胎鼠生长受限模型中孕鼠胎盘滋养细胞一氧化氮合酶和血管内皮生长因子水平变化

目的 探讨孕鼠胎盘滋养细胞一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, eNOS)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在胎鼠生长受限(growth retardation in fetal mice,FGR)机制中起的作用.方法 采用双侧子宫动静脉中段部分结扎法建立SD大鼠的FGR动物模型;比较妊娠21 d FGR组及对照组的胎鼠体重、胎盘重量;利用免疫组织化学方法 ,对孕鼠胎盘eNOS、VEGF水平进行的定性定量分析;应用化学发光法检测胎盘NO含量;应用ELISA法检测孕鼠血清VEGF水平.结果 (1)FGR组胎盘平均重量明显低于对照组(P＜0.005),FGR组FGR发生率(33.3%)较对照组(1.14%)明显升高(P＜0.005),而两组胎鼠死亡率差异无统计学意义(4.94% vs 3.41%,P＞0.05).(2)在胎盘组织中,eNOS均分布于合体滋养细胞和血管内皮细胞胞浆内;VEGF主要分布于合体滋养细胞、Hofbauer细胞的胞浆和细胞外基质.(3)胎盘滋养细胞的eNOS组化染色阳性值,FGR组较对照组明显增加(P＜0.01);胎盘滋养细胞的VEGF组化染色阳性值,FGR组较对照组明显减少(P＜0.01).(4)FGR组胎盘NO含量明显高于对照组,孕鼠血清VEGF明显低于对照组.结论 (1)双侧子宫动静脉中段部分结扎法是建立FGR动物模型的有效方法 .(2)胎盘滋养细胞eNOS表达异常增加、VEGF表达异常降低可能在FGR发病机制中起重要作用.     

人合体滋养细胞微粒对孕鼠血管内皮的影响

目的 研究人合体滋养细胞微粒（syncytiotrophoblast microparticles,STBM）对SD孕鼠血管内皮的影响,从而探讨子痫前期可能的发病机制.方法 选取2013年8 ～10月在上海交通大学附属第六人民医院住院行选择性剖宫产的10例子痫前期患者的胎盘,采用机械打碎法体外制备合体滋养细胞微粒.将孕鼠随机分为两组,于孕7.5、10.5及13.5天分别经尾静脉注入合体滋养细胞微粒及生理盐水,自孕10.5天起隔日大鼠无创血压测量分析系统测量血压,并于17.5天取血检测血中一氧化氮（nitric oxide,NO）及内皮素（endotelin,ET）含量.结果 实验组孕鼠于10.5天起血压逐渐增高,而对照组血压无明显改变.同时实验组孕鼠血一氧化氮水平（47.256±6.708 μmol/L）明显低于对照组（61.287 ±9.725μmol/L）（P＜0.01）,而内皮素水平（91.209±16.918ng/L）明显高于对照组（56.624±9.337ng/L）（P＜0.01）.结论 STBM可以损伤孕鼠血管内皮,使其调节血管舒缩功能受损,从而导致孕鼠血压升高,提示其可能是子痫前期内皮细胞功能紊乱的原因.     

一种新型胎儿宫内生长迟缓大鼠动物模型

目的建立一种良好的胎儿宫内生长迟缓(intrauterinegrowthretardation,IUGR)动物模型,以利于IUGR的病因、病理及治疗学方面的研究。方法采用子宫动静脉中段部分结扎法,结扎孕龄为17d的SD大鼠子宫动静脉。结果结扎组SD大鼠体质量为(3.32±0.54)g和胎盘质量为(0.38±0.05)g,对照组SD大鼠体质量为(4.55±0.76)g和胎盘质量为(0.44±0.11)g,实验组和对照组有显著性差异(P<0.005);实验组IUGR发病率(33.33%)较对照组(1.14%)明显增高(P<0.005);实验组胎鼠死亡率(4.94%)与对照组(3.41%)无显著性差异(P>0.05)。结论采用双侧子宫动静脉中段部分结扎法可建立良好的IUGR动物模型。     

凋亡及凋亡相关因子在胎儿生长受限胎盘滋养细胞中的表达

目的　研究胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR）胎盘滋养细胞的凋亡及凋亡相关因子Fas、Fasl的表达及意义。方法　收集2014年3月至2017年3月大连市妇女儿童医疗中心剖宫产分娩的胎盘,正常妊娠晚期（对照组）、FGR（实验组）,各50例。采用TUNEL法检测两组胎盘滋养细胞的凋亡,计算凋亡指数。采用免疫组化S-P法检测凋亡相关因子Fas、Fasl的表达。结果　对照组、实验组均可见胎盘滋养细胞的凋亡,凋亡指数AI分别为（17.64±6.97）%及（56.48±7.98）%,差异有显著性意义（P<0.05）。实验组Fas表达高于对照组,实验组Fasl表达低于对照组,差异均有显著性意义（P<0.05）。实验组AI与Fas表达呈正相关（r=0.634,P=0.000）,与Fasl呈负相关（r=-0.940,P=0.000）。结论　凋亡相关因子Fas、Fasl可能共同通过诱导胎盘滋养细胞的凋亡参与FGR的发病。     

胰岛素样生长因子I受体在宫同内发育心缓胎鼠中的表达研究

目的 探讨宫内发育迟缓（IUGR）时胰岛素样生长因子I受体（IGFD－1R）表达的变化及其在组织和细胞中的定位。方法 将21只SD孕鼠随机分为实验组12只和对照组9只。钳夹实验组孕鼠双侧子宫动、静脉20分钟,建立宫内发育迟缓动物模型。对照组仅作开腹和关腹术。两组均于孕22天剖宫取出胎鼠,采用免疫组化法观察孕晚期胎鼠肝脏和肺组织中IGF－1R的表达。结果 实验组胎鼠的体重、身长及胎盘、肝、肺组织重量按对照组明显降低（P＜0．05）;实验组胎鼠肝脏IGF－1R表达面积比较对照组明显增加,平均灰度明显降低（P＜0．01）;实验组胎鼠肺组织IGF－1R表达面积也比较对照组明显增加（P＜0．05）,但平均灰度则无显著性差异（P＞0．05）。结论 宫内发育迟缓时IGF－1R在肝脏和肺组织的表达增加,可能是机体对IGF－1降低的代偿机制。     

胎儿生长受限胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bcl-2、bax的表达

目的探讨胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)患者胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bax、bcl-2的表达及意义。方法收集2014年3月～2017年6月大连市妇女儿童医疗中心剖宫产分娩患者的胎盘,其中正常妊娠晚期(对照组)、FGR(实验组)各50例。应用免疫组化S-P法检测两组胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bcl-2、bax的表达。结果实验组bax蛋白表达明显高于对照组,差异有显著性(P0.05),实验组bcl-2蛋白表达低于对照组,差异有显著性(P0.05)。P53蛋白在正常妊娠晚期、FGR组均未见表达或仅有个别细胞表达,差异无显著性(P0.05)。结论 FGR患者胎盘滋养细胞凋亡是非P53依赖的凋亡,凋亡相关因子bax、bcl-2蛋白可能共同介导FGR胎盘滋养细胞的凋亡。     

胎盘四氯二苯二(噁)英表达在胰岛素样生长因子2诱导胎鼠发育异常中的作用

目的 研究四氯二苯二噁英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）对胎鼠生长发育的影响及与胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor2，IGF2）的关系。方法 经灌胃给予孕10d大鼠10μg／kg TCDD，20d剖宫取胎，比较实验组和对照组孕鼠妊娠结果，测量两组活胎的身长、体重及胎盘重；用逆转录-实时定量PCR和免疫组化方法检测两组活胎胎盘组织昭F2 mRNA及蛋白的表达水平，用甲基化敏感限制酶HpaⅡ酶切-PCR法检测两组胎盘组织IGF2基因DMR1的甲基化程度。结果 实验组死胎及吸收胎发生率为12．2％。致畸率为11．6％，活胎身长、体重及胎盘重明显低于对照组；实验组活胎胎盘组织IGF2mRNA及蛋白的表达明显高于对照组；两组IGF2基因DMRl的甲基化程度无差异。结论 孕10d给予大鼠10μg／kgTCDD灌胃可导致死胎、吸收胎、畸形胎和胎儿宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation，I-UGR）。TCDD所致胎鼠发育异常可能与胎盘组织IGF2表达增高有关。     

孕期染毒 PFOS 对胎鼠体重的影响

目的i评价孕鼠染毒全氟辛烷磺酸盐（PFOS）对胎鼠体重的影响。方法：取孕鼠12只随机分为3组：0．05％TW-20（对照组）,5mg（kg．d）低剂量灌胃组,20mg／（kg·d）高剂量灌胃组,各四只,SD大鼠从怀孕1ld开始灌胃给予PFOS,第19d结束灌胃,第20d处死孕鼠取组织。观察测量胎鼠平均体重,取胎鼠胎盘测重量,采用ELISA测孕鼠血清中糖皮质激素（GC）的含量。结果：与正常对照组比较,不同剂量PFOS对各组孕鼠的胎鼠的体重,胎鼠胎盘重量,孕鼠血清中GC含量比较差异有统计学意义。低剂量组与高剂量组胎鼠胎盘重量明显下降（P〈0．001）;低剂量组胎鼠体重下降（P〈0．05）,高剂量组胎鼠体重明显下降（P〈0．001）;低剂量组孕鼠血清中GC含量升高（P〈0．05）,高剂量组孕鼠血清中GC含量明显升高（P〈0．001）。结论：孕期染毒PFOS对胚胎发育有毒性作用,不同剂量有不同的效应。     

神经肽Y在孕鼠肝内胆汁淤积症胎盘中的表达及意义

目的：观察妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）孕鼠肝脏、胎盘结构变化；分析神经肽Y（NPY）在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）孕鼠胎盘中的表达，探讨ICP的发病机制：方法：选择孕15天SD大鼠，用孕酮及乙炔雌二醇建立孕鼠ICP模型，观察孕鼠肝脏和胎盘的病理变化；应用免疫组织化学染色方法及图像分析检测ICP孕鼠（15例，实验组）及正常孕鼠（15例，对照组）胎盘中NPY的表达及定量：结果：①孕鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆酸（TBA）明显升高；肝细胞水肿，胞质内出现空泡，毛细胆管扩张、胆汁淤积；胎盘绒毛肿胀、增粗，绒毛间隙变窄，滋养细胞增生②ICP孕鼠组绒毛的NPY免疫反应呈强阳性，对照组部分滋养细胞的NPY免疫反应阳性绒毛的毛细血管内皮细胞呈弱阳性或阴性。对两组胎盘免疫组化染色进行定量分析结果显示，ICP组NPY的染色强度高于对照组，两组比较有统计学意义（P〈0．05）.结论：NPY在ICP胎盘中的表达升高，提示胎盘合成和分泌血管活性物质的功能失调可能参与了ICP的发生与发展，并与ICP围生儿等不良预后有密切的关系．     

妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B对胎鼠胸腺发育的影响

目的: 观察妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B (SEB)对胎鼠胸腺发育的影响。方法: 将孕鼠随机分为实验组及对照组,每组12只;实验组和对照组孕鼠在妊娠第16天分别尾静脉注射SEB 15 μg和等体积的生理盐水;于妊娠21天打开母鼠腹腔取出胎鼠,称量胎盘、胎鼠及其胸腺的湿重和干重;胎鼠胸腺细胞以抗CD4-APC及抗CD8-PE双标染色后用流式细胞仪检测T淋巴细胞各亚群。结果: 妊娠母鼠静脉注射SEB后可明显减少胎鼠胸腺的湿重和干重(P < 0.01),减少CD4-CD8+、CD4+CD8+T细胞(P < 0.01和P < 0.05),但明显增加CD4+CD8-T细胞(P < 0.01);胎鼠和胎盘的干、湿重与对照组差异均无统计学意义(P > 0.05)。结论: SEB可明显影响胎鼠胸腺的发育。     

人肝癌细胞在免疫重建前后SCID小鼠中的生长特点

目的 探讨SCID小鼠免疫重建及免疫对人肝癌细胞成瘤的影响。方法 体外培养人肝癌细胞系，接种到SCID小鼠和用BALB／c,CBA/N小鼠外周血淋巴细胞重建的SCID（B－PBL－SCID和C－PBL－SCID）小鼠皮下；监测成瘤状态，测定鼠脾细胞毒杀伤力和免疫重建的免疫球蛋白量，作血清与靶细胞凝集实验。结果 免疫重建体现了所用小鼠免疫对肿瘤的排斥特点，免疫重建成功；SCID和C－PBL－SCID小鼠100％成瘤（两瘤体相比P＜0．01），B－PBL－SCID出现瘤体后逐渐消失；B－PBL－SCID和C－PBL－SCID脾细胞对靶细胞有一定的杀伤力，B－PBL－SCID的血清能与靶细胞产生凝集反应。结论 SCID是建立肿瘤模型和肿瘤免疫研究的良好动物；肝癌细胞在小鼠体内的成瘤率与T，B细胞免疫有关。     

小鼠机体炎症反应促进纤维肉瘤生长的作用

目的   探讨小鼠机体炎症反应促进纤维肉瘤生长的作用及可能机制。方法   C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(PBS组)、脂多糖组(LPS组)、纤维肉瘤组(PC组)、脂多糖+纤维肉瘤组(LC组)、脂多糖+纤维肉瘤+塞来昔布组(Cele组),PBS组小鼠腹腔注射PBS缓冲液,其余各组小鼠给以脂多糖(LPS)建立炎症模型,实验第5天处死LPS组、PBS组小鼠,其余组小鼠皮下接种纤维肉瘤细胞,同时Cele组小鼠给予塞来昔布,接种肿瘤第21天处死小鼠。比较各组小鼠的一般状况及肿瘤体积,处死小鼠后取肺组织观察外形改变及组织病理学特点,应用CD31染色比较PC组及LC组小鼠肿瘤的血管形态及微血管密度(MVD)。结果   与PBS组相比,LPS组小鼠肺组织血管通透性增高,组织液渗出增多,肺泡腔内可见大量红细胞、炎症细胞;与PC组相比,LC组小鼠肿瘤生长速度快,肿瘤MVD增加,血管紊乱。结论   炎症反应对纤维肉瘤的生长有促进作用,其机制可能与促进肿瘤血管生成有关,抗炎治疗可抑制纤维肉瘤的生长。     

择时放疗对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的以时间治疗学的原理为基础对放射治疗进行改良，以获得更佳的疗效。方法首先将肿瘤细胞LLC细胞悬液接种至已接受2周光暗适应的雄性C57BL／6J小鼠皮下。待肿瘤长至直径1．0厘米时，按特定时间点分组（组Ⅰ照射时间11HALO，组Ⅱ照射时间为23HALO）对小鼠行^60Co-γ射线一次性全身照射。之后观察各组肿瘤大小，并对肿瘤组织行HE染色和PCNA免疫组化染色，进而观察肿瘤细胞形态和增值情况。结果组Ⅰ较组Ⅱ而言，肿瘤再生长的速度更加缓慢，且出现更明显的细胞退行性变和区域性坏死，同时PCNA表达量明显降低。结论在11HALO行放射治疗的小鼠肿瘤生长明显比23HALO行放射治疗的小鼠和未经放射治疗的小鼠缓慢，肿瘤组织受损也相对严重。说明在该时间点行放射治疗有助于提高放疗的效果。     

核酸制品对小鼠生长的影响

核酸是遗传的物质基础。机体的生长，发育与衰老均与核酸代谢密切相关，本文使用人胎盘ＤＮＡ喂养动物，经半个月观察后，表明给予ＤＮＡ组小鼠体重增加明显大于对照组小鼠，Ｐ＜０．０１。过去对蛋白质的营养价值很重视，而对核酸的摄入则很少问津，本研究表明，外源ＤＮＡ可促进小鼠的生长。说明机体在生长发育适当加核酸的供给，有助于机体的生长，发育。高核酸食品应引起人们的重视。     

甲状腺激素可抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长

目的探讨甲状腺激素对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立BALB/c人胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,将成
瘤裸鼠随机分为对照组（灭菌蒸馏水）、甲状腺激素（T3）高浓度组、T3低浓度组、丙基硫氧嘧啶（PTU）高浓度组、PTU低浓度组,
干预21 d。测量各组裸鼠体质量变化;测量各组移植瘤体积与瘤体质量变化;应用ELISA法检测裸鼠血清中甲状腺激素T3浓
度;应用免疫组化染色法检测瘤体组织中细胞增殖核抗原（PCNA）的表达和肿瘤微血管密度（MVD）的变化。结果与对照组相
比,甲状腺激素组裸鼠体质量较干预前均明显减轻（P<0.05）,而PTU组变化不明显。甲状腺激素组移植瘤体积增长明显滞后于
PTU组和对照组（P<0.05）。甲状腺激素组瘤体质量显著低于PTU组和对照组（P<0.05）。与PTU组和对照组相比,甲状腺激素
组的PCNA增殖指数与MVD亦明显降低（P<0.05）,但不同浓度组间无显著统计学差异（P>0.05）。结论甲状腺激素可抑制人
胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应,具有潜在的临床应用价值。
     

HGF/c-met在小鼠毛囊生长周期中的表达

目的HGF及其受体c-met是很多系统中间充质-上皮互相作用的主要的介导者,毛囊周期性生长是典型的间充质-上皮互作模型,为证实HGF/c-met信号在小鼠毛囊周期生长过程中是否发挥作用。方法 本实验运用免疫组织化学的方法对HGF/c-met在ICR小鼠毛囊生长期、退化期和休止期进行组织定位。结果 HGF主要位于真毛乳头和皮脂腺,c-met主要位于毛基质、根鞘部和表皮。HGF及其受体在小鼠毛囊生长期表达量达到最高值,在退化期基本不表达,在休止期-生长期过渡时HGF及其受体表达量均上升。结论 HGF/c-met信号在ICR小鼠毛囊生长过程中起调控作用。     

新生小鼠胸腺的体外生长及酶表达

目的:观察器官培养条件下新生小鼠胸腺的生长状况.方法:对新生BALB/c小鼠胸腺分别进行1、3、5和7 d的体外培养,然后用常规组织学及酶组织化学方法对其进行染色和镜下观察.结果:从培养1 d组开始,胸腺的生长状况便可分为两个区:第1区为除贴附培养滤纸一侧以外的皮质部分,第2区为髓质及贴附培养滤纸一侧的皮质部分.第1区内细胞排列紧密,细胞呈良好的生长状态,有较多酶阳性反应较强的细胞;第2区内细胞排列较松散,部分细胞结构较差,基质细胞明显减少,酶阳性反应细胞较少.以上生长状况在培养3 d组、5 d组和7 d组更加明显,且 3组之间无明显差别.结论:[ HTSS 本器官培养条件下的胸腺生长状况具有区域性差别.     

整合素连接激酶对裸鼠前列腺癌的影响

目的：探讨应用整合素连接激酶（ILK）特异siRNA敲除ILK基因对人DU145细胞系裸鼠原位前列腺癌生长及进展的影响。方法：将合成的ILK特异siRNA转染人DU145细胞系,应用逆转录PCR检测ILK在转录水平的表达情况;使用Western blot方法检测ILK在蛋白水平的表达情况。初步探讨敲除ILK基因后对人DU145细胞的黏附、侵袭性的影响及其对细胞骨架结构的影响。分别将ILK siRNA和对照DU145细胞注入裸鼠皮下,每5天1次,连续4周,检测裸鼠前列腺癌肿瘤的大小、分化程度、凋亡及增殖状态来观察ILK对前列腺癌生长的影响。结果：siRNA显著降低了ILK基因的表达,ILK mRNA及蛋白的表达分别被抑制87%与81%。与对照组相比,实验组DU145黏附力及侵袭力显著下降,实验组细胞骨架结构破坏明显。裸鼠种植DU145细胞后5周,实验组与对照组相比,细胞在裸鼠种植部位形成的肿瘤体积明显减小［（18.1±1.3） mm³ vs (157.6±9.7) mm³,P<0.01）］,分化程度变好［Gleason评分（5.8±0.2） vs （ 8.8±0.3）,P<0.05］,凋亡指数增加［（64.75±5.87） vs （38.57±3.45）,P<0.01］,增殖指数减小［(42.75±4.76） vs （88.57±7.57）,P<0.01］。结论：动物实验表明,特异性的抑制ILK能抑制人DU145细胞的黏附及其侵袭能力,破坏DU145细胞骨架的形成,诱导前列腺肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤细胞的增殖,从而在一定程度上抑制了肿瘤的生长及进展。     

N-乙酰半胱氨酸对小鼠肺腺癌生长、转移的抑制作用

目的: 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对T739小鼠肺腺癌原发瘤形成及自发性肺转移的影响。方法: T739小鼠51只随机分为3组,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ、Ⅲ组分别在每天饮水中加入0.5g/kg、1.0g/kgNAC,72h后皮下接种小鼠LA795肺腺癌细胞(0.2×106个/只),观察小鼠体重变化、皮下肿瘤形成、生长及肺转移情况;采用二硫代对硝苯甲酸显色法测定血中谷胱甘肽(GSH)含量。结果: 接种第4天,肿瘤出现率Ⅱ、Ⅲ组分别为47.1%和38.9%,均明显低于Ⅰ组81.25%(P<0.05)。第22天处死小鼠后皮下肿瘤重量Ⅱ、Ⅲ组明显低于Ⅰ组(P<0.05和P<0.01),且与NAC剂量呈负相关(P<0.01)。各组之间自发性肺转移灶的数目差异均无显著性(P>0.05)。各组小鼠体重实验后均较实验前明显下降(P<0.01),但实验后3组之间体重差异均无显著性(P>0.05)。血GSH含量Ⅰ组明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01)。结论: NAC可明显延长肿瘤形成的潜伏期,抑制原发瘤的生长;NAC对小鼠无明显副作用,是一种安全可靠的制剂。     

生长抑素对人胃癌裸鼠种植瘤生长的影响

目的 研究生长抑素对裸鼠人胃癌SGC-7901细胞种植瘤生长的影响.方法 构建裸鼠人胃癌SGC-7901细胞种植瘤模型.将24只模型鼠随机分为4组（n=6）,分别尾静脉给予生理盐水（对照组）、奥曲肽（奥曲肽组）、高剂量生长抑素（生长抑素高剂量组）和低剂量生长抑素（生长抑素低剂量组）干预3周后,处死动物并获取肿瘤组织.称取各组种植瘤重量,计算抑瘤率.TUNEL法比较各组瘤体内细胞凋亡情况.Western blot法检测各组种植瘤组织内caspase-3的表达.结果 奥曲肽组、生长抑素高剂量组、生长抑素低剂量组平均瘤体重量较对照组均显著减轻（P＜0.05）,其抑瘤率分别为43.66％、41.55％、28.17％,生长抑素高剂量组和奥曲肽组的抑瘤率明显高于生长抑素低剂量组（P＜0.05）.各用药组细胞凋亡率显著高于对照组（P＜0.05）,生长抑素高、低剂量组细胞凋亡率显著高于奥曲肽组（P＜0.05）,生长抑素高、低剂量组间凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）.生长抑素高、低剂量组caspase-3的表达量显著高于对照组和奥曲肽组（P＜0.05）,生长抑素高、低剂量组间caspase-3的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 生长抑素和奥曲肽均可显著抑制胃癌种植瘤生长、诱导胃癌细胞凋亡,且诱导能力以生长抑素尤为显著.caspase-3的表达上调可能是其诱导胃癌细胞凋亡的相关机制之一。