孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.     

氧化苦参碱对人白血病K562细胞株凋亡作用的研究

目的探讨氧化苦参碱（Oxymatrine,Oxy）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响。方法用Oxy处理K562细胞,MTT法检测药物对细胞的抑制作用;荧光显微镜及透射电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例,琼脂糖凝胶电泳技术观察DNA降解。结果 Oxy能够抑制K562细胞生长,对K562细胞的IC50约为2.33mg.mL-1。Oxy作用后的K562细胞呈现凋亡形态学改变,流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为7.03%～54.99%,琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带。结论 Oxy能够诱导K562细胞发生凋亡。     

细胞外信号调解激酶对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡影响的研究

目的:探讨细胞外信号调解激酶(ERK)对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡的影响.方法:形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:0.5μmol/L蟾蜍灵作用K562细胞24h诱导典型的细胞凋亡,预先用ERK抑制剂PD98059处理细胞1 h,明显增加蟾蜍灵诱导的细胞凋亡率(P＜0.05);而用佛波酯预先处理后,明显拮抗蟾蜍灵的作用(P＜0.05).结论:ERK负向调节蟾蜍灵诱导的K562细胞凋亡过程.     

墓头回提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨墓头回提取物体外抗白血病作用,为墓头回提取物抗肿瘤活性单体的筛选提供理论依据。方法采用MTT法测定墓头回对K562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;台盼蓝拒染法、流式细胞仪PI染色观察墓头回对K562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测墓头回对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果墓头回对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内其抑制作用具有明显的剂量依赖性,IC50为36.03 mg/L。墓头回作用于K562细胞后,倒置显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,实验组细胞凋亡率明显高于对照组,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论墓头回作用于K562细胞,可以明显抑制K652细胞增殖。此外,诱导K562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的研究

目的:探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的作用.方法:以不同浓度的冬凌草甲素处理K562/A02及敏感株K562/S细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测半数抑制率(IC50),分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内DNR浓度的影响.结果:冬凌草甲素可诱导两种细胞凋亡,两者在各浓度、各时点无显著差异;可显著逆转K562/A02细胞对DNR、HHT的耐药性,提高该细胞内DNR的浓度.结论:冬凌草甲素对K562/A02细胞有诱导凋亡、逆转耐药性的作用,是一种很有希望的抗白血病中药.     

P53途径在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨辛伐他汀处理后的P53通路和细胞周期的分子水平变化,以说明P53途径在辛伐他汀抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡中的作用.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞仪检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测P53通路和细胞周期相关基因的变化.采用免疫组化LDP法检测P21蛋白变化的水平.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数P53通路基因和细胞周期相关基因出现差异表达.P21蛋白随药物作用时间的延长,表达上调.结论 P53通路可能在辛伐他汀诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡发生的过程中起重要作用.     

二烯丙基二硫对K562细胞生长抑制和促凋亡的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病K562细胞增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响。方法采用CCK-8技术检测细胞存活率,进行细胞形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测DADS对细胞凋亡及周期的影响。结果 DADS能有效地抑制人白血病K562细胞增殖,15、30、60、120和240μmol/L DADS作用于K562细胞48h后,抑制率分别为26.3%、58.2%、44.7%、62.6%和75.6%。Hoechst形态学观察呈现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现出凋亡特征性的梯状条带,流式细胞仪检测可见亚二倍体峰并阻滞细胞于G2/M期,30、60和120μmol/L DADS作用于K562细胞12h后,Annexin V/PI双标记法检测早期凋亡细胞率分别为18.59%±0.81%、20.85%±0.65%、23.5%±1.1%（P〈0.05）。结论 DADS呈浓度依赖性抑制K562细胞生长,其机制与诱导细胞凋亡并阻滞细胞于G2/M期有关。     

三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

安迪粉针剂诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的:探讨安迪注射剂(Andi injection,Adi)对慢性粒细胞白血病K562细胞株凋亡的影响。方法:流式细胞仪技术检测细胞凋亡变化;使用荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变;评价Adi对K562细胞株凋亡的影响。结果:流式细胞仪检测结果显示10、20μg/ml Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P<0.05);荧光显微镜和电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变。结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。     

鸦胆子油乳抑制人白血病多药耐药K562/VCR细胞株增殖的实验研究

目的探讨鸦胆子油乳对人白血病多药耐药K562/VCR细胞株增殖抑制的作用及增加化疗药物阿霉素在K562/VCR的蓄积浓度,达到逆转作用。方法用MTT方法检测鸦胆子油乳对体外细胞K562/VCR的增殖抑制率;通过光学显微镜观察细胞形态学改变,DNA凝胶电泳检测,流式细胞仪(FCM)分析鸦胆子油乳对K562/VCR细胞株细胞周期分布的影响及细胞内ADM浓度。结果 (1)鸦胆子油乳对K562及K562/VCR细胞有明显抑制效应,且效应具有时间、剂量依赖关系;(2)1500mg/L的鸦胆子油乳即可诱导耐药细胞出现典型的细胞凋亡形态学特征;(3)DNA电泳呈现典型的梯形条带;(4)FCM细胞周期分析显示细胞周期中G0/G1期的比例逐渐增加,S期细胞减少,鸦胆子油乳使肿瘤细胞停滞在G1期;(5)鸦胆子油乳可提高K562/VCR细胞内阿霉素的蓄积浓度,与未加鸦胆子油乳对照组比较有显著性差异。结论鸦胆子油乳抑制K562/VCR细胞的增殖及诱导耐药细胞周期阻滞;鸦胆子油乳可增加细胞内化疗药物蓄积。     

抗氧化剂An7845对K562白血病细胞的增殖抑制和凋亡诱导活性

目的：观察抗氧化剂An7845在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察抗氧化剂An7845对K562细胞增殖的影响,采用细胞形态学及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡。结果：不同浓度的An7845（5×10-8～5×10-5 mol/L）对K562细胞具有抑制增殖的作用,并呈剂量依赖关系。经An7845（5×10-7 mol/L）处理后,K562细胞在形态学上可见明显凋亡细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见DNA梯形带。结论：抗氧化剂An7845能抑制K562白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

羽扇豆醇对白血病细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的研究羽扇豆醇对人髓系K562、NB4、SHI-01及淋系Jurkat白血病细胞的增殖和凋亡作用。方法以不加药物处理为对照组,设置5个羽扇豆醇浓度梯度分别处理人髓系、淋系白血病细胞,采用MTT法检测细胞活力及增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随着羽扇豆醇浓度的升高,细胞增殖明显受到抑制。当浓度达到150μmol/L时,4种细胞都呈现出明显的增殖抑制作用（均P〈0.05）;与对照组相比,羽扇豆醇组细胞凋亡率明显增加（P〈0.05）。结论羽扇豆醇可显著抑制人髓系K562、NB4、SHI-01及淋系Jurkat白血病细胞增殖并诱导其凋亡。     

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562／G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3－（4,5－二甲基噻唑－2）－2,5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测FM—Nov17对K562及K562／G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562／G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562／G01细胞增殖,半数抑制率（IC50）分别为（58．28±0．31）和（62．36±0．14）μmol／L,并减少K562及K562／G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。／M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2／M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562／G01细胞的增殖。     

白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞作用研究

目的研究白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法 MTT法检测白山毛桃根提取物对K562细胞增殖抑制的影响;Hoechst33258染色实验观察白山毛桃根提取物诱导K562细胞凋亡情况;流式细胞仪检测该药物诱导K562细胞凋亡的情况。结果白山毛桃根提取物可以抑制K562细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性,对K562细胞的半数抑制率(IC_(50))在24 h、48 h、72 h时分别为31、28、10 mg/ml,形态学观察表明白山毛桃根提取物能诱导K562细胞的凋亡。结论白山毛桃根提取物能抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

地西他滨对K562细胞γ-珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的研究地西他滨对K562细胞γ-珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响,探讨药物治疗β-地中海贫血的新思路。方法分别用不同浓度(0 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L、300 nmol/L)地西他滨作用于K562细胞24 h、48 h、72 h,用CCK-8检测药物对K562细胞存活率的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量RT-PCR检测γ-珠蛋白基因表达。结果地西他滨对K562细胞生长有抑制作用,作用后细胞凋亡率增加,γ-珠蛋白基因表达显著提高(P<0.05)。结论地西他滨可以提高K562细胞γ-珠蛋白基因表达。     

盐酸埃克替尼对肺癌A549细胞PI3K/AKT、HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨盐酸埃克替尼对肺腺癌A549细胞PI3K/AKT、HIF1α信号通路的影响。 方法 采用细胞计数法分析在不同浓度盐酸埃克替尼下肺腺癌A549细胞生长情况,MTT法测定不同浓度盐酸埃克替尼对肺腺癌A549细胞抑制率。采用显微镜下直接观察不同浓度盐酸埃克替尼下肺腺癌A549细胞的细胞形态变化情况,采用TUNEL法检测在不同浓度盐酸埃克替尼下肺腺癌A549细胞凋亡率;免疫组化法检测肺腺癌A549细胞PI3K/AKT、HIF1α蛋白表达。 结果 随盐酸埃克替尼浓度增加,肿瘤细胞增加明显减少,细胞形态不规则,50 mg/L剂量组可见大量坏死肿瘤细胞。盐酸埃克替尼抑制肺腺癌A549细胞增殖,在一定时间范围内呈现剂量和时间依赖性,各组与空白对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);12.5 mg/L组、25 mg/L组、50 mg/L组、DPP(25 mg/L)组肿瘤细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);12.5 mg/L组、25 mg/L组、50 mg/L组、DPP(25 mg/L)组肺腺癌A549细胞PI3K、AKT、HIF1α蛋白表达明显低于于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 盐酸埃克替尼对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡及抑制PI3K/AKT、HIF-1α信号通路来实现的。