人卵巢癌细胞C—erbB—2扩增及表达抑制TNF和LAK杀伤活性的…

利用人卵巢癌细胞株，在确定Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增和过表达及Ｃ－ｅｒｂＢ－２正常拷贝和低表达的基础上对Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增及表达与ＴＮＦ和ＬＡＫ杀伤活性的关系进行研究，并以非特异性杀伤物Ｈ２Ｏ２为对照。结果表明：Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增及过表达可明显抑制ＴＮＦ和ＬＡＫ的杀伤活性的，但Ｈ２Ｏ２的杀伤活性无显性。     

TNFα对LAK细胞抗胃癌效应的影响

目的： 观察体外TNFα联用IL-2培养LAK细胞的抗胃癌作用及TNFα预处理后胃癌细胞对LAK细胞敏感性的变化。方法: 以不同浓度TNFα与IL-2配伍培养LAK细胞, 并做TNFα的单抗阻断试验, 用LDH释放法检测LAK细胞抗癌活性;以TNFα预处理胃癌细胞, 检测LAK细胞抗瘤活性。结果: TNFα在低浓度IL-2下增加LAK活性,使IL-2诱导同等LAK活性的浓度下降约10倍;TNFα预处理使LAK对其抗瘤活性提高约9％。结论: TNFα可增加IL-2诱导的LAK抗胃癌活性;TNFα预处理可使胃癌细胞对LAK的敏感性增加。     

rIL－2激活的小鼠粘附性LAK细胞抗瘤活性和扩增的研究

小鼠脾脏淋巴细胞在体外ｒＩＬ－２培养下，可粘附到塑料板或玻璃瓶上，在除去非粘附性淋巴细胞后，粘附性ＬＡＫ细胞（Ａ－ＬＡＫ）在ｒＩＬ－２存在的条件下，４天内可迅速扩增３６倍，与ＬＡＫ细胞抗瘤活性相比，Ａ－ＬＡＫ细胞抗瘤活性明显增强，培养２０天后其抗瘤活性仍可达３３％，从形态学分析，Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成。     

LAK和TIL细胞的表型测定

应用多种抗人淋巴细胞的单克隆抗体和流式细胞仪，分析用ＩＬ－２诱生患者淋巴细胞２周形成的ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞的表型。结果：ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（８５．０±２．５３）％，ＣＤ＿（１６）细胞为（８．３±１．０）％，证实ＬＡＫ细胞是以Ｔ细胞为主，包括有ＮＫ细胞的混合群体。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占８１．４８％，因而推测ＬＡＫ细细胞中，抗原特异性和ＭＨＣ限制性的ＣＴＬ细胞占有很大比例。ＴＩＬ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（６４．７±９．７）％，ＣＤ＿（１６）￣＋细胞为（１．６±０．２）％，Ｌｅｕ７￣＋细胞为（６．８±１．１）％。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占ＣＤ＿８￣＋细胞的８６．７６％，证实ＴＩＬ细胞主要是Ｔ细胞，ＮＫ细胞极少。     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

NK／LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

OBJECTIVE: To understand the relation between cytotoxic activity of immunologic effector cells and multidrug resistance of the tumor cells. METHODS: Continuous observation of the morphological changes and MTT colorimetry were employed to evaluate the cytotoxic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells and natural killer (NK) cells against multidrug-resistant (MDR) human oral carcinoma cell line-KBV200 (before and after reversal of MDR) and parental drug-sensitive cell line KB. The morphologic changes of LAK cells and the 3 target cell lines were observed continuously under inverted microscope 3 h after co-culture of LAK cells with one of three target cell lines respectively. The lysis rates of three tumor cell lines in response to co-culture with LAK or NK cells were determined using MTT colorimetry. RESULTS: In comparison with the parental drug-sensitive cell line KB, both KBV200 and its reserved cell line by verapamil (KBVV) showed earlier adherence and greater number of cells lysed by LAK. In MTT colorimetry assay, the cytotoxicity of both LAK and NK cells against the 3 cell lines was associated with the effector-to-target (E/T) cell ratio; the lysis rates of KBV200 and reversed KBV200 cells by verapamil in response to LAK and NK cells were higher than that of KB cells (P<0.05), but KBV200 and KBVV did not significantly differ (P>0.05). At the same E/T ratio, LAK cells possessed stronger cytotoxicity than NK cells against all the tumor cell lines (P<0.05). CONCLUSIONS: Immunologic effector cells possess strong cytotoxic activity against multidrug-resistant cell line KBV200. Modulation of MDR does not decrease the cytotoxic activity of the immunologic effector cells. The results of this study suggest that adoptive cell immunotherapy with immunologic effector cells may be of value in controlling the progress of MDR tumors.     

淋巴因子对人PBMNC的LAK细胞形成、增殖和细胞毒作用的影响

应用乳酸脱氢酶释放法对重组白介素２，粗制天然白介素２，重组肿瘤坏死因子和天然免疫活性肽等淋巴因子诱导人ＰＢＭＮＣ为ＬＡＫ细胞以及ＬＡＫ细胞对靶细胞（人外周血淋巴细胞，人食管癌１０９细胞株和人红白血病细胞株＿（５６２）的细胞毒作用分别于培养的第４ｄ和第７ｄ进行了检测。结果显示：①四个配伍组和一个重组白介素２组的多克隆ＬＡＫ细胞攻击溶解１０９细胞株和Ｋ＿（５６２）细胞株的水平波动子２８％和６６％之间，中位数为４７％，而对正常人外周血淋巴细胞均无细胞毒作用；②重组白介素２和粗制天然白介素２配伍培养ＬＡＫ细胞的增殖协力约高于重组白介素２和重组肿瘤坏死因子组，以及重组白介素２和免疫活性肽组增殖协力的３倍，③在诱导ＬＡＫ细胞的过程中其增殖量和其细胞毒活性可以不同步。建议临床上治疗晚期肿瘤病人除用ＬＡＫ细胞和重组白介素２外，首先选用天然白介素２。     

白细胞介素2,4及肿瘤坏死因子对LAK细胞活性的影响

为了提高淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）对乙肝病毒感染细胞的杀伤活性，研究了白细胞介素２（ＩＬ２），白细胞介素４（ＩＬ４）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）单独及不同组合时，所诱生的ＬＡＫ细胞对ＨｅｐＧ２细胞和２２ｌ５细胞的杀伤活性，并初步研究了ＬＡＫ细胞的活化及杀伤机制。结果表明：三种细胞因子的组合诱导较两种细胞因子组合好，而两两组合又较单独诱导好；另外，ＩＬ２单独诱导时，随其剂量的增加，细胞表面ＩＬ２受体（ＩＬ—２Ｒ）表达量也增加，细胞内溶酶体含量也增加，其对靶细胞的杀伤活性也增加，均呈正相关。提示ＩＬ—２Ｒ和溶酶体可能参与ＬＡＫ细胞的活化和杀伤机制。     

体外诱导激活的杀伤细胞对癌细胞的作用

作者用低浓度(200 U/ml)重组人白细胞介素2(γIL-2)体外诱导人外周血淋巴细胞,研究了体外淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)对传代瘤细胞株的杀伤作用机理。倒置显微镜卜观察。LAK细胞可在体外增殖,较一般淋巴细胞体积增大3～7倍,且在培养96 h后,可见分裂象。在LAK细胞与瘤细胞共育时,LAK细胞对瘤细胞有显著的趋向性,首先接近包围瘤细胞,然后裂解为小效应细胞,攻击进入瘤细胞浆内,致其崩溃死亡。     

TNF与化疗药物联合应用对卵巢癌细胞株超微结构的影响

目的：探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和化疗药物联合应用的作用机制。方法：用３ＡＯ卵巢癌细胞株作为靶细胞，体外培养，分单独用药及联合用药组，于用药后不同时间收获细胞，制成电镜标本，在透视电镜下观察单独应用ＴＮＦ及ＴＮＦ与化疗药物（阿霉素、更生霉素）联合用药对卵巢癌细胞超微结构的改变。结果：电镜显示，单独应用ＴＮＦ，卵巢癌细胞无明显改变性多见，而细胞膜变化不明显。结论：ＴＮＦ与化疗药物有协同抗卵巢癌细胞的     

NK/LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

目的明确免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性是否与肿瘤的耐药性相关。方法采用连续形态学观察及MTT比色法,研究淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞及自然杀伤(NK)细胞,对人口腔癌耐药细胞株KBV200耐药性逆转前后及亲本敏感株KB的杀伤活性。(1)在肿瘤细胞与LAK细胞共育后3 h内连续在倒置显微镜下观察LAK细胞对上述3者的杀瘤效应;(2)采用MTT比色法检测NK及LAK对3株细胞的杀伤率。结果与KB细胞组相比,在KBV200和KBV200 维拉帕米组,LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早、数量多,伸出伪足的LAK细胞比率高,出现集落样细胞团块时间亦早。NK、LAK细胞对KBV200细胞株耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(P<0.05),而对耐药株耐药性逆转前后的杀伤率无统计学差异(P>0.05);LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(P<0.05)。结论免疫活性细胞对KBV200细胞株有较强的杀伤作用,逆转耐药性不降低免疫活性细胞杀伤活力,提示细胞过继免疫治疗可能成为控制化疗耐药病人病情发展的一个有效手段。     

抗CD3单克隆抗体激活杀伤细胞高效扩增培养体系的建立及细胞毒活性检测

目的： 建立从20mL外周血中高效扩增抗CD₃单克隆抗体激活的杀伤细(CD₃AK)的培养体系,并进行体外细胞毒活性检测。 方法： 采用抗CD₃单克隆抗体（Anti-CD₃ mAb）激活人外周血单个核细胞（PBMC）,在人重组白细胞介素2(rIL-2)的协同活化下,获得CD₃AK。对CD₃AK进行长期体外培养,进行增殖动力学、免疫表型和体外抗肿瘤活性的分析。 结果：在培养第7～22天,CD₃AK增殖倍数明显提高,最高可达317倍;免疫表型分析显示,CD₃⁺细胞从活化前的51.9%增加至94.6%,CD₄⁺细胞从19.5%增加至51.1%,CD₈⁺细胞从22.1%增加至52.1%;效靶比20∶1组和40∶1组的杀伤肿瘤细胞活性明显高于10∶1组（P<0.05和P<0.01）;在7～19 d的培养天数之内,杀伤肿瘤细胞活性最强。 结论： 从外周血中高效扩增的CD₃AK是以CD₃⁺、CD₄⁺和CD₈⁺细胞为主的异质性细胞群,在体外有明显的杀伤肿瘤细胞活性。     

源于肝癌患者细胞因子诱导杀伤细胞的生物学特性及抗癌活性

目的 比较源于肝癌患者与健康人的细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的生物学特性及抗癌活性.方法 提取肝癌患者和健康人的外周血单个核细胞,常规诱导培养CIK细胞,动态观察其增殖活性、细胞表型及细胞毒活性.选BALB/c裸鼠SMMC-7721肝癌模型,接种肿瘤细胞10d后,选择荷瘤大小相似的裸鼠30只,腹腔注射化疗药物后平分成A组(单独化疗组)、B组(健康人CIK治疗组)和C组(肝癌患者CIK治疗组),观察肿瘤大小的变化.结果 两种来源CIK细胞的增殖活性、细胞表型及细胞毒活性均差异无显著性,体外抗癌活性相似,均可提高化疗的效果.B组和C组治疗后肿瘤受抑制的程度差异无显著性,但均明显大于A组.结论 源于肝癌患者CIK细胞与源于健康人的CIK细胞具有相似的生物学特性及抗癌活性.     

抑制ClC-3表达对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用

目的：探讨抑制氯离子通道-3(ClC-3)基因表达对顺铂(DDP)诱导的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用,为卵巢癌的治疗提供实验依据。方法：转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒至人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法检测转染重组质粒对ClC-3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞增殖率;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白细胞色素C（Cyt-c）及Caspase-3活化片段蛋白表达。结果：与SKOV3细胞比较,SKOV3/ DDP细胞中ClC-3蛋白表达水平增加( P<0.05);转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒后,SKOV3/DDP细胞ClC蛋白表达水平明显降低;ClC-3-siRNA联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞增殖率下降( P<0.05),Cyt-c和Caspase-3活化片段蛋白表达水平增加( P<0.05) 。结论：pSH1-siRNA-ClC-3可有效抑制SKOV3/DDP细胞ClC-3蛋白的表达,并促进DDP诱导SKOV3/DDP细胞凋亡。     

人卵巢癌细胞系A2780中肿瘤干细胞的分离及鉴定

目的从人卵巢癌细胞系A2780中分离并鉴定卵巢癌干细胞。方法将A2780细胞置于含人重组表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、人重组碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、牛血清白蛋白和人胰岛素的无血清培养基中培养,采用连续传代诱导培养肿瘤干细胞,对每代分离出来的肿瘤干细胞进行流式检测,并对第4代肿瘤干细胞进行免疫荧光检测和逆向分化实验。结果从A2780细胞中成功分离出肿瘤干细胞,在上述无血清培养基中呈悬浮生长,具有很强的自我更新能力,流式检测显示随着传代诱导,CD133阳性率依次升高,免疫荧光进一步证实了CD133是卵巢癌干细胞的表面标记物,诱导分化实验说明其可逆向分化成为A2780肿瘤细胞。结论体外培养的卵巢癌细胞株A2780中存在卵巢癌干细胞,并能将其分离培养和诱导分化。     

Liposome-C-erbB2 antisense oligodoxynucleotides in human ovarian cancer cells

目的　探讨脂质体—硫代磷酸化修饰的C erbB2 反义脱氧寡核苷酸 (C erbB2 antisensephosphorothioatedoligodeoxynucleotides ,C erbB2 S ODNs)对卵巢癌细胞系C erbB2 癌基因表达及细胞增殖的影响。方法　采用流式细胞仪技术 ,3 H TdR掺入方法了解脂质体—C erbB2 S ODNs对卵巢癌细胞系SKOV3 C erbB2 癌基因表达及细胞生长 ,细胞周期的作用。结果　脂质体—C erbB2 S ODNs能降低C erbB2 的表达 ,并抑制细胞生长达 30 % ;脂质体—C erbB2 S ODNs较单用C erbB2 S ODNs的作用效率增强约 4 0倍。结论　C erbB2 癌基因的反义调控可能在卵巢癌基因治疗中有一定作用 ;脂质体能够有效地增强C erbB2 S ODNs的作用效率。     

EGFR和C-erbB-2蛋白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)和C-erbB-2蚕白在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达,探讨它们在卵巢肿瘤发生发展中的作用及临床意义.方法:应用免疫组化S-P法检测11例卵巢良性肿瘤,15例交界性肿瘤,43例恶性肿瘤及10例正常卵巢组织中的EGFR和C-erbB-2蛋白阳性率.结果:EGFR和C-erbB-2在恶性及交界性肿瘤中的阳性表达率均显著高于正常组织及良性肿瘤(P＜0.05);在低分化组织中的阳性表达率与中、高分化组织相比,差异显著(P＜0.05);在Ⅲ～Ⅳ期中的表达率与Ⅰ～Ⅱ期的表达率相比,差异显著(P＜0.05).EGFR与C-erbB-2蛋白之间有相关性,差异显著(P=0.033＜0.05).结论:EGFR和C-erbB-2的同步表达在卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展中有协同作用,两种蛋白的联合检测有助于卵巢癌的早期诊断,治疗及评估预后.