Fas相关死亡结构域蛋白增强5-氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞生长作用的研究

目的 通过体外和体内实验研究结肠癌细胞在稳定转染Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)基因后对5-氟尿嘧啶的敏感性,探讨FADD基因与5-氟尿嘧啶联合治疗结肠癌的可行性.方法 ①RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染FADD基因的结肠癌细胞SW480/FADD、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/neo和正常结肠癌细胞SW480中FADD基因的mRNA和蛋白表达水平.②MTT法检测3种细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性.TUNEL法和流式双染法检测细胞凋亡率.Western印迹法检测caspase-8和caspase-3的表达.③裸鼠成瘤实验观察瘤体生长曲线,病理学和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 ①SW480/FADD细胞FADD基因mRNA和蛋白表达水平明显较SW480和SW480/neo增高(P＜0.05).②5-氟尿嘧啶对SW480/FADD的抑制率明显高于SW480和SW480/neo,差异有统计学意义(P＜0.05).③5-氟尿嘧啶(10 mg/L)干预48 h后,SW480/FADD凋亡率达(33.3±4.5)%,与SW480[(13.9±3.2)%]和SW480/neo[(14.1±3.4)%]间差异有统计学意义(P＜0.05).④5-氟尿嘧啶(10 mg/L)干预48 h后,SW480、SW480/neo的procaspase-8和procaspase-3表达比SW480/FADD增高,而cleaved easpase-8和cleaved caspase-3的表达比SW480/FADD降低(P＜0.05).⑤SW480/FADD对5-氟尿嘧啶更加敏感,瘤体体积增加幅度明显小于SW480和SW480/neo,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 稳定转染FADD基因可明显增加结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在的价值.     

奥沙利铂下调survivin表达抑制人结肠癌细胞株HCT116增殖并诱导其凋亡

目的:观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人结肠癌细胞株HCT116增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制.方法:试验分空白对照组、不同浓度奥沙利铂(15、30、60或90 μM)处理组;向培养基中加入不同浓度奥沙利铂,分别在24、48、72 h取培养的HCT 116细胞;MTT法检测奥沙利铂对细胞增殖的作用;流式细胞术分析细胞周期的分布及凋亡率;Western blot和Real-time PCR检测survivin表达水平.结果:60或90 μM奥沙利铂作用48 h后引起HCT 116细胞G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞由51.5%增加到65%,细胞增殖减少;90 μM奥沙利铂作用72 h时,正常对照相比凋亡率增加了近8倍;有明显的survivin表达下调伴随细胞凋亡.结论:奥沙利铂抑制HCT 116细胞增殖、诱导其凋亡并且呈剂量依赖性,其机制可能与下调survivin表达有关.     

程序性细胞死亡5因子增强顺铂抑制结肠癌细胞生长作用的体外研究

目的通过体外实验研究稳定转染程序性细胞死亡5(PDCD5)因子的结肠癌细胞对顺铂的敏感性,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗结肠癌的可行性。方法实时定量RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染PDCD5因子的结肠癌细胞SW480/PD-CD5、稳定转染空载体的结肠癌细胞SW480/Neo以及正常结肠癌细胞SW480的PDCD5因子的mRNA和蛋白表达水平。MTT法检测3种细胞对顺铂的敏感性。Hoechst 33258法和流式双染法检测3种细胞在顺铂干预下的凋亡率。Western印迹法检测3种细胞在顺铂干预下Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Cyt c的表达水平。结果 SW480/PDCD5中PDCD5因子mRNA和蛋白表达水平较SW480和SW480/Neo增高(P<0.05)。SW480/PDCD5增殖抑制率高于SW480和SW480/Neo,生存率低于SW480和SW480/Neo(P<0.05)。顺铂(10 mg/L)干预24 h后,SW480/PDCD5凋亡率高于SW480和SW480/Neo(P<0.05)。顺铂(10 mg/L)干预24 h后,SW480、SW480/Neo的Bcl-2、Bcl-xL以及核内Cyt c表达较SW480/PDCD5增高(P<0.05),而Bax和胞浆Cyt c的表达较SW480/PDCD5降低(P<0.05)。结论稳定转染PDCD5因子可以增加结肠癌细胞对顺铂的敏感性,二者联合应用在结肠癌治疗中有潜在价值。     

白藜芦醇通过SDF-1/CXCR4信号通路诱导大肠癌细胞株SW480凋亡

[目的]探讨白藜芦醇(Res)对大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响,并研究Res对SDF-1/CXCR4信号通路的作用。[方法]以20、40、80μmol/L Res处理SW480细胞后,采用CCK8方法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot方法分析细胞中凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2及SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白的表达水平。[结果]Res处理SW480细胞后,细胞增殖抑制率明显升高,且呈时间和剂量依赖性(P0.05);Res处理后SW480细胞凋亡率也显著升高(P0.05);药物处理组中促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达显著升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2及SDF-1、CXCR4蛋白表达水平显著降低,表现出剂量依赖性(P0.05)。[结论]Res抑制大肠癌细胞株SW480增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与降低SDF-1/CXCR4信号通路活化相关。     

芥菜籽提取物对人结肠癌细胞系SW480凋亡的影响

目的观察芥菜籽提取物（MSE）对人结肠癌细胞系SW480细胞凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法采用体外细胞培养技术,用CCK-8法观察MSE对人大肠癌SW480细胞生长的影响;Hoechest3325荧光染色显微镜下观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制。结果在浓度0．2—1．0mg／ml作用24—72h范围内,MSE对SW480细胞增殖具有明显抑制作用（P〈0．01）。24h内其凋亡率随着药物浓度的增加而增加,且逐渐从早期凋亡走向晚期凋亡,呈浓度依赖性;24h内Caspase-3活性较对照组显著提高（P〈0．05）。结论MSE能有效抑制体外培养的人结肠癌细胞SW480的生长,这种抑制作用与MSE促进肿瘤细胞凋亡、激活凋亡蛋白酶Caspase-3的活性有关。     

苦参碱对大肠癌细胞增殖和表达增殖诱导配体的影响

目的 通过研究苦参碱对大肠癌细胞株SW480增殖和表达增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)水平的影响,为苦参碱和APRIL的抗癌研究提供理论基础.方法 采用MTT法检测苦参碱对大肠癌细胞株SW480增殖的抑制率.免疫组化法和实时荧光定量PCR检测大肠癌SW480细胞株的APRIL表达,用实时荧光定量PCR检测加入不同终浓度(0.5、1.0、2.0 mg/ml)的苦参碱后24、48、72 h SW480细胞表达APRIL mRNA的水平,设氟尿嘧啶为对照组及不加药为空白对照组.结果 苦参碱对大肠癌SW480细胞的增殖有明显的抑制作用,并且呈剂量和时间依赖.SW480细胞有明显的APRIL表达,加入不同浓度(50、100、200 ug/ml)的氟尿嘧啶后,SW480细胞APRIL mRNA的水平均逐渐升高,至72 h表达最高并与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.001),而加入不同浓度苦参碱,在药物作用后24 h,SW480细胞的APRIL mRNA水平升高并与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.001),而后逐渐下降,至药物作用后72 h,其水平与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 氟尿嘧啶在抑制SW480细胞增殖的同时,残存癌细胞的增殖能力有可能因为APRILmRNA水平的高表达而增强,故同时辅予对抗APRIL功能的治疗措施可能具有潜在的重要作用,而苦参碱不会引起SW480细胞APRIL mRNA水平的持续升高.可望成为一个有益的抗大肠癌辅助治疗手段.     

人参皂苷Rh3对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rh3对人结肠癌细胞SW480增殖与凋亡的影响。方法体外培养的人结肠癌细胞SW480分别用无血清培养液稀释的终浓度为15、30、60、120和240μg/ml的人参皂苷Rh3作用24、48及72h,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖;采用终浓度为15μg/ml的人参皂甙Rh3作用于SW480细胞24及72h,应用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,采用终浓度为15、20μg/ml的人参皂甙Rh3作用于SW480细胞24及72h;应用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法计算细胞凋亡率和坏死率。结果 15μg/ml人参皂苷Rh3作用48h即可明显抑制SW480细胞增殖,其作用随剂量增加和作用时间延长而增强,30μg/ml人参皂苷Rh3作用72h抑制率超过80%;15μg/ml人参皂苷Rh3作用24h部分细胞凋亡,胞浆呈棕色,作用72h凋亡细胞增多;15μg/ml人参皂苷Rh3作用24h细胞凋亡率为25.5%,20μg/ml人参皂苷Rh3作用24h细胞凋亡率为31%,未见细胞坏死,15μg/ml人参皂苷Rh3作用72h细胞凋亡率为55%、坏死率为7%,20μg/ml人参皂苷Rh3作用72h细胞凋亡率为67.5%、坏死率为7%。结论人参皂苷Rh3能抑制人结肠癌细胞SW480增殖,诱导其凋亡,作用呈剂量依赖性和时间依赖性。     

雌激素受体β过表达对大肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的观察雌激素受体β（ERβ）过表达对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆（SW480-C1-ERβ）。RT—PCR及WesternBlot鉴定ERβ的过表达。以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞（SW480-pEGFP—C1）作为对照,在无雌激素或有雌激素作用的条件下,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT—PCR方法检测凋亡相关基因survivin和Bax表达。结果SW480和SW480-pEGFP—C1细胞中ERβ mRNA和蛋白表达较低,而稳定转染的SW480-C1-ERβ细胞中ERβmRNA和蛋白表达明显增加。在有或无雌激素作用的条件下均可发现,与SW480细胞或SW480-pEGFP—C1细胞比较,SW480-C1-ERβ细胞增殖速度减慢,凋亡率明显增高,survivin表达减低,Bax表达增高;在SW480-C1-ERβ细胞中,有雌激素作用者较无雌激素作用者以上变化更明显。结论ERβ过表达可以同时以配体非依赖性和配体依赖性的方式抑制细胞增殖和增加细胞凋亡,可能与调控凋亡相关基因survivin和Bax表达有关。     

C-FLIPsiRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的探讨C-FLIP siRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响。方法常规方法培养大肠癌SW480细胞,待细胞处于对数生长期时,进行转染,分别转染C-FLIP siRNA重组体(观察组)和nonsilencing空载体(NC组),转染后24 h,将细胞传至96孔板中,两组转染细胞各传32孔,每8孔为一组平行孔,分别检测16 h、24 h、48 h、72 h细胞的增殖情况,并检测两种转染细胞中GHR受体mRNA和蛋白的表达情况。结果 C-FLIP siRNA重组体转染率达75%;大肠癌SW480培养后各时间点的吸光度值相比,差异有统计学意义(F=7.329,P=0.016),观察组的吸光度值均小于对照组,并且随着时间的延长,观察组吸光度值增加越来越慢,直至不增加;两组GHR受体蛋白水平相比,对照组高于观察组,差异有统计学意义(t=73.140,P=0.000);GHR mRNA表达观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=12.685,P=0.000)。结论 C-FLIP siRNA重组体能够有效抑制大肠癌细胞株中SW480的增殖。     

siRNA沉默ERCC1基因表达对结肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响和机制

目的 采用小干扰RNA(siRNA)技术作用于人结肠癌细胞HCT116中的ERCC1,探讨其对结肠癌铂类耐药细胞株增殖、凋亡的影响。方法 体外培养结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP并验证其耐药性;qRT-PCR和蛋白印迹技术检测细胞和组织中ERCC1表达量的变化;采用siRNA-NC和siRNA-ERCC1转染细胞,CCK-8法检测耐药细胞的增殖能力,流式细胞术检测耐药细胞的凋亡变化。结果 结肠癌耐药组织和人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP ERCC1的表达水平明显升高(P<0.05);转染siRNA ERCC1后,HCT116/L-OHP细胞中的ERCC1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);奥沙利铂联合处理后,siRNA ERCC1转染使HCT116/L-OHP细胞的增殖活性下降、凋亡率升高。结论 siRNA能有效下调ERCC1基因表达,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡,增强奥沙利铂对耐药细胞株HCT116/L-OHP的杀伤作用。     

顺铂对胃癌细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过研究顺铂对人胃癌BGC-823细胞Bax和Bcl-2的影响,探讨顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法用化疗药物顺铂以不同浓度、不同时间处理对数期生长的人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,采用免疫印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bax及Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结果顺铂对人胃癌细胞BGC-823生长增殖具有明显抑制作用,其效应成浓度和时间依赖性（P〈0．05）。不同浓度的顺铂处理BGC-823细胞24小时后,Bax蛋白和mRNA水平成浓度依赖性增加（P〈0．05）,而Bcl-2蛋白和mRNA水平成浓度依赖性减少。结论经顺铂处理的人胃癌BGC一823细胞,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了Bax的表达,同时使Bcl-2表达下调,此途径可能为顺铂所诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990生长抑制作用的体外研究

目的 观察硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990增殖、凋亡的影响,探讨硼替佐米杀伤癌细胞的可能机制.方法 应用1、10、50、100、500 nmol/L及1、10 μmol/L的硼替佐米干预BxPC3、SW1990细胞,以硼替佐米未干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、survivin mRNA表达;蛋白质印迹法检测pro-caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、surviving蛋白表达.结果 大于50 nmol/L的硼替佐米干预胰腺癌BxPC3、SW1990细胞时,呈浓度及时间依赖性抑制细胞的增殖,其中硼替佐米对BxPC3细胞的生长抑制作用显著大于对SW1990细胞的作用,两者差异有统计学意义（P值均＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预组BxPC3和SW1990细胞凋亡率分别为（22.56±4.23）％和（（12.71±2.23）％,显著高于对照组的（2.15±0.47）％和（2.32±0.54）％（P值均＜0.05）,且BxPC3细胞的凋亡率显著高于SW1990细胞（P＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预48 h后BxPC3和SW1990细胞的Bak mRNA表达无显著变化,Bax mRNA及蛋白表达显著增加（P值均＜0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-xl mRNA表达均减少（P值均＜0.05）.survivin mRNA和蛋白表达在BxPC3细胞中均减少,而在SW1990细胞中均增加（P值均＜0.05）.2株细胞的pro-caspase-3蛋白表达减少,而cleaved-caspase-3蛋白表达增加（P值均＜0.05）.结论 硼替佐米可抑制胰腺癌细胞BxPC3、SW1990的增殖、诱导凋亡,对BxPC3细胞的作用高于对SW1990细胞,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径及survivin参与的肿瘤耐药相关.     

蛹虫草提取物对人结肠癌细胞SW111C生长的抑制作用

目的探讨蛹虫草提取物（RW）对结肠癌细胞株SW111C的抑制作用及可能机制。方法将不同浓度的RW作用于体外培养的SW111C细胞。采用四氮唑盐（MTT）比色法检测不同作用时间SW111C增殖抑制率;姬姆萨染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术（FCM）PI染色法检测细胞凋亡率和细胞周期的分布;端粒重复序列扩增（TRAP）-银染法检测端粒酶活性变化。结果 RW对SW111C细胞有明显抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性;经RW作用72 h后,细胞发生凋亡形态学变化,凋亡率随浓度的增高而增高,细胞周期阻滞于G1期,S期细胞减少;随着药物浓度升高,端粒酶活性逐渐减弱。结论 RW对体外培养的SW111C细胞有增殖抑制作用,并呈现浓度和时间依赖性,其机制可能与诱导SW111C细胞凋亡、改变其细胞周期分布、降低端粒酶活性有关。     

根皮素对结肠癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探究根皮素对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 设置对照组、低浓度组(25μmol/L根皮素)、中浓度组(50μmol/L根皮素)、高浓度组(100μmol/L根皮素)、高浓度+LiCl组(100μmol/L根皮素+20 mmol/L Wnt激活剂),MTT法检测SW480细胞活力；克隆形成实验检测SW480细胞增殖情况；流式细胞术检测SW480细胞凋亡情况；Western blotting检测SW480细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况。结果 相较于对照组，低浓度组、中浓度组、高浓度组SW480细胞存活率、c-Myc、Cyclin D1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β水平显著降低，克隆细胞数减少而细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著提高(P<0.05),呈剂量依赖性；与高浓度组相比，高浓度+LiCl组细胞存活率、c-Myc、CyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β水平显著提高，克隆细胞数增加而细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著降低(P<0.0...     

薏苡仁油联合奥沙利铂对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析薏苡仁油联合奥沙利铂对结肠癌HT-29细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 将人结肠癌HT-29细胞株作为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度注射用薏苡仁油和奥沙利铂联合作用对人结肠癌HT-29细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Suvivin表达水平。结果 薏苡仁油组、奥沙利铂组、奥沙利铂+薏苡仁油组均会对人结肠癌HT-29细胞增殖产生一定抑制作用,且薏苡仁油浓度越高,作用时间越长,细胞增殖抑制率越高,差异有统计学意义(P<0.05);与薏苡仁油组、奥沙利铂组相比,奥沙利铂+薏苡仁油组细胞增殖抑制率更高,差异有统计学意义(P<0.05);薏苡仁油组、奥沙利铂组、奥沙利铂+薏苡仁油组细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.05);薏苡仁油浓度越高,细胞凋亡率也越高,差异有统计学意义(P<0.05);奥沙利铂+薏苡仁油组细胞凋亡率明显高于单独奥沙利铂组、薏苡仁油组,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组中Survivin mRNA为阴性表达,将不同浓度薏苡仁油加入行4...     

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组：NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<...     

蟾蜍灵联合奥沙利铂对胃癌MGC803细胞增殖抑制及凋亡的影响

目的 研究蟾蜍灵联合奥沙利铂诱导人胃癌细胞株MG C803凋亡及对凋亡因子Bax、Bcl-2的影响.方法 应用MTr法检测不同浓度蟾蜍灵及奥沙利铂单药及联合对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡和周期阻滞;Western印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)蟾蜍灵及奥沙利铂单药均抑制MGC803细胞增殖,呈剂量时间依赖效应,且联合用药的细胞增殖抑制率高于单药组,差异有统计学意义.24、48 h及72 h联合指数(CI)分别为0.693、0.596、0.481;(2)药物作用细胞24h,流式细胞仪检测10 nmol/L蟾蜍灵及10 μg/ml奥沙利铂凋亡率分别为2.9％及4.3％,联合用药组为14.13％,与单药组对比有统计学差异;(3)Western印迹结果显示,蟾蜍灵、奥沙利铂单用于胃癌细胞24h后,Bax及Bcl-2表达无明显变化,而联合组Bax蛋白表达上调到对照组145.94％,Bcl-2蛋白下调到对照组57.14％.结论 蟾蜍灵联合奥沙利铂协同诱导胃癌MGC803细胞凋亡,且可能与下调Bcl-2、上调Bax蛋白有关.     

survivin-siRNA重组腺病毒质粒与结直肠癌细胞剂量和时间的相关性

目的构建survivin-siRNA重组腺病毒质粒,探讨不同浓度和时间点的survivin-siRNA重组腺病毒质粒pBAsi-survivin对结直肠癌SW480细胞的影响。方法将制备好的survivin-siRNA重组腺病毒载体pBAsi-survivin,按浓度梯度分别为50、100、150、200、250、300 nmol/L 6个浓度梯度分别转染SW480,并检测最适浓度下转染12、24、36、48、60、72 h 6个时间梯度,用RT-PCR检测各组细胞中survivin mRNA的表达水平,用Western印迹检测各组细胞中survivin蛋白的表达水平,用MTT法检测细胞的生长情况。结果结直肠癌SW480细胞对survivin-siRNA重组腺病毒pBAsi-survivin有浓度依赖性,浓度在100 nmol/L时survivin mRNA表达抑制率39.01%,蛋白表达抑制率为47.83%,细胞生长抑制率为(15.1±1.0)%;在转染48 h后转染效率最高,survivin mRNA和蛋白表达抑制率分别为67.19%、68.24%,细胞生长抑制率为(37.0±2.7)%。结论结直肠癌SW480细胞对survivin-siRNA重组腺病毒pBAsi-survivin有浓度和时间依赖性,pBAsi-survivin浓度100 nmol/L是体外抑制结直肠癌SW480细胞的最适宜浓度,转染48 h效率最高。     

姜黄素对结肠癌细胞SW480 FasL基因表达和侵袭能力的影响

目的研究姜黄素对人结肠癌SW480细胞FasL mRNA表达及对其侵袭能力的影响,为中药抗肿瘤提供实验依据。方法根据MTT法得到姜黄素对SW480细胞的半数有效抑制浓度（IC50）,确定药物作用浓度。SW480细胞分别经姜黄素不同浓度（0．5 IC50、IC50）作用后,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测姜黄素作用前后人结肠癌SW480细胞FasL mRNA的变化;应用Transwell细胞侵袭试验检测姜黄素对SW480细胞侵袭能力的影响。结果姜黄素处理后SW480细胞FasL mRNA表达水平均明显高于对照组（P〈0．01）;而且FasL mRNA表达水平随姜黄素作用浓度增加显著上调,姜黄素不同浓度组比较均有显著性差异（P〈0．01）;随姜黄素作用浓度升高,SW480细胞侵袭能力明显增强,不同浓度组比较均有显著性差异（P〈0．01）。结论姜黄素在一定时间内均可上调人结肠癌SW480细胞FasL mRNA的表达,而且这种上调作用在一定范围内呈剂量依赖性,可使结肠癌细胞的侵袭能力增强。     

重楼皂苷Ⅰ对结肠癌耐奥沙利铂细胞株的毒性研究

目的探讨重楼皂苷Ⅰ对结肠癌耐奥沙利铂细胞的体外毒性及其机制。方法复苏结肠癌SW480、LoVo细胞,采用大剂量冲击法诱导结肠癌耐奥沙利铂细胞,CCK-8实验检测其耐药性,Transwell细胞侵袭实验检测其侵袭性以鉴定其恶性生物学行为。CCK-8实验检测重楼皂苷Ⅰ对耐药细胞及其亲代细胞的毒性作用,Annexin V/PI染色流式细胞术检测重楼皂苷Ⅰ处理细胞后Annexin V/PI阳性细胞比例以检测其对细胞凋亡的作用。提取细胞总蛋白,Western blotting检测重楼皂苷I处理细胞后细胞中凋亡相关蛋白Bax和Caspass-3等蛋白的表达。结果大剂量奥沙利铂冲击法成功诱导奥沙利铂耐药细胞LoVo/L-OHP、SW480/LOHP。CCK-8细胞毒性实验显示,LoVo/L-OHP、SW480/L-OHP的IC_(50)值比其亲代细胞提高5~25倍,Transwell细胞侵袭实验证实,耐药细胞比亲代细胞具有更强的侵袭性(P0.019)。CCK-8实验显示,重楼皂苷I对SW480、LoVo及其耐奥沙利铂细胞的IC_(50)值相似。Annexin V/PI染色、流式细胞仪检测凋亡细胞比例显示,重楼皂苷I处理细胞后,Annexin V/PI阳性细胞率明显升高,Western blotting结果显示,重楼皂苷Ⅰ处理细胞后细胞中Bax和Caspass-3蛋白表达水平升高。这两个实验证实,重楼皂苷Ⅰ能够促进结肠癌细胞及其耐药细胞凋亡。结论重楼皂苷I对结肠癌细胞及耐奥沙利铂细胞均有良好的抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用是通过介导结肠癌细胞凋亡实现的。