酶联免疫吸附双抗原夹心法检测人畜布氏菌抗体的研究

目的 为人畜布氏菌病血清学诊断、监测及流行病学调查提供实用和简便的一种酶免疫试验技术。方法 在制备高滴度布氏菌抗原辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上，应用酶联免疫吸附双抗原夹心法即双抗原夹心酶联免疫吸附试验（DAgS－ELISA）、试管凝集试验（SAT）及虎红平板凝集试验（RBPT）对从山西省布氏菌病疫区收集的布氏菌病患、布氏菌感染羊、牛、猪以及健康人、羊、牛、猪共计290份血清进行对比检测。结果 上述3种试验对健康人、羊、牛、猪共计140份血清检查均为阴性反应，用DAgS-ELISA对布氏菌感染人、羊、牛、猪共计150份血清检查，其阳性率分别为91．4％、74．6％、66．7％及66．7％，从总体而言，检查的特异性及敏感性，以DAgS-ELISA优于SAT及RBPT。结论 双抗原夹心酶联免疫吸附试验检测人畜布氏菌抗体，不仅特异、敏感、简便，而且制备一种布氏菌抗原酶结合物及其冻干制品，可用于人及各种动物布氏菌抗体的检测，值得推广应用。     

用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验检测人畜布氏菌抗体的研究

目的摸索建立用布氏菌乳环抗原的血清学试验,以用于人畜血清中布氏菌抗体的检测。方法在制备并标化布氏菌乳环抗原的基础上,用此抗原分别做PAT、SAT、CAT、CFT、及DAgS-ELISA,同时与这些试验的常规方法对部分布氏菌感染的人畜血清及正常血清进行对比检测。结果5种常规血清学试验即RBPT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA与用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验即PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对部分布氏菌感染人畜血清进行对比检测,其阳性率分别为91.5%(65/71)、83.3%(60/72)、58.2%(39/67)、46.4%(26/56)、81.9%(59/72)以及94.4%(67/71)、83.3%(60/72)、56.7%(38/67)、54.5%(30/55)、80.6%(58/72)。并且对两种抗原的试验所得阳性率进行显著性差异检验,差异均无显著性。(χ2分别为0.220、0.000、0.950、0.360、0.005,P>0.05)。其所测抗体的几何平均滴度(GMT)分别为1∶121、1∶23、1∶6和1∶19以及1∶109、1∶23、1∶10和1∶19。结论用布氏菌乳环抗原不仅适用做MRT对布氏菌感染奶特异性抗体的检测,而且可用此种抗原PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对人畜血清布氏菌抗体的检测。     

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究

目的建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上，建立检测布氏菌抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAbS-ELISA)，包括常规DAbS—ELISA及快速DAbS-ELISA。用建立的两种DAbS-ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察；同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果常规DAbS—ELISA检测布氏菌544A、16M、133OS及104M的菌体抗原以及布氏菌16M可溶性抗原的敏感性分别为0．22万菌／ml、120万菌／ml、190万菌／ml、2万菌／ml和0．012μg／ml；用快速DAbS—ELISA法的敏感性分别为22万菌／ml、120万菌／ml、1900万菌／ml、20万菌／ml和1．2μg／ml；同时用这两种DAbS—ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为0．22万菌／ml、1900万菌／ml、20万菌／ml和0．012μg／ml；以及22万菌／ml、120万菌／ml、1900万菌／ml、200万菌／ml和1．2μg／ml。而且这两种DAbS—ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论双抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。     

双抗原夹心酶联免疫试验检测急性布鲁杆菌病患者抗体真实性观察

目的观察双抗原夹心酶联免疫试验(DAgS-ELISA)检测急性布鲁杆菌病(布病)患者的真实性,即灵敏度和特异度。方法以试管凝集试验(SAT)法为金标准,用DAgS-ELISA与虎红平板凝集试验(RBPT)、补体结合试验(CFT)以及间接酶联免疫试验(I-ELISA)对同一布病患者人群和对照组人群血清标本进行检测比较。结果真实性比较,与金标准SAT的符合率分别为:DAgS-ELISA 96.49%,RBPT 94.74%,I-ELISA 85.09%,CFT 72.81%;诊断效能比较,阳性和阴性预测值DAgS-ELISA分别为93.48%、98.53%,RBPT分别为88.00%、100%,CFT分别为100%、69.30%,I-ELISA分别为78.72%、89.55%。结论DAgS-ELISA检测急性布病患者的敏感性和特异性优于其他方法。     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。     

布鲁氏菌病自然感染与菌苗免疫鉴别诊断研究进展

为防制动物布鲁氏菌病(以下简称布病),成功地研制出了布鲁氏菌(以下简称布氏菌)羊种M_5弱毒疫苗和猪种S_2弱毒疫菌等,并进行了大面积的推广应用,对牛、羊、猪、鹿等动物布病的防制起了具大的作用,经济效益和社会效益十分显著,但是存在的问题是布氏菌自然感染和菌苗免疫的鉴别,因为人畜应用活菌苗以后所产生的各种血清学反应和自然感染所产生的各种血清学反应极其相似。鉴别诊断不仅关系着布病的防治工作,同时对流行病学调查也具有重要意义,这也是布病防治领域的难题之一。多年来,国内外学者为解决这一具有战略意义的课题,在建立不同种类的检测方法,分析布氏菌免疫和感染的机体体液中的不同类型免疫球蛋白抗体出现的时间、在数量上的差别和动态上的关系,以及制备和纯化各种布氏菌的抗原等方面进行了广泛深入的研究。     

酶联免疫吸附试验诊断布鲁氏菌病的研究

Carlesson 氏应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定牛种布氏菌抗体获得较好结果。ELISA 陆续用于人畜布氏菌病的诊断。目前,大多数作者认为,ELISA,检测布氏菌抗体,具有方法简便、快速、特异及灵敏等优点。但也有资料表明,本试验在检测抗体敏感性上还不及试管凝集试验。此外,关于 ELISA 检测布氏菌抗体类型以及对布氏菌病患者的诊断标准等,这在布氏菌病(简称布病)防治工作上仍是尚未解决的课     

免疫斑点法检测布氏菌病人血清中抗原的初步应用

免疫斑点试验是一种酶联免疫分析新技术,应用硝基纤维素纸结合蛋白质,比聚苯乙烯吸附牢固这一特点,来替代聚乙烯作固体载体,据报道,对实验动物绵羊布氏菌病的抗原检测,具有可靠性,特异性强,敏感性高等优点,但仍有操作烦杂,有非特异干优因素,目前用斑点——ELISA双抗夹心法检测病人血清抗原的报道甚少,作者以硝酸纤维膜(NC)作为载体,检测了36例布病患者及43例因S_2菌苗感染抗体阳性血清(同时作SAT和RBPT抗体测定为参考),结果如下。1 实验材料与方法 材料:硝酸纤维膜,直径0.4cm,北京化工学校附属工厂生产,包被抗体自制,以牛型104M布氏菌     

抗生物素蛋白-生物素酶标法在检测布鲁氏菌病抗体中的应用

本文报道使用抗生物素蛋白—生物素酶标法(简称ABC-ELISA法)检测布氏菌抗体,以提高对布病患者的检出率。用ABC-ELISA等五种方法检测了100名健康人及150名慢性布病患者的血清,结果表明ABC-ELISA法检测布氏菌病抗体有较高的敏感性,其血清滴度比2-MET高64倍,比Wright氏反应高8—32倍,比Coomb’s试验高4—16倍,比PPA-ELISA高4—8倍。其检出率明显高于其他四项试验(P<0.01),并有较强的特异性,是布病诊断中有发展前途的新方法。     

4头猪耶氏菌感染误诊为布氏菌感染

布病与0∶9型耶氏菌的血清学交叉反应,国外早有报告,国内亦有数篇报告。最近我们发现4份猪血清,按布病常规检测方法判定为布病阳性,经过鉴别试验,确认为耶氏菌感染,类似例子不少,特此介绍,以引起重视。 材料和方法 一、标本来源 在莆田调查布病时,使用布病试管凝集试验法检查猪血清,有4份血清抗体滴度达到1∶100～1∶400,按规定应判为布病阳性。 二、检测方法 1.试管凝集抗原为兰州生物制品研究所产品,在有效期内使用。 2.快速酶斑点试验:在前文的基础上,改用0∶3型耶氏菌外膜蛋白为抗原,布氏菌抗原为全菌可溶性抗原。将这两种抗原滴于同一条膜上,自然凉干后封闭。详细方法和判定见之文献。     

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的　建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法　将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果　建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论　利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。     

用酶免疫法检测牛结核分枝杆菌的IgG抗体

目的　建立一种酶免疫法检测牛血清中牛结核分枝杆菌的IgG抗体。方法　从牛结核分枝杆菌中分离牛结核菌糖脂抗原 ,并固相在聚苯乙烯微量反应板上 ,将抗牛IgG单克隆抗体标记在辣根过氧化物酶。 结果　皮肤试验阳性 46头牛中 ,酶标阳性 30头牛。皮肤试验阴性 750头牛中 ,酶标阴性为 70 7头牛。结论　本法可作为皮肤试验的辅助试验     

Quantitative determination of parathyroid hypertensive factor by enzyme-linked immunosorbent assay

A new competitive enzyme immunoassay for the detection parathyroid hypertensive factor (PHF) in human plasma using a PHF-horseradish peroxidase conjugate and IgM antibody adsorbed on the microtiter plate was established. The antibodies raised against rat PHF could recognize human PHF. Cross-reactivity of anti-PHF antibodies with other serum haptens and proteins was negligible. Conjugation of PHF with horseradish peroxidase did not neutralize the antigen activity. The limit of detection of PHF was 0.02 U/mL in reference units and PHF levels between 0.02 and 1 U/mL could be detected. Within-run coefficient of variation (CV) was less than 10%, and between-run CV was less than 15% for over the dynamic range of the assay. Preliminary clinical studies were performed with plasma samples from hypertensive patients with confirmed diagnosis. Parathyroid hypertensive factor levels, as detected with this immunoassay, were positively correlated with PHF levels detected with the semiquantitative blood pressure (BP) bioassay previously used. Parathyroid hypertensive factor levels detected with the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were also correlated with BP in patients. The PHF ELISA provides a selective, simple, and rapid method that can be used for routine determination of PHF in human plasma, and provides useful clinical information.     

Rapid Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Hantavirus-Specific Antibodies in Divergent Small Mammals

We assessed the utility of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of hantavirus-specific antibodies from sera of Oligoryzomys longicaudatus, the principal reservoir of Andes virus (ANDV), using an antigen previously developed for detection of antibodies to Sin Nombre virus (SNV) in sera from Peromyscus maniculatus. The assay uses a protein A/G horseradish peroxidase conjugate and can be performed in as little as 1.5 hours. Serum samples from Oligoryzomys longicaudatus collected in central-south Chile were used and the assay identified several that were antibody positive. This assay can be used for the rapid detection of antibodies to divergent hantaviruses from geographically and phylogenetically distant rodent species.     

酶斑点杂交法与双抗体夹心法检测汉坦病毒感染的比较

目的将酶标抗汉坦病毒NP抗原单链抗体应用于酶斑点杂交法和双抗体夹心法,检测汉坦病毒感染,探索价格低廉早期HFRS诊断试剂。方法以戊二醛偶联辣根过氧化物酶和抗汉坦病毒NP抗原单链抗体,制备酶标单链抗体,并应用于酶斑点杂交法和双抗体夹心法中,检测56份早期HFRS患者血清及66份阴性对照血清。结果56份HFRS患者血清中,双抗体夹心法检测出29例阳性,阳性率为51.79%,酶斑点杂交法检测出28例阳性,阳性率为50.00%,两方法检测66例阴性对照血清,结果均为阴性。统计学处理,两方法差异不显著。结论以酶标抗汉坦病毒NP抗原单链抗体制备的酶斑点杂交和双抗体夹心诊断试剂,均为稳定性好、假阳性率低、造价低廉、诊断可靠的诊断试剂。     

Detection of antigens of Mycobacterium tuberculosis in patients of infertility by monoclonal antibody based sandwiched enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)

A sandwich ELISA to detect specific protein antigens of Mycobacterium tuberculosis was developed by using polyclonal anti-BCG rabbit antibodies as the primary capture antibodies. The mycobacterial antigens were detected with horseradish peroxidase conjugated monoclonal antibodies (P 6) as secondary antibodies. The enzyme was detected by using 1,2 Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and Hydrogen peroxide as substrate. The antigen could be quantitated through linear regression analysis with lower detection limit of 1.25 μg/ml. 50 consecutive cases of infertility were examined by laparoscopy and tested for the presence of the antigen in the serum. Mycobacterial antigen could be detected in 9 of the 12 cases with definitive diagnosis of tuberculosis, 5 of the 23 where the diagnosis of tuberculosis was probable and in only 1 of 15 patients who had no laparoscopic abnormalities indicative of tuberculosis.     

人血清载脂蛋白E酶联免疫吸附测定方法的建立

利用由纯化的人血浆载脂蛋白Ｅ制备获得的小鼠抗人载脂蛋白Ｅ单克隆抗体和兔抗人载脂蛋白Ｅ多克隆抗体，建立了人血清载脂蛋白Ｅ浓度的抗体双夹心酶联免疫吸附测定方法。该方法具有特异性强，灵敏度高，操作简便和重复性好等优点，可广泛地应用于基础研究和临床检验。     

河南省20株布鲁氏菌鉴定与PFGE分子分型研究

目的检测与分析河南省2010-2012年20株布氏菌型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征。方法采集病人静脉血,分别以试管凝集试验(SAT)、双相血培养瓶分离培养、热裂解法制备DNA模板和AMOS-PCR鉴定4种布氏菌型别。采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对检出的布鲁氏菌进行分子分型鉴定。结果分离培养的20株布鲁氏菌经鉴定,19株为羊种,1株为牛种;羊种布鲁氏菌经XbaI酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了8种不同带型,带型相似度在80%~100%之间,牛种与羊种菌株在带型相似度上差异较大,具有较好的分辨能力。结论河南省病人感染的布鲁氏菌以羊种为主要型别,AMOS-PCR与PFGE作为布鲁氏菌菌型鉴定与分子分型的技术手段,为布鲁氏菌病的病原学监测与应急检测提供依据。     

Use of peroxidase-labelled antigen for the detection of antibodies to Borrelia burgdorferi in human and animal sera

We have developed a modified ELISA for the detection of anti-Borrelia burgdorferi (Bb) antibodies based on a peroxidase enzyme labelled antigen (ELAT). Microtiter plates were coated with antigen of Bb. The immunoglobulins of the serum samples were bound to the antigen and specific antibodies were detected by an enzyme labelled antigen. The test principle facilitates the recognition of specific antibodies in different collectives of human and animal sera. We performed epidemiological studies with the ELAT on 231 sera from mothers in maternity wards (9.5% positive), 219 patient sera sent to the Bb routine diagnostics (15% positive) and 230 sera from forestry workers (21.3% positive). We further investigated sera from red deer from South Lower Saxony which remained 55% Bb-antibody positive; deer were 37% and fallow deer were 29% positive.