柚皮素减轻AngⅡ诱导的原代大鼠心肌细胞肥大作用

目的:探讨柚皮素(Naringenin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的原代大鼠心肌细胞(NRVMs)肥大作用及其作用机制。方法:AngⅡ刺激NRVMs构建体外心肌肥大模型,分为Vehicle组、Naringenin组、AngⅡ组和AngⅡ+Naringenin组。CCK8检测心肌细胞活性,α-actinin免疫荧光染色检测心肌细胞横截面积,RT-PCR检测ANP、BNP mRNA表达水平,Western Blot检测JNK、ERK及P38蛋白磷酸化水平,Hoechst染色检测心肌细胞凋亡。结果:与对照组相比,AngⅡ组心肌细胞横截面积明显增大,ANP、BNP mRNA表达水平明显增加,给予柚皮素干预后心肌细胞面积减小,ANP、BNP mRNA表达水平降低;此外,柚皮素能够减轻AngⅡ诱导的ERK和P38蛋白磷酸化水平上调及心肌细胞凋亡。结论:柚皮素可以减轻AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制MAPK信号通路以及减轻心肌细胞凋亡有关。     

MicroRNA-185对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的影响

目的探讨MicroRNA-185(miR-185)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的心肌细胞肥大及凋亡的影响。方法将心肌细胞系H9c2细胞随机分为对照组、AngⅡ处理组、阴性对照组和miR-185过表达组。对照组细胞采用常规培养; AngⅡ处理组细胞常规培养,并给予AngⅡ处理;阴性对照组细胞使用含miR-185阴性对照(NC)的无血清培养基处理24 h后给予AngⅡ处理; miR-185过表达组细胞使用含miR-185模拟物(miR-185 mimic)的无血清培养基培处理24 h后给予AngⅡ处理。采用实时定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-185、心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和细胞分裂周期蛋白42(CDC42) mRNA表达,应用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞活性,细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡小体富计因子水平,Western blot法测定各组细胞中活化型多聚腺苷二磷酸核糖聚合梅(cleaved PARP)、活化型caspase 3和CDC42蛋白表达。结果与对照组比较,AngⅡ处理组和阴性对照组细胞中miR-185相对表达量、细胞活性显著降低(P <0. 05),ANP、BNP、β-MHC和CDC42 mRNA相对表达量、细胞凋亡小体富计因子及活化型PARP、活化型caspase 3和CDC42蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。阴性对照组与AngⅡ处理组细胞中miR-185和ANP、BNP、β-MHC、CDC42 mRNA相对表达量、细胞活性、凋亡小体富计因子及活化型PARP、活化型caspase 3、CDC42蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。与AngⅡ组和阴性对照组比较,miR-185过表达组细胞中miR-185相对表达量、细胞活性显著升高(P <0. 05),ANP、BNP、β-MHC和CDC42 mRNA相对表达量、细胞凋亡小体富计因子及活化型PARP、活化型caspase 3、CDC42蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。结论 miR-185可能通过下调心肌细胞中CDC42水平来减轻AngⅡ介导的心肌细胞损伤,抑制AngⅡ介导的心肌细胞肥大和凋亡,改善心肌细胞活性,从而发挥心肌保护作用。     

右美托咪定诱导心肌细胞代偿性肥大发挥心肌保护作用实验研究

目的:探讨右美托咪定(DEX)诱导心肌细胞代偿性肥大从而发挥心肌保护作用。方法:新生乳鼠(1～3 d)心脏提取分离培养，建立离体心肌细胞群。实验分组：正常心肌细胞对照组(C组)、DEX组(D组)。荧光显微镜观察两组心肌细胞的形态变化，Western blot检测两组心肌细胞肥大指标的差异表达，CCK8检测细胞活性。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大，建立离体心肌肥厚模型(A组),药物孵育24 h后停药24 h, Western blot检测三组细胞心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链基因(β-MHC)蛋白的表达水平。结果:与C组对比，D组心肌细胞形态增大；心肌肥大相关指标ANP、BNP和β-MHC蛋白水平表达增加，差异有统计学意义(均P<0.05);CCK8检测细胞活性增高，差异有统计学意义(P<0.05);D组停药后ANP、BNP和β-MHC蛋白表达明显恢复，接近C组。而A组停药后ANP、BNP和β-MHC蛋白表达并未恢复正常。结论:右美托咪定可能是通过诱导大鼠心肌细胞可逆代偿性肥大来保护心肌细胞的功能。     

mAKAPp在Angll促新生大鼠心肌细胞 肥大中的作用及其机制

目的研究mAKAPβ蛋白在AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法观察AngⅡ刺激下大鼠心室肌细胞形态学变化及细胞内mAKAPβ蛋白表达水平的变化。使用RNA干扰技术抑制mAKAPβ蛋白表达,观察在此条件下AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大作用的变化,同时观察ERK2蛋白磷酸化水平的变化。结果在AngⅡ刺激下,大鼠心肌细胞面积明显增大,ANP表达水平明显升高,P-ERK水平明显升高,但mAKAPβ蛋白表达水平无明显改变。使用RNA干扰技术抑制mAKAPβ蛋白表达后,AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大的表现明显减弱甚至消失。结论AngⅡ有明显的促新生大鼠心肌细胞肥大作用,mAKPβ蛋白在此过程中发挥着重要作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导的新生小鼠心肌细胞肥大模型

目的 探索新生小鼠心肌细胞的原代培养方法,建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。方法 使用0.03%的胰酶+0.04%的2型胶原酶多次消化分离心肌细胞,差时贴壁法纯化心肌细胞。1μmol/L AngⅡ刺激心肌细胞肥大,α-actinin染色进行心肌细胞纯度鉴定及面积检测,实时定量RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物的表达,Western blot法检测蛋白质磷酸化水平。结果 培养得到的小鼠心肌细胞具有较高纯度及存活力;AngⅡ刺激后心肌细胞面积增大、蛋白合成增加,ANP、BNP、β-MHC等心肌细胞肥大标志物的mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而α-MHC表达则下降(P<0.05);此外,AngⅡ刺激组ERK、JNK与p38的磷酸化水平较对照组明显上调(P<0.05)。结论 使用改良的新生小鼠心肌细胞原代培养方法,成功培养了具有较高纯度及存活力的小鼠心肌细胞,并建立了AngⅡ诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。     

自噬在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

【目的】探讨自噬在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用.【方法】原代培养的乳鼠心肌细胞,采用Ang Ⅱ干预建立心肌肥大的模型;在光学显微镜下观察心肌细胞的形态,采用Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽(ANP)的表达,Western blot法检测LC3蛋白的表达.【结果】 Ang Ⅱ可抑制自噬相关基因LC3蛋白的表达,自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)会促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.【结论】AngⅡ可能通过抑制自噬来诱导心肌细胞肥大.     

miR-155下调心肌细胞ATR1α表达改善心肌细胞肥大

目的 研究微小RNA(miR)-155对心肌细胞肥大的影响,以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1α亚型(angiotensinⅡreceptor subtype 1α,ATR1α)在其中的作用.方法 AngⅡ诱导体外培养大鼠心肌细胞H9C2 (2-1)肥大,将miR-155模拟物(mimics)和miR-155抑制物(inhibitors)转染入心肌细胞.测量心肌细胞表面积.实验分为对照组、AngⅡ组、模拟物组、miR-155抑制物组、AngⅡ加模拟物组、AngⅡ加抑制物组.实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达.逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、p肌球蛋白重链(β-MHC)、ATR1α mRNA表达水平.Western blot法检测ATR1α蛋白表达水平.结果 与AngⅡ组比较,AngⅡ加模拟物组处理可降低心肌细胞ANP、β-MHC mRNA及ATR1a mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),心肌细胞表面积降低(P＜0.05);AngⅡ加抑制物组处理ATR1α mRNA和蛋白表达水平增加(P＜0.05),但ANP、β-MHC mRNA表达水平及心肌细胞表面积改变差异无统计学意义(P＞0.05),仅miR-155 mimics或miR-155 inhibitors处理各项指标均改变差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-155过表达抑制心肌细胞肥大;ATR1α可能为其负性调控作用靶点.     

SH2B1对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大过程中糖代谢的影响和机制研究

目的研究同源性2b衔接蛋白1(SH2B1)对心肌细胞肥大过程中糖代谢的影响及具体机制。方法将分离培养好的乳鼠心肌细胞随机分为对照组、AngⅡ组。采用荧光定量PCR检测心肌肥大标志物ANP、BNP的mRNA表达变化,Western Blot检测SH2B1、糖代谢相关蛋白GLUT4、G6PD和信号通路AMPK的表达水平。为了进一步探索SH2B1在心肌肥厚中发挥的作用,采用小干扰RNA(siRNA)沉默SH2B1基因,将乳鼠心肌细胞分为对照组、AngⅡ组、siSH2B1组、siSH2B1+AngⅡ组;48 h后检测上述指标的变化。然后使用AMPK抑制剂compound C处理乳鼠心肌细胞,检测AMPK对糖代谢相关蛋白的影响,将乳鼠心肌细胞分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+compound C组,Western Blot检测GLUT4、G6PD的蛋白表达水平。结果与对照组相比,AngⅡ组SH2B1、GLUT4、G6PD蛋白表达水平上调,差异有统计学意义(P<0.05),AMPK表达差异无统计学意义(P>0.05),而磷酸化AMPK表达增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。与siNeg组相比,siSH2B1组SH2B1表达量明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与siNeg+AngⅡ组相比,siSH2BI+AngⅡ组GLUT4、G6PD蛋白表达减少,AMPK的磷酸化水平减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论SH2B1可通过促进心肌细胞糖代谢而加重AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与AMPK信号通路相关。     

热量限制缓解血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大作用

目的 探讨热量限制(caloric restriction, CR)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞肥大的影响及可能机制。方法 将H9c2细胞分为6组：正常对照组、AngⅡ组(1μmol/L)、热量限制组(CR)、CR+AngⅡ组、NF-κB抑制剂组(CR+AngⅡ+Ss)、NF-κB激动剂组(CR+AngⅡ+Bet)。将各组细胞进行相应的药物处理后,用CCK-8法检测细胞活力;鬼笔环肽染色检测心肌细胞表面积;细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、髓过氧化物酶(MPO)及氧化应激指标(ROS、SOD、MDA)的检测采用相应试剂盒;RT-qPCR法检测心肌细胞中肥大相关基因(ANP、BNP、β-MHC)与焦亡相关基因(NLRP3、ASC、GSDMD、caspase1、IL-18与IL-1β)的mRNA表达;Western blot法检测心肌细胞中NLRP3、ASC、GSDMD、caspase1以及NF-κB的蛋白表达水平。结果 (1)AngⅡ可诱导H9c2心肌细胞表面积及肥大标志基因(ANP、BNP、β-MHC)的mRNA表达量较对照组显著增加,而这种改...     

PTEN负性调控血管紧张素Ⅱ刺激所致心肌细胞肥大

目的研究PTEN对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响.方法构建携带PTEN基因的腺病毒载体,感染原代培养的乳鼠心肌细胞,用AngⅡ作为肥大刺激因素,测定ANF、β-MHC与心肌细胞大小.结果对照组与仅携带GFP的腺病毒感染的心肌细胞在AngⅡ作用下,ANF、β-MHC表达与细胞直径显著增高,而PTEN过度表达则对上述改变具有抑制作用.结论 PTEN能够负性调控AngⅡ所致的心肌细胞肥大.     

Effect of Atorvastatin on Expression of Peroxisome Proliferator-activated Receptor Beta/delta in AngiotensinⅡ-induced Hypertrophic Myocardial CellsIn Vitro

Objective To explore the effect of atorvastatin on cardiac hypertrophy and to determine the potential mechanism involved. Methods Anin vitro cardiomyocyte hypertrophy from neonatal rats was induced with angiotensinⅡ (AngⅡ) stimulation. Before AngⅡ stimulation, the cultured rat cardiac myocytes were pretreated with atorvastatin at different concentrations (0.1, 1, and 10μmol/L). The following parameters were evaluated: the myocyte surface area,3H-leucine incorporation into myocytes, mRNA expressions of atrial natriuretic peptide, brain natriuretic peptide, matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 2, and interleukin-1β, mRNA and protein expressions of theδ/β peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) subtypes. Results It was shown that atorvastatin could ameliorate AngⅡ-induced neonatal cardiomyocyte hypertrophy in the area of cardiomyocytes,3H-leucine incorporation, and the expression of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide markedly. Meanwhile, atorvastatin also inhibited the augmented mRNA level of several cytokines in hypertrophic myocytes. Furthermore, the down-regulated expression of PPAR-δ/β at both the mRNA and protein levels in hypertrophic myocytes could be significantly reversed by atorvastatin treatment. Conclusions Atorvastatin could improve AngⅡ-induced cardiac hypertrophy and inhibit the expression of cytokines. Such effect might be partly achieved through activation of the PPAR-δ/β pathway.     

心肌细胞肥大中番茄红素对自噬的作用

目的 探讨在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大中,番茄红素对自噬的影响.方法 原代培养的乳鼠心肌细胞,采用AngⅡ干预建立心肌肥大的模型;用番茄红素和自噬的阻断剂3-甲基腺嘌呤（3MA）干预.在光学显微镜下观察心肌细胞的形态;采用Western blot法检测自噬相关基因6（Atg6）Beclin1及自噬相关基因8（Atg8）LC3蛋白的表达;Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽（ANP）的mRNA表达.结果 在AngⅡ诱导的心肌肥大中[细胞面积（517.19±52.31）;ANP相对含量（17.83±2.07）],番茄红素[细胞面积（355.82±40.45）;ANP相对含量（12.16±1.41）]缓解了心肌细胞面积的增加（F=56.518,P＜0.05）,下调了ANP的mRNA表达水平（F=157.048,P＜ 0.05）.番茄红素增加了心肌肥大时自噬相关基因Beclin1[蛋白相对含量（0.685±0.058）,F=202.873,P＜0.05]和LC3蛋白相对含量[（0.608±0.045）,F=177.114,P＜0.05]蛋白的表达.自噬阻断剂3MA降低了番茄红素对心肌细胞肥大的抑制作用（P＜0.01）.结论 番茄红素可能通过激活自噬来抑制心肌细胞肥大.     

Effects of Cyclosporine A on Angiotensin Ⅱ-induced Cardiomyocyte Hypertrophy in Neonatal Rats

The effects of cyclosporine A (CsA) on Angiontensin Ⅱ (Ang Ⅱ )-induced protein contents, c-fos protein levels and cytosolic Ca2+ level ([Ca2+ ]i) in cultured cardiomyocytes of neonatal rats were observed. Total protein contents were determined by Bradford method. The expression of c-fos protein was detected by Western blot. [Ca2+ ]i labeled with fluorescent probe Fluo-3/AM was measured under a laser scanning confocal microscope. The results revealed that as compared with control, the total protein contents were increased in cardiomyocytes treated with Ang Ⅱ (10-7 mol/L), which could be inhibited by CsA in a dose-dependent manner. It was found that Ang Ⅱ could increase the c-fos protein expression, which could be inhibited by CsA in a dose-dependent manner.Ang Ⅱ induced the [Ca2+ ]i elevation in cardiomyocytes. CsA did not influence the resting intracellular Ca2+ , but inhibited significantly the Ang Ⅱ-induced [Ca2+ ]i elevation. It was concluded that CsA can suppress the Ang Ⅱ-induced c-fos protein expression and [Ca2+ ]i elevation in single cardiomyocyte, which might play a role in the prevention of Ang Ⅱ -induced cardiomyocyte hypertrophy by CsA.     

心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

  目的  探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase, cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。  方法  纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点。制作野生型cMLCK(WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感染原代心肌细胞,并用随机数法随机分为6组:对照组、AngⅡ组、WT-cMLCK组、WT-cMLCK+AngⅡ组、ΔNT-cMLCK组、ΔNT-cMLCK+AngⅡ组,每组3个样本。RT-PCR检测心衰因子表达;Western blotting检测cMLCK及底物的表达;免疫荧光检测细胞表面积。  结果  WT-cMLCK在体外体系能对其底物MLC2v进行磷酸化;而ΔNT-cMLCK对MLC2v的磷酸化作用消失;使用AngⅡ处理后,可见细胞面积增大[(1 787.0±142.6)μm2 vs.(2 458.0±211.3)μm2,P < 0.001],ANP、β-MHC表达上调(均P < 0.05);cMLCK及p-MLC2v表达上调(均P < 0.05);过表达WT-cMLCK可逆转心肌肥大[(2 527.0±116.4)μm2 vs.(1 775.0±88.5)μm2,P < 0.001];敲除N端可使cMLCK的保护作用丧失[(1 775.0±88.5)μm2 vs.(2 613.0±118.4)μm2,P < 0.001]。  结论  过表达cMLCK可改善AngⅡ诱导的心肌肥大,该作用依赖于其N端。      

乌苏里藜芦生物碱对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响

[目的]在原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞上,观察乌苏里藜芦生物碱(Veratrum nigrum L.Var.ussurience Na-kai alkaloids,VnA)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠乳鼠的心肌细胞肥大的影响。[方法]通过BCA法测定心肌细胞蛋白含量和显微测微器测定心肌细胞直径,免疫荧光法分析心肌细胞内钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的表达变化。[结果]在一定剂量范围内VnA能抑制心肌细胞蛋白含量的增加(P<0.01)和细胞体积的增加(P<0.01),细胞内CaN的表达减少。[结论]VnA抑制AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞肥大可能与其抑制细胞内CaN表达有关。     

miRNA-204靶向LC3B在Ang Ⅱ诱导的心肌肥厚中的作用

目的 探讨体外血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导原代大鼠心肌细胞肥大中miRNA-204靶向自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3 B)表达的作用.方法 以原代大鼠心肌细胞为研究对象,根据不同的处理分为对照组、Ang Ⅱ组、联合1组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染阴性对照慢病毒载体)和联合2组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染miRNA-204慢病毒过表达载体).各组在干预治疗后48～72 h,行激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化,荧光定量PCR探测miRNA-204的表达,蛋白印迹测定LC3B的表达;同时,双荧光素酶活性基因报告验证miRNA-204的靶基因.结果 与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞相对表面积明显增大,同时LC3B蛋白表达明显升高、miRNA-204表达上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).与联合1组比较,联合2组能明显减少LC3B蛋白表达,同时使心肌细胞相对表面积缩小(P＜0.05).进一步的荧光素酶活性报告基因实验结果提示,miR-NA-204能结合LC3B的非翻译区的野生型片段减少荧光素霉活性(P＜0.05);但不能结合其突变型片段灭活荧光素酶活性(P＞0.05).结论 miRNA-204能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用是通过靶向LC3B的表达实现的.     

血管紧张素转换酶2与原发性高血压及心功能的关系

目的：探讨血管紧张素转换酶2(ACE2)与原发性高血压及心功能的关系,阐明其在高血压发生、发展中的作用。方法：选择原发性高血压患者113例作为试验组（EH组）,其中无左室收缩功能减退组（非HF组）65例,高血压并发左室收缩功能减退组(HF组)48例,正常对照组60例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测113例原发性高...