肝内转移和多中心发生的多结节肝癌蛋白质表达谱的差异分析

目的 比较分析多结节肝癌的肝内转移癌灶和多中心发生癌灶的蛋白质表达谱,为更加准确的分子分型方法提供实验依据. 方法对5例肝内转移(IM)和6例多中心发生(MO)的多结节肝癌按照结节大小分为IM1、IM2、MO1、MO2四组,联合双向凝胶电泳与质谱技术分析多结节肝癌的蛋白质表达谱;并用Westem blot验证质谱结果.结果 双向凝胶电泳联合质谱技术鉴定IM1、IM2、MO1、MO2四组共30个差异蛋白质点,确认为25种差异表达的蛋白质;Gene Ontology 分类显示其与细胞运动、信号转导、氧化还原、脂类代谢、氨基酸代谢等有关. 结论多结节肝癌肝内转移和多中心发生的蛋白质表达不同;双向凝胶电泳联合质谱技术可作为二者分子分型的方法,有利于临床医师对肝癌患者实施治疗和判断预后.     

DJ-1基因在肝细胞癌中的表达及其与肝癌侵袭和转移的关系

目的 探讨DJ-1基因mRNA及其蛋白在肝细胞癌中的表达规律及其与肝细胞癌侵袭和转移的关系. 方法应用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测46例肝细胞癌中DJ-1基因mRNA及蛋白的表达情况,结合患者的临床病理资料分析DJ-1基因与肝细胞癌的侵袭与转移的关系.应用χ2检验进行统计学处理.结果 肝癌组织中DJ-1基因mRNA及蛋白的表达阳性率分别为69.6%(32/46)和58.7%(27/46),明显高于癌旁肝组织的表达阳性率[分别为39.1%(18/46)和34.8%(16/46)],χ2=8.587,P<0.05;且DJ-1基因蛋白在肝癌组织中的高表达与患者肿瘤的大小、甲胎蛋白水平、HBsAg、肿瘤的分化程度以及有无肝硬化无关(P>0.05),而与肿瘤有无包膜及有无门静脉癌栓有关(χ2=7.846,P<0.05).结论 DJ-1基因在肝细胞癌的侵袭和转移过程中可能起重要作用.     

热休克蛋白27高表达与肝细胞癌耐药相关

目的应用蛋白质组学技术从蛋白质水平寻找肝癌耐药相关的蛋白质分子。方法以长春新碱（VCR）诱导HepG2细胞建立的耐药肝癌细胞HepG2／VCR为研究对象,用二维电泳技术分离两种细胞的总蛋白,对差异表达的蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾串联质谱进行分析鉴定。再用反义核酸抑制该差异蛋白质表达以研究其与耐药的关系。结果鉴定出一个在肝癌耐药细胞株HepG2／VCR中高丰度表达的蛋白质为热休克蛋白27（HSP27）,反义核酸抑制HSP27的表达后增强了HepG2／VCR对VCR的化疗敏感性（P〈0．05）。结论HSP27可能是与肝癌细胞株HepG2／VCR耐药密切相关的蛋白质。     

C-met-siRNA在肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和转移中的作用

目的探讨c—met-siRNA对肝细胞癌生长和侵袭的影响。方法采用脂质体法将pSuppressorRetro／c—met—siRNA导入包装细胞Phoenix A中获得含c-met-siRNA的逆转录病毒颗粒，进一步感染靶细胞MHCC97-H，Western blot检测c—Met的表达，通过生长曲线、运动试验及侵袭试验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。结果肝细胞癌MHCC97-H细胞中c—Met的表达显著降低；细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制。结论c—met—siRNA能抑制肝细胞癌细胞MHCC97-H的生长、运动及侵袭，这对肝细胞癌的生长、转移具有重要的临床意义。     

肝癌细胞放射敏感性与survivin蛋白表达的关系

目的 探讨肝癌细胞放射敏感性与survivin表达的关系.方法 肝癌细胞HepG2和SMMC-7721在接受不同剂量γ射线照射后,分别采用克隆形成法、免疫细胞化学法、流式细胞术、比色法等检测细胞存活率、survivin蛋白表达、细胞周期变化和Caspase-3活性.结果 在2Gy照射下HepG2和SMMC-7721细胞的存活分数分别为0.43±0.01与0.70±0.02,SMMC-7721较HepG2放射抗拒.γ射线对SMMC-7721细胞的G2/M期阻滞时间较HepG2细胞长(48 h对24 h),在阻滞峰各剂量点SMMC-7721细胞的G2/M期比例也更高.γ射线可上调两株肝癌细胞survivin蛋白的表达,照射后48～72 h,SMMC-7721细胞的survivin蛋白表达水平显著高于HepG2细胞(t值为2.81～5.20,P值均＜0.05).而Caspase-3的活化水平在放射敏感的HepG2细胞中更高(t值为6.05～6.72,P值均＜0.01).结论 射线诱导的survivin表达上调及survivin对Caspase-3的负调控可能是SMMC-7721细胞较HepG2细胞放射抗拒的原因之一.     

KiSS-1与肝癌细胞增殖及黏附和侵袭关系的体外实验研究

目的 观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响,为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础.方法 培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H,瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组,转染空载体pcDNA3.1/HisC的细胞为空白对照组,未转染细胞为阴性对照组,采用流式细胞术与四甲基偶氮唑盐法、基质黏附实验、Transwell体外侵袭和趋化运动实验检测KiSS-1表达对MHCC97-H细胞体外增殖、黏附、侵袭和运动能力的影响.应用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,组间差异以两样本t检验分析. 结果 转染组、空载体组和未转染组与Matrigel基质的黏附能力(A值)分别为0.257±0.029、0.374±0.016和0.394±0.031,转染组明显低于空载体组(t=-7.90345,P＜0.01)和未转染组(t=-7.22752,P＜0.01);与Fibronectin基质的黏附能力(A值)分别为0.292±0.004、0.394±0.010和0.412±0.023,转染组明显低于空载体组(t=-20.93138,P＜0.01)和未转染组(t=-11.31371,P＜0.01);趋化运动至Transwell小室下室表面的细胞数分别为65.80±1.92、93.80±2.28和96.40±2.07,转染组明显低于空载体组(t=-30.11750,P＜ 0.01)和未转染组(t=-24.19142,P＜0.01);侵袭至Transwell小室下室表面的细胞数为42.40±1.14、66.00±1.58和67.80±1.92,转染组明显低于空载体组(t=-27.0711,P＜0.01)和未转染组(t=-25.4,P＜0.01).而转染组、空载体组和未转染组的细胞增殖能力(A值)分别为0.644±0.027、0.669±0.022和0.678±0.027,转染组略低于空载体组(t=-1.60371,P＞0.05)和未转染组(t=-1.97828,P＞0.05);同时,转染组较空载体组和未转染组未出现明显的G1期阻滞和S期阻滞,也未出现明显的凋亡峰.结论 KiSS-1表达虽不影响肝癌细胞的体外增殖能力,但可抑制其黏附、侵袭和运动能力,提示KiSS-1可作为一个候选的肝细胞癌转移抑制基因,可望成为肝癌侵袭转移治疗的新靶点.     

肝癌转移相关的微小RNAs在不同转移潜能肝癌细胞系的定量研究

目的 研究与转移密切相关的微小RNAs(miRNAs)在不同转移潜能肝癌细胞系的表达水平,探讨其在肿瘤转移过程中的生物学功能.方法 提取细胞系MHCC97H、MHCC97L、HepG2、L02的总RNA,通过反转录获得特异miRNA(miR-122a、miR-124a、miR-148a、miR-148b、miR-15a、miR-219、miR-30c、miR-338、miR-34a、Let-7g、miR-9)的cDNA,并应用TaqMan MGB探针法对其进行定量检测.采用AB17500系统软件V1.3.1采集Ct值,并使用miRNA内参基因RNU6B校正,相对定量计算公式RQ=2-△Ct,A Ct=CtmiRNAs-CtRNu6B.数据均经SPSS13.0统计软件包处理,采用t检验或非参数检验. 结果 转移相关的miRNAs(miR-124a除外)在MHCC97H与MHCC97L中表达,差异均有统计学意义.HepG2中miR-30c、miR-338、miR-34a和Let-g的表达水平明显高于L02,分别为miR-30c(8.41±0.40比6.82±0.29),miR-338(3.14±0.29比-2.36±0.32),miR-34a(0.71±0.40比-2.95±0.26),Let-7g(-4.07±0.55比-6.98±0.56),t值依次为2.948,12.656,7.484,3.684,P值均＜0.05,差异有统计学意义.而miR-148b,miR-9的表达则显著低于正常肝细胞,分别为miR-148b(1.96±0.51比3.76±0.28),miR-9(-4.38±0.86比-1.10±0.53),t值依次为-3.073,-3.324,P值均＜0.05,差异有统计学意义.miR-148家族中miR-48b在所测细胞系中的表达(5.46±1.21)均显著强于miR-148a的表达(1.29±0.35),Z=-5.097,P=3×10-7,差异有统计学意义.结论 可以利用肝癌细胞系列细胞平台进一步研究肝癌转移相关miRNAs在肿瘤转移过程中的生物学功能.     

腺苷酸环化酶相关蛋白2在肝癌组织中的表达及其意义

有关腺苷酸环化酶相关蛋白(adenylate cyclase-associated protein,CAP)2在肝癌中的生物学作用机制尚不明确.本研究应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学技术检测CAP2在人正常肝脏、肝硬化和肝癌组织中的表达,探讨CAP2在肝癌发生发展过程中的作用.     

肝癌转移相关的骨桥蛋白表达及其糖基化的改变

目的 检测骨桥蛋白(OPN)在不同转移潜能肝癌细胞株及肝癌组织中的蛋白表达水平及其糖基化水平,探讨OPN糖基化改变与肝癌转移的相关性及其意义. 方法 用免疫组织化学和Western blot法检测人肝癌组织(非转移组6例、转移组7例)及不同转移潜能人肝癌细胞株(L02、Hep3B、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6)中OPN蛋白水平;采用免疫沉淀技术纯化肝癌组织中的OPN蛋白,并采用多重凝集素印迹技术检测转移与非转移肝癌组织中OPN糖基化水平差异.数据统计采用t检验和方差分析.结果 OPN在不同转移潜能肝癌细胞株的表达差异具有统计学意义(F=5.04,P＜0.01).在肝癌组织中,转移组OPN蛋白表达水平明显高于非转移组(t=2.447,P＜0.05),相对吸光度值分别为0.69±0.21和0.45±0.14.免疫沉淀技术成功纯化肝癌组织中的OPN蛋白,后续的凝集素印迹结果显示:与非转移组相比,转移组OPN蛋白对凝集素朝鲜槐、红腰果E型、蔓陀罗、刀豆素A的亲和力较低(P值均＜0.05).结论 OPN蛋白表达水平与肝癌转移潜能增强呈正相关;OPN蛋白的α2,3-唾液酸、平分型GlcNAc、多天线、偏二天线的糖链、高甘露糖型N-糖等糖基化水平改变可能与肝癌转移潜能增高有关.     

细胞间黏附分子-1异常表达与肝癌的侵袭生长和转移

肝细胞性肝癌(HCC)的侵袭生长和转移是治疗失败和死亡的主要原因.HCC转移的发生是多步骤、复杂的生物学过程,在体内受到多种因素调节.通常认为HCC转移的过程是原发部位的癌细胞脱离原发病灶进入血流,在远端的转移部位附着于内皮细胞后开始生长,破坏基底膜完整性,形成浸润性生长.现有的研究结果表明,在HCC的转移过程中多种细胞黏附分子(cell adhesion molecule,CAM)参与其中,并发挥重要作用[1].随着肿瘤免疫学及多种"组学"如基因组学、蛋白质组学、转录组学等新技术的进展,关于CAM与肝癌转移发生机制研究的进展较快.本文综述了与肝癌细胞侵袭生长和远处转移密切相关的细胞间黏附分子-l(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的研究进展.     

内皮细胞特异性分子1在原发性肝癌中的表达及其意义

Objective To study the expression and significance of endothelial cell specific molecule-1(ESM-1) in hepatocellular carcinolna(HCC)tissue and serum from HCC patients.Methods The ESM-1 expression was evaluated by immunohistochemistry staining and quantitative real-time PCR in 30 tumor tissues from HCC patients,15 surrounding non-cancerous hepatic parenchyma,and 15 normal controls.Serum levels of ESM-1 were also measured in the HCC patients and healthy controls by Enzyme-linked imrnunosorbent assay(ELISA).Results ESM-1 was expressed in endothelium of 24 HCC tissues and 6 pericarcinomatous tissues.however,it was not expressed in normal liver tissues.The mRNA level of ESM-1was 0.064±0.018,0.383±0.103,0.528±0.148 in the corresponding tissues,respectively.The mRNA level of ESM-1 in tissues was correlated with the TNM phase of HCC patients.tumor vascular invasion as well as metastasis.The serum ESM-1 was(12.643±2.280)ng/ml and(4.660±1.172)ng/ml in hepatic cell carcinoma and normal controls,respectively.Conclusion The expression of ESM-1 is significantly upregulated in HCC,suggesting that ESM-1 may play an important role in the pathoigenesis of HCC.     

Dickkopf-1 (DKK1) promotes invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma

BackgroundDickkopf-1 (DKK1) recently has been reported to be involved in the progress of hepatocellular carcinoma, but its concrete role is not clear. The objective of this study is to investigate the clinical significance, biological function and molecular mechanism of DKK1 in the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma.MethodsThe mRNA and protein expression levels of DKK1 in hepatocellular carcinoma were detected and its prognostic significance was assessed. The biological function of DKK1 in hepatocellular carcinoma was investigated by using wound healing, transwell invasion assay and hepatocellular carcinoma metastatic mouse model.ResultsDKK1 was predominantly elevated in hepatocellular carcinoma tissues, especially in tissue with vascular invasion. The increased DKK1 expression was correlated with multiple tumour nodes, high Edmondson–Steiner grade and vein invasion, as well as poor overall and disease-free survival of hepatocellular carcinoma. DKK1 could promote hepatocellular carcinoma cell invasion and metastasis in vitro and in vivo. Finally, a positive relationship of DKK1 expression with RhoA and JNK levels was found in both hepatocellular carcinoma cell lines and tissues, suggesting that DKK1 promotes invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma possibly through the non-canonical Wnt pathway.ConclusionsCollectively, our findings suggest that DKK1 could serve as a novel prognostic marker and therapeutic target for hepatocellular carcinoma.     

Relationship between expression of CD44v6 and nm23-H1 and tumor invasion and metastasis in hepatocellular carcinoma

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＣＤ４４ｉｓａｃｅｌｓｕｒｆａｃｅｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ．Ａｓａｋｉｎｄｏｆａｄｈｅｓｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌｅ,ｉｔｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓｉｎｃｅｌｃｅｌａｎｄｃｅｌｍａｔｒｉｘａｄｈｅｓｉｏｎ...     

内皮细胞特异性分子1在原发性肝癌中的表达及其意义

目的 探讨内皮细胞特异性分子1(ESM-1)在原发性肝癌中的表达情况及其意义.方法 采用免疫组织化学法和荧光实时定量PCR检测ESM-1在15份正常肝组织,15份癌旁组织及30份肝癌组织中的阳性表达率及mRNA水平,并分析肝癌组织ESM-1的表达情况与患者临床特征的关系;用酶联免疫吸附法测定相应肝癌患者及正常对照者血清中ESM-1的水平.计数资料采用X2检验,计量资料采用两样本均数t检验及t'检验.结果 在正常肝组织,癌旁组织及肝癌组织中,ESM-1的阳性表达率分别为0.40%(6/15)、80%(24/30);mRNA水平分别为0.064±0.018、0.383±0.103、0.528±0.148,各组织中ESM-1表达水平的差异有统计学意义(P＜0.05).ESM-1的表达与肝癌的TNM分期,血管侵犯显著相关(P＜0.01).肝癌患者血清ESM-1的水平[(12.643±2.280)ng/ml]明显高于正常对照组[(4.660±1.172)ng/ml],t=10.16,P＜0.05.结论 肝癌患者ESM-1表达水平的增高可能在肝癌的发生、发展和转移中起重要作用.     

Increased polycomb-group oncogene Bmi-1 expression correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma

Purpose Recent studies have identified polycomb-group gene Bmi-1 as oncogene in the generation of mouse pre-cell lymphomas, and overexpression of Bmi-1 has been found in several human tumor with the disease progress and poor prognosis of the cancer patients. Methods In present study, we investigated Bmi-1 expression and its prognostic significance in hepatocellular carcinoma (HCC) by performing immunohistochemical analysis, using a total of 137 HCC clinical tissue samples. Results High Bmi-1 expression (Bmi-1 2+ or 3+) was shown in 29.9% cases. The positive immuno-staining of Bmi-1 was not only in well/moderately-differentiated tumor cells, but also in surrounding noncancerous or cirrhotic liver tissue. Bmi-1 expression level did not correlate with any clinicopathological parameters. However, survival analysis showed that the high-Bmi-1 group had a significantly shorter overall survival time than the low-Bmi-1 group (P = 0.047). Multivariate analysis after 24 months revealed that Bmi-1 expression was a significant and independent prognostic parameter (P = 0.002) for HCC patients. Conclusions Our study indicated that Bmi-1 could be a candidate biomarker for long-term survival in HCC. The first two authors contributed equally to this work.