显示肝、肾上腺脂类油红O方法探讨

油红 O为脂溶性 ,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料 ,在脂肪内能高度溶解 ,从而染色 ,能保存组织中的脂肪滴。配制染料的溶剂是染色成败的关键 ,在此介绍一种油红 O染色的改进。油红 O原配方是由异丙醇 ,我们改用酒精配制效果同样满意。1取材 :小狗肝脏、肾上腺固定于 1 0 %中性甲醛溶液内 1～ 2 d。 2蒸馏水洗冰冻切片 1 0～ 2 0 μm入蒸馏水。 3用 70～ 80 %异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗。 4入油红 O染色 1 5～ 2 5 min。油红 O配方 :油红 O1 g,异丙醇 1 0 0 ml或 70 %酒精 1 0 0 ml,将油红 O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱…     

用醛复红、橘黄G、丽春红G和苯胺蓝显示胰岛A、B、D三种细胞的方法

国内、外对胰岛细胞的特殊染色法不断得到了改进和完善。这些方法对A细胞和B细胞比较稳定,但D细胞染色仍不够理想。本法是在Gomori醛复红基础上,根据胰岛各种细胞分泌颗粒的性质,对酸碱性染料亲和能力的特性,选用了醛复红染B细胞,橘黄G丽春红G染A细胞,苯胺蓝染D细胞。我们用此法进行了反复试验,稳定可靠,效果良好,适合制作多量的教学切片标本。方法如下:一、取豚鼠新鲜胰腺,Helly's液固定24小时,中     

人胚胎期胰腺的形态学研究

本研究收集胎龄5～41周的人胚胎53例,取胰腺,Bouin液固定,按常规制石蜡切片。部分切片经阿利新蓝-焰红、硝酸银-醛复红-铅苏木精等方法染色,部分切片作免疫组织化学PAP反应,观察胰岛A、B和D细胞。取不同胎龄的胰尾组织14例,戊二醛固定,Epon812包埋,透射电镜观察。本文的结果表明,胰腺内分泌部主要是由胰管2级以下分支的管壁上皮细胞,向周围的间充质内增生和分化而成。胎龄12周时,即可在光镜下辨认A、B及D细胞;电镜下观察,胰腺外分泌细胞在胎龄14周以后,才能见到分泌颗粒,证明胰岛细胞的分化早于外分泌细胞。测量16～36周胎儿胰腺内胰岛所占的比例,证明胚胎期胰腺内分泌部所占比例远高于成年人。本实验为临床使用人胎胰岛移植提供了参考资料。     

弹力纤维染色与免疫组织化学双重染色技术

我们采用Gomori醛品红弹力纤维染色法和免疫组织化学SP法结合的双重染色方法 ,可同时显示血管壁上的弹力纤维和某些抗原成分 ,效果满意 ,介绍如下。一、材料与方法1.材料 :大鼠髂动脉粥样硬化标本 35份 (例 ) ,经 4 %甲醛固定 ,常规脱水、石蜡包埋 ,切片厚 5 μm。2 .试剂 :(1)醛品红染液 :碱性品红 0 .5g ,70 %乙醇10 0ml,浓盐酸 1ml,三聚乙醛 1ml,将碱性品红溶于 70 %乙醇 ,然后加入浓盐酸混合均匀后 ,加入三聚乙醛 ,轻轻摇动使混合均匀 ,于室温下静置 2d ,成熟时呈深紫色。过滤于小口砂塞瓶 ,置冰箱备用。 (2 ) 70 %乙醇。 (3)免疫组织…     

胰岛 A、B 及D细胞偶氮胭脂红-丽春红桔黄G-亮绿特染法

胰岛细胞特染技术,近年来来国内外有不少新的改进方法,各有所长、总的来说A、B细胞染色比较稳定、但D细胞染色不够理想,本人曾对胰岛细胞染色作了一点探索,如硝酸银-醛复红-铅苏木素法,不足之处是切片若久存,则银离子易扩散、导致D细胞褪色,有待改进。本法是在Mallory及Heidenhain AzAn法的基础上,根据胰岛细胞化学特性和染色原理予以改良、操作较简便、效果较好,介绍如下: 一、材料和方法:取豚鼠新鲜胰腺、Helly液固定24小时、常规脱水,石腊包埋,切片厚     

胰岛细胞区别染色法的改进

<正> 在光学显微镜下对胰岛细胞的鉴定,主要依靠对这些细胞分泌颗粒的区别染色。自从Lane于1907年在豚鼠胰岛中描述了含有不同类型颗粒的A和B两种细胞以来,已有各种染色方法应用于胰岛细胞的区别染色。1931年,Blodm首先采用Mallory-Heidenhainazan染色法来染人的胰腺标本,在同一标本中能区别A、B和D细胞,这是胰岛细胞三     

显示肥厚性瘢痕组织中胶原纤维和基质的方法

肥厚性瘢痕（Hypertrophicscar．HTS）为皮肢真皮损伤后结缔组织过渡增生而形成的病理结构，以创伤局部胶原纤维和细胞外基质（ExtracellularmatrixECM）过渡沉积为病理特征。传统的结缔组织胶原纤维和ECM的染色方法不甚适应于HTS的结构显示，且不能反映两者的关系。为此我们结合组织化学和组织学染色技术，摸索出同时显示胶原纤维和ECM及其相互关系的方法。。取正常人皮肤3例，HTS3个月、半年、一年皮肤各5例，福尔马林固定，普通石蜡切片6Pm，脱蜡下行至蒸馏水。进行两种菜色：1．切片入PHZ5阿新兰溶液哪①新兰ig＋3％醋酸100ml）染色smin，蒸馏水洗，Harris苏木精染胞核，脱水至95％酒精，染伊红，脱水，透明，封固。结果胶原纤维粉红色，酸性粘液（主要为酸性粘蛋白）为蓝色，位于胶原纤维周围，胞核染紫红色。2．切片经常规PAS反应，蒸馏水洗，人甲基绿酒精液（甲基绿ig十蒸馏水100ml十无水酒精25ml）染色Zmin，苯胺蓝水溶液smin，常观脱水透明封片。结果胶原纤维染蓝色，粘多粘粉红色位于胶原纤维周围，胞核呈绿色。该方法显示出HTS中胶原纤维和基质的关系，为瘢痕组织研究提供形态学观察依据。     

抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响

日的 :观察抗原免疫刺激后外周淋巴器官中细胞凋亡的情况。方法 :用完全佛氏佐剂免疫 B1 0 .A小鼠 ,2 1天后解剖 ,取出腹部淋巴结 ,制成冰冻切片。采用 TUNEL原位染色法 ,步骤如下 :1 .制备冰切片 ,过夜 ;2 .用 4%多聚甲醛 ( PBS,p H7.4)固定1 0分钟 ,然后 PBS洗 30分钟 ;3.用 3% H2 O2 (甲醇稀释 )封闭 ,室温下1 0分钟 ,然后 PBS洗 30遍 ;4.用 0 .1 % Triton X- 1 0 0 ( 0 .1 %柠檬酸钠 )在冰上 ( 4℃ )作用 2分钟 ,然后 PBS洗2遍 ;5 .擦干切片 ,每张加 5 0μl TUNEL反应混合液 ,置于湿盒中放于 37℃反应 30分钟 ,然后 PBS洗 …     

胰岛细胞的阿利新蓝—焰红染色法

胰岛细胞的染色方法虽然已有不少介绍,但仍是组织学技术中比较难作的,往往不太容易制出满意的标本。Bussolati等人曾介绍用硫代硫酸化醛复红(TAF)显示胰岛乙细胞(Stain technology 49:313,1974)。我们在应用硫代硫酸化处理切片后,应用阿利新蓝     

地高辛标记的cRNA探针在胰岛素mRNA原位分子杂交中的应用

采用雄性成年Wistar大鼠胰腺,用地高辛标记的cRNA探针进行原位分子杂交,以检测胰岛B细胞的胰岛素基因表达产物mRNA;同时用免疫组织化学PAP法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行原位比较。1.标本制备:大鼠经4%多聚甲醛灌流固定,取胰尾,入Bouin液固定20h,常规石蜡包埋,切片厚6μm,裱在用铬矾明胶处理的载片上。2.探针标记:用RNA标记试剂盒(Boehringer Mannheim     

常规HE染色过程中分色方法的比较

<正>HE染色是组织学﹑病理学等形态学教学和科研中最基本的方法,一张组织切片HE染色的质量好坏不但取决于染料质量﹑染色时间﹑染色温度等,在一定程度上取决于分色液的选择和分色时间。传统上的分色液有1%盐酸酒精溶液[1]和1%盐酸水溶液,之后有文献报道分色液为5%冰醋酸酒精溶液[2],作者选用5%冰醋酸水溶液。经过反复试验,总结和分析了几种分色液染色效果,现报道如下。     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

Urocortin在人足月胎盘合体滋养细胞表达的亚细胞定位

目的: 利用冰冻超薄切片免疫电镜技术, 观察研究urocortin在人足月胎盘合体滋养细胞上的表达与亚细胞定位。方法: 取材5例足月胎盘组织块固定在4%多聚甲醛液中, 每例标本分成两部分, 一部分做常规石蜡包埋切片, 免疫组化染色, 光镜下观察; 另一部分做冰冻超薄切片, A蛋白-金免疫标记, 透射电镜下观察。 结果: (1) 光镜下观察可见: urocortin主要分布在足月胎盘合体滋养细胞的胞质内。(2) 免疫电镜下观察可见: 抗urocortin金颗粒主要见于合体滋养细胞的粗面内质网上, 也见于细胞核膜上和细胞核内。结论: 足月胎盘的合体滋养细胞能合成和分泌urocortin, urocortin在胞质内合成后可内化（internalization）入胞核内, 提示人胎盘上作为肽类激素的urocortin可能存在“胞内分泌（intracrine）”现象。     

成人睾丸支持细胞分离方法的建立及在胰岛移植中的应用

目的:建立成人睾丸支持细胞简便高效分离方法,并应用于胰岛移植。方法:A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶、透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化。采用形态学观察和免疫组化鉴定支持细胞;MTT法和流式细胞术(FCM)测定3组支持细胞的活性和纯度;Western blot检测3组支持细胞Fas-L的表达;比较3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果。结果:经鉴定,分离的细胞具有支持细胞的特征;方法A和B分离的支持细胞数量较多,方法B和C分离的支持细胞杂质较少;MTT法检测结果显示,B组支持细胞活性显著高于A组和C组(P0.05);Western blot结果显示,B组支持细胞Fas-L的表达水平显著高于A组和C组(P0.05);FCM检测3种方法分离的S支持细胞纯度分别为(85.2±1.8)%、(92.3±2.5)%、(93.1±2.6)%,B组和C组的支持细胞纯度显著高于A组(P0.05);将3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠模型肾包膜下,B组胰岛移植物存活时间显著高于单独胰岛移植组和A、C两组(P0.05)。结论:采用两步消化法能够获得纯度和活性较高的支持细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活。     

肝部分切除后再生期间胰岛细胞的免疫组织化学研究

成年雌性大鼠50只,分为肝部分切除组、假手术组和正常对照组。手术后d 1、2、3、6、14分批取胰尾。石蜡切片用免疫组织化学PAP法,分别显示含胰岛素的B细胞、含C肽的B细胞、含高糖素的A细胞和含生长抑素的D细胞,观察肝再生期间胰岛B、A和D细胞激素分泌活动的变化。根据胰岛细胞内免疫反应物含量不等,将胰岛细胞分泌活动分成3级:+、++和+++,分别计算各级胰岛细胞所占的百分比,作为判断胰岛细胞激素分泌活动的指标。结果发现,肝部分切除后1～3 d B细胞释放胰岛素活动增强,术后3～6 d转为胰岛素的合成和/或贮存加强。术后1～3d,A细胞逐次增强高糖素的释放。此时,D细胞的释放活动却减弱。至术后d 6,A细胞分泌活动已趋正常,但D细胞增强生长抑素的释放。至术后d 14,胰岛细胞的激素分泌活动均恢复到正常水平。胰岛B细胞和A细胞激素分泌活动的变化,与肝再生过程呈现密切而平行的关系。D细胞的变化则可能反映出对B细胞和A细胞内分泌活动的调控作用。     

青年供体胰段移植的超微结构及解剖学基础

背景:在胰腺和胰岛移植中,青年供体胰腺血管吻合难度较小,成功概率大,但目前青年供体胰腺胰段移植的解剖学基础国内尚缺乏。目的:观察青年人胰腺胰尾的微细结构、胰岛B细胞胰高血糖素和胰岛素阳性表达面积及胰岛B细胞免疫阳性染色面积,以及青年尸体胰腺血管的解剖情况。方法:选择青年人尸体12例,取胰尾切片苏木精-伊红染色后光镜观察,显微测微器测量胰岛数量和面积,用胰高血糖素抗血清和胰岛素抗血清进行免疫组织化学染色。另取3例青年人尸体取胰尾组织块铀铅染色。透射电镜观察青年供体胰腺B细胞,胰岛形态和数量、结构及其分泌颗粒,以及青年供体胰腺血管情况。结果与结论:青年供体胰尾组织中胰岛B细胞内分泌颗粒多,内质网、高尔基复合体和线粒体等细胞器发达,胰岛数目分布多,胰岛B细胞的免疫阳性染色面积大。青年供体胰尾有较多而密的胰岛B细胞散在分布,胰岛B细胞分泌颗粒多。血管适合做端侧吻合。提示青年供体胰腺细胞的分泌活动旺盛,血管适合做端侧吻合,适宜作为胰腺胰段胰岛移植供体。     

人胎儿结肠及直肠内胰多肽及生长抑素免疫反应细胞的个体发生

近年来 ,胃肠激素对生长发育和肿瘤的影响已引起人们的关注。为了探讨人胎结肠及直肠内胰多肽 (PP)、生长抑素 (SS)免疫反应细胞的个体发育及两种细胞的相互关系。本实验收集 9～ 2 8wk因故中止妊娠人胎 33例 ,取结肠、直肠组织 ,Bouin液固定 ,常规石蜡包埋 ,制成 4μm厚的连续切片。取相邻切片按免疫组织化学 SABC法和免疫组织化学双重染色法分别显示 PP-、SS- IR细胞。结果显示 ,9～ 11wk人胎结肠及直肠内可见 PP-IR细胞 ,单个分散于尚未分化完全的绒毛及肠腺上皮 ;18～ 2 5 wk结肠内 PP- IR细胞数量有所增加 ,直肠内 PP- IR细…     

结扎大鼠胸导管诱发胰组织结构的形态学变化

目的 观察胰淋巴淤滞动物模型胰组织结构变化和胰淀肽沉积情况,探讨淋巴淤滞对胰组织细微和超微结构的影响. 方法 10月龄大鼠20只,采用腹部结扎大鼠胸导管,建立胰淋巴淤滞动物模型,造模后6个月取材,部分胰组织经石蜡包埋切片,行HE和刚果红染色;部分经冷冻切片,行免疫组织化学染色和光镜观察;部分标本进行透射电镜样品制备和观察. 结果 HE和刚果红染色切片光镜观察显示,胰腺小叶间隙增宽,呈明显的结缔组织增生、脂肪堆积;胰岛淡染或着朱红色,组织间隙明显增宽.免疫组织化学染色切片光镜观察显示,在胰岛及其周围,呈现胰淀肽强阳性棕褐色着色反应.超薄切片透射电镜观察显示,胰腺小叶间隙增宽,可见血管和扩大的淋巴管;胰岛细胞间隙增宽,细胞间隙内可见大量脂滴样物质和胶原原纤维样结构.结论 胸导管结扎可导致胰淋巴引流障碍,引起胰淋巴管扩张,结缔组织间隙增宽,脂肪堆积,胰岛细胞间隙扩大,胰淀肽沉积等,这些结构变化可能影响胰岛的功能.     

一种不易褪色的Masson三色染色方法及其应用

目前常用的Ｍａｓｓｏｎ三色染色法染出的组织切片虽然颜色艳丽、色调对比分明,但容易褪色、难以长久保存。现介绍一种改良Ｍａｓｓｏｎ三色染色法,经实践证明染色稳定且不易褪色,可长时间保存,现介绍如下。1　材料和方法11　材料111　标本来自于中山医科大学法医病理学教研室及病理学教研室的解剖心脏200例及5例肿瘤标本。112　Ｂｏｕｉｎ液　饱和苦味酸水溶液75ｍｌ,甲醛25ｍｌ,冰乙酸5ｍｌ。113　Ⅰ液　1%比布列西猩红水溶液90ｍｌ,1%酸性品红水溶液10ｍｌ,冰乙酸1ｍｌ。114　Ⅱ液　磷钼酸25ｇ,磷钨酸25ｇ,蒸馏水100ｍｌ。115　Ⅲ液　苯…     

一种可用于支持细胞功能判定的染色法

在光学显微镜下对支持细胞(Sertoli细胞)的功能进行快速直接的判定,一直缺少客观有效的方法.通过数年的摸索,找到了一种通过特异地对残余体及其前体进行染色来判定支持细胞功能状况的染色方法.具体的染色方法如下:1 材料与方法1.1 动物成年雄性Wilster大鼠.1.2 染色方法1.2.1 染色液的配制天青Ⅱ号0.5g、美蓝0.5g、伊红1g,加少量水顺次溶解后,加水至100ml,于瓶中敝口静置48小时,过滤、留上清液备用.最好于用前1周内配制.1.2.2 染色步骤动物睾丸用Bouin液或4%甲醛固定24～72小时,石蜡包埋,切片4～5μm厚.切片脱蜡至水,置染色液中染色12～24小时.染色后蒸馏水冲洗,晾干,切片置装有五氧化二磷干燥瓶中干燥24～48小时,直接入二甲苯透明,中性树胶封片.