HCV NS—5区分型引物法检测新疆两城市HCV基因型

了解新疆两城市丙型肝炎病毒感染者中存在哪些基因型，以便为今后防治ＨＣＶ感染提供依据。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ技术，选择ＨＣＶ ＮＳ－５区设计的分型引物进行基因分型。结果；我们检测了１２８例已证实为丙型肝炎病毒感染者的血清，其中基因分型检测出的９８例中可分为１ａ型１４例，１ｂ型５８例，２ａ型１１，２ｂ型１０例，混合感染５例。     

90例丙型肝炎患者HCV基因分型研究

目的 了解徐州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型的分布情况。方法 对９０例血清ＨＣＶ ＲＮＡ阳性的丙型肝炎（ＨＣ）患者，行ＨＣＶ基因酶切分型。结果 ９０例中ＨＣＶ－Ⅱ型７１（７８．９％），ＨＣＶ－Ⅲ型１７例（１８．９％），ＨＣＶ－Ⅱ／Ⅲ混合型２例（２．２％）。结论 徐州地区ＨＣＶ流行株基因型主要为Ⅱ型，同时存在Ⅲ、Ⅱ／Ⅲ混合型。     

用套式RT-PCR法检测肝细胞癌中丙型肝炎病毒基因型

目的　检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法　用ＲＴＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者血清ＨＣＶ,再以巢式ＲＴＰＣＲ法对ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。对多数标本中ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ也进行了免疫组化和原位杂交检测。结果　ＨＣＣ组织中ＨＣＶ阳性率为５０％（３９／７８）,与ＨＢＶ者（６４．４％）差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）,两者重叠感染率３４％（２０／５９）。在１０例血清ＨＣＶ阴性ＨＣＣ患者中,３例ＨＣＣ冰冻组织检出ＨＣＶＲＮＡ。在ＨＣＣ组织中共检出３种ＨＣＶ基因型,其中２ａ、１ｂ、３ａ和混合型分别为１７例（４３．６％）、９例（２３．１％）、４例（１０．３％）和２例（５．１％）,各基因型间差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）,但２ａ型与１ｂ型间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,２ａ型与ＨＢＶ的重叠感染明显较其他ＨＣＶ基因型者常见（Ｐ＜０．０５）。结论　２ａ型ＨＣＶ是ＨＣＣ组织中最常见的基因型并易与ＨＢＶ重叠感染率,ＨＣＣ患者血清ＨＣＶ检测不一定能准确反映ＨＣＣ组织中的ＨＣＶ感染率,其所示基因型也有所不同。     

干扰素治疗丙型肝炎效果随访研究

目的：探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型与干扰素治疗后ＨＣＶＲＮＡ阴转远期效果的相关性。方法;采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法。结果：干扰素治疗后,经过１８ｍｏ－２６ｍｏ的随访,Ⅱ－１ｂ型ＨＣＶＲＮＡ持续阴转率为２０．０％;Ⅲ／２ａ型为７０．０％,两型疗效相差非常显。结论;干扰素治疗丙型肝炎的疗效与丙型肝炎病毒基因型有关,对Ⅲ／２ａ型的疗效优于Ⅱ／１ｂ。     

贵州HCV感染株基因分型研究

为了解本地区ＨＣＶ感染株的基因型及现有分型方法的适用性，从贵州２０６例慢性肝炎和血液病患者中筛出３５份抗－ＨＣＶ阳性血清，用逆转录套式聚合酶链反应作ＨＣＶＲＮＡ检测。３０份ＨＣＶＲＮＡ阳性血清用３种分型方法（核心区特异引物ＰＣＲ，非结构５区特异探针核酸杂交，５′末端非编码区限制性长度多态性分析）进行ＨＣＶ基因分型。结果３份血清为ＨＣＶ２ａ感染，２７份为ＨＣＶ１ｂ感染。对８份ＨＣＶ１ｂ、１份ＨＣＶ２ａ血清的ＰＣＲ扩增产物直接测序，核酸序列分型结果与原型别一致。表明ＨＣＶ１ｂ是贵州地区ＨＣＶ感染株的主要基因型，ＨＣＶ２ａ感染并不常见。以ＨＣＶ基因组不同区域为基础的各方法分型结果间有很好的相符性。     

丙型肝炎病毒家庭内传播的4年随访和分子流行病学调查

为研究ＨＣＶ感染的家庭内聚集现象，对某自然村ＨＣＶ感染状况进行了４年随访和分子流行病学调查。应用逆转录巢式多聚酶链反应（ＲＴ－ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）、ＯｋａｍｏｔｏＨＣＶ基因分型法及ＳＳＣＰ法分析ＨＣＶ核心区基因变异。结果：抗ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ阳性率由４年前的２１．３１％增加至４３．１８％。家庭成员有≥２人抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性的５２户，也较４年前增加３．４６倍。经用Ｏｋａｍｏｔｏ法基因分型［１］，该村ＨＣＶ基因型主要为１ｂ／Ⅱ型，占９０．６７％，其余为２ａ／Ⅲ型，占１．３３％，两者混合感染占２．００％。进一步用ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）技术对ＨＣＶ基因变异进行研究，发现在同一家庭内的成员间ＨＣＶｃＤＮＡ的单链构象一致，但不同家庭的成员间ＨＣＶｃＤＮＡ的单链构象呈现多态性。表明该村近４年来ＨＣＶ感染明显增高主要由家庭成员传播所致。ＳＳＣＰ分析比基因分型更适用于ＨＣＶ感染的分子流行病学调查。     

贵州HICV感染株基因分型研究

为了解本地区ＨＣＶ感染株的基因型及现有分型方法的适用性，从贵州２６例慢性肝炎和血液病患者中筛出３５份抗－ＨＣＶ阳性血清，用逆转录套式聚合酶链反应作ＨＣＶ ＲＮＡ检测，３０份ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清用３种分型方法进行ＨＣＶ基因分型。结果３份血清为ＨＣＶ２α感染，２７份为ＨＣＶ１ｂ感染。对８份ＨＣＶ１ｂ，１份ＨＣＶ２ａ血清的ＰＣＲ扩增产物直接测序，核酸序列分型结果与原型另一致。     

丙型肝炎病毒基因型与丙型肝炎临床病情关系的研究

应用引物特异ＰＣＲ法对沈阳地区８３例各型丙型肝炎，６例原发性肝癌抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ均阳性的血清标本进行ＨＣＶ基因分型，旨在了解本地区ＨＣＶ基因型分布情况及ＨＣＶ不同基因型与丙型肝炎病人临床病情轻重的关系。结果表明：ＨＣＶ－Ⅱ型感染占５７．３％（５１／８９）、ＨＣＶ－Ⅲ型感染占２８．１％（２５／８９）、Ⅱ／Ⅲ混合型感染占１３．５％（１２／８９）、未分型占１．１％（１８９）；急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度、肝炎后肝硬化及原发性肝癌中ＨＣＶ－Ⅱ型感染分别占６２．５％、３５．５％、６６．７％、８５．７％、９０．９％及１００％，而ＨＣＶ－Ⅲ型感染分别占２５％、４６．７％、８．３％、０％、９．１％及０％。提示沈阳地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主，其次为Ⅲ型及Ⅱ／Ⅲ混合型，ＨＣＶ不同基因型与丙型肝炎病人临床病情的严重程度呈密切相关     

广州地区丙型肝炎患者病毒基因分型及其与临床病情的关系

目的：探讨广州地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型分布的特点以及ＨＣＶ基因型与临床病情的关系。方法：病例选自广州居民,基因分型使用Ｏｋａｍｏｔｏ的“型特异性引物ＰＣＲ法”,并加以改进,基因型的命名采用国际上统一的Ｓｉｍｍｏｎｄｓ两级命名体系。结果：广州ＨＣＶ基因型分布１ａ占７６％、１ｂ占４９５％、２ａ占２３８％、２ｂ占１９％、３ａ占２９％、１ｂ＋２ａ混合型占９５％、未定型占５％,同国内其它地区一些学者所报道的结果相似。结论：ＨＣＶ基因型分布不存在先前认为的地理上的南北差异。不同基因型传播途径没有差异,均以血液传播为主（８２９％）。１型及混合型感染病情较重,干扰素疗效较差     

HCV基因型与IFN—α2b抗病毒疗效的关系

目的；研究丙肝病毒基因型与丙肝患者使用ＩＦＮ－α２ｂ治疗效果的关系。方法；采用ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ产物酶切分型方法，对７９例丙肝患者做ＨＣＶ基因分型。所有病例均按预定方案应用ＩＦＮ－α２ｂ治疗，根据ＡＬＴ的变化情况和判断疗效。首先考察应用１ＭＵ和３ＭＵ ＩＦＮ－α２ｂ两种剂量在治疗效果上的差异性；然后研究ＨＣＶ基因型对ＩＦＮ－α２ｂ治疗效果的影响。     

丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体联合检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体检测联合应用的意义。方法抗-HCV和HCV-cAg用ELISA法检测,HCV-RNA用RT-PCR法检测。结果1761例病人共测得阳性标本57例,其中抗-HCV阳性54例,HCV-cAg阳性22例,同时阳性为19例。3例HCV-RNA而抗-HCV阴性样本中检出HCV-cAg。22例HCV-cAg阳性标本经HCV-RNA检测均为阳性。结论HCV-RNA、抗-HCV和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高检出阳性率,有利于早期诊断。     

丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体联合检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体检测联合应用的意义。方法抗-HCV和HCV-cAg用ELISA法检测,HCV-RNA用RT-PCR法检测。结果1761例病人共测得阳性标本57例,其中抗-HCV阳性54例,HCV-cAg阳性22例,同时阳性为19例。3例HCV-RNA而抗-HCV阴性样本中检出HCV-cAg。22例HCV-cAg阳性标本经HCV-RNA检测均为阳性。结论HCV-RNA、抗-HCV和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高检出阳性率,有利于早期诊断。     

HCV RNA水平对HCV/HIV合并感染自然进程的影响

目的 探讨HCV RNA PCR水平对丙型肝炎病毒（HCV）/人类免疫缺陷病毒（HIV）合并感染自然进程的影响.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测HCV RNA,比较初次就诊高效反转录病毒治疗（HAART）前的HCV/HIV合并感染（HCV/HIV组）、HCV单纯感染（HCV组）、HIV单纯感染（HIV组）患者的HCV RNA、HIV RNA、CD4＋T淋巴细胞计数、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、透明质酸酶（HA）、层粘连蛋白（LN）、甘胆酸（CG）、Ⅲ型胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）、年龄等指标.结果 HCV/HIV组与HCV组和HIV组CD4＋T淋巴细胞计数分别为139.75±91.586、647.16±363.379、288.0±219.6个/微升（P＜0.01）.与HCV组患者的发病年龄分别为37±15和52±13岁（P＜0.01）.HCV RNA分别为6.0417±0.93524和5.2553±1.62773log/ml（P＜0.05）;CⅣ分别为105.30±24.630和95.41±52.889ng/ml（P＜0.05）;CG分别为1444.98±1721.597、139.00±165.640μg/ml （P＜ 0.01）;PCⅢ分别为285.52±244.558、159.82±86.928ng/ml（P＜ 0.01）;ALT分别为104.42±107.90、46.22±32.589U/L（P ＜0.01）.与HIV组HIV RNA分别为4.8±0.9和4.1±1.0log/ml（P ＜0.01）.结论 HCV/HIV合并感染可以加重和加快HCV、HIV疾病的自然进程.高水平的HCV RNA是HCV/HIV合并感染患者的HCV、HIV疾病自然进程的危险因素之一.     

151例血清抗-HCV阳性患者的HCV RNA检测分析

目的:探讨丙型肝炎抗体(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的关系.方法:研究对间接ELISA法检测抗-HCV阳性患者的血清进行HCV RNA检测(采用RT-PCR法).结果:151例血清抗-HCV阳性患者有85例HCV RNA阳性,阳性率为56.2%.另外,还观察了40例抗HCV阳性病人的双份血清,急性期第一份血清ALT升高、HCV RNA为阳性;经抗病毒治疗后的第二份血清,部分病人ALT复常,HCV RNA阴转,另外部分病人反复ALT异常,HCV RNA则始终为阳性.结论:HCV RNA能鉴别活动性HCV感染及非活动性感染,可为抗病毒药物疗效的评价和临床合理用药提供依据.     

慢性HCV感染患者RNA、ALT、AST水平以及细胞因子之间的关系

目的：研究慢性HCV感染患者HCV RNA水平，ALT、AST以及外周血单个核细胞（PBMCs）体外细胞因子分泌之间的关系。方法：体外培养慢性HCV感染患者PBMCs72小时后，ELISA检测培养上清细胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF—α）含量，荧光定量PCR检测患者血清HCV RNA含量。结果：RNA阳性患者ALT、AST水平明显高于阴性患者，但阳性患者之间，ALT、AST水平无显著差异。不论RNA滴度高低，细胞因子分泌水平均无差异。相关性分析表明IFN-γ与ALT、AST有一定相关性（r=-0．8178，P=0．02；r=0．7517．P=0．04）。结论：血清HCV RNA水平与肝损伤有关，INF-γ在抗HCV免疫应答的同时可能对肝脏也造成了一定损伤。     

基因芯片技术检测乙、丙型肝炎病毒临床研究

探讨基因芯片技术在乙、丙型病毒检测的作用。方法用迈科锐HBV、HCV联合基因芯片检测血清HBV-DNA和HCV-RNA。结果基因芯片检测42例HBV-DNA的检出率为86％(26/30),符合率为88％(37/42),假阳性为8％(1/12)。检测HCV-RNA检出率为71％(5/7)。符合率为92％(39/42),假阳性为2％(1/35)。结论 HBV、HCV联合基因芯片检测HBV-DNA和HCV-RNA有较好的敏感性和特异性。     

丙肝患者血清 HCV RNA拷贝数与HCV Ab定量和肝脏功能损伤程度的关系

目的 对丙型肝炎患者丙肝病毒RNA（HCV RNA）、丙肝病毒抗体（HCV Ab）和肝功能指标定量结果进行统计分析,并探讨HCV RNA与HCV Ab和肝功能指标间的关系,为丙肝患者诊断和治疗提供参考依据。方法 收集342例丙肝患者血清,采用实时荧光定量PCR技术检测HCV RNA拷贝数,采用化学发光技术检测HCV Ab浓度,分别采用速率法、免疫比浊法、溴甲酚紫法和重氮盐法检测血清ALT、AST,PA,ALB和TBIL、DBIL的活性或浓度。结果 342例研究对象中,HCV RNA拷贝数以N×10⁶ IU/mL为主,占48.7%;而N×10³ IU/mL和N×10⁴ IU/mL最少,分别占4.3%和7.4%。在HCV RNA拷贝数小于1×10³ IU/mL组中,HCV Ab浓度较其他组低,而HCV RNA拷贝数在N×（10³~10⁷）IU/mL组间时,HCV Ab浓度差异无统计学意义（P>0.05）;当HCV Ab浓度大于10 S/CO时,HCV RNA阳性率升高,可达88.7%。与HCV RNA拷贝数小于N×10³ IU/mL相比,大于N×10⁴ IU/mL的丙肝患者血清ALT、AST、ALB和PA异常率增加（P<0.05）,而血清DBIL和IBIL差异无统计学意义（P>0.05）。结论 丙肝病毒主要损伤肝细胞及其合成功能,联合检测HCV Ab和HCV RNA拷贝数对丙型肝炎的诊断和治疗具有重要的意义。     

RELATIONSHIP BETWEEN LOAD OF HCV RNA AND ANTIBODIES AGAINST REGIONAL SPECIFIC PROTEINS OF HCV IN SERUM

Objective To study whether HCV RNA load is related to the antibodies against regional specific proteins of HCV. Methods 69 serum samples were detected for HCV RNA load by Real time fluorescent PCR. Anti-HCV and the antibodies against regional specific proteins of HCV were detected by EL1SA. Results The positive rates of anti-C and anti-NS3 were remarkably higher than those of anti-NS4 and anti-NS5. We divided the serum samples into two groups on the basis of load of HCV RNA, there was no statistical significance between A and B group in the positive rate as well as the antibody reactivity of HCV anti-C, anti-NS3 , anti-NS4 and anti-NS5. From the distribution of different combined patterns, we could conclude that the pattern IV was superior to others in both of the two groups. Conclusion There are remarkable differences in different antibodies against the regional specific proteins of HCV. The positive rates and the antibody reactivity of anti-C, anti-NS3, anti-NS4, anti-NS5 are not related to the HCV viral load. The E1A-3 which conclude C, NS3, NS4, NS5 proteins could enhance the sensitivity of detection HCV.     

HCV RNA含量与肝脏组织病理学损伤之间的关系

目的:探讨丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量和ALT浓度与肝脏组织病理学损伤之间的关系.方法:应用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测681例HCV感染患者血清HCV RNA,电化学发光分析技术检测HBsAg,ELISA检测抗HAV IgM、抗HCV IgG和抗HEV IgM,Bayer全自动生化分析仪检测ALT浓度.H-E染色,光学显微镜观察组织病理损伤程度.结果:681例血清标本中,HCV RNA和抗HCV抗体均阳性和均阴性者分别是150例和420例,HCV抗体阴性而HCV RNA阳性40例,HCV RNA阴性而HCV抗体阳性71例.在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,190例HCVRNA阳性患者中,36例患者在HCV RNA检测前后7 d内,曾进行过肝脏组织病理学检测,轻度、中度和重度肝脏病理学损伤患者血清中,HCV RNA浓度及ALT浓度相差均不显著.结论:血清学标志物和病毒核酸都是监测HCV感染的重要指标.HCV RNA浓度、血清ALT浓度与肝脏病理损伤相关性不显著,HCV RNA水平不能反映肝脏病理损伤程度.