ET-1mRNA在弥漫性脑损伤中的表达及与脑水肿的关系

目的 探讨弥漫性脑损伤脑组织不同时间段ET-1mRNA表达及与脑组织水肿的关系.方法 依据Marmarou's弥漫性脑损伤动物模型改进,应用SD雄性大鼠55只,随机分为2组:假手术(对照组)(n=5)和弥漫性脑损伤组(n=50),损伤组再按照不同时间段分组(n=5),损伤后大鼠自由进食饮水,按0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、1周、2周等时间段处死大鼠,提取大鼠皮层脑组织.应用分析天平测定组织干重,应用脑组织干湿重比表示脑组织含水量.结果 对照组,0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、1周、2周时间段外伤组ET-1mRNA Ct值不同时间组之间差别有统计学意义;脑组织含水量对照组不同时间组之间含水量差别有统计学意义(P<0.01).结论 ①弥漫性脑损伤后ET-1mRNA表达短期增加,6h就达到高峰.②弥漫性脑损伤后脑组织含水量增加,6h增幅快,12h到达较高水平,持续2周.③ET-1mRNA早期高表达可能是导致脑组织含水量增加的一个原因.     

孕酮对幼年大鼠感染性脑水肿水通道蛋白4表达的影响

目的 观察内毒素(LPS)致幼年大鼠感染性脑水肿后,腹腔注射孕酮(Prog)对水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 将90只幼年大鼠随机分为对照组(C,n=10),内毒素组(LPS,n=40)和内毒素+孕酮组(LPS+Prog,n=40).建立LPS致大鼠感染性脑水肿模型后1 h,LPS+Prog组和LPS组分别腹腔注射孕酮和生理盐水,以后每6小时注射一次.手术后6、12、24和48 h处死动物,分别行脑组织含水量的测定,用免疫组化和RT-PCR检测脑组织内AQP4表达水平.结果 LPS组脑组织含水量明显高于C组和LPS+Prog组(P<0.01).在LPS注射6 h时,幼鼠脑组织 AQP4表达明显增加,12 h达高峰.LPS+Prog组在LPS注射后12 h时,脑组织中AQP4在蛋白水平和mRNA水平的表达均低于LPS组(P<0.01).结论 孕酮可能在转录和翻译水平下调AQP4的表达,从而抑制LPS诱导的幼年大鼠感染性脑水肿的发生发展.     

大鼠急性颅脑损伤后 IL-8在颅内表达的动态观察

目的：探讨大鼠急性颅脑外伤后颅内 IL-8的表达在继发性脑损伤中的作用及意义。方法将健康成年 SD 大鼠70只,随机分为对照组和损伤组后12、24、72、120 h,1周、2周组,每组10只。采用液压打击致伤法制作大鼠急性颅脑损伤模型。观察 IL-8在损伤灶周围的表达,并作脑组织含水量测量。结果损伤后12 h 时即可见坏组织死周围和皮层散在表达 IL-8的棕黄色阳性细胞,24 h 时阳性细胞明显增多达到高峰,不仅在神经元表达,也在胶质细胞、部分血管内皮细胞以及聚集成堆的中性粒细胞内表达;伤后72 h 阳性细胞开始减少,但经过光密度值检测仍高于对照组（P ＜0．05）。损伤后7 d 阳性细胞略有所回升,至损伤后14 d 阳性细胞明显减少,基本趋于平稳。损伤后病变侧各时间点阳性细胞数与对照组比较,差异均有统计学意义（P ＜0．05）。假手术组大鼠各时间点脑组织含水量差异均无统计学意义（P ＞0．05）。损伤组各时间点（除伤后14 d）脑含水量与假手术组相比均有增高（P ＜0．05）,在伤后24 h 达高峰,持续到72 h,伤后14 d 时脑含水量较对照组虽有所升高,但差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论IL-8的表达与脑损伤后脑组织的病理生理学改变密切相关,在损伤早期 IL-8的高表达参与了脑水肿形成等继发性神经元损害过程,后期 IL-8的稍高表达可能与神经元修复有关。     

水通道蛋白4mRNA在大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿中的表达及尼莫地平对其表达的影响

目的：研究大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织AQP4mRNA的表达及脑含水量的变化以及应用尼莫地平对AQP4mRNA表达的影响。方法：健康成年大鼠60只,随机分为对照组、假手术组、SAH组、尼莫地平组,建立蛛网膜下腔出血模型,分别在6h、1d、3d、5d、7d个时间点断头取脑,测定脑含水量,并用RT-PCR法检测AQP4mRNA表达。结果：SAH组脑含水量及脑组织内AQP4在6h后即增加,随时相递增,3d达到高峰,较假手术组及尼莫地平组明显增高（P＜0.05）。结论：大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿的程度与AQP4的表达成正比,这表明AQP4在蛛网膜下腔出血性脑水肿的病理生理中起着非常重要的作用。尼莫地平可以下调AQP4mRNA的表达,从而减轻脑水肿的程度。     

大鼠脑缺血/再灌注后早期AQP4的动态表达及其与脑水肿关系的研究

目的研究局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织病理变化及脑组织水通道蛋白4(AQP4)和相关蛋白表达变化,以探索AQP4与脑水肿的关系。方法♂成年SD大鼠150只,体质量250~300 g,随机分为假手术(Sham)组和脑缺血/再灌注损伤模型(I/R)组,其中I/R组又分为I/R-6 h、I/R-12 h、I/R-24 h、I/R-48 h 4个时间点组别。采用线栓法阻塞大脑中动脉建立局灶性脑缺血/再灌注模型,于相应时间点进行神经症状评分,EB染色检测脑组织通透性,TTC染色观察脑梗死体积,干湿重法检测脑含水量的变化,免疫组化(IHC)检测大鼠脑缺血/再灌注后不同时间点梗死灶周围AQP4的表达,Western blot及RT-PCR检测AQP4及相关蛋白表达情况。结果与Sham组相比较,随着再灌注时间增加,I/R模型组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、脑组织通透性,脑组织含水量均持续增加,IHC显示AQP4的表达逐渐上调,分布愈加广泛;Western blot及RT-PCR结果验证了AQP4表达水平的增高趋势,同时对相关蛋白表达检测显示,MMP-9表达增高,Occludin及JAM-1表达显示降低趋势,在I/R-48h模型组表达差异性均最明显(均P<0.01 vs Sham)。结论脑缺血/再灌注后,伴随脑组织损伤的加剧,AQP4与MMP-9表达共同被激活,导致Occludin及JAM-1等TJPs蛋白降解增加,共同参与了脑水肿的形成。     

重型颅脑损伤后Pim-3的表达与细胞凋亡关系的研究

目的探讨颅脑损伤后Pim-3的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 48只大鼠随机分为实验组与对照组。实验组大鼠制作重型颅脑损伤模型,对照组大鼠予以假手术处理,两组大鼠分别在伤后6、24、72h及7d免疫组化SP法检测Pim-3蛋白表达、TUNEL法检测细胞凋亡。结果重型颅脑损伤后大鼠脑组织Pim-3蛋白水平、细胞凋亡水平均较对照组明显升高,并在伤后24h达到高峰,7d后开始下降。结论 Pim-3可能在颅脑损伤后细胞凋亡中起重要作用。     

AG490对大鼠脑液压冲击伤后脑水肿及水通道蛋白4表达的影响

目的研究AG490对大鼠脑液压冲击伤后继发性脑水肿及水通道蛋白4(AQP-4)表达的影响。方法取健康成年雄性SD大鼠104只,按照随机数字表法分为假手术组8只,对照组48只,AG490组48只,对照组及AG490组随机各分为6个亚组分别对应伤后各时间点3h、6h、12h、24h、48h、72h。对照组及AG490组给予液压冲击打击,制作大脑损伤模型;假手术组仅给予颅骨钻孔术不给予液压冲击。AG490组于伤后1小时按照5mg/kg给予腹腔注射AG490,对照组接受等量生理盐水。干湿重法测定脑组织含水量,免疫组织化学法测定脑组织AQP-4蛋白的表达,HE染色后光镜下观察细胞形态学改变。结果 (1)和假手术组比,对照组及AG490组脑组织含水量均升高(P<0.05)。AG490组各时间段均比对照组脑组织含水量少(P<0.05)。(2)AQP-4表达阳性细胞镜下呈棕黄色空泡状。AG490组各时间亚组AQP-4表达水平均较对照组减低(P<0.05)。(3)光镜下见AG490组各时间点均较对照组病理损伤轻。结论脑损伤后急性期应用AG490可以明显减轻创伤后脑水肿,其作用可能与抑制AQP-4在损伤脑组织中的表达有关。     

弥漫性颅脑损伤对大鼠海马一氧化氮合成酶活性及表达的影响

目的 :研究大鼠弥漫性颅脑损伤后海马结构一氧化氮合成酶 (NOS)活力及表达 ,分析海马不同亚区NOS活力变化与时间的关系。方法 :制作Wistar大鼠弥漫性脑损伤模型 ,并分对照组、假手术组及伤后6、12、24、48h组 ,于不同时间点获取脑组织 ;用NADPH 黄递酶 (NADPH d)组织化学法和免疫组化法检测NOS的活性及表达情况。结果 :NADPH d组织化学法显示 ,弥漫性脑损伤后 ,海马结构NOS阳性神经元数量在伤后6h最多 ,以后逐渐减少 ,伤后24、48h组明显低于假手术组 (P<0 05) ;免疫组化结果显示 ,在CA1、CA3区和齿状回 (DG) ,伤后24、48h组阳性细胞数均低于假手术组 (P<0 01)。结论 :大鼠弥漫性脑损伤后 ,可引起海马各区NOS的变化 ,该变化可能是造成脑组织继发性损害机制之一。     

自发性蛛网膜下出血大鼠脑水肿与水通道蛋白-9的表达

目的:旨在探讨自发性蛛网膜下出血大鼠模型中,神经组织内水通道蛋白9(AQP9)表达变化,了解自发性蛛网膜下出血这一病理生理过程中AQP9与脑水肿的变化,并试图揭示出其相关性。方法:健康成年雄性大鼠60只,随机分为假手术组、SAH组,建立大鼠自发性蛛网膜下出血模型。分别建模后24h、48h及72h断头、取脑,测脑含水量,并利用RT-PCR技术检测大鼠脑组织在自发性蛛网膜下出血后AQP9的表达。结果:大鼠自发性蛛网膜下出血后,脑含水量增高,AQP9呈现高表达,且于72h内逐渐递增,明显高于对照组(P<0.05)。结论:自发性蛛网膜下出血后AQP9高表达和脑水肿呈现正相关,二者可能存在相关性,前者或为后者的原因之一,对自发性蛛网膜下出血后脑水肿而言意义重大。     

脑外伤28例血肿周围脑组织水通道蛋白AQP4mRNA分析

重型颅脑损伤后脑水肿的治疗目前主要以20%甘露醇静脉快速滴注进行脱水来控制,但由于使用甘露醇过程中常导致水、电解质紊乱和酸碱失衡反而加重脑损害。更为重要的是,甘露醇有诱发心力衰竭及急性肾功能不全的风险,这迫使人们寻找新的更加安全的控制脑水肿的方案。本文通过对脑外伤患者血肿周围脑组织中AQP4mRNA的表达变化与伤后不同时段脑组织含水量进行分析,结合相关     

黄体酮对颅脑损伤大鼠脑组织含水量及水通道蛋白-4表达的影响

目的:探讨黄体酮对脑外伤模型大鼠脑组织含水量、水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响机制.方法:SD雄性大鼠165只,随机分为假手术组(55只)、模型组(55只)和黄体酮组(55只),用Freeney法造成大鼠脑挫裂伤模型,干湿重法测定脑组织含水量,并采用免疫组化方法检测脑组织AQP-4蛋白的表达.结果:模型组大鼠伤后各时间点伤侧脑组织含水量、伤灶周围AQP-4蛋白表达水平均明显高于假手术组(均P<0.05);黄体酮治疗组各时间点脑组织含水量、AQP-4表达水平均较模型组降低(P<0.05).结论:黄体酮可以明显减轻创伤后脑水肿,其作用可能与抑制AQP-4在损伤脑组织中的表达有关.     

创伤性脑损伤大鼠P物质和降钙素基因相关肽变化及其意义

目的建立液压创伤性脑损伤(TBI)模型,探讨创伤性脑损伤大鼠P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)变化及其意义。方法健康雄性Wistar大鼠168只,体质量250～300 g,随机分为损伤组(126只)及对照组(42只)。损伤组随机分为:轻度、中度、重度3组,每组42只大鼠。3种损伤组及对照组,分别再随机分为0.5、2、6、12、24、48、72 h各7个亚组,每亚组6只。采用液压颅脑损伤仪,对轻度、中度、重度组分别给予0.5～1.0atm、1.5～2.0 atm、2.5～3.0 atm液压冲击力,制成轻、中、重3型液压颅脑损伤模型。分别于致伤后相应观察时间点对损伤组及对照组行心脏采血。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血浆SP、CGRP的含量。结果创伤性脑损伤(TBI)中SP与CGRP血浆含量变化呈正相关(r=0.879,P<0.01)。变化规律基本都是损伤后立即升高,随之迅速下降,12 h或24 h之后缓慢回升。不同程度TBI组及对照组之间SP、CGRP血浆总含量不同,差异有统计学意义(P<0.01)。TBI中相同程度不同时间点之间SP、CGRP血浆含量不同,差异有统计学意义(P<0.01)。TBI中损伤程度和时间对于SP、CGRP血浆含量有交互效应。SP血浆含量中度组0.5 h时最高,重度组24 h时最低。CGRP血浆含量中度组2 h时最高,重度组24 h时最低。结论TBI中SP与CGRP在血浆含量变化呈正相关,且与损伤程度有关,通过测定SP及CGRP血浆含量可以间接推测TBI病变及损伤程度。     

不同程度创伤性脑损伤大鼠降钙素基因相关肽表达变化及其意义

目的建立液压创伤性脑损伤(TBI)模型,探讨创伤性脑损伤大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)表达变化及其意义。方法健康雄性Wistar大鼠168只,体质量250～300g,随机分为损伤轻度、中度、重度及对照组各42只。各组分别再随机分为0.5、2、6、12、24、48、72h各7个亚组每组6只。采用液压颅脑损伤仪,对轻度、中度、重度组分别给予0.5～1.0atm(1atm=101.3kPa)、1.5～2.0atm、2.5～3.0atm液压冲击力,制成轻、中、重3型液压颅脑损伤模型。分别于致伤后相应时间点对各组大鼠断头取脑。采用苏木素-伊红(HE)染色观察TBI中组织病理改变,免疫组织化学检测创伤区大脑皮层CGRP表达。结果①光镜观察显示:创伤后12～48h时脑组织损伤最严重。②不同程度TBI中创伤区大脑皮层CGRP神经元表达的阳性单位呈现规律性变化,损伤程度越重,CGRP表达的阳性单位变化幅度越大。不同程度TBI组及对照组之间创伤区大脑皮层中CGRP神经元表达的阳性单位不同,差异有统计学意义;重度组明显低于轻度、中度及对照组,差异有统计学意义;轻度、中度及对照组之间,差异无统计学意义。TBI中损伤程度和时间对于创伤区大脑皮层中CGRP神经元表达的阳性单位有交互效应,中度2h时最高,重度24h时最低。结论不同程度TBI中创伤区大脑皮层CGRP神经元表达的阳性单位量与损伤程度及损伤后时间有关。     

依达拉奉对大鼠星形胶质细胞水通透性的影响

目的 探讨依达拉奉对缺氧复氧大鼠星形胶质细胞模型水通透性和水通道蛋白4（AQP4）的影响.方法 原代培养大鼠星形胶质细胞,通过95％（体积分数）N2培养8h和95％（体积分数）的空气复氧培养6h,构建缺氧复氧水肿模型.设置空白组（正常细胞）、对照组（水肿细胞未经受药物刺激）和刺激组（接受0.1、1、10或100μg/mL的依达拉奉溶液刺激）.采用细胞水通透性系数（Pd）检测、荧光定量PCR和Western Blot定量空白组、对照组和刺激组细胞水肿、AQP4 mRNA AQP4蛋白表达.结果 缺氧8h和复氧6h后细胞水肿,且AQP4表达量上升.0.1μg/mL依达拉奉刺激后,模型细胞水通量、AQP4 mRNA水平和蛋白表达量与未刺激过的水肿星形胶质细胞比较,差异无统计学意义（P均＞0.05）,1、10或100μg/mL依达拉奉刺激后,水肿星形胶质细胞水通量、AQP4 mRNA水平和蛋白表达量显著低于未刺激过的水肿星形胶质细胞（P均＜0.05）,与正常的星形胶质细胞比较,差异无统计学意义（P均＞0.05）.结论 1、10或100 μg/mL依达拉奉可通过抑制AQP4 mRNA水平和蛋白表达,从而抑制细胞水肿.     

尼莫同对大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP4 mRNA表达的影响

目的研究大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP_4 mRNA表达及脑水含量的变化,以及尼莫同的干预机制。方法健康Wistar大鼠75只,随机分为假手术组、手术组、尼莫同组,建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别在6h、1d、3d、5d、7d5个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,测定脑水含量,并用RT-PCR法测定AQP_4 mRNA表达。结果手术组大鼠脑水含量及脑组织内AQP_4 mRNA表达在6h后开始升高,3d后达到高峰,较假手术组和尼莫同组明显增高(P<0.05)。结论缺血性脑水肿脑组织内AQP_4 mRNA呈高表达,提示AQP4与脑水肿形成有关,钙离子拮抗剂尼莫同可以降低脑组织内AQP_4 mRNA表达,从而减轻脑水肿程度。     

纳络酮在重型颅脑损伤患者中的早期应用研究

目的探讨早期应用纳络酮对重型颅脑外伤患者的影响。方法对127例重型颅脑损伤患者随机分成纳络酮治疗组（n=67）和对照组（n=60）,观察治疗后患者生命体征、远期疗效,进行统计学分析。结果纳络酮组患者呼吸循环较快恢复稳定,呼吸异常（27%）和心律异常（64%）明显减少（P〈0.05）,脑水肿较对照组明显减轻（P〈0.05）。纳络酮组治疗两周后GCS评分及伤后6个月GOS评分均好于对照组（P〈0.05）。结论早期大剂量运用纳络酮对重型颅脑外伤患者疗效确切,显著改善患者的预后。     

己美舒利对大鼠脑损伤后脑水肿及髓过氧化物酶、金属蛋白酶-2的影响

目的阐明环氧化酶-2（cox-2）抑制剂尼美舒利对大鼠创伤性脑损伤的影响与机制。方法健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组：对照组、尼美舒利组【6mg／（kg·d）1、创伤组、创伤＋尼美舒利组f6mg／（kg·d）1。利用300g,／m的自由落体重力打击装置创建SD大鼠创伤性脑损伤模型,创伤后24h进行神经功能评分,随后处死动物并断头取脑组织。脑水肿及血脑屏障通透性分别以干湿重称重法及伊文思蓝染色测定,测量脑组织中髓过氧化物酶（MPO）及金属蛋白酶-2（MMP-2）的含量以及病理组织形态学观察。结果创伤组脑组织含水量及EB含量比对照组明显增加（P〈0．05）,创伤＋尼美舒利组脑组织含水量及EB含量比创伤组明显减少（P〈0．01）。创伤＋尼美舒利组脑组织MMP-2、MPO表达比创伤组减少,MPO蛋白表达与MMP-2蛋白表达呈正相关。结论在创伤性脑损伤大鼠模型中,尼美舒利通过保持血脑屏障完整性,抑制MPO、MMP-2的过度表达（可能通过其抗炎能力）而发挥其神经保护作用。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠对脑损伤所致脑水肿的影响研究

目的:观察单唾液酸四己糖神经节苷脂钠(GM1)治疗对脑损伤所致脑水肿的临床疗效。方法:78例脑损伤致脑水肿患者随机分为治疗组与对照组,各39例。对照组予常规治疗。治疗组加用GM1,急性期(2周)100 mg加入100ml生理盐水中,ivgtt,qd;维持期(2周)20 mg肌注,每日1²次。4周为1个疗程。测算脑水肿面积,行格拉斯哥昏迷(GCS)评分,测定血清中一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS),记录不良反应。结果:治疗前,治疗组与对照组的GCS评分分别为(9.6±1.0)分和(9.8±1.3)分,治疗后分别为(12.9±1.6)分和(11.2±1.5)分,均较治疗前提高(P<0.05或P<0.01),且治疗组更高(P<0.05)。两组治疗7d水肿面积均明显增大(P<0.01),治疗14、28 d均明显缩小(P<0.01);组间比较,治疗组治疗7、14、28 d脑水肿面积均明显较小(P<0.05或P<0.01)。治疗组NO、NOS均显著降低(P<0.01),组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。两组均无严重不良反应出现。结论:GM1治疗脑损伤所致脑水肿,可明显降低水肿面积、NO及NOS,改善GCS评分。     

应用脑皮质撞击仪建立颅脑创伤后应激性溃疡动物模型的研究

目的 应用电子脑皮质撞击仪（eCCI）建立颅脑创伤后应激性溃疡的动物模型,为进一步研究颅脑损伤所致应激性溃疡的发生机制及治疗方法奠定基础.方法 选取健康雄性Spraque-Dawley（SD）大鼠20只,按照随机数字表法分为假手术组和颅脑创伤组,每组10只.应用eCCI对颅脑创伤组大鼠顶叶大脑皮质区行精确撞击（打击速率4 m/s,打击时间200 ms,打击深度4 mm）.假手术组仅用牙科钻开骨窗（5 mm ×5 mm）,消毒后缝合头皮但不做打击.伤后48 h应用多普勒血流量计测定2组大鼠脑和胃黏膜表面局部血流量,苏木精-伊红染色观察脑和胃组织病理学改变.结果 致伤48 h后,颅脑创伤组脑组织血流量较假手术组明显下降[（40.2±1.9）ml/（min·100 g）比（107.6±3.4） ml/（min·100 g）]（P ＜0.01）.假手术组和颅脑创伤组胃黏膜表面血流量比较,差异有统计学意义[（32.9±2.0）ml/（min·100 g）比（42.1±1.0）ml/（min·100 g）]（P＜0.01）.致伤48 h后,光镜下假手术组大鼠脑组织正常,结构完整,胞核蓝染,胞质呈粉红色;颅脑创伤组大鼠脑组织损伤灶周围神经元数量明显减少,结构排列紊乱,局部脑组织变性坏死,逐渐形成瘢痕,伴大量红细胞渗出.假手术组大鼠胃组织基本正常,黏膜表层结构完整,黏膜下层未见明显嗜酸性炎细胞渗出;颅脑创伤组大鼠胃组织可见黏膜表层细胞、腺胃细胞变性、脱落,伴红细胞渗出,黏膜下可见嗜酸性炎细胞浸润.结论 大鼠颅脑创伤后存在应激性溃疡,应用脑皮质撞击仪可成功建立颅脑创伤后应激性溃疡的大鼠模型.