抗凝剂对定量检测乙型肝炎病毒DNA的影响

目的探讨用实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒DNA拷贝数时，不同抗凝剂对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响。方法采集40例乙型肝炎患者血液，分别置于不含抗凝剂及含肝素钠、枸缘酸钠、EDTA-k2抗凝剂的无茵试管中，分离血清和血浆后于-20℃冰箱保存备用。采用实时荧光定量PCR方法检测血清和血浆中乙型肝炎病毒DNA的拷贝数，用配对t检验对检测结果进行统计处理。结果40例乙型肝炎患者不合抗凝荆组的乙型肝炎病毒DNA拷贝数的对数均数为5．66±2．10，含肝素钠组的对数均数为5．42±2．26，含枸缘酸钠组的对数均数为5．36±2．11，含EDTA-k2组的对数均数为5．58±2．16。三种含抗凝剂的标本分别与不合抗凝剂的血清组标本中的乙型肝炎病毒DNA拷贝数转换为对数经配对t检验统计处理，含肝素钠组和枸缘酸钠组的DNA拷贝数与不含抗凝剂组DNA拷贝数差异有统计学意义（P〈0．05），而含EDTA-K2组的DNA拷贝数与不含抗凝荆组的的DNA拷贝数差异无统计学意义（P〉0.05）。结论实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒DNA拷贝数，应避免使用含肝素钠和枸缘酸钠的血浆标本，使用不合抗凝剂或含EDTA-K2抗凝剂的无菌试管收集标本。     

不同标本因素对荧光定量PCR法测定HBVDNA结果的影响

目的 探讨用含不同抗凝剂及促凝剂真空采血管采集的标本及溶血、黄疽标本对荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA结果的影响。方法用含不同抗凝剂及促凝剂的真空采血管采集标本,制备溶血和未溶血、高黄疸和正常胆红索水平血清标本,同时用荧光实时定量PCR法测定HBVDNA的含量。结果不同真空采血管之间、溶血血清和未溶血血清、高黄疸血清和正常胆红素水平血清HBVDNA均无统计学意义（P〉0．05）。结论含不同抗凝剂及促凝剂的真空采血管、溶血、黄疸标本对HBVDNA检测结果无明显影响。     

标本因素对荧光定量PCR检测HBV DNA的影响

目的: 探讨标本溶血、黄疸、脂血对荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的影响。方法: 荧光定量PCR检测无溶血、无黄疸、非脂血血清和溶血、黄疸、高脂血清标本的HBV DNA。结果: 溶血、黄疸、高脂血血清与无溶血、无黄疸、非脂血血清HBV DNA定量检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论: 标本溶血、黄疸、脂血对荧光定量PCR检测HBV DNA无干扰。     

血红蛋白和肝素对FQ-PCR检测HBV DNA结果的影响

目的探讨血红蛋白和肝素对荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）定量检测乙型肝炎病毒核酸（HBVDNA）的影响。方法采用沉淀煮沸裂解法提取含不同浓度血红蛋白或肝素的血浆标本中的HBVDNA,应用FQ-PCR方法对HBVDNA进行定量检测。结果血浆标本中血红蛋白浓度〈37g/L或肝素浓度〈62.5U/ml时,对HBVDNA的定量结果无明显影响,但当肝素浓度达到125U/ml以上时,PCR反应明显受到抑制。结论对轻微的溶血和使用常规浓度肝素抗凝的血浆标本,可采用沉淀煮沸裂解法提取HBVDNA进行FQ-PCR定量检测。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒-DNA的临床意义

目的　评价荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测乙型肝炎病毒 (HBV) DNA对辨别病毒复制的临床意义。　方法　采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法 ,检测 79份血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。　结果　在乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒核心抗体 (抗 HBc)阳性的 2 6份标本中 ,HBV DNA全部阳性 ,平均拷贝数为2 7× 10 5/ml。 8例HBsAg、HBeAg阳性的标本中 ,HBV DNA全部阳性 ,平均拷贝数为 5 2× 10 4/ml。 2 1例HBsAg、乙型肝炎病毒e抗体 (抗 HBe)、抗 HBc阳性的标本中 ,HBV DNA阳性率为 6 6 7% ,平均拷贝数为 3 1× 10 4/ml。 9例HBsAg阳性的标本中HBV DNA阳性率为 11% ,平均拷贝数为 1 4× 10 3 /ml。　结论　荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况。     

乙型肝炎血清标志物联合病毒DNA检测在临床应用中的意义

目的探讨乙型肝炎血清标志物五项（HBV-M）联合病毒DNA（HBV-DNA）检测在临床应用中的意义。方法HBV-M采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测，HBV-DNA采用实时荧光定量PCR法（FQ-PCR）检测。结果HBsAg＋各组HBV-DNA阳性率显著高于HBsAg^-各组p〈0．01；HBsAg^＋各组HBV-DNA拷贝数显著高于HBsAg^-各组p〈0．01。结论乙型肝炎血清标志物五项联合乙型肝炎病毒DNA检测，有利于对乙型肝炎的疗效观察和病程监控。     

血红蛋白对磷酸肌酸激酶活力检测的影响

目的探讨血清中游离的血红蛋白(不同程度溶血)对检测血清磷酸肌酸激酶(CK)活力的影响。方法用自制血红蛋白(Hb)液,制成不同浓度Hb含量的血清标本,用自动血细胞计数仪检测其Hb浓度,用自动生化仪配对检测原血清以及含不同浓度Hb血清的CK活力(U/L)。结果含不同浓度Hb血清比原血清CK活力均有不同程度的升高,且CK活力升高的程度与血清中Hb的浓度成正相关。结论在检测血清CK活力时,不宜采用溶血的血清标本,以免造成CK活力的假性增高。     

HBV DNA荧光定量PCR与乙型肝炎病毒血清标志物检测的相关性探讨

目的探讨鞍山地区HBV DNA荧光定量PCR与乙型肝炎病毒血清标志物检测的相关性。方法用深圳匹基生物工程股份有限公司生产的HBVDNA荧光定量PCR检测试剂。结果乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HB)三项均阳性，患者血清标本中检出HBV DNA阳性率高达98．4％；HBsAg、乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)三项均阳性，患者血清标本中检出HBV DNA阳性率达63．1％。结论HBV DNA荧光定量PCR检测在临床上对乙型肝炎基因诊断，特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面具有重要意义。     

高脂血溶血标本对聚合酶链反应测定低水平乙型肝炎病毒的脱氧核糖核酸检测结果的影响

目的 探究高脂血、溶血标本对聚合酶链反应(PCR)测定低水平乙型肝炎病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)检测结果.方法 从50160例乙型肝炎标本中抽选出100例甘油三酯(TG)正常、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定为(4.0～9.0)×103 U/mL的乙型肝炎患者血清标本进行即刻检验.另选择出100例乙型肝炎...     

荧光定量PCR与ELISA法检测HBV-DNA结果分析

目的 :应用荧光定量PCR方法精确检测HBV -DNA的拷贝数 ,为临床判断病毒复制程度提供指标 ;对比分析荧光定量PCR方法和ELISA方法检测HBV -DNA的结果。方法 :用荧光定量PCR法检测 10 14例用ELISA法诊断为乙型肝炎病人的血清HBV -DNA拷贝数。结果 :10 14例病人中 ,病毒拷贝数≥ 1× 10 5的 4 99例 ,阳性率4 9.2 % ;HBeAg阳性患者的HBV -DNA拷贝数≥ 1× 10 5的阳性率显著高于HBeAg阴性患者。结论 :荧光定量PCR检测HBV病毒复制情况结果准确 ,对临床工作指导意义更大 ;HBeAg是一项重要指标。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值

目的: 探讨实时荧光定量PCR(F Q-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值。方法: 采用FQ-PCR方法检测196例患者血清中HBV-DNA。结果: 112例HBeAg(+)/HBeAb(-)标本中FQ-PCR均阳性,HBV-DNA拷贝数1.08×107/ml;68例HBeAg(-)/HBeAb(+)标本中,平均拷贝数6.12×105/ml,其阳性率为66.2%;16例HBeAg(-)/HBeAb(-)标本中,平均拷贝数为2.72×104/ml。结论: 实时FQ-PCR可以实现准确定量,是了解HBV在体内复制和判断疗效的有利手段。     

HBV DNA和HCV RNA检测试剂抗干扰能力验证

目的:评估乙型肝炎病毒(HBV)脱氧核糖核酸(DNA)和丙型肝炎病毒(HCV)核糖核酸(RNA)定量检测试剂的抗干扰能力.方法:选择高、低浓度HBV DNA和HCV RNA阳性血清标本,采用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度血红蛋白(hemoglobin,Hb),总胆红素(total bilirubin,TBIL)和甘油三酯(triglyceride,TG)对2种阳性血清标本检测的干扰.以偏差<±7.5％ 为可接受范围.结果:HBV DNA检测,当Hb浓度≤4.5 g/L时,各样本均未受到干扰,Hb浓度≥8.1 g/L时,各样本受到不同程度的干扰;当TBIL浓度≤370μmol/L时,高浓度样本检测未受到明显干扰,TBIL浓度≥666μmol/L,各样本受到不同程度的干扰;TG浓度≤12.6 mmol/L时,未对检测造成干扰.HB≤8.1 g/L,TBIL浓度≤666μmol/L,TG浓度≤12.6 mmol/L均未对HCV RNA检测造成干扰.结论:HBV DNA和HCV RN A定量检测试剂具有一定的抗干扰能力.     

乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA水平与HDL-C的相关性

目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清HBV DNA和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,探讨血清HBV DNA拷贝数与HDL-C水平的相关性.方法 收集116例HBV感染者血清,通过实时荧光定量PCR法测定血清HBV DNA拷贝数,通过选择性抑制均相测定法分析血清HDL-C值;计算HBV DNA拷贝数与HDL-C的相关系数,并对相关系数进行显著性检验.结果 在乙型肝炎病毒感染者中,血清HBV DNA拷贝数对数均值为(4.18±1.77 )/ml,分布范围为(1.38～7.85)/ml;血清HDL-C浓度均值为(1.30 ±0.29) mmol/L,分布范围为(0.66～2.01)mmol/L.血清HBV DNA拷贝数与HDL-C水平存在负相关(r=-0.5346,P=0.0023).结论 HDL-C对乙型肝炎病毒的复制有抑制作用.     

标本因素对HBV DNA测定的影响

目的 探讨脂血、黄疸、溶血及常温储存3d和4℃保存7d对乙肝病毒D N A(H B V D N A)荧光定量测定结果的影响.方法 将阳性标本进行即时检测、室温保存3d检测、4℃保存7d后检测及高脂血和非脂血、黄疸和非黄疸、溶血血清和未溶血血清同时作HBV DNA荧光定量PCR.结果 溶血与未溶血血清标本、黄疸和非黄疸、脂血和非脂血血清标本HBVDNA含量都在同一数量级.血清标本在室温下短期贮存(3d)、4～12保存7d内分别与即时检测HBV DNA含量比较均无统计学意义(P>0.05).结论 脂血、黄疸、溶血、血清标本不同储存温度及时间对HBV DNA定量结果测定无影响.     

慢性乙肝患者不同层次乙肝病毒载量血清补体C3检测结果分析

目的:观察慢性乙型肝炎患者血清补体C3指标的变化,为临床提供有价值的实验室信息,满足临床对患者的诊治需求.方法: 对临床已确诊的120例慢性乙肝患者使用罗氏Lightcycler实时荧光定量PCR仪检测其血清病毒拷贝数,并以乙肝病毒载量为标准,分为低、中、高三组进行研究;用免疫比浊法借助日立7600全自动生化分析仪检测患者血清补体C3.结果:使用实时荧光定量PCR仪检测慢性乙肝患者血清中的病毒拷贝数,据此可将患者血清HBV DNA检测结果分为A、B、C三组,其中A组:(103～104)copies/ml,B组:(105～106)copies/ml,C组:＞107copies/ml;每组检测补体C3指标,结果显示:A组、B组、C组分别与正常对照组比较,血清补体C3指标均有降低(P＜0.01);血清补体C3指标在A组、B组、C组间比较,均无显著变化(P＞0.05).结论:血清补体C3指标降低,提示慢性乙型肝炎患者可能有肝脏功能的损伤,该指标的检测将有助于临床诊断、治疗;不同病毒载量组间血清补体C3指标比较,降低程度不明显,提示病毒载量商低可能与慢性乙型肝炎患者肝脏功能的损伤程度无相关性,因而为乙型肝炎的发病机制研究积累了资料.     

HBV-DNA检测中的质量控制与结果分析

乙肝病毒DNA定量检测是最直接最客观的病毒复制指标,其浓度的高低与病人各期感染性呈正相关,是评价病毒传染性和抗病毒治疗的可靠方法。HBV-DNA检测的过程中,核酸的制备,试剂灵敏度和仪器的稳定性以及结果分析中参数和标准曲线的选择对结果有着显著的影响。观察实时荧光定量PCR乙肝病毒DNA的测定值,不同厂家试剂结果的差异,以及自制的室内质控血清对试剂灵敏度及仪器的稳定性的控制,处理结果中发现的假阳性和假阴性的问题,在定量PCR检测中,对乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效观察有重要的意义。1材料与方法1·1材料标本来源…     

两种HBV-DNA定量测定方法的比较

目的考察实时荧光PCR定量法(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的准确性。方法通过对 56份血清进行HBV—DNA检测,其中包括一个10倍倍比稀释系列6份、阴性血清12份和阳性血清38份。比较两种方法的准确性及临床标本符合情况。结果微板核酸杂交定量法和实时荧光定量法的线性回归系统分别为0．977 和0．999。实时荧光定量法所检测的不同含量的样本批内变异系数均低于微板核酸杂交定量法。结论实时荧光定量法具有较好的灵敏度、特异性、重复性和线性,与微板核酸杂交定量法有良好的相关性。     

实时FQ-PCR与时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎分析

目的：探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）定量检测乙型肝炎病毒（HBV—DNA）与时间分辨荧光免疫分析法对乙型肝炎免疫标志物（HBV—M）检测对乙型肝炎实验室诊断的敏感性。方法：采用两种方法分别对800例本院传染科住院及门诊可疑病人血清标本进行检测。结果：用FQ—PCR检测800例。HBV—DNA阳性例数602,阳性率87．81％,用时间分辨荧光免疫分析法检测800例,HBV—M的阳性例数477,阳性率59．63％,通过χ^2检检,χ^2=2．98,P〈0．05。结论：在乙型肝炎的实验室诊断中,FQ—PCR检测乙型肝炎病毒HBV—DNA更优于时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎免疫标志物HBV—M。     

荧光定量PCR与普通PCR检测HBV DNA的对照分析

目的 比较普通PCR（CommonPCR）和实时荧光定量PCR(Real time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测人血清HBVDNA结果之间的相互关系,为临床提供最有效的诊断方法。方法 对117例份清标本用两种方法同时进行检测,分析其相关性,比较其差异。结果 荧光定量CPR不仅能几乎100％检测出普通PCR阳性的标本,还能在其阴性的76份标本中检测出36份阳性,其拷贝数均在较低水平。在不同的血清标志物模式下,定量方法的阳性率均明显高于定性方法。结论 荧光定量PCR具有一定优势,尤其适合于使用抗病毒药物的病人的疗效观察和病情预测。     

PCR抑制物干扰HBV DNA试剂检测能力评价

目的评价PCR抑制物对乙型肝炎(简称乙肝)病毒(HBV) DNA定量检测结果的干扰。方法收集高值和低值HBV DNA阳性血清,用高黄疸、高脂血、高IgG和重度溶血阴性血清5倍稀释,制备成高值和低值干扰实验组,同样用特征指标正常阴性血清5倍稀释,制备成高值和低值正常对照组,计算偏差,按照CNAS(中国合格评定国家认可委员会)-CL02-A009文件中分子诊断项目分析性能标准:当偏倚量<±0. 24时,判断检测结果不受样本中抑制物的影响。结果4种抑制物干扰高值和低值样本HBV DNA定量检测偏倚量均<±0. 24。结论当样本中的抑制物浓度为TBil≤288. 80umol/L、Hb≤4g/L、IgG≤32. 32g/L和TG≤14. 16mmol/L时,可以作为合格标本,对HBV DNA定量检测结果没有干扰。