一种高效的LAK细胞——A—LAK细胞

LAK 细胞用于晚期癌症病人的过继免疫治疗已取得可喜成果。本文介绍了一种高效 LAK细胞——A-LAK 细胞的分离培养方法、体内外抗瘤活性,并分析了其用于肿瘤过继免疫治疗的优点。     

人胎儿LAK细胞临床应用的可行性研究

LAK疗法是迄今最有效的抗肿瘤免疫过继疗法,但是在实施此疗法过程中存在的最棘手问题便是LAK前体细胞来源及数量问题。为了寻找能够代替自身PBL有新的LAK前体细胞来源,本文主要探讨了胎儿LAK细胞抗肿瘤活性以及体外扩增和增殖规律。材料和方法一、胎儿哈尔滨市妇产医院为本项研究提供水囊引产胎儿。胎龄为20～34周。二、LAK细胞诱导及体外扩增胎儿脾脏、肝脏或胸腺细胞以1.5×10~6/ml浓度混悬     

生物反应调节剂在提高LAK细胞抗肿瘤活性应用

自1982年美国学者Rosenberg等发现淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）以来,淋巴因子激活的杀伤细胞／白介素2（IL－2）过继免疫疗法对晚期肿瘤病人的治疗取得了确切的疗效,是肿瘤过继免疫治疗的重大突破,但由于IL－2的用量较大,常导致严重的毛细血管渗漏综合症（CLS）等副作用的发生,从而限制了LAK／IL－2疗法的广泛应用。近十年来,由于新的生物反应调节剂（BRM）的出现．给LAK／IL－2肿瘤过继免疫治疗带来新的生机。根据Mihich的定义：BRM是指能通过调整宿主对肿瘤的反应使二者之间的相互作用朝向有利于治疗肿瘤的方向发…     

γδT细胞、NK细胞及LAK的生物学特性比较

过继性免疫治疗是肿瘤生物治疗的重要手段之一.80年代后期,开始进行LAK细胞抗肿瘤过继免疫治疗,并取得一定效果.近来,γδT细胞和NK细胞在非恃异性或半特异性免疫治疗中的作用逐渐被重视.我们通过体外分离和增殖培养γδT细胞、NK细胞和LAK细胞,比较研究了3种细胞的抗肿瘤的生物学特性,结果显示,以MACS分离γδT细胞,培养2周后细胞数扩增600～800倍,CD3,CD8和γδT表达阳性率分别是70.41%,42.69%和40.5%,γδT细胞对NK敏感细胞K562以及NK不敏感细胞Raji,XG-73种不同到细胞均有较高的杀伤率,分别为35.98%,32.27%和49.08%,高于对照组PBMC的19.56%,11.34%和10.58%;NK细胞对此3种细胞的杀伤率分别是45.21%,12.34%和11.94%;     

天然IL2诱导鼠LAK细胞的生长特性及形态学观察

本文介绍了用自制的IL_2(白介素Ⅱ)和粗提的lL2(?)(?)导LAK(淋巴因子活化杀伤细胞)的生成。用大鼠脾细胞制备IL_2乳腺癌小鼠脾细胞作为诱导LAK的单个核细胞。初步结果显示:1.IL_2培养上清能诱导出LAK样增殖特性。2.IL_2的粗提物可使LAK增殖作用增强。3.IL_2可使活化的和未活化的淋巴细胞同样增值。     

快速诱导人胎脾LAK细胞的实验研究

本文研究了大剂量IL-2短期冲击人胎脾单个核细胞(FSMC)后,其杀伤活性、增殖活性、表面抗原表达的时间动力学变化。结果表明:快速诱导人胎脾LAK细胞时,IL-2的最适剂量是5000UIL-2/1.0×10~7cell/ml。在第2、3d,快速诱导的人胎脾LAK细胞的杀伤活性及增殖活性均显著高于常规LAK(P<0.05,P<0.05)。且两者表型基本相同。快速诱导后不洗去IL-2的LAK细胞的杀伤、增殖活性显著、极显著地高于常规LAK(P<0.05,P<0.01),在后期,也不低于甚至高于常规LAK细胞。这些结果提示,快速诱导的人胎脾LAK细胞有可能用于临床,从而大大简化操作,减少污染机会;先用5000UIL-2/1.0×10~7cell/ml冲击1h,再按常规方法培养是一种独立且更优的方法。     

人脐带血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响

目的研究人脐带血树突状细胞(DC)对LAK细胞杀伤活性的影响.方法从人脐带血中分离出DC,以不同浓度与LAK细胞共育,检测其杀伤活性变化.结果加入低于1×105/mlDC的LAK杀伤活性显著增强,高于此浓度则对LAK活性呈不显著或负面影响.结论该结果提示脐血DC对LAK细胞杀伤活性可能具双向调节作用.     

人脐带血树突状细胞对LAK细胞杀伤活笥的影响

目的研究人脐带血树突状细胞(DC)对LAK细胞杀伤活性的影响.方法从人脐带血中分离出DC,以不同浓度与LAK细胞共育,检测其杀伤活性变化.结果加入低于1×105/mlDC的LAK杀伤活性显著增强,高于此浓度则对LAK活性呈不显著或负面影响.结论该结果提示脐血DC对LAK细胞杀伤活性可能具双向调节作用.     

HGPRT缺陷型Lewis肺癌细胞株的筛选及其生物学特征

目的 为细胞融合等实验提供次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）缺陷细胞株。方法 用8－氮杂鸟嘌呤（8－AG）对Lewis肺癌细胞株L3－8进行长期渐进式给药,从中克隆筛选出HRPRT缺陷细胞株,并观察其体内成瘤和肺转移特性。结果 经过1年的筛选鉴定,获得了在20mg/L8－AG和1640培养液中能长期稳定生长,在HAT选择性培养基中不能形成克隆的AL9901细胞株。AL9901和L3－8的染色体众数分别为58和62,在C57BL／6小鼠体内成瘤率均为100％（10／10）,肺转移率分别为305（3／10）和70％（7／10）。结论 HGPRT缺陷型AL9901细胞株基本保持了L3－8细胞的生物学特征,可作为制备Lewis肺癌DC融合疫苗的亲本抗原细胞。     

辐射诱导辐射耐受鳞癌细胞株的建立及其生物学特性

目的通过辐射人喉鳞癌细胞株Hep-2获得辐射耐受细胞株Hep-2R，建立一个放射敏感性研究的对比模型。方法用γ线反复照射Hep-2细胞，建立辐射耐受细胞Hep-2R。成克隆实验法测定两株细胞不同剂量照射后的细胞存活分数，拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数。光镜、电镜、活细胞计数、染色体分析及流式细胞仪周期分布比较其生物学差异。结果经7个月辐射诱导得到了一个放射敏感性不同于亲本细胞株的Hep-2R细胞株，并已稳定传30代以上且辐射耐受性能稳定。其SF2=0．680、D0=3．24Gy、D0=1．90Gy、N=1．80，而Hep-2细胞SF2=0．415、Db=2．06Gy、D0=1．01Gy、N=1．64。Hep-2R细胞形态及染色体数目发生了改变，群体倍增时间较亲本细胞延长。细胞周期分析显示G1期细胞增多，S、G2期细胞减少。结论通过辐射诱导可以从Hep-2细胞株得到辐射耐受细胞株Hep-2R，这种相同背景、不同放射敏感细胞株为进一步研究放射敏感性的分子机制提供了一个良好对比模型。     

多倍体肿瘤细胞的建立及其生物学特性的研究

目的:建立多倍体肿瘤细胞,研究其增殖、分裂和药物敏感性.方法:将鼠纤维肉瘤细胞株Meth-A经270nmol/L秋水仙碱、800nmol/LK-252a、100nmol/LStaurospo-line和100nmol/L紫杉醇处理60h后继续培养,台盼蓝染色计数细胞,经碘化丙啶染色后流式细胞仪检测细胞DNA含量;并测定肿瘤细胞对3种化疗药物的半数抑制浓度(IC50).结果:建成了可稳定生长47d的多倍体细胞,DNA含量为4倍体.此细胞呈指数增殖,但比2倍体Meth-A细胞株生长缓慢.柔红霉素对2倍体和4倍体细胞的IC50分别为(0.022±0.002)和(0.023±0.003)μg/mL,顺铂的IC50分别为(0.108±0.035)和(0.173±0.086) μg /mL,两者差异无统计学意义,t值分别为0.85和1.23,P均>0.05;但紫杉醇的IG50分别是(39.812±0.116)和(21.385±0.660)μg/mL,4倍体细胞明显低于2倍体细胞,t=6.16,P<0.01.Gimsa染色显示,多倍体细胞体积大,多核.结论:4倍体细胞可连续地增殖和分裂,对抗肿瘤药物仍然敏感,此细胞可以用于研究多倍体化后的生物学行为.     

In vitro experimental expansion and induction of LAK cell of lymphocytes from human carcinomatous ascites

Investigation on the in vitro expansion and induction of LAK cell activity of peritoneal exudate lymphocytes (PEL) from malignant ascites of advanced ovarian cancer patients is presented. The results indicated that to isolate PEL from malignant ascites was much more simple and economic than to isolate tumor infiltrating lymphocytes (TIL). PEL could be in vitro expanded 17-fold and induced to acquire LAK cell activity in the presence of rIL-2. Thus, PEL can be used as LAK cell precursor for adoptive immunotherapy of cancer.     

一株HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞株的建立及其生物学性质

目的　为研制肺癌疫苗提供适合细胞融合的抗原细胞。方法　用8氮鸟嘌呤(8AG)从小鼠肺癌细胞LA795渐进诱导次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HGPRT)缺陷型细胞株ALA9702,并鉴定其生物学性质及成瘤性。结果　ALA9702细胞在20μg/ml8AG培养液中生长了一年,在HAT培养液中不能形成集落,并保持了来源细胞LA795的生物学性质及成瘤性。结论　ALA9702细胞株稳定表现为HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞,为建立有效的特异性肺癌疫苗治疗提供有利的抗原材料     

人骨肉瘤甲氨蝶呤耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的:诱导并建立耐甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)的人骨肉瘤细胞系,观察耐药细胞系(SOSP-9607/MTX)的生物学特性.方法:以MTX为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导建立人成骨肉瘤耐药细胞系SOSP-9607/MTX.利用光学显微镜观察细胞形态及其结构变化;MTT法检测原细胞株与耐药细胞株对MTX、顺铂(cisplatin,DDP)、卡铂 (carboplatin,CBP) 、阿霉素(doxorubicin,ADM)、异环磷酰胺(ifosfamide,IFO)、紫杉醇(paclitaxel,PTX)的药物敏感性;细胞生长曲线检测耐药细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞周期比例.结果:经12个月的诱导,建立SOSP-9607/MTX耐药细胞系,其对MTX的耐药指数(resistant index,RI)为原细胞株的4.63倍;耐药细胞系对ADM、DDP、IFO、PTX产生不同程度的耐药指数,对CBP敏感;光镜观察SOSP-9607/MTX细胞异型性与多核现象较原细胞株明显增加,细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降,流式细胞仪检测表明,G2期细胞减少,G1和S期细胞增加(P<0.05).结论:建立了耐MTX人成骨肉瘤细胞株SOSP-9607/MTX,并观察了耐药株细胞的生物学特性,为进一步研究甲氨蝶呤的耐药机制提供了良好的实验模型.     

耐甲氨蝶呤人骨肉瘤细胞株建立及其生物学特性

目的：诱导并建立耐甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）的人骨肉瘤细胞株并观察耐药细胞系（Saos-2／MTXl、Saos-2／MTX2）的生物学特性。方法：以MTX为诱导剂，采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法，诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株，建立不同药物浓度耐药系（Saos-2／MTX1、Saos-2／MTX2）；MTT法检测原代与耐药细胞株对MTX、顺铂（cisplatin，DDP）、阿霉素（doxorubicin，ADM）、异环磷酰胺（ifosfamide，IFO）、表柔比星（epirubicine，EPI）、比柔比星（pirarubicin，THP）、紫杉醇（paclitaxel，PTX）药物敏感性；利用光学显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化；利用细胞生长曲线检测细胞增殖能力；利用流式细胞仪检测细胞周期比例。结果：经178d的诱导，建立Saos-2／MTXl，Saos一2／MTX2耐药细胞株，其对MTX的耐药指数（resisitantdrugindex，RI）分别为原代细胞株的4．87和12．73倍；耐药细胞株对ADM、EPI、THP、PTX产生不同程度的交叉耐药，对DDP敏感；光镜观察Saos-2／MTX1、Saos-2／MTX2细胞体积增大，多核现象较原代Saos-2细胞株明显增加；透射电镜显示Saos-2／MTX1、Saos-2／MTX2细胞株表面突起较原代Saos-2细胞株减少、且核仁增大增多；细胞生长曲线和流式细胞仪检测显示耐药细胞株增殖能力下降，S期细胞所占比例减少（P〈0．05）。结论：本研究建立了耐MTX人成骨肉瘤细胞株Saos-2／MTX1、Saos-2／MTX2，并观察了耐药株细胞的生物学特性，为进一步研究甲氨蝶呤的耐药机制提供了一种实验模型。     

Establishment of a human pulmonary adenocarcinoma cell line Lu-YePa and its biological characteristics

This paper presents the establishment of a human pulmonary adenocarcinoma cell line Lu-YePa and its biological characteristics. The primary cells of Lu-YePa cell line were derived from a twenty six year old patient with poorly differentiated adenocarcinoma of the lung. After 36 days' culture, transfer was made and the cells proliferated steadily and rapidly afterwards. The doubling time was 34.6 hours. Mitotic index reached 49.5% on day 5. Chromosome number was subtriploid with the mode of 62. The large submetacentric marker chromosome was presented in 68% of cells. PAS positive granules were found in the cytoplasm. The study of concanavalin A condensation, electron microscopic observation, heterotransplantation and plating efficiency indicates that Lu-YePa cells are concordant with the human pulmonary adenocarcinoma cells in morphology and biological behavior.     

人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性

目的: 采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析.方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线.用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力. 结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1.EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h.放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6 μg/L) .染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主.该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致.结论: 通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系.     

人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214的建立及其生物学特性

目的 建立人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214,为子宫颈癌研究提供实验模型。方法 无菌切除人子宫颈癌的手术标本,用组织块贴壁法体外培养,连续传代稳定生长后,绘制细胞生长曲线。采用光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染色体核形分析。用免疫组化法测定细胞系肿瘤标记物的(ER、PR、Keratine、PCNA)表达情况。结果 组织块贴壁法体外培养获得人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214(简称H),细胞维持培养16个月,传代131代,生长稳定,群体倍增时间为35．48h,细胞呈上皮镶嵌状贴壁生长,趋向复层生长,无接触抑制。超微结构显示,具有典型的桥粒结构和较多的张力原纤维。染色体数目35—156条,主流范围58—80条(64．8％),结构为人类染色体。细胞的肿瘤标记物(ER、PR、Keratine、PCNA)检测呈高表达,DNA指数为1．931。裸鼠移植瘤组织病理形态学与患者原始肿瘤一致,无血清培养成功。结论 通过组织块贴壁法体外培养建立的人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC—0214,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代16个月以上,细胞形态不变,生长周期恒定,可望作为一个稳定的细胞系。