Apoptin对宫颈癌Hela细胞放疗增敏作用实验研究

目的探讨Apoptin增加宫颈癌Hela细胞的敏感性及作用机制。方法应用脂质体转染方法将表达Apoptin的重组载体pEGFP—Apoptin转染入人宫颈癌Hela细胞。其中转染pEGFP-Apopti为实验组,转染pEGFP—C2组为阳性对照组,未转染组为阴性对照组。上述各组经射线干预后利用平板克隆形成实验、流式细胞术、MTT及蛋白印迹western—blot等方法分别检测细胞凋亡、周期及相关蛋白表达水平。结果pEGFP—Apoptin在人宫颈癌Hela细胞中稳定表达。Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞对放射线的敏感性,Apoptin可使p21、p27的表达量上调,使Rad50及Ku80的表达量下调,而对XLF的表达量则无影响。结论Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞的放疗敏感性,其机制可能与细胞周期阻滞及同源与非同源重组修复相关蛋白的表达水平改变有关。     

肢体骨肉瘤的开创放疗

近年来、在肢体原发性恶性骨肿瘤的治疗中,放射治疗已居于重要地位,但放疗与手术都有其一定的局限性,为克服两者的局限性,术中放疗逐渐兴起。开创效疗系术中放疗的发展。本文对9例骨肉瘤行钴60开创放疗,剂量为6,000—8,000rad,观察21～33个月、其中除2例截肢及1例死于肺转移外、6例达到保留肢体的目的。文中介绍了具体方法及注意事项,并强调放疗与化疗并用,包括肢体灌注及超大剂量氨甲喋呤甲酰四氢叶酸钙解救疗法(HD—MTX—CFR)。     

Rb反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞凋亡及化疗药敏的影响

目的:观察Rb反义寡核苷酸(AS—ODN)对人成骨肉瘤(MG-63)细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响。方法:人工合成RbAS—ODN、S—ODN(正义寡核苷酸)经脂质体(Lip)包裹转染MG-63细胞。采用Westem Blot检测转染前后Rb蛋白表达状况，流式细胞术测定MG-63细胞转染前后阿霉素(Adriamycin，ADM)诱导细胞凋亡程度，MTT法观察化疗药敏的变化。结果:经Rb AS—ODN处理的MG-63细胞Rb蛋白表达量明显下降，RbAS—ODN处理的MG-63细胞加ADM作用后与对照组比较，细胞凋亡率明显下降，化疗药物敏感性降低。结论:RbAS—ODN阳离子脂质体转染具有抑制化疗药诱导骨肉癌MG-63细胞凋亡的作用及降低化疗药物敏威性作用。     

胰岛素对肺腺癌A549细胞放疗增敏作用的研究

目的探讨胰岛素能否提高体外肺腺癌A549细胞的放疗敏感性。方法将胰岛素直接作用于体外培养的A549细胞，再将此细胞放于直线加速器下行X线照射，采用甲基噻唑基四唑（MTT）、流式细胞仪等检测肺腺癌A549细胞的凋亡情况。结果仅给予胰岛素作用该细胞时，MTT检测结果表明，给予胰岛素的细胞光密度（OD）值与未给予胰岛素的细胞OD值之间无明显差异（P〉0．05）。同时给予胰岛素及X线照射后，给予不同浓度胰岛素的细胞与未给予胰岛素的细胞相比凋亡率有差异（P〈0．05），其中4、8、16mU／mL浓度组有明显差异（P〈0．01）。结论不同浓度的胰岛素液并不会长时间地促进A549细胞的增殖，胰岛素可提高该肿瘤细胞的放疗敏感性，促进肿瘤细胞的凋亡，为胰岛素充当放疗增敏剂运用于临床治疗提供一定的理论依据。     

NF-κB靶向放疗增敏作用及其机制研究进展

放射治疗是恶性肿瘤治疗的重要手段之一,它通过电离辐射导致DNA损伤,杀死肿瘤细胞,从而达到治疗肿瘤的目的。然而,电离辐射同时也激活了其他抗凋亡的转录因子。其中核转录因子κB(NF-κB)的激活被认为是保护细胞、阻碍细胞凋亡的关键因素。文章从转录因子NF-KB及其家族的发现、组成、功能,在电离辐射的作用下,NF-κB信号通路激活的机制,NF-κB信号通路抑制剂用于放疗增敏的作用等研究进展进行综述。     

紫杉醇对中晚期肺癌放疗增敏作用的临床研究

目的：研究紫杉醇对中晚期肺癌的放疗增敏作用及不良反应。方法：45例患者均为手术不能切除的Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌。随机分为2组：A组小剂量紫杉醇配合直线加速器放疗,B组单纯直线加速器放疗。结果：A组有效率（CR＋PR）78.3%,B组有效率40.9%,两组对比P〈0.05,差异有显著性,且不良反应轻。结论：紫杉醇对中晚期肺癌放疗有增敏作用,能明显提高中晚期肺癌的局部控制率和生存率,无严重不良反应,值得推广。     

三氧化二砷对宫颈癌放疗增敏

目的:探讨三氧化二砷对宫颈癌三维适形放疗的增敏作用。方法:将124例宫颈癌患者随机分为三氧化二砷联合放疗组(治疗组)及顺铂联合放疗组(对照组),观察近期肿瘤消退情况、不良反应及其生存期。结果:治疗组患者在放疗4周、6周及放疗结束时有效率分别为74.2%、83.9%及88.7%,而对照组分别为80.7%、87.1%及90.3%,差异无统计学意义(P>0.05),治疗组1、3、5年生存率分别为93.0%、69.4%及46.8%,对照组分别为90.3%、67.7%及48.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组的消化道反应发生率为16.1%,而对照组为50.0%,差异有统计学意义(P<0.01),骨髓抑制情况治疗组为32.3%,而对照组为54.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:三氧化二砷对宫颈癌放疗增敏作用与顺铂相当,但其副作用较小。     

鼻咽癌放疗中顺铂增敏作用和紫杉醇增敏作用的比较

目的探讨顺铂和紫杉醇在鼻咽癌放射治疗中的增敏作用和不良反应。方法选取2005年6月～2010年6月于湖南省郴州市第一人民医院肿瘤科首次治疗的102例局部晚期鼻咽癌患者,随机分顺铂增敏组（C组,n=50）与紫杉醇增敏组（P组,n=52）。用药方法：C组顺铂每周用药1次,每次按40mg／m^2剂量用药,用药后1h内进行放疗,到放疗结束;P组按紫杉醇60mg,m^2药量静脉滴注,每周1次,共用7周。放疗方法：先定制面模固定,采用常规放疗方法。结果治疗后,两组在原发灶及颈部淋巴结退缩方面的差异没有统计学意义（P〉0．05）。C组（52．0％）转移率高于P组（28．8％）,且差异有统计学意义（P〈0．05）,而两组在复发率和生存率方面差异无统计学意义（P〉0．05）。P组在2、3级口腔黏膜炎、白细胞减少方面较C组明显,并且差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论顺铂与紫杉醇在鼻咽癌放射治疗中的增敏作用相似,但顺铂毒副作用相对较小。     

中药放疗增敏剂的研究进展

放射治疗是恶性肿瘤治疗的主要手段之一，但由于肿瘤不同的生物特性及个体差异，肿瘤放射敏感性差异很大，故临床疗效令人不满意。从20世纪60年代始，高效低毒的放疗增敏剂成为研究热点，现代医学进行许多有意义研究，或因其疗效不佳，或因其毒性较大限制了其广泛使用，目前尚无广泛应用的放射增敏西药。中药因其不仅对放疗起增敏效果，还可以减轻放疗引起的毒副反应，受到各国学者的高度重视，现将放疗增敏的中药临床及机制研究综述如下。     

siRNA沉默己糖激酶-2基因对MDA-MB231细胞放疗敏感性的影响

目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默己糖激酶-2(HK2)对乳腺癌细胞MDA-MB231放疗敏感性的影响.方法 实验分为3组:空白(Control)组、阴性对照(Negative)组和转染HK2 siRNA的实验(siRNA-HK2)组.将HK2 siRNA瞬时转染于MDA-MB231细胞,用Western blot和qRT-PCR分别检测转染前后HK2蛋白和mRNA表达;CCK-8实验观察不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X线照射下三组细胞增殖情况;流式细胞仪检测三组细胞在4 Gy照射下细胞凋亡率,观察siRNA干扰HK2对乳腺癌细胞MDA-MB231放疗敏感性的影响.结果 siRNA-HK2组HK2的蛋白和mRNA表达量均降低.三组细胞分别给予不同剂量的X线照射后,细胞存活率呈剂量依赖性递减的趋势,且siRNA-HK2组的存活率较Control组和Negative组明显下降(P<0.05).照射后,siRNA-HK2组细胞凋亡率明显高于Control组和Negative组(P<0.01).结论 沉默乳腺癌细胞HK2基因可增加其对放疗的敏感性.     

靶向C-erbB-2基因小干扰RNA对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响

目的 探讨转染靶向C-erbb-2基因小下扰RNA(siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响.方法 合成四对C-erbb-2基因的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA的干扰效果,筛选出干扰效果最好的一对,用LipofectamineTM2000转染肺腺癌细胞Calu-3,实验分为6组:空白组、单纯干扰组、2 Gy照射组、干扰加2 Gy照射组、5Gv照射组和干扰加5 Gv照射组,每组设3个复孔,最后Annexin V-FITC Kit检测各组细胞的凋亡.结果 从合成的shRNA中筛选出一对siRNA.其干扰效果较其他3种有统计学差异;用其干扰Calu-3细胞后,分别用2 Gy和5 Gy的剂量照射细胞,得到的凋亡率如下:李白组7.767±0.551、干扰组14.400±1.114、2 Gy剂量组11.867±0.737、2 Gy+干扰组23.000±1.664、5 Gy剂量组16.100±0.624、5 Gy+干扰组27.900±1.709.结论 靶向转染C-erbB-2基因siRNA至Calu-3细胞可提高其凋亡率;靶向转染C-erbB-2基因siRNA至Calu-3细胞可提高其对γ射线的敏感性.     

抑制Aurora激酶B的表达可促进骨肉瘤143B细胞凋亡

目的 探讨抑制Aurora激酶B（AURKB）诱导骨肉瘤143B细胞自噬对凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法 构建慢病毒载体（干扰慢病毒Lv/shAURKB和相应的空载慢病毒Lv/shScrambled）,分别感染人源骨肉瘤细胞系143B细胞,并采用氯喹（CQ）进行干预24 h,分别作为：AURKB慢病毒干扰组（plv/shAURKB组）;阴性对照组（plv/NC组）;plv/shAURKB+CQ组;空载慢病毒+氯喹处理组（plv/NC+CQ组）。RT-qPCR检测Lv/shAURKB慢病毒载体对AURKB mRNA的干扰效率。Western blot检测AURKB、P62、LC3、Cleaved-Caspase3、Bcl2、P-ULK1（Ser555）等蛋白表达水平。采用透射电镜和LC3双标荧光法示踪143B细胞内自噬小体并检测自噬水平,流式细胞术和Tunel实验检测细胞凋亡。免疫共沉淀检测AURKB蛋白与ULK1（UNC-51样激酶1）蛋白间的相互作用关系。结果 plv/shAURKB组细胞中AURKB mRNA及蛋白表达水平均低于plv/NC组,差异有统计学意义（P<0.05）;plv/shAURKB组中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的比率和自噬小体数量高于plv/NC组,而P62的表达低于plv/NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）;plv/shAURKB组细胞中促凋亡蛋白Cleaved-caspase3显著高于plv/NC组（P<0.05）,而抑制凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著低于plv/NC组（P<0.05）;与plv/shAURKB组相比plv/shAURKB+CQ组中凋亡相关蛋白 Cleaved-caspase3和Bcl2的表达得到明显回复（P<0.05）。Tunel实验和流式细胞术结果显示,plv/shAURKB组细胞凋亡率显著高于plv/NC组（P<0.05）,plv/shAURKB+CQ组细胞凋亡率与plv /shAURKB组相比得到明显的回复（P<0.05）。plv/shAURKB组细胞中自噬启动蛋白ULK1Ser555磷酸化水平显著高于plv/NC组（P<0.05）。免疫共沉淀检测显示：免疫沉淀AURKB的同时ULK1也发生了沉淀。结论 沉默AURKB能够通过激活ULK1Ser555磷酸化诱导细胞自噬促进骨肉瘤143B细胞凋亡。     

SiRNA沉默Livin基因促骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的:研究特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默骨肉瘤MG-63细胞Livin基因对细胞凋亡的影响?方法:设计针对人源Livin基因的siRNA,转染至对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞株;RT-PCR检测转染后骨肉瘤MG-63细胞Livin基因表达的变化,Western blot检测转染后骨肉瘤MG-63细胞Livin蛋白表达的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染后细胞凋亡的变化?结果:Livin特异性siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后,Livin基因表达较空白对照和阴性对照显著减少(0.195 ± 0.019 vs 0.539 ± 0.031?0.438 ± 0.029)?Western blot检测结果显示Livin蛋白质水平较空白对照和阴性对照显著减少(0.165 ± 0.022 vs 0.632 ± 0.034?0.625 ± 0.035)?流式细胞仪检测见siRNA组骨肉瘤MG-63细胞凋亡率较对照组明显增加?结论:RNA干扰能有效沉默骨肉瘤MG-63细胞Livin基因表达,促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡?     

RNA干扰IgG表达对人前列腺癌细胞株PC3放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰沉默IgG 表达对人前列腺癌PC3 细胞株放射敏感性的影响。方法将IgG FC 段受体RNA质粒
（FCGR1AshRNA）和阴性对照质粒（NCshRNA）转染人前列腺癌PC3细胞,Q-PCR和Western-blot检测IgG表达。以60Co γ射线
0、2、4、6、8、10 Gy分别照射空白对照组、NCshRNA组、FCGR1AshRNA组细胞;照射48 h后,MTS法检测细胞增殖状态;照射
12、24、48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率。重点探讨6Gy射线照射后不同时间的敏感性、增值率、抑制率与凋亡率。结果质
粒转染前列腺癌PC3细胞后,FCGR1AshRNA与NCshRNA组和空白对照组相比,IgG表达水平明显下降,细胞增殖受抑制（P<
0.05）。不同放射剂量下48 h后及6Gy射线照射后的不同时间段,FCGR1AshRNA组的增值率减低,凋亡率升高（P<0.05）。结
论RNA干扰抑制IgG表达能提高PC3细胞对放射线的敏感性,IgG基因可能是联合放疗治疗前列腺癌的理想靶点。
     

Histone deacetylase inhibitor, 2-propylpentanoic acid, increases the chemosensitivity and radiosensitivity of human glioma cell lines in vitro

Background  Treatment for malignant glioma generally consists of cytoreductive surgery followed by radiotherapy and chemotherapy. In this study, we intended to investigate the effects of 2-propylpentanoic acid (VPA), a histone deacetylase inhibitor, on chemosensitivity and radiosensitivity in human glioma cell lines.

Methods  Human glioma cell lines, T98-G, and SF295, were treated with temozolomide (TMZ) or irradiation (IR), with or without VPA (1.0 mmol/L). Then, cytotoxicity and clonogenic survival assay was performed. Cell cycle stage, apoptosis, and autophagy were also detected using flow cytometry and dansyl monocadaverin (MDC) incorporation assay. One-way analysis of variance (ANOVA) and t-test were used to analyze the differences among variant groups.

Results  Mild cytotoxicity of VPA was revealed in both cell lines, T98-G and SF295, with the 50% inhibiting concentration (IC50) value of (3.85±0.58) mmol/L and (2.15±0.38) mmol/L, respectively; while the IC50 value of TMZ was (0.20±0.09) mmol/L for T98-G and (0.08±0.02) mmol/L for SF295. Moreover, if combined with VPA (1.0 mmol/L) for 96 hours, the sensitivity of glioma cells to TMZ was significant increased (P <0.05). The surviving fractions at 2 Gy (SF2) of T98-G and SF295 cells exposed to IR alone were 0.52 and 0.58. However, when VPA was combined with IR, the SF2 of T98-G and SF295 dropped to 0.39 (P=0.047) and 0.49 (P=0.049), respectively. Treatment with VPA plus TMZ or IR also resulted in a significant decrease in the proportion of cells in the G2 phase and increased apoptotic rates as well as autophagy in T98-G and SF295 cell lines (P <0.01).

Conclusion  VPA may enhance the activities of TMZ and IR on glioma cells possibly through cell cycle block and promote autophagy, and thus could be a potential sensitizer of glioma treatment.

     

几种重组干扰素单独及联用阿霉素对骨肉瘤细胞的毒性研究

目的体外评价几种国产干扰素联合阿霉素的抗骨肉瘤活性及其协同效应。方法采用MTT比色法,体外对比检测阿霉素及几种国内临床常用重组干扰素（rhIFNα2a、rhIFNα1b、rhIFNα1c、rhIFNβ和rhIFNγ）的抗骨肉瘤细胞增殖活性。分别将几种干扰素与阿霉素联合用药,对比检测其抗骨肉瘤的协同作用。结果rhIFNα2a为5×104IU/L、rhIFNα1b为3.75×105IU／L、thIFNalc为1.25×105IU／L、rhIFNβ为5×105IU／L时,细胞生长抑制率均达到50％：rhIFNγ对0S732细胞生长无明显抑制作用;rhIFNα1c与ADM合用时有明显的协同增强效应。结论rhIFNα2a、rhIFNa1b、rhIFNβ、rhIFNαlc对骨肉瘤细胞的生长有明显的抑制作用,其中以rhIFNα2a和rhIFNα1c作用最为明显;上述4种IFNs与阿霉素合用均呈协同增强效应;rhIFNγ在体外对骨肉瘤细胞无明显抑制作用。     

The histone deacetylase inhibitor, 2-propylpentanoic acid, increases the chemosensitivity and radiosensitivity of human glioma cell lines in vitro

Background Treatment for malignant glioma generally consists of cytoreductive surgery followed by radiotherapy and chemotherapy. In this study, we intend to investigate the effects of 2-propylpentanoic acid (VPA), a histone deacetylase inhibitor, on chemosensitivity and radiosensitivity in human glioma cell lines. Methods Human glioma cell lines, T98-G, and SF295, were treated with temozolomide (TMZ) or irradiation (IR), with or without VPA (1.0 mmol/L). Then, cytotoxicity and clonogenic survival assay was performed. Cell cycle stage, apoptosis, and autophagy were also detected using flow cytometry and dansyl monocadaverin (MDC) incorporation assay. One-way analysis of variance (ANOVA) and t-test were used to analyze the differences among variant groups. Results Mild cytotoxicity of VPA was revealed in both cell lines, T98-G and SF295, with the 50% inhibiting concentration (IC50) value of (3.85?0.58) mmol/L and (2.15?0.38) mmol/L, respectively; while the IC50 value of TMZ was (0.20?0.09) mmol/L for T98-G and (0.08?0.02) mmol/L for SF295. Moreover, if combined with VPA (1.0 mmol/L) for 96 hours, the sensitivity of glioma cells to TMZ was significant increased (P <0.05). The surviving fractions at 2 Gy (SF2) of T98-G and SF295 cells exposed to IR alone were 0.52 and 0.58. However, when VPA was combined with IR, the SF2 of T98-G and SF295 dropped to 0.39 (P=0.047) and 0.49 (P=0.049), respectively. Treatment with VPA plus TMZ or IR also resulted in a significant decrease in the proportion of cells in the G2 phase and increased apoptotic rates as well as autophagy in T98-G and SF295 cell lines (P <0.01). Conclusion VPA may enhance the activities of TMZ and IR on glioma cells possibly through cell cycle block and promote autophagy, and thus could be a potential sensitizer of glioma treatment.     

脂肪酸合成酶介导骨肉瘤细胞体外“失巢凋亡”抵抗的研究

目的 比较具有“失巢凋亡”抵抗的骨肉瘤细胞与其亲本细胞中脂肪酸合成酶(FASN)表达和细胞恶型表型的差异.方法 poly-HEMA包被法悬浮培养人骨肉瘤细胞建立人抗失巢凋亡骨肉瘤细胞模型,Westernblot、qRT-PCR检测贴壁培养和悬浮培养14d重贴壁培养的骨肉瘤细胞(U2-OS和143B)中FASN表达水平的差异;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术,CCK8、Wound healing和Transwell Invasion实验检测细胞凋亡率、细胞增殖、迁徙及侵袭能力的差异.结果 常规贴壁培养的U2-OS、143B细胞的增殖、抗凋亡、迁移及侵袭能力显著低于悬浮培养14d重贴壁培养的U2-OS、143B细胞;FASN蛋白及mRNA在常规贴壁培养的骨肉瘤细胞(U2-OS和143B)中的表达水平显著地低于其在悬浮培养14d重贴壁培养的细胞中的表达水平.结论 FASN高表达可能通过介导细胞抗“失巢凋亡”促进骨肉瘤细胞的迁徙侵袭.     

蛋白激酶CK2基因表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用

目的 研究蛋白激酶CK2表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用,并探讨其可能机制.方法 通过RNA干扰技术下调鼻咽癌5-8F细胞中CK2α蛋白表达,利用Western blotting方法验证干扰效果;利用克隆形成实验观察CK2表达沉默后对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响;应用免疫荧光方法检测γ-H2AX灶点形成;Annexin-V和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 通过RNA干扰技术可以有效沉默CK2α表达.克隆形成实验结果显示CK2α表达沉默后,鼻咽癌细胞形成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加;1 Gy照射后15min,CK2α沉默的细胞γ-H2AX灶点数目明显增加;CK2α沉默的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01).结论 蛋白激酶CK2与鼻咽癌放射敏感性密切相关,CK2可能是一个非常有潜力的鼻咽癌治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of protein kinase CK2 gene silencing on the radiosensitization in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells and its possible mechanism. Methods RNA interference (RNAi) technique was used to down-regulate the protein kinase CK2α expression in 5-8F cells, and clonogenic assay was employed to observe the changes in the radiosensitivity of the cells. DNA double-strand break was assessed by immunofluorescence staining of γ-H2AX foci,and the cell apoptosis was examined using Annexin V-FITC/PI double-staining flow cytometry. Results CK2α protein was successfully silenced by siRNA. CK2α knockdown significantly decreased the clonogenic activity and increased the radiosensitivity of the NPC cells. After a 15-min exposure of the cells to 1 Gy radiation, significant difference occurred in the γ-H2AX foci between CK2α knockdown cells and the control cells (P<0.01). CK2α silencing significantly increased the cell apoptosis after the exposure (P<0.01). Conclusion Protein kinase CK2 plays an important role in the radiosensitivity of the NPC cells, and suppression of its expression might be a potential therapeutic approach of cancer.     

HSV-tk/GCV自杀基因系统对骨肉瘤细胞体外杀伤效应

目的：观察：HSV—tk／GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS-2的体外杀伤作用．方法：构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN,在lipofectamine2000介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人骨肉瘤细胞SAOS-2,G418筛选出抗性克隆命名为SAOS／tk,以RT—PCR及Southern blot检测tk基因的整合及表达．观察tk基因修饰细胞生长状况及MTT法观察前药对tk基因修饰骨肉瘤细胞的杀伤效应．结果：RT—PCR及Southern blot分析证明tk基因在人骨肉瘤细胞系SAOS-2中有整合及表达;SAOS／tk与未转基因的原肿瘤细胞相比,两者生长速度及形态结构无明显差别;在前药敏感性试验中,GCV对SAOS／tk细胞的杀伤作用十分明显,半数致死量约为1mg／L,而亲本细胞SAOS-2和空白质粒转染SAOS／0细胞,半数致死量大于100mg／L．tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗,SAOS／tk占混合细胞总数的20％时即可杀伤约50％的混合培养细胞.结论：人骨肉瘤细胞系SAOS-2对HSV—tk／GCV系统高度敏感,并且有明显的旁观者效应,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径．