PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印普杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３｀寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份传阅耕ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩     

应用多重聚合酶链反应同时检测二种弧菌的探讨

目的：建立一种敏感、快速的多重聚酶链反应（ｍｕｔｉｐｌｅＰＣＲ）同时检测二种弧菌基因。方法：对７２份腹泻患者粪便进行了常规培养和生化鉴定,同时进行ＰＣＲ法检测。后者在实施中应用多重聚合酶链反应在一次ＰＣＲ反应中同时扩增副溶血性弧菌的热稳定直接溶血素（ｔｄｈ）基因和０１群霍乱弧菌的霍乱毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因。结果：在１１份培养阳性标本中经ＰＣＲ法检测,ｃｔｘＡ基因８份,ｔｄｈ基因３份,而常规培     

用聚合酶链反应检测咽拭子和痰液中的肺炎支原体

采用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增肺炎支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｍｐ）特异的１４４ｂｐＤＮＡ片段，并将ＰＣＲ扩增与常规培养或血清冷凝集素测定相比较。结果表明，该法的阳性率明显高于常规培养或冷凝集素测定。２５例患者标本常规培养阳性６例（２４．０％），ＰＣＲ扩增阳性１１例（４４．０％），５０例患儿咽拭子ＰＣＲ扩增阳性１５例（３０．０％），其中２７例同时进行了ＰＣＲ和血清冷凝集素测定，阳性率分别为４０．７％（１１／２７）和２５．９％（７／２７）。ＰＣＲ扩增阳性病例改用红霉素或四环素治疗均获显著疗效。本法具有快速、特异、灵敏度高等优点，可望成为早期诊断Ｍｐ感染的常规方法。     

用双重PCR快速诊断新生儿巨细胞病毒感染

用双重ＰＣＲ法检测新生患儿及随访新生儿期诊断为巨细胞包涵体病患儿的尿及血标本中巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。两对引物序列取自ＨＣＭＶＩＥＡ基因区，第一对引物扩增片段为７２１ｂｐ，第二对引物扩增片段为１６７ｂｐ。新生患儿２３份尿标本，１７例检出阳性；１８份白细胞提取物，１２份阳性。随访患儿７例，４例在尿或血中检出ＣＭＶＤＮＡ。ＰＣＲ结果与病毒分离比较，两法的符合率为９５．６％，ＰＣＲ获得结果仅需１～２天。尿标本用于ＰＣＲ较血标本检出率高，预处理简便     

PCR-SSP快速HLA-DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行ＨＬＡＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃，３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速、准确，适合于临床应用     

PCR热启动及稀释法与常规法检测血清HBV—DNA的结果比较

采用常规ＰＣＲ、热启动ＰＣＲ、稀释后热泪动ＰＣＲ三种方法，对经ＥＬＩＳＡ检测为ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ或抗ＨＢｅ阳性的血清标本，检测其乙型肝炎病毒ＵＮＡ（ＨＢＶ－ＤＮＡ）。结果显示热启动ＰＣＲ、稀释后热启动ＰＣＲ能提高ＨＢＶ－ＤＮＡ的阳性检出率。     

沙眼衣原体基因分型及其应用

本文分别以沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃｔ）隐蔽性质粒引物（Ｐｐ）及主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ；）引物（Ｐｍ）．用ＰＣＲ扩增Ｃｔ特异性ＤＮＡ，并用单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｉｙｍｏｒｐｈ－ｉｓｍ，ＳＳＣＰ）作基因分型。４２６份标本中，９２例质粒ＰＣＲ阳性，用质粒ＰＣＲ阳性标本作ｏｍｐ：ＰＣＲ，６６例为阳性。其中５２例标本经ＳＳＣＰ分析显示７种不同的电泳图谱，１８例与标准株ＴＥ５５电泳图谱相同。其中两份标本分别取羊水及新生儿睑结膜，其ＳＳＣＰ图谱相同，表明两株Ｃｔ核酸序列完全相同。在分子水平上证实了Ｃｔ的垂直传播。临床标本可先采用敏感的质粒ＰＣＲ作初筛。阳性者再作ｏｍｐ１ＰＣＲ进行基因分型。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对Ｃｔ作基因分型，在分子流行病学研究中有重要意义。     

反转录—聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用

为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感，特异的检测方法，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ，副流感病毒２型，腺病毒７对照无扩增带，ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１：１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４     

用套式PCR检测新生儿先天性巨细胞病毒感染

选取ＨＣＭＶＡＤ１６９株ＥｃｏＲＩＪ片段区的ＩＥＡ基因第四外显子为扩增靶序列，合成两对引物，外引物扩增２４２ｂｐ片段，内引物扩增１４６ｂｐ的片段，此方法很灵敏，可检测５－１０ｆｇＨＣＭｖＤＮＡ。我们随机采集５１名新生儿脐带血，应用ＮａＩ法提取全血ＤＮＡ为模板进行扩增，结果表明：３２名为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，以口腔粘液ＤＮＡ（４０名）为模板进行扩增，２４名为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性。因此，套式ＰＣＲ可用于临床上快速准确地检测ＨＣＭＶ。     

PCR—SSP快速HLA—DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行了ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速，准确，适合于临床应用。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

肾移植供受者DNA水平人类白细胞抗原－DR配型的研究

探讨利用聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ），进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ基因分型，并应用于肾移植临床的可行性，以准确选择理想配型的供受者，提高移植物长期存活率。方法作者应用分子生物学技术根据ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成３０个特异引物，快速盐析法提取模板ＤＮＡ，借助ＰＣＲ技术建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对１７１例肾移植供受者和１４份标准ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因水平分型。扩增条件为９４℃、３０秒、６０℃、５０秒，７２℃、４０秒，共３４个循环。分型结果采用标准ＤＮＡ，限制性内切酶分析和特异性探针杂交等予以确证。结果所有１７１份样本和１４份标准ＤＮＡ采用ＰＣＲ－ＳＳＰ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因分型均获成功。特异性扩增产物与引物设计预期大小相同，无假阳性和假阴性，总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ、内切酶分析和探针杂交等证实符合，特异性和重复性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型是一种快速而精确的方法，适合于器官移植，尤其是尸肾移植供受者配型选择的临床应用。     

日本血吸虫铁蛋白基因的筛选、克隆与表达

采用Ｓｊ未成熟虫卵抗原超免疫兔血清（ＲＡＳｊＩＥＡ）对Ｓｊ成虫ｃＤＮＡ文库进行筛选，并对可能具有抗日本血吸虫生殖／卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Ｓｊ成虫文库，获得单个阳性克隆，ＰＣＲ扩增后琼脂糖电泳测定基因大小，ＤＮＡ测序，基因库搜索，找出同源基因。共鉴定出６个不同的基因克隆。选择其中的铁蛋白（ＳｊＦｅｒ）基因亚克隆于ｐＧＭＣ载体。重组蛋白以ＧＭＣＳＦ（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）－ＳｊＦｅｒ融合蛋白的形式在细菌中高效表达。表达产物仅溶于８Ｍ尿素溶液中，分子量为４０ｋＤ。     

逆转录-半套式-聚合酶链反应在流行性乙型脑炎病人病原学诊断中的临床应用研究(摘要)

目的 :①建立一种新的敏感性高、特异性强的检测ＪＥＶＲＮＡ的方法 (ＲＴ -ｓｅｍｉ-ｎｅｓｔｅｄ -ＰＣＲ) ,并对该方法在临床标本检测中的应用进行评价。②分析新建立的ＲＴ ｓｅｍｉ-ｎｅｓｔ ｅｄ-ＰＣＲ与ＩｇＭ捕获法ＥＬＩＳＡ(ＭａｃＥＬＩＳＡ)的相关性 ,评价两种方法在临床标本检测中的应用。方法 :随机收集临床诊断的 37例乙脑和 15例病人标本 (包括血清、脑脊液 )分别为 6 3份和 30份 ,同时用ＲＴ -ｓｅｍｉ-ｎｅｓｔｅｄ -ＰＣＲ、ＭａｃＥＬＩＳＡ进行检测。结果 :除疫苗第一次ＰＣＲ扩增可出现相应电泳条带外 ,临床标本第一…     

逆转录—半套式聚合酶链反应检测汉坦病毒RNA及其临床初步应用

目的：建立可用于汉坦病毒检测的ＲＴ－ＰＣＲ方法，并对其临床应用进行初步研究，方法：比较７６－１１８株和ＳＲ－１１株Ｓ基因序列，选择其保守区设计半套式引物，通过病毒培养上清及患者血清的扩增检测进行ＰＣＲ方法的敏感性，特异性及临床应用研究。结果所建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法可检出１．２５ＰＦＵ的病毒量；对照组（正常细胞培养上清和正常人血清）经扩增检测为阴性，８６份级ＩＦＡ检测抗ＨＶ－ＩｇＭ阳性的肾综合征出血     

用PTVS检测t（14；18）PCR产物的DNA序列

为确定聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛（ＤＩＧ）系统检测ｔ（１４；１８）的特异性，我们采用ＰＧＥＭ－Ｔｖｅｃｔｏｒ系统（ＰＴＶＳ）和双脱氧链终止技术克隆并测定了ＲＬ细胞系和一个ＮＨＬ患者－Ａｍｂｒｏｓｅｎ的ｔ（１４；１８）ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列。结果表明两者的ＰＣＲ扩增产物均为ｂｃｌ－２－ＪＨ融合基因片段，证实ＰＣＲ－ＤＩＧ系统是一种特异的检测ｔ（１４；１８）的方法。同时还表明用ＰＴＶＳ对ＰＣＲ。产物进行克隆测序优于直接用双脱氧法测序。     

小鼠β趋化因子受体CCR5基因的克隆

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂ ｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用Ｍａｒａｔｈｏｎ ＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂ ｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｍ方法检测分析该ＡＤＬＤ，Ｎｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，     

HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析

目的 探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于ＨＦＲＳ临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要浒汉坦病毒（ＨＶ）毒株的分子流行病学特点。方法 设计合成了两套分别互补于ＨＶ Ｍ基因片段和Ｓ基因片段的引物,建立了检测ＨＦＲＳ患临床血清标本中ＨＶ基因的ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ方法,并对扩增的部分ＨＶ靶基因进行了测序分析和比较,结果 １１９份ＨＦＲＳ患轿清（经临床和ＩＦＡ确诊）经用Ｓ基因片段引物的ＲＴ－ｎ     

应用聚合酶链反应技术检测解脲脲原体

本文就聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测解脲脲原体（ＵＵ）的方法建立与应用进行了探讨。利用互补于１６ＳｒＲＮＡ基因的一对引物，通过ＰＣＲ对ＵＵ进行检测，扩增片段长度为３９７ｂｐ。与４６例培养对照，培养阳性９例，ＰＣＲ阳性１３例，而且其它相关微生物ＰＣＥ检测无特异性扩增。对临床６２例泌尿生殖道感染患者进行检测，阳性率为１５／６２（２４．２％）。该法具有可靠、简便、快速等优点，用于解脲脲原体感染的临床诊断具有重要价值。     

PCR扩增IS6110检测结核分枝杆菌的特异性和可靠性

目的：评价ＰＣＲ扩增ＩＳ６１１０检测结核分枝杆菌复合群的特异性和可靠性。方法：用Ｂａｃｔｅｃ２法对４５个不疑肺结核病人痰标本进行分枝杆菌检测，用四对分别针对ＩＳ６１１０不同区域引物和一对分枝杆菌属特异的１６ＳｒＲＮＡ基因引物对这４５个痰标本及其液体培养物和２７株已知分枝杆菌株进行ＰＣＲ扩增检测。结果：所有分枝杆菌的均扩增出的１６ＳｒＲＮＡ基因片段，结核分枝杆菌复合群均扩增出了ＩＳ６１１０的四个不同