p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的抑制作用

目的 对比野生型和p75 neurotrophin receptor(p75 NTR)敲除小鼠股骨骨质的改变,探讨p75 NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的影响.方法 取同窝p75 NTR+/+(野生型)和p75 NTR-/-(敲除型)雄性小鼠,出生后8周龄时行股骨Micro-CT扫描,检测股骨松质骨的骨量(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积/骨量(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和皮质骨的骨量(Ct.BV)、骨皮质厚度(Ct.TbTh)、骨皮质的骨表面积/骨量(Ct.BS/BV);出生后40 d分别取同窝两种基因型雄性小鼠行钙黄绿素荧光双标实验,以检测股骨的矿化沉积速率;提取4周龄大小鼠股骨总RNA及蛋白质,RT-PCR和Western blot检测ALP、Runx2的表达.结果 Micro-CT结果显示:p75 NTR--小鼠股骨的BV、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Ct.BV、Ct.TbTh明显低于同窝p75 NTR+/+小鼠(P＜0.05),同时,p75 NTR-/-小鼠的BS/BV、Tb.Sp、Ct.BS/BV明显高于p75 NTR+/+小鼠(P＜0.01);钙黄绿素荧光双标检测结果显示:p75 NTR-/-小鼠股骨的矿化速率明显低于同窝p75 NTR+/+小鼠(P＜0.01);RT-PCR及Western blot结果显示:p75 NTR--小鼠的ALP、Runx2表达均明显低于p75 NTR+/+小鼠(P＜0.01).结论 p75 NTR敲除对小鼠股骨的矿化发育有一定的抑制作用.     

疫苗免疫对小鼠神经系统发育影响的初步探讨

目的 探讨疫苗免疫对于小鼠神经系统发育的影响。 方法 将制备计划免疫9 种疫苗病原体的蛋白氨基酸序列与可能导致神经系统发育障碍的分子氨基酸序列进行比对,找到同源序列（ ≥ 5-6AA） 并进行化学合成,免疫乳鼠,筛选出可能导致神经系统发育障碍的氨基酸序列。对神经系统发育障碍血清样本进行ELISA 检测。 结果 神经系统发育障碍血清中抗AS-4 抗体滴度明显升高,与神经系统发育障碍相关分子氨基酸同源序列的AS-4 具有更大的研究价值。用AS-4 免疫乳鼠,在小鼠脑组织内可发现明显的T 淋巴细胞侵润。 结论 由于疫苗诱导,小鼠机体免疫系统对与疫苗相同序列的蛋白产生免疫反应。     

褪黑素对小鼠子宫内膜发育的影响

目的探讨褪黑素对小鼠子宫内膜发育的影响,为临床用药提供实验依据。方法随机将80只雌性昆明小鼠分为非受孕组和受孕组,每组又分为非喂药组和喂药组,每组20只。喂药组给予褪黑素,非喂药组给予生理盐水。于用药10 d后24 h内处死非受孕组小鼠,取子宫做成石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色,光镜观察并进行图像分析。在非受孕组雌鼠处死取材的当天,受孕组雌鼠与雄鼠合笼,于受孕后6 d处死受孕组小鼠,观察孕鼠着床情况,取子宫做成石蜡切片,HE染色,光镜观察并进行图像分析。结果非受孕组:喂药组子宫内膜厚度(157.21±0.09)μm明显薄于非喂药组(290.32±0.12)μm(P<0.05);2组子宫腺体的直径、周长比较无统计学意义(P>0.05)。受孕组:喂药组子宫内膜厚度(269.73±0.13)μm明显薄于非喂药组(368.35±0.19)μm(P<0.05),喂药组子宫腺体的直径、周长明显小于非喂药组(P<0.05)。结论褪黑素能够抑制小鼠子宫内膜的发育。     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

过量氟对体外培养小鼠磨牙牙胚发育的影响

目的:建立小鼠牙胚发育的体外培养模型 ,初步研究过量氟对小鼠牙胚发育的影响。方法 :取胎龄 18dBAL B/ c小鼠牙胚 ,在 96孔培养板 BGJb半固体培养基标准环境下培养 5 d和 10 d,HE染色 ,观察牙胚发育形态 ,并初步研究 5 .0× 10 - 6 g/ L 氟对体外牙胚发育的影响。结果:牙胚在体外继续发育 ,牙尖形成明显 ,内釉上皮细胞和成牙本质细胞极化 ,分泌基质。氟干预组牙胚发育与对照组相似 ,但部分区域成牙本质细胞极化不明显 ,基质分泌明显少于对照组。 结论 :小鼠牙胚在 BGJb半固体培养基生长良好 ,为研究氟对牙胚损伤提供良好模型。     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的 Whitten氏培养液对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养 ,研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含 0 .0 1%、0 .5 %、1.0 %、1.5 %、2 .0 %、3.0 %、5 .0 %、10 .0 %乙醇的 Whitten氏培养液对 2细胞胚胎进行培养 ,观察研究小鼠 2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含 1%和 3%乙醇的 Whit-ten氏培养液分别对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果 :含低浓度乙醇 (1%以下 )的培养液对外细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用 ,而在 2细胞和 4细胞胚胎…     

鼻滴脂多糖对新生小鼠肺发育的影响及机制探讨

目的：观察鼻滴脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对新生小鼠肺发育的影响及NF-κB、MIP-1α和VEGFR-2的变化,探讨出生后肺部炎症在支气管肺发育不良发病中的作用及可能的机制。方法：新生1 d内的C57BL/6小鼠20只随机分为生理盐水组和LPS组：LPS组于出生后1 d（P1）到出生后13 d（P13）每天鼻滴LPS 25 mg/kg,生理盐水组P1到P13每天鼻滴等量生理盐水。第14天收集2组小鼠肺组织标本进行检测,运用HE染色观察各组小鼠肺组织形态学改变,免疫组化观察CD31的表达并进行肺微血管密度计数,qRT-PCR检测VEGFR-2、MIP-1α mRNA水平变化,Western blot检测P65、IκBα、磷酸化P65（Ser536）、磷酸化IκBα（Ser32）及VEGFR-2蛋白水平的变化。结果：与生理盐水组相比,LPS组HE染色表现为肺泡增大,血管周围可见炎性细胞浸润。LPS组放射性肺泡计数（4.533±0.166）低于生理盐水组（8.377±0.290）（P=0.000）,肺泡平均截距（54.890±2.074）高于生理盐水组（32.750±0.787）（P=0.000）。CD31免疫组化示LPS组肺微血管密度（3.387±0.007）低于生理盐水组（5.631±0.014）（P=0.000）。qRT-PCR示LPS组VEGFR-2 mRNA表达下降（P=0.000）,MIP-1α mRNA表达升高（P=0.000）。Western blot示LPS组P65蛋白、磷酸化P65（Ser536）及磷酸化IκBα（Ser32）蛋白水平升高,IκBα蛋白及VEGFR-2蛋白水平降低（P=0.000）。结论：鼻滴脂多糖抑制新生小鼠肺发育,出生后肺部炎症可能参与支气管肺发育不良的发生,其机制可能和VEGFR-2表达下降、NF-κB激活上调MIP-1α有关。     

蒺藜提取物对小鼠睾丸发育影响

目的 探讨蒺藜提取物对未性成熟小鼠睾丸发育的影响.方法 未性成熟健康雄性小鼠30只,随机分为给药组、对照组A和对照组B,每组10只;实验组每天给390 mg/kg的蒺藜提取物,对照组A、B分别给睾丸酮和等量生理盐水32 mg/kg灌胃;3周后测量小鼠睾丸湿重;制备光镜标本,测量各组生精小管管径(TD)及上皮高度(SEH),同时计数生精上皮细胞数量.结果 给药组与对照组A比较,睾丸湿重、TD、SEH和生精上皮细胞数量等数值相近,与对照组B比较,睾丸湿重、TD、SEH和生精上皮细胞数量均增大.结论 蒺藜提取物可促进未性成熟小鼠睾丸的发育.     

注射性臀肌挛缩对儿童骨骼发育的影响

为了探讨注射臀肌挛缩对儿童骨骼发育的影响,我们对88例臀肌挛缩与50例非臀肌挛缩症的骨盆、髋关节X线平片分析比较。结果发现88例肌挛缩病儿的髋臼指数基本正常颈干解增加,CE解增大,闭孔形态变异等。全部病例术后随访平均8年。     

IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性DCs成熟的实验研究

目的观察白细胞介素-6(IL-6)对于内毒素(LPS)诱导的小鼠髓源性树突状细胞(DC)成熟效应的抑制作用。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养髓源性DCs(BMDCs)。用相差倒置显微镜观察BM-DCs的形态特点。用LPS诱导DC成熟。采用FACS结合混合淋巴细胞反应,观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型和刺激同种淋巴细胞增殖功能上的变化。结果形态观察和FACS分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P0.05)。混合淋巴细胞反应显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDCs刺激同种淋巴细胞增殖的能力明显减弱,并呈剂量依赖关系(P0.05)。结论IL-6能明显抑制LPS诱导的BMDCs成熟,可能是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。     

小鼠骨髓耐受性树突状细胞的体外培养与鉴定

目的建立一种简单经济的小鼠骨髓耐受性树突状细胞（DC）的培养方法，为进一步研究耐受性DC在自身免疫性疾病治疗中的运用打下基础。方法取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞，加入细胞因子rmGM—CSF和IL-4，分成磷酸酯多糖（LPS）-DC和单纯DC两组，前者在培养结束前18h加入LPS，后者不加；培养6d后收集疏松贴壁细胞进行形态、细胞表面标记以及免疫功能的鉴定。结果用此方法培养的细胞其表面CD11c的表达率超过76％，具有典型的DC形态。单纯组DC的细胞中度表达MHCⅡ类分子，低水平表达共刺激分子，刺激T细胞增殖的能力较弱；LPS—DC组细胞高水平表达MHCⅡ类分子和共刺激分子，能够诱导T细胞大量增殖。结论利用此法能在体外培养出大量的未成熟DC，具有耐受性．为其在治疗自身免疫性疾病的应用奠定了基础.     

小鼠骨髓耐受性树突状细胞的体外培养与鉴定

目的 建立一种简单经济的小鼠骨髓耐受性树突状细胞(DC)的培养方法,为进一步研究耐受性DC在自身免疫性疾病治疗中的运用打下基础。方法 取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入细胞因子rmGM-CSF和IL-4,分成磷酸酯多糖(LPS)-DC和单纯DC两组,前者在培养结束前18h加入LPS,后者不加;培养6d后收集疏松贴壁细胞进行形态、细胞表面标记以及免疫功能的鉴定。结果 用此方法培养的细胞其表面CD11c的表达率超过76%,具有典型的DC形态。单纯组DC的细胞中度表达MHCⅡ类分子,低水平表达共刺激分子,刺激T细胞增殖的能力较弱;LPS-DC组细胞高水平表达MHCII类分子和共刺激分子,能够诱导T细胞大量增殖。结论 利用此法能在体外培养出大量的未成熟DC,具有耐受性,为其在治疗自身免疫性疾病的应用奠定了基础。     

Effects of Salvia Miltiorrhiza Bung on the formation of osteoclastlike cells in mouse bone marrow culture

SalviaMiltiorrhizaBung(SMB),akindoftradi-tionalChinesemedicine,hasbeenusedinthetreat-mentofthebonefractureinrecentyears[1－2].SomestudiesaboutthemechanismofSMBonboneremod-elingindicatedthatSMBcannotonlyimprovemi-cro-circulation,butalsopromotenewboneformation,suchasstimulatingthedifferentiation,proliferation,andAlkalinephosphataseactivityofosteoblast-likecells[3－5].ButtheeffectsofSMBonosteoclastsandboneresorptionisstillunclear.WeinvestigatedtheeffectsofSMBonosteoclast-likecellsformatio…     

FGF-23（R176Q）过表达对成年小鼠下颌骨形成和矿化的影响

目的：研究 FGF-23（R176Q）过表达对成年小鼠下颌骨形成和矿化的影响。方法使用 CT 扫描、血清学检查、HE染色、免疫组织化学法染色和 RT-PCR 等方法分析 FGF-23（R176Q）转基因小鼠（TG 组）和野生型小鼠（WT 组）下颌骨,比较血清钙、磷浓度变化和下颌骨骨基质和矿化的差异。结果WT 组小鼠血清钙、磷和1,25（OH）2 D3浓度均明显高于 TG 组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;TG 组的成骨细胞密度低于 WT 组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;TG 组的二聚糖阳性百分比高于 WT 组,而 DSP 阳性百分比低于 WT 组,差异有统计学意义（P ＜0．05）;WT 组的 OCN 和Ⅰ型胶原 mRNA 表达水平均明显高于 TG 组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论FGF-23（R176Q）过表达能够抑制下颌骨骨基质的形成,减少骨质的矿化,进而导致了下颌骨发育障碍。     

大鼠长骨成骨细胞体外培养形态观察

目的 建立生长期大鼠长骨成骨细胞体外培养实验模型并观察其生长及骨化过程。方法 以10周龄Wistar大鼠股骨，胫骨为材料，采用酶分次消化法分离成骨细胞，经DME：F－12加10％胎牛血清的培养基原代和传统培养或含50μg/ml L-抗坏血酸和10mmol/L β－甘油磷酸钠的培养基连续培养，追踪观察成骨细胞在体外培养中的增殖及形态变化，并通过Giremsa,ALPey Kossa染色技术，观察细胞体外基质分泌和骨化过程。结果 （1）大鼠工骨成骨细胞具有体内成骨细胞的形态特征，增殖代谢旺盛，其群体倍增时间为78h。（2）成骨细胞分泌形成球形和无定形基质。（3）当给予钙化条件培养时，细胞形成钙化骨基质。（4）大多数细胞ALP染色呈阳性并与基质的钙化密切相关。结论 培养的生长期大鼠长骨成骨细胞具有成骨细胞的某些生物学行为，为儿童骨生长及调控的研究提供了一种实验模型。     

乙醇摄入致小鼠骨代谢异常的骨形态计量学观察

目的:通过骨组织形态计量方法观察乙醇摄入对生长期小鼠骨代谢的影响.方法:清洁级6周龄昆明种小鼠30只,随机分成基础组(A)、正常对照组(B)、乙醇组(C)给予50%(体积分数)乙醇(根据预实验结果选用),按 4 g·kg-1·d-1 剂量灌胃(换算成 60 kg 体重成人相当于摄入乙醇约 30 g/d),连续灌胃 60 d 后处死全部小鼠,取胫骨上段、中段进行不脱钙骨制片,再经自动图像分析系统进行骨组织形态计量学分析.结果:与正常组比较,乙醇组的小鼠形态学参数骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)明显降低(-66%, P＜0.05),骨形成率(BFR/TV)降低(-35%, P＜0.05);皮质骨面积百分率(%Ct.Ar)降低(-7%, P＜0.05)及髓腔面积百分率增加(%Ma.Ar 32%, P＜0.05),骨内膜骨形成率E-BFR/BS降低 (-41%, P＜0.05).结论:小剂量乙醇摄入可造成生长期小鼠骨代谢的降低,骨量的丢失.     

序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育     

内毒素及肿瘤坏死因子对肝细胞超微结构的影响

目的：研究内毒素及肿瘤坏死因子对肝细胞超微结构的影响。方法：我们采用胶原酶二步法灌注一月龄ＳＤ雄性大鼠肝脏,制备肝细胞悬液并进行了原代培养,重点研究了内毒素、肿瘤坏死因子对原代短期培养肝细胞超微结构的影响。结果：表现为糖原减少、溶酶体增多、线粒体肿大、嵴溶解、内质网扩张及断裂、甚至可见核空泡化、染色质消失。其中以肿瘤坏死因子引起的肝细胞损伤为重;若二者联合作用,则肝细胞受损更加严重。结论：内毒素与     

小鼠神经干细胞的分离培养

目的 探讨小鼠神经干细胞的体外分离培养方法。方法 采用贴壁培养法,从成体小鼠大脑皮层分离并体外培养成体小鼠大脑皮层细胞,制成细胞悬液后将其置入DMEN/F12(1:1)液(包括15％FCS,bFGF20ng/ml,青霉素100u/ml和链霉素100u/ml)培养,获得细胞克隆。应用免疫组织化学技术检测克隆细胞巢蛋白(Nestin)的表达。结果原代及传代培养的细胞均可持续分裂增殖形成细胞克隆;克隆细胞表达巢蛋白(Nestin)。结论 分离的细胞在体外具有很强的增殖能力和自我更新能力,表达Nestin的为中枢神经系统的干细胞。