骨髓间质干细胞在扩张型心肌病微环境中的分化研究

目的：探讨骨髓间质干细胞（MSCs）自体移植后在扩张型心肌病（DCM）微环境中分化为心肌细胞和血管内皮细胞的可行性。 方法： 用健康日本大耳白兔分离培养MSCs，盐酸阿霉素耳缘静脉注射复制兔DCM模型，将5溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的MSCs移植到扩张型心肌病心肌内,4周后观察移植细胞的增殖分化情况。 结果： 细胞移植4周后，可以在实验组心肌内找到BrdU标记的阳性细胞，且一部分表现为心肌特异性肌钙蛋白T（troponin T）染色阳性，一部分Ⅷ因子相关抗原染色阳性并参与形成新生血管，对照组中没有发现。 结论： MSCs自体移植到扩张型心肌病后可以分化为心肌细胞和血管内皮细胞。     

人胚胎脐血间质干细胞生物学特性研究

目的:研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性,探讨其在自体宫内基因转移/治疗(IUGT)领域的应用前景。方法: 采用L-DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞(MSC);流式细胞仪技术检测细胞表面标记;地塞米松/胰岛素等作为脂肪细胞诱导液,β-甘油磷酸钠/抗坏血酸等作为成骨细胞诱导液分别诱导细胞分化;将携带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染MSC,荧光显微镜下检测MSC表达转基因特性;F344新生大鼠肝内注射MSC,免疫荧光检测6周后不同组织器官中人MSC存在;非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷性小鼠(NOD/SCID)皮下注射MSC,病理切片检测第30 d细胞体内成瘤性。 结果:3 mL人中期胚胎脐血可以分离、培养出MSC,细胞均一地表达CD29、CD44、CD59、CD105、CD166,不表达CD34、CD45、CD80、CD86、CD42a、HLA-DR分子,体外培养中具有成脂、成骨能力;细胞表达转基因产物绿色荧光蛋白阳性率高达56.32%±3.28%;在新生大鼠体内,人中期胚胎脐血来源的MSC能向多个不同组织器官迁移,在NOD/SCID小鼠内不具有成瘤性。结论:人中期胚胎脐血MSC适合中、晚期胚胎自体IUGT靶细胞。     

人胎盘血间质干细胞分离培养

目的：分离培养人胎盘血间质干细胞（hMSC），为hMSC探寻新来源。方法：采用羟乙基淀粉（HES）方法分离、富集胎盘血有核细胞；DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC；流式细胞仪检测细胞表面标记；地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果：胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下，生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞，阳性获得率29.17%（7/24），该细胞传代培养达6个月以上；流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性，CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性；加入脂肪细胞诱导剂，细胞在形态上向脂肪细胞转化，胞内出现脂滴、脂泡，油红O阳性。结论：人胎盘血可以分离培养出hMSC，是hMSC的重要来源。     

成人骨髓间质干细胞在脑梗塞模型鼠的迁移和分化

目的：探讨成人骨髓间质干细胞（human mesenchymal stem cells， hMSC）在脑梗塞模型鼠脑内的迁移和分化，是否影响模型大鼠的运动功能。 方法： 体外扩增培养hMSC，建立左大脑中动脉梗塞模型（MACO）大鼠，将标记Hoeschst33342的hMSC，经参芪液诱导30 min后注入模型鼠脑内，观察hMSC在大鼠脑内的存活、迁移、分化，以及能否改善模型鼠运动功能。 结果： 第5代呈集落生长的hMSC，均一性好。hMSC可在脑内存活6周以上；随着时间的延长，hMSC在脑内迁移的范围越来越大；间接免疫荧光表明hMSC在大鼠脑内表达人神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）；模型鼠的肢体运动功能有明显改善。 结论： hMSC可在大鼠脑内分化为神经细胞，有望成为治疗脑梗塞的理想的种子细胞。     

大鼠骨髓间质干细胞基本生物学特性的研究

目的:研究成年大鼠骨髓间质干细胞(rBMMSCs)的基本生物学特性,并与成人骨髓间质干细胞(hBMMSCs)作比较。方法:分别采用贴壁法和Ficoll-Paque淋巴细胞分离法分离获得rBMMSCs和hBMMSCs,进行体外传代、扩增、纯化,比较分析不同代数的rBMMSCs和hBMMSCs的增殖能力和克隆形成能力,观察传代次数对rBMMSCs的神经分化能力的影响,流式细胞仪检测rBMMSCs表面抗原表达;采用中期分裂相秋水仙素阻抑法分析rBMMSCs的核型。结果:原代rBMMSCs和hBMMSCs在体外扩增后可分别获得(7-8)×10⁵和(5-6)×10⁵个细胞,体外扩增5代后可分别获得1.7×10⁸和l×10⁸个细胞,体外扩增15代后,可分别获得(4-8)×10¹²和(3-4)×10¹²个细胞,随着传代次数的增加,细胞的增殖能力、克隆形成能力和神经分化能力有所下降,但各代rBMMSCs的增殖能力和克隆形成能力都比hBMMCs较强。流式细胞仪检测结果显示rBMMSCs的CDllb、CD45、CD61、CD71、CD8O、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ表达为阴性,而CD29和CD44表达阳性。rBMMSCs为正常大鼠二倍体核型。结论:rBMMSCs具有极强的自我更新能力和神经分化能力,是一种具有正常二倍体核型的间质干细胞,在组织工程中具有广阔的应用前景。     

诱导骨髓间质干细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

目的: 观察人骨髓间质干细胞（MSCs）移植到兔角膜基质后的分化发育情况，探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法: 24只新西兰兔随机分为2组。实验组：将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4 d，用5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植到兔角膜基质；对照组：采用保存羊膜移植到兔角膜基质。分别于移植后1、2、3、4、6和8周，摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查，检查移植到兔角膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况；免疫组织化学检测移植到角膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白K3/12（CK3/CK12）和角蛋白K13（CK13）的表达。结果: MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长，与羊膜共培养4 d后，MSCs贴附羊膜生长迅速，组织学特征无明显改变。羊膜负载MSCs移植到兔角膜基质表面, 术后免疫组织化学检测角膜上皮层CK3/CK12表达阳性， CK13表达阴性，在重建的角膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞并同时表达角膜上皮细胞特异性表面标志蛋白K3/K12，未发生免疫排斥反应，未见异常增殖细胞。结论: 羊膜负载MSCs移植到兔眼表角膜基质后，MSCs能存活、增殖并向角膜上皮样细胞分化。     

地中海贫血患儿血清特异性PRA影响脐血造血干细胞增殖、分化能力的观察

目的： 探讨反复输血地中海贫血患儿血清中特异性群体反应性抗体（PRA）对脐血造血干/祖细胞增殖、分化能力的影响。 方法： 采用1×105脐血单个核细胞（MNC）与实验血清（健康儿童AB血清50 μL、PRA血清 0 μL、50 μL、100 μL）、补体联合孵育后半固体集落培养，倒置显微镜下观察并计数第7 d、第14 d总集落数和各种集落数。结果： 脐血造血干/祖细胞受PRA血清作用后，在半固体集落培养第7 d，总集落数、CFU-GM分别为A组88.20±9.41、79.00±11.39和B组88.60±9.12、79.20±10.44，显著高于C组20.60±7.39、15.20±4.66和D组4.00±2.05、1.40±0.51，P<0.01；其余各组的各种集落数两两比较，差异无显著（P>0.05）。A组与E组比较：两组的各种集落数比较均无显著差异（P>0.05）。在半固体集落培养第14 d，总集落数、CFU-GM分别为A组216.00±31.10、117.40±24.80和B组213.20±31.06、116.00±19.75，显著高于C组97.80±14.43、32.80±8.10和D组31.40±13.41、8.40±4.30，P<0.01;第14 d CFU-GEMM分别为A组45.60±8.51和B组42.60±7.03，显著高于C组20.80±6.96和D组7.80±6.06，P<0.05；第14 d BFU-MK分别为A组12.80±4.42、B组11.00±2.74，显著高于D组1.00±0.55，P<0.05；B组第 14 d CFU-E17.20±4.03显著高于D组5.60±2.87，P<0.05。A组与E组比较：两组的各种集落数比较差异均无显著（P>0.05）。PRA血清量与各种集落数目之间的Kendall相关分析：PRA血清量与第7 d的总集落数及CFU-GM、第14 d的总集落数、CFU-GM、CFU-GEMM、BFU-E、BFU-MK呈负相关（tau-b分别为-0.793、-0.849、-0.808、-0.804、-0.645、-0.674、-0.624，P<0.01；与第14 d CFU-MK呈负相关（tau-b为 -0.466，P<0.05）。结论： 特异性PRA对脐血造血干/祖细胞的增殖、分化能力具有抑制作用；在一定浓度下其抑制作用与PRA剂量有相关性：PRA剂量越大，抑制作用越强。     

人脐带血中粘附前体细胞的研究

目的:验证脐带血中内皮细胞前体细胞的存在,并研究这一前体细胞的分化发育过程中的影响因素。方法:用淋巴细胞分离液分离出脐带血中的单个核细胞,在胶原包被的培养瓶中,用含20%小牛血清的MCDB131培养液培养,获得具有粘附性的细胞,并观察不同培养条件对这一细胞分化发育的影响。倒置相差显微镜下每日两次观察、记录。流式细胞分析所获细胞的CD34、CD14以及因子免疫组化检测Ⅶ因子表达。结果与结论:脐带血中存在可粘附CD34^-内皮细胞的前体细胞,小牛血清、小牛下丘脑提取物、胰岛素对这一细胞的生成及分化有促进作用,而地塞米松、次黄嘌呤则对这一细胞的生成及分化有抑制作用。免疫组化证实这一细胞Ⅶ因子表达阳性,培养两周的粘附梭形细胞可形成管状排列及血岛样结构。     

小儿骨髓间质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞

BACKGROUND:In the past, the culture and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in vitro were mostly reported in the adult or animal rather than in children. OBJECTIVE:To explore the ability of bone marrow mesenchymal stem cells from children differentiating into neural stem cells and nerve cells. METHODS:Bone marrow mesenchymal stem cells from children were isolated and cultured, and passage 12 cells were cultured in the pre-induction medium (DMEM culture medium containing 10% fetal bovine serum and 1 mmol/L β-mercapto ethanol) and induction medium (DMEM containing 2% dimethyl sulfoxide and 150 μmol/L butylated hydroxyanisole). Expression of nestin and β-tublin III was detected using immunocytochemistry method at 30 minutes and 7 days after induction, while RT-PCR was used to detect nestin mRNA expression at 0, 5.5, 6 days after induction. RESULTS AND CONCLUSION: After combined induction, the cells shrank from round shape to tapered, polygonal or oval shape, and cell processes extended gradually and became filament-like shape. Interconnected cells formed a network at 6 days after combined induction. The expression of nestin antigen was positive at 30 minutes after induction, while the expression of β-tublin was positive at 7 days. RT-PCR findings showed that positive expression of nestin mRNA was detected at 5.5 hours of induction, and then disappeared at 6 days. These findings show that the combined use of dimethyl sulfoxide and butylated hydroxyanisole can induce bone marrow mesenchymal stem cells from children to differentiate into neural stem cells and nerve cells in vitro.     

人骨髓间质干细胞体外扩增和向内皮细胞定向诱导分化的研究

目的：体外分离、扩增成人骨髓间质干细胞（MSCs）和向内皮细胞（ECs）定向诱导分化，开辟心血管组织工程种子细胞的新来源。 方法： 采用Percoll(1 073 g/L)从正常成人骨髓中分离出MSCs，纯化和扩增后流式细胞仪鉴定其纯度；用血管内皮生长因子(VEGF)诱导MSCs向ECs分化，Ⅷ因子(vWF)免疫组化和透射电镜(TEM)鉴定细胞性质。 结果： 5.0×105个MSCs在体外扩增15代后，获得8.0×1012个MSCs，扩增了约1.6×107倍；MSCs在加入VEGF诱导培养大约14-21 d，80%-90%的诱导细胞对Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应；TEM可观察到胞浆内有Weible-palade小体，证实为ECs。 结论： 成人骨髓MSCs在体外具有定向诱导分化为ECs的潜能，这为心脏组织工程瓣体外构建, 尤其是在小儿先天性心脏病组织工程研究中种子细胞的来源提供了可能性。     

小鼠胎肝间质干细胞的纯化与分化多能性研究

目的： 分离纯化小鼠胎肝间质干细胞（flMSCs）并探讨其分化潜能。方法： 通过改良贴壁法分离BABL/c小鼠胎肝间质干细胞；流式细胞术测定细胞周期和表型；体外诱导贴壁细胞向脂肪、软骨、骨组织以及神经细胞分化；化学染色、RT-PCR和免疫细胞化学染色鉴定分化。结果： 改进贴壁法分离的flMSCs呈均一梭形，(83.76±2.88)%处于G₀/G₁期,表达CD44、CD29,不表达造血细胞表面标志CD45、CD11b,诱导后能向脂肪、软骨、骨以及神经方向分化。结论： 贴壁法可以分离纯化小鼠flMSCs，小鼠flMSCs具有较强的分化潜能和“可塑性”，可用于干细胞治疗疾病的进一步研究。     

人脐血来源MSCs的主要生物学特性的研究

目的：探讨人脐血间充质干细胞（MSCs）分离、纯化、扩增、表面标志、免疫表型及其造血生长因子（HGFs）分泌等生物学特性方法：(1) Ficoll法分离、纯化人脐血、成人骨髓和胎儿骨髓MSCs，动态观察不同来源MSCs的生长状况。(2) 流式细胞仪检测脐血和骨髓MSCs表面CD34、CD45、CD14、CD29、CD44、CD105、CD166、CD80、CD86、CD40和CD40L的表达。(3) ELISA法检测脐血和骨髓MSCs培养上清中SCF、TPO、FLT-3L和IL-6的分泌水平。结果：(1) 所有骨髓标本中均可分离纯化出MSCs，而15份脐血中仅4份分离纯化出MSCs，脐血MSCs和骨髓MSCs的细胞形态无明显差异,脐血MSCs原代培养所需要的单个核细胞（MNC）量为骨髓MSCs的3倍，且其原代培养的增殖速度较慢，但脐血MSCs传代培养的增殖速度和骨髓相似。(2) 脐血MSCs和骨髓MSCs表面标志无差异，均不表达造血细胞表面标志以及与免疫识别有关的表面抗原。(3) 脐血和骨髓MSCs分泌SCF、TPO、FLT-3L和IL-6的水平相似。结论： (1)脐血和骨髓同样可以分离、纯化MSCs，但脐血中MSCs的含量少，且大部分脐血中不含MSCs。(2)纯化的脐血MSCs扩增能力、表面标志、免疫学表型及HGFs分泌水平和骨髓MSCs相似。     

人脐带间充质干细胞研究进展及应用

人脐带间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。随着细胞技术的提高,人们对于脐带间充干细胞的研究越发深入,在医学的各个领域都取得了长足的进步,如脐带间充质干细胞分离技术及脐带间充质干细胞的诱导分化技术。本文就脐带间充质干细胞的生物学特性、诱导分化潜能、免疫原性进行综述,重点讨论其最新的临床应用。     

足月小样儿及正常胎儿脐血间充质干细胞的分离培养及形态学观察

目的建立一种简单实用的脐血间充质干细胞(MSCs)的分离培养方法,观察其生物学特性,为脐血MSCs在临床的广泛应用奠定基础。方法无菌条件下采集足月小样儿和足月正常胎儿分娩脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,采用MesencultTM培养基培养,观察脐血MSCs的生物学特性,免疫荧光方法检测其表面标记物的表达情况。结果采用MesencultTM培养基,正常儿脐血MSCs培养成功率为66.67%,相同培养条件下,足月小样儿脐血培养成功率低于正常体重胎儿的脐血。人脐血MSCs强表达CD29、CD44和CD90,不表达造血干细胞表面标志CD34。结论我们建立了最佳的脐血MSCs的分离培养方法。     

Proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cell encapsulated in polyelectrolyte complexation fibrous scaffold

A biofunctional scaffold was constructed with human mesenchymal stem cells (hMSCs) encapsulated in polyelectrolyte complexation (PEC) fibers. Human MSCs were either encapsulated in PEC fibers and constructed into a fibrous scaffold or seeded on PEC fibrous scaffolds. The proliferation, chondrogenic and osteogenic differentiation of the encapsulated and seeded hMSCs were compared for a culture period of 5.5 weeks. Gene expression and extracellular matrix production showed evidences of chondrogenesis and osteogenesis in the cell-encapsulated scaffolds and cell-seeded scaffolds when the samples were cultured in the chondrogenic and osteogenic differentiation media, respectively. However, better cell proliferation and differentiation were observed on the hMSC-encapsulated scaffolds compared to the hMSC-seeded scaffolds. The study demonstrated that the cell-encapsulated PEC fibers could support proliferation and chondrogenic and osteogenic differentiation of the encapsulated-hMSCs. Together with our previous works, which demonstrated the feasibility of PEC fiber in controlled release of drug, protein and gene delivery, the reported PEC fibrous scaffold system will have the potential in composing a multi-component system for various tissue-engineering applications.     

致敏小鼠骨髓间充质干细胞体外培养及多向分化功能的测定

目的：评价异基因脾细胞输注致敏的小鼠骨髓源性间充质干细胞(MSCs)的体外培养生长能力及其多向分化功能。方法：应用贴壁培养法体外培养间充质干细胞,流式检测其表面标志以及检测其成骨、成脂和成肌多向分化状况;结果：致敏小鼠骨髓源性MSCs与非致敏小鼠骨髓源性MSCs比较,形态学无差异且均表达CD29+、CD105+、CD44+和Sca-1+ ;CD34-、CD11b-;同时在相应的诱导条件下具有向成骨、成脂、成肌多向分化的能力。结论：异基因脾细胞输注致敏的小鼠,其骨髓源性MSCs的形态学和功能与正常小鼠的MSCs比较评估未见异常。     

脐带血间充质干细胞的研究进展

脐带血中存在着丰富的造血干细胞,在移植方面发挥重要作用,在脐血中是否还存在间充质干细胞却有争议,有的学者认为其中有间充质干细胞,且与骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的形态、表面标志及分化潜能非常相似,有的学者认为含量较低,难以传代培养扩增,总结了近5年来国内外关于脐血间充质干细胞的研究情况,为脐血的充分利用提供更多的资料。     

人脐血源性MSCs的免疫调节作用

目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.     

低氧对间充质干细胞生物学特性的影响

机体内间充质干细胞(MSC)处于相对低氧环境(体积分数为1％～7％)与常氧环境(体积分数为20％)时表现出不同的生物学特性.低氧诱导因子1α(HIF-1α)作为低氧环境下的主要转录调控因子,广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡、糖酵解及血管生成等方面的调控.近年来发现,HIF-1α在对MSC存活、分化及迁移的调控中起重要作用.MSC处于低氧环境时,通过对HIF-1α及其下游基因的调控,可提高MSC的存活率,促进其成软骨分化,抑制成脂分化,增强迁移能力,但对成骨分化能力的影响仍存在争议.不同组织来源、氧体积分数及诱导培养条件等均会对MSC的生物学特性造成影响.因此不同实验结果的比较应在统一的实验条件基础上进行.拟从低氧对MSC的增殖、凋亡、分化及迁移的影响作一综述.