论IP可能通过抗氧化作用和减少TNF-α,减少心肌坏死范围和降低糖尿病大鼠室颤的发生率,从而减轻糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注的损害.     

神经型一氧化氮合酶在小鼠心肌缺血预处理中的作用

目的 应用神经型一氧化氮合酶(nNOS)基因敲除小鼠和nNOS抑制剂,探讨nNOS对心肌缺血预处理后心肌细胞凋亡的影响.方法 实验分为野生型缺血再灌注组(WT IR)、野生型缺血预处理组(WT IP)、野生型缺血预处理L-VNIO处理组(WT IP+ L-VNIO)、基因敲除鼠缺血再灌注组(KO IR)和基因敲除鼠缺血预处理组(KO IP).采用冠状动脉左前降支结扎法建立小鼠缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注组缺血30 min再灌注3h,缺血预处理组分别经缺血5 min再灌注5 min连续三个循环后,再缺血30 min再灌注3h,观察TUNEL染色和Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性变化,并用Western Blot法观察Bax、Bcl-2和Fas蛋白的表达情况.结果 与WT IR组相比,WT IP组小鼠TUNEL阳性细胞数目减少,Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性降低,Bax和Fas蛋白表达显著降低,Bcl-2表达显著增加(P＜0.05).而在KO IP组,与KO IR组相比,TUNEL阳性细胞数目和Caspase活性显著增加,Bax和Fas表达显著增高,Bcl-2表达显著降低(P＜0.05).结论 nNOS在心肌缺血预处理时发挥抑制心肌细胞凋亡的作用.     

一氧化氮在高脂饲养兔胸主动脉的变化和意义

观察高脂饲养兔胸主动脉血管环对去甲肾上腺素（ＮＥ）的反应性及环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）含量的变化。结果表明其对ＮＥ的反应性降低，组织ｃＧＭＰ的含量减少。左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）和硝普钠（ＳＮＰ）可恢复此反应性，而一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）阻滞剂Ｌ－硝基精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）却加重其降低的反应性。提示高脂饲养兔血管环中的一氧化氮（ＮＯ）减少，Ｌ－Ａｒｇ及ＳＮＰ可以逆转之，暗示Ｌ－Ａｒｇ／ＮＯ通路障碍可能是动脉粥样硬化的又一机理。     

二氮嗪预处理对大鼠离体缺血/再灌注心肌保护作用的研究

目的 探讨二氮嗪预处理（DPC）对心肌缺血/再灌注损伤保护作用的机制。方法 Wistar大鼠26只,建立离体心脏Langendorff灌注模型,随机分成4组,即:①缺血/再灌注组（I/R组,n=10）:在心脏平衡灌流30 min后,缺血30 min再灌注K-H液1 h。②二氮嗪预处理组（DPC组,n=10）:在心脏平衡灌流10 min后,给予含二氮嗪（100μmol/L）的K-H液灌注5 min,再复灌不含二氮嗪的K-H液5 min后,给予含二氮嗪的K-H液灌注5 min;再复灌不含二氮嗪的K-H液5 min,然后缺血30 min,再灌注K-H液1 h。③空白对照组(n=3):用等量盐水代替二氮嗪,过程同DPC组。④二甲基亚砜组（DMSO组,n=3）:用DMSO代替二氮嗪,过程同DPC组。取4组大鼠心尖肌制作冰冻切片和电镜标本。前者用于免疫组化染色检测过氧化物酶体增生激活受体γ协同刺激因子1α（PGC-1α）的表达;后者用于对心肌线粒体进行Flameng评分。结果 I/R组、DPC组、空白对照组和DMSO组的PGC-1α平均积分吸光度值（IODA）,分别为（3.88±1.72）、（8.40±3.64）、（3.40±2.44）和（3.69±1.92）,DPC组与其他组比较PGC-1α的表达明显增高（P<0.05）。Flameng评分:I/R组为（1.78±0.14）,DPC组为（0.47±0.10）,空白对照组为（1.69±0.23）、DMSO组为（1.72±0.17）,DPC组较其他组线粒体的损伤明显减轻（P<0.01）。结论 DPC后,心肌中PGC-1α的表达明显增加,线粒体的损伤明显减轻,提示DPC对心肌的保护作用与PGC-1α的高表达有关,PGC-1α可能是一种内源性心肌保护物质。     

GATA-6基因在一氧化氮—环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路抑制血管平滑肌细胞表型转化中的作用

目的探讨一氧化氮—环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路是否通过对GATA-6表达进行调节来抑制苯肾上腺素诱导的血管平滑肌细胞表型转化。方法组织贴块法原代培养Wistar大鼠血管平滑肌细胞。四甲基偶氮唑盐法测定血管平滑肌细胞的增殖,逆转录聚合酶链反应以及免疫印迹法测定GATA-6和平滑肌肌球蛋白重链的表达水平。结果一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶选择性环磷酸鸟苷类似物Sp-8-pCPT-cGMPs抑制苯肾上腺素诱导的血管平滑肌细胞增殖,但环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶拮抗剂Rp-8-pCPT-cGMPs促进血管平滑肌细胞增殖。S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMPs促进GATA-6和平滑肌肌球蛋白重链mRNA和蛋白质的表达,而Rp-8-pCPT-cGMPs则降低其表达水平。结论一氧化氮—环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路在转录水平和翻译水平促进GATA-6和平滑肌肌球蛋白重链的表达,进而参与维持血管平滑肌细胞分化表型。     

缺血预处理对糖尿病大鼠心肌梗死和细胞因子的影响

目的 观察大鼠心肌梗死面积和细胞相关因子的变化,探讨缺血预处理（IP）对缺血－再灌注（I／R）糖尿病大鼠心肌的保护作用。方法 向健康SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素（每只60mg/kg）制造糖尿病大鼠模型。2d后测定血糖,将血糖≥11．1mmol/L定为糖尿病鼠,共39只。2周后,麻醉大鼠。开胸结扎冠状动脉左前降支（LADCA）复制IP和I／R模型。将39只糖尿病大鼠分为IP组、非缺血预处理（NIP）组、对照组,每组13只。记录Ⅱ导联心电图,测定心腔血清肌酸激酶同工酶（CK－MB）、白细胞介素－8（IL－8）、肿瘤坏死因子α（TNFα）、心肌组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。取心脏切片染色,计算心肌缺血范围和心肌坏死范围。结果 IP组和NIP组间心肌缺血范围分别为46．6％和48．6％,无显著性差异,心肌坏死范围分别为64．8％和32．6％9P＜0．01）。IP组再灌注期室性心律失常减少,尤其是室颤较NIP组显著减少52．9％（P＜0．01）。IP组CK－MB和TNFα及MDA显著低于NIP组（P＜0．05）。结论 缺血预处理可通过减少TNFα和抗氧化作用,减少心肌坏死范围和降低糖尿病大鼠室颤的发生,从而减轻糖尿病大鼠心肌I／R的严重损害。     

一氧化氮对大鼠在体心肌缺血预适应作用的研究

目的:实验以缺血预适应模型为基础,研究一氧化氮(NO)在心肌缺血预适应延迟相中的作用。方法:实验将Wistar大鼠随机分为5组:假手术组、仅行缺血预适应处理的对照组、于延迟相给药的S-甲基琉脲硫酸盐(SMT)组、硝普钠(SNP)组和SMT+SNP组。测算各组动物血清NO2-+NO3-含量及CK-MB定量,观察NO的释放对心肌损伤、梗死面积的影响。心肌细胞超微结构的变化。结果:限制内源性NO的释放可降低心肌损伤的程度,缩小心肌损伤、梗死面积。结论:在心肌缺血预适应延迟相过程中,内源性NO加重心肌损伤程度,而外源性NO可减轻心肌损伤程度。     

雷米普利对2型糖尿病患者一氧化氮和C反应蛋白的影响

目的　探讨 2型糖尿病患者血清一氧化氮 (NO)和C反应蛋白 (CRP)的变化及雷米普利对其影响。方法　 160例 2型糖尿病患者随机分为常规治疗组和雷米普利组 ,雷米普利组在常规治疗基础上加雷米普利治疗。用化学法和免疫比浊法测定治疗前及治疗 1、2、3、6月后血清NO和CRP ,以 75名正常人为对照。结果　糖尿病患者血清NO浓度显著低于正常人。而CRP浓度显著高于正常人。雷米普利组治疗 2月后NO浓度从 ( 9.2 4± 3 .43 ) μmol/L显著上升到 ( 10 .76± 3 .0 7) μmol/L ,3月后CRP从 ( 3 .3 6± 1.82 )mg/L显著下降到 ( 2 .72± 1.63 )mg/L ;常规治疗组 6个月观察期内NO和CRP无明显变化。结论　 2型糖尿病患者存在着血管内皮功能受损和动脉壁的慢性炎症反应 ,雷米普利减轻了这种内皮功能受损和慢性炎症反应。     

诱导型一氧化氮合酶和解偶联蛋白-2对心肌缺血预适应的作用

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和解偶联蛋白-2（uncoupling protein-2,UCP2）对大鼠心肌缺血预适应的保护机制。方法 结扎左冠状动脉复制大鼠心肌缺血再灌注模型。预适应组行3次缺血5min,再灌注10min的预处理,分别于预处理0,6,12,24和48h（分别为0,6,12,24和48h亚组）后行30min缺血及120min再灌注：对照组开胸后不结扎左冠状动脉,电镜观察心肌超微结构,据Rainio评分标准进行心肌超微结构损伤程度的半定量分析。采用Western Blot及比色法检测心肌UCP2活性及iNOS活性。结果 预适应各亚组UCP2活性均增高（P〈0．05）,0h亚组UCP2表达水平最高（P〈0．01）,24小时亚组和48小时亚组心肌iNOS活性显著升高（P〈0．05）。结论 UCP2和iNOS共同参与了大鼠心肌缺血预适应心肌保护作用。     

一氧化氮在2型糖尿病发病机制中的作用

在病理条件下,一氧化氮通过影响胰岛素信号系统转导途径中的重要的信号分子而导致外周组织胰岛素抵抗的形成,并通过介导脂质、细胞因子及高糖所致的胰岛β细胞功能障碍,而在 2型糖尿病的发病中发挥了重要作用。     

糖尿病患者血浆一氧化氮水平与血流动力学变化关系的研究

目的研究ＮＯ在ＤＭ患者血管并发症中的作用。方法高效液相色谱测定７４例ＤＭ病人和３０例正常人血浆ＮＯ水平，同时测定甲襞微循环血流及经颅多普勒血流。结果糖尿病组血浆ＮＯ水平明显低于对照组（Ｐ＜００１），随着血管并发症的增多，血浆ＮＯ的水平也随之降低；甲襞微循环总积分ＤＭＭ组较对照组增高（Ｐ＜００１），血流速度明显减慢（Ｐ＜００１），颅底动脉血流速度明显高于对照组（Ｐ＜００１）；ＤＭ病人血浆ＮＯ与微循环血流速度呈直线正相关，ＮＯ与颅底动脉血流速度呈负相关。结论ＮＯ可影响ＤＭ病人的血液动力学变化，其水平的高低在一定程度上反映了ＤＭ及血管损伤的程度。     

卡托普利对2型糖尿病患者内皮素、一氧化氮及C反应蛋白的影响

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和C反应蛋白(C-RP)的变化及卡托普利对其影响。方法120例T2DM患者随机分为常规治疗组和卡托普利组,卡托普利组在常规治疗基础上加卡托普利。分别测定治疗前及治疗1、2、3、6个月后血清NO、ET和C-RP,以50例正常人为对照。结果T2DM患者血清NO浓度显著低于对照组(23±6μmol/L比37±8μmol/L,P<0·05),ET含量明显高于对照组(94±19μg/L比57±14μg/L,P<0·05),C-RP浓度显著高于对照组(4·6±2·1mg/L比2·3±1·2mg/L,P<0·05)。卡托普利组治疗2个月后NO浓度显著上升(23±7μmol/L比29±6μmol/L,P<0·05),ET显著下降(95±19μg/L比80±22μg/L,P<0·05),3个月后C-RP也显著下降(4·7±1·3mg/L比3·3±1·1mg/L,P<0·05);常规治疗组6个月观察期内NO、ET和C-RP无明显变化。结论T2DM患者存在着血管内皮功能受损和动脉内膜的慢性炎症反应,卡托普利可减轻T2DM患者的内皮功能受损和慢性炎症反应。     

去甲肾上腺素预处理对大鼠供心热休克蛋白70、一氧化氮及一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨去甲肾上腺素预处理是否可诱导心肌热休克蛋白70(HSP70)的合成,并研究其对供心一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨去甲肾上腺素预处理心肌保护作用机制。方法:Wistar大鼠18只,分为2组:对照组(C,n=9),腹腔注射0.9%氧化钠注射液0.5 mL,24 h后取离体心脏灌注(Histidine-tryptophan-ketoglutarte,HTK)心脏保护液,4℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注(Krebs-Henseleit,K-H)液2 h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于0.9%氯化钠液中)3.1μmol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法同C组。测定心肌HSP70、NO、NOS的含量以及相关生化指标并做统计学处理比较。结果:HSP70含量E组较C组明显增高(P<0.01),NO、NOS的含量E组较C组明显增多(P<0.01),生化指标E组明显优于C组。结论:去甲肾上腺素预处理能诱导供心心肌组织HSP70、NO、NOS高表达,其对供心具有明显的保护效应,并且其促进心肌NO、NOS的表达,这可能是去甲肾上腺素预处理发挥供心保护作用的机制之一。     

缺血预处理对老年大鼠肝硬化肝脏保护作用及其机制探讨

目的　探讨缺血预处理对老年大鼠肝硬化肝脏缺血再灌注损伤的保护作用和机制。　方法　老年肝硬化SD雄性大鼠 40只 ,随机分为 5组 ,每组 8只。以肝组织ATP、ADP、AMP、能荷及血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、乳酸脱氢酶 (LDH)和肝脏胆汁分泌量来评价肝功能 ,检测肝组织P 选择素蛋白表达并计算肝组织中性粒细胞浸润数。　结果　缺血再灌注 12 0min后 ,缺血预处理 (IPC)组和精氨酸预处理 (APC)组ATP含量和能荷水平明显高于缺血再灌注 (I/R)组〔分别为 (4 1± 1 6)、(4 0± 1 6)、(1 5± 0 6)U/L和 (0 6± 0 1)、(0 6± 0 1)、(0 4± 0 1)U/L ,均为P<0 0 1〕 ,而Nω 硝基 L 精氨酸甲酯预处理 (NPC)组与I/R组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。IPC组和APC组ALT、AST、LDH受到明显抑制 (P <0 0 1)。肝组织胆汁分泌量 ,IPC组明显多于I/R组〔(0 10±0 0 3 )和 (0 0 7± 0 0 3 )ml/g肝组织 ,P <0 0 1〕 ,APC组与I/R组差异有显著性 (P <0 0 1)。IPC组和APC组中白细胞浸润受到抑制。I/R组肝细胞P 选择素蛋白表达显著增强 (P <0 0 1) ,IPC组和APC组明显抑制 ,而NPC组增强 (P <0 0 1)。肝组织中P 选择素蛋白表达与中性粒细胞浸润数之间呈显著正相关 (r=0 60 ,P <0 0 1)。     

Macrophage-derived cytokine and nitric oxide profiles in type I and type II diabetes mellitus: effect of thymoquinone

Abstract Comparing macrophage-derived cytokine and nitric oxide (NO) profiles in type I and type II diabetes mellitus (DM); and determining whether thymoquinone (TQ) has any modulatory effect were the main objectives of the present study. Peritoneal macrophages have been collected from Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty (OLETF) as a model for type II DM and its control Long-Evans Tokushima Otsuka (LETO) rats, as well as from streptozotocin (STZ)-injected LETO ones as a model for type I DM. The cells were cultured and incubated with or without TQ (10 µM) in the absence or presence of lipopolysaccharide (LPS; 1 µg/ml). The same parameters have been also assessed in sera of the used animals with or without TQ treatment (3 mg/kg) under both LPS-stimulated (10 mg/kg) and unstimulated conditions. Nitrite, IL-1 and TNF- were significantly higher in macrophage supernatants and sera of the acutely affected STZ-LETO rats either with or without LPS stimulation compared to corresponding controls. On the other hand, chronically diabetic OLETF rats macrophage supernatants showed significant decreases of IL-1 and TNF- levels upon LPS stimulation or even without stimulation (IL-1); and insignificant increase in nitrite concentration, which turned significant upon LPS stimulation. Sera of these animals, however, showed significant increase in TNF- level. TQ normalised the elevated nitrite and cytokine profiles both in vitro and in vivo, yet had no significant effect on the already decreased parameters in chronically affected OLETF rats. These data suggest that there is a tendency for macrophage inflammatory products to increase in acute type I and to decrease in chronic type II DM; and that TQ has the potential to normalise the elevated levels of these macrophage-derived inflammatory mediators.