长期低氧对骨肉瘤细胞增殖与分化的影响

目的 观察长期低氧对骨肉瘤细胞增殖、分化及骨肉瘤干细胞自我更新能力的影响.方法 采用噻吩蓝(MTT)比色法观察低氧对骨肉瘤细胞系MG63增殖的影响.后续试验分为两组:第1组为低氧处理组,将MG63细胞在低氧环境下培养1周后进行实验;第2组为常氧对照组.应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测两组骨肉瘤细胞的成骨分化基因(Runx2和OC)、胚胎干细胞标志基因Oct3/4、原癌基因c-Myc及低氧诱导因子(HIF)-1a、2a的表达.采用无血清悬浮球培养法观察并比较两组细胞肉瘤球数目和体积的差异.采用免疫组织化学染色法检测两组细胞中HIF-1a和HIF-2a蛋白的表达.结果 培养第6、9天,低氧处理组的光密度(D)值为0.128±0.020、0.700±0.060,分别显著高于常氧对照组的0.073±0.050、0.480±0.120(P值均＜0.05).低氧处理组MG63细胞骨肉瘤球的数目为(24±10.97)个,显著高于常氧对照组的(1 3±3.95)个(P＜0.05);低氧处理组MG63骨肉瘤球的体积显著大于常氧对照组.与常氧对照组比较,低氧处理组细胞的成骨标志基因Runx2和OC均显著下调(P值均＜0.05),胚胎干细胞标志基因Oct3/4和原癌基因c-Myc表达均显著上调(P值均＜0.05),HIF-2α表达显著上调(P＜0.05);免疫组织化学染色检测到MG63细胞中有HIF-1a和HIF-2a蛋白表达.结论 长期低氧可促进骨肉瘤细胞MG63的增殖,抑制其成骨分化,并促进骨肉瘤球的自我更新能力,增强其干细胞特性.HIF-2a蛋白可能在这些过程中发挥关键作用.     

腺病毒介导BMP-2和BMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用研究

目的 研究骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用.方法 分别用重组腺病毒AdBMP-2、AdBMP-6和AdGFP感染骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶(ALP)活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化.结果 与感染AdGFP的相应骨肉瘤细胞株(对照组)相比,分别感染AdBMP-2和AdBMP-6的两种骨肉瘤细胞株的细胞存活率随时间延长逐渐降低,凋亡率逐渐增加,细胞穿膜数逐渐减少,ALP活性逐渐增加.结论 BMP-2和BMP-6可以抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移,并诱导它们凋亡和向成骨细胞分化.     

下调Notch3表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察Notch3在骨肉瘤细胞中的表达及下调Notch3表达后对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,探讨Notch3在骨肉瘤细胞生物学功能中的作用.方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S,采用Real-time PCR和Western blot检测3种骨肉瘤细胞系中Notch3的mRNA和蛋白表达水平;利用siRNA敲低Notch3在骨肉瘤U20S细胞中的表达,并将细胞分为siNotch3组和阴性对照组,检测下调Notch3的表达后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭、迁移等生物学特性的变化.结果 Notch3在骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S中均呈阳性表达,并且在低级别骨肉瘤细胞系MG63中的表达明显低于高级别细胞系Saos2和U20S(P ＜0.05),下调Notch3的U20S细胞(siNotch3组)增殖、侵袭、迁移能力较阴性对照组减弱,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在骨肉瘤细胞U20S中下调Notch3的表达可明显抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进凋亡.Notch3可能是Notch 通路在骨肉瘤中的关键受体之一,并参与了骨肉瘤的发生、发展.     

辣椒碱抑制分化因子1表达以及核转移提高骨肉瘤对顺铂敏感性

目的 研究辣椒碱对骨肉瘤细胞系中分化抑制因子1(Id1)的作用,并观察辣椒碱对骨肉瘤顺铂敏感性的影响.方法 我院病理科收集12例骨肉瘤患者肿瘤切除组织切片以及12例骨关节炎患者全膝关节置换术后废弃的骨组织,福尔马林固定后制作石蜡切片,利用免疫组化检测Id1的表达差异.顺铂与辣椒碱共同处理MG63、HOS以及143B 3种骨肉瘤细胞系后,用免疫蛋白印迹检测Id1以及与Id1表达有关的磷酸化p65(p-p65)以及磷酸化Smad1/5(p-Smad1/5)表达改变;免疫荧光检测Id1表达部位;流式细胞学检测细胞凋亡程度.结果 骨肉瘤表达高水平Id1;顺铂能介导骨肉瘤细胞株Id1表达上调(P＜0.05)以及Id1入核;辣椒碱通过抑制p65以及Smad1/5磷酸化抑制Id1蛋白表达(P＜0.05);联合应用辣椒碱能抑制顺铂引起Id1入核(P＜0.05)并加强凋亡效果(P＜0.05).结论 辣椒碱能通过抑制顺铂介导的骨肉瘤Id1上调以及核转移,加强顺铂介导骨肉瘤细胞凋亡效果,可作为潜在的化疗辅助药物.     

分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Id1表达调节后MG-63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Id1下调表达后,MG-63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Western blotting技术检测Id1下调表达后对p-AKT水平的影响。结果本实验利用RNA干扰技术下调骨肉瘤细胞系Id1表达后,可以明显抑制MG-63细胞的增殖,p-AKT的水平也显示下降,流式细胞术证明下调后Id1的水平可以一定程度地调节细胞凋亡水平,而对细胞周期无明显影响,另外进一步构建了Id1的真核表达质粒,转染Id1过表达质粒后,并未见骨肉瘤细胞明显地增殖加速。结论分化抑制因子Id1可能通过影响AKT信号通路进而影响了骨肉瘤细胞的增殖。     

去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤细胞黏附、迁移和侵袭

目的研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭特性的影响,并初步探讨其相关机制。方法不同浓度的NDGA处理MG63细胞,用CCK-8法、细胞划痕试验和Transwell小室模型分别测定其黏附力、迁移力和侵袭力,Western blot法检测MG63细胞基质金属酶(MMPs)表达量的变化。结果 NDGA明显抑制骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭力(P<0.05);NDGA抑制MG63细胞的黏附、迁移和侵袭力呈剂量依赖性;Westernblot检测表明MG63细胞MMP-2和MMP-9的表达明显下调。结论 NDGA可抑制骨肉瘤MG63细胞的体外黏附,迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少骨肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现。     

Inhibition of nordihydroguaiaretic acid on adhesion,migration and invasion of osteosarcoma cell

目的 研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭特性的影响,并初步探讨其相关机制.方法 不同浓度的NDGA处理MG63 细胞,用CCK-8法、细胞划痕试验和Transwell小室模型分别测定其黏附力、迁移力和侵袭力,Western blot法检测MG63细胞基质金属酶(MMPs)表达量的变化.结果 NDGA明显抑制骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭力(P<0.05);NDGA抑制MG63细胞的黏附、迁移和侵袭力呈剂量依赖性;Western blot检测表明MG63细胞MMP-2和MMP-9 的表达明显下调.结论 NDGA可抑制骨肉瘤MG63细胞的体外黏附,迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少骨肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现.     

Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用

目的探讨DNA分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation,Id)Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用。方法 Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3的表达;将子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B两株细胞各分为未处理细胞组、空白病毒组、启动子病毒组和Id1/Id3双敲低组。通过qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染细胞后MMP2、CXCR4和P21 mRNA表达量,Western blot检测MMP2、CXCR4、P21蛋白表达情况;通过MTT增殖试验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞粘附实验检测Id1/Id3表达改变后,对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、移行和粘附能力的影响。结果 Id1/Id3在子宫内膜癌组织中较癌旁组织表达增高(P<0.05);双敲低Id1/Id3,子宫内膜癌细胞中MMP2、CXCR4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P<0.05),P21的mRNA水平和蛋白水平则明显升高(P<0.05),RNAi组与其他3组细胞相比均有显著性差异;Id1/Id3双敲低组子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B株细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力和粘附能力均抑制(P<0.05)。结论 Id1/Id3在子宫内膜癌患者组织中高表达,并可通过升调MMP2、CXCR4和降调P21的表达促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附作用,靶向Id1/Id3治疗可能成为预防和治疗子宫内膜癌的新方案。     

人骨肉瘤细胞系MG63体外增强单核细胞的迁移及侵袭能力

目的:观察骨肉瘤细胞对单核细胞侵袭能力的影响,探讨肿瘤浸润单核细胞协助肿瘤侵袭的作用.方法:利用transwell体外模型检测骨肉瘤细胞系MG63条件培养基作用下人单核细胞系Thp-1迁移及侵袭能力的变化;明胶酶谱方法检测MG63细胞条件培养基作用后Thp-1细胞表达MMP-9的改变.结果:与阴性对照组对比,MG63细胞条件培养基明显增强了Thp-1细胞迁移及侵袭能力;而且MG63细胞条件培养基对Thp-1细胞具有趋化作用.明胶酶谱结果提示MG63细胞条件培养基作用后Thp-1细胞表达MMP-9增强.结论:骨肉瘤细胞MG63能够增强单核细胞Thp-1的迁移及侵袭能力,并可能是通过增强单核细胞MMP-9的表达而实现的.     

Twist调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法Real-time PCR 及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-siTwist腺病毒感染 细胞,细胞生长曲线检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂直迁移及侵袭能力。 Ad-Twist及Ad-siTwist感染Luc标记的143B细胞,制备胫骨近端骨肉瘤模型,活体成像动态观察细胞在体内的生长。结果在 骨肉瘤细胞中Twist 的基础表达显著高于C3H10 细胞（P<0.05）,其中在143B细胞表达最高,MG63 细胞次之,TE85 细胞中最 低,Twist的表达水平与骨肉瘤细胞的恶性程度呈正相关。Ad-Twist及Ad-siTwist感染细胞分别能显著提高或降低骨肉瘤细胞 中Twist的mRNA及蛋白水平的表达（P<0.05）。生长曲线结果显示Twist过表达能显著促进骨肉瘤细胞的增殖,而抑制Twist的 表达后,骨肉瘤细胞的增殖能力降低（P<0.05）。Transwell实验发现Twist过表达后,3种骨肉瘤细胞迁移或侵袭至小室的细胞 数明显增多,而抑制Twist的表达可降低骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力（P<0.05）。143B细胞具有良好的体内成瘤能力,Twist过表 达促进143B细胞在裸鼠体内生长,活体成像动态观察荧光信号显著高于对照组,抑制Twist表达可显著抑制细胞在裸鼠体内生 长,信号明显弱于对照组。结论Twist可增强骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

干细胞分化的表观遗传调控

干细胞具有自我更新能力和多谱系细胞分化能力,在基础医学和临床应用中有极大研究意义。以胚胎干细胞为模型,近年来干细胞分化的表观遗传调控已成为研究热点。染色质结构的表观遗传调控,比如DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰,对于胚胎发育时基因的激活和抑制非常关键。本文综述了干细胞多潜能性维持和干细胞分化的表观遗传机制及其一些表观遗传修饰之间的联系。     

p53基因在5-aza诱导小鼠胚胎干细胞向心肌样细胞分化中表达的研究

目的 检测p53基因及其蛋白在5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化过程中的变化,进而探讨p53基因及其蛋白在胚胎早期心肌分化过程中发挥作用的条件.方法 以10 μmol/L的5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化,分别选取诱导后1周、2周、3周、4周这4个时间点进行样品收集.Tr-izol法提取诱...     

苦参碱对SMMC-7721细胞系的诱导分化作用

目的：研究苦参碱对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１的诱导分化作用．方法：用细胞培养方法，观察细胞增殖、形态、功能和代谢等方面指标，研究苦参碱（Ｍａ）对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１在体外的诱导分化作用．结果：各处理组细胞均出现细胞增殖抑制，亚细胞结构趋于正常，ＡＦＰ分泌量明显低于培养天数相同的对照组细胞，γ－ＧＴ活力逐日下降，酪氨酸－α－酮戊二酸转移酶（ＴＡＴ）活力始终高于对照组细胞．处理６ｄ后，细胞ＤＮＡ含量降低，Ｓ期细胞数增加．结论：Ｍａ可使ＳＭＭＣ－７７２１细胞聚集于Ｓ期，诱导其向正常肝细胞分化     

人干细胞的分化研究及临床应用探索

人干细胞是具有自我复制和分化潜能的细胞,有很多种类,在人体发育中起着决定性的作用.干细胞的分化是干细胞研究的核心内容,除了受干细胞自身分化潜能制约外,同时受干细胞周围环境的控制.人干细胞的分化研究分为体外研究和体内研究,除观察人干细胞诱导分化后的形态变化外,同时也探索细胞分化的分子机制.人们关注人干细胞的研究,目的就是体外扩增干细胞并获得具有定向分化能力的干细胞,采用适当的手段治疗人类疾病,维护人体健康.     

胚胎干细胞定向分化为神经细胞的研究进展

最近研究表明胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESC)在体内外均可以发育分化出神经组织细胞，这对于了解神经发育的机制和研究神经组织退化性或者脑组织损伤性疾病的治疗具有重要的意义。本文就胚胎干细胞定向分化为神经组织细胞及其基因表达特点作一综述。     

小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的研究进展

小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES cell）体外培养可以分化成为外胚层组织,并进一步分化为神经元和神经胶质细胞。这些细胞已用于中枢神经系统疾病的细胞替代治疗和治疗药物的研发。小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的方法主要有拟胚体介导的神经细胞分化、基质细胞诱导的神经细胞分化、默认模式介导的神经细胞分化、单层粘附培养诱导的神经细胞分化和遗传工程介导的神经细胞分化等。本文综述了这些分化方法。     

人原始生殖细胞分离培养的初步研究

[目的]探讨分离培养人原始生殖细胞的最佳条件。[方法]用胰蛋白酶消化5～9周人流组织中的人胚生殖嵴,获取人原始生殖细胞。以小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层,在高糖DMEM培养基中添加10μmol/L福司克林(forskolin)和5～μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养液中培养、传代,并对子代细胞进行碱性磷酸酶活性检测和体外分化实验。[结果]原代培养时形成许多大小不等,形态各异的由人原始生殖细胞组成的集落,约5～7d传代。传代后,集落生长,变大。细胞培养到第七代,检测碱性磷酸酶染色为强阳性,体外分化实验有拟胚体形成。[结论]人原始生殖细胞可以用胰蛋白酶消化分离培养。用高糖DMEM培养基,添加forskolin和bFGF有利于人原始生殖细胞增殖。体外分化实验初步证实人原始生殖细胞具有多向分化潜能。     

B超引导下胎羊体内人干细胞移植及其向肝脏细胞分化的研究

目的:建立B超引导下胎羊体内人干细胞移植模型,及移植细胞向肝脏细胞体内分化的检测方法.方法:通过B超引导下的穿刺,将(0.5～3)×107 人干细胞移植入发育50～60 d的胎羊体内(n=6);移植后110～120 d取材分析,用人HLA-DR引物PCR检测人源性细胞的嵌合;用人特异性肝细胞、白蛋白、CK18抗体免疫组化染色及Alu探针原位杂交,检测移植细胞向肝脏细胞的分化.结果:在移植的6只胎羊中,5只顺利生产;PCR检测显示5只实验羊肝脏组织中均有人源性细胞的嵌合;免疫组化及Alu探针原位杂交显示人源性细胞分布于门管区周围和肝小叶中,表达白蛋白、CK18等肝细胞分化标志;Alu探针阳性细胞也分布于胆管上皮中.结论:胎羊体内干细胞移植模型及其向肝脏细胞分化的检测,可以有效地显示人干细胞体内向肝脏细胞分化的潜能.     

HMBA-induced differentiation of myeloid leukemic cell lines is associated with altered G1 cell cycle regulators and related genes

The proliferation and differentiation of hematopoietic cells can be regulated by a number of physiological agents including hexamethylene bisacetamide (HMBA). Clinically, HMBA has been used for the treatment of acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome. However, the mechanism of the effect of HMBA on the differentiation of myeloid leukemic cells is largely