抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells．CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody，Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞，具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子，这就提出一个问题。     

CD_3单克隆抗体激活细胞的体外抗肿瘤作用

目的:观察CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD3AK)的体外杀伤肿瘤作用。方法:采用MTT法测定不同时期CD3AK细胞的杀伤活性。结果:培养到第4天的CD3AK细胞已有明显的杀伤活性,第10天达高峰;CD3AK对K562、H7402和MNK45肿瘤细胞的杀伤活性显著高于LAK和NK细胞(P<0.05),对Hela-3肿瘤细胞的杀伤活性略低于LAK细胞。结论:CD3AK是一种广谱、高效的肿瘤杀伤细胞,但它对不同种类的肿瘤细胞的杀伤效应又存在着较大的差异。     

人CD3AK细胞杀伤人肺腺癌细胞的形态学观察

抗CD3抗体激活的杀伤细胞(CD3AK细胞)是一种新型的免疫效应细胞，与LAK细胞相比具有广谱、较高的杀伤活性及低IL-2依赖性的特点，因而受到重视。关于其杀伤机制的研究目前尚无明确报道。本研究把体外培养中贴壁状态的人肺腺癌细胞与用抗CD3单克隆抗体激活的人外周血来源的CD3AK细胞共同培养，电镜下观察了两种细胞的相互作用和靶细胞被杀伤的过程．藉此对CD3AK细胞杀伤肿瘤细胞的机制作一探讨。     

肿瘤生物治疗的新模式:分子靶向-过继性细胞免疫治疗

分子靶向－过继性细胞免疫治疗是分子靶向药物和过继性细胞免疫疗法有机结合的新治疗模式,该模式建立在NK细胞活化性信号通路(NKG2DNKG2DLs) 的生物学特性,尤其是受配体可调控性的理论基础之上。分子靶向药物在其中扮演双重角色,除了药物本身对肿瘤细胞的毒性作用外,还作为“刺激诱导”源,诱导肿瘤细胞表达免疫激活物NKG2DLs（natural killer group 2 member D ligands）,与NK细胞表面NKG2D（natural killer group 2 member D）结合,激活NK细胞的杀伤活性。NKG2D与NKG2DLs是NK细胞主要的活化性受、配体,在机体抗肿瘤免疫中起重要作用。NKG2D主要表达于NK、CD8+T、γδT和活化的巨噬细胞,参与适应性及固有性免疫应答。与NKG2D结合的配体(NKG2DLs)广泛低表达于多种肿瘤细胞,而在正常组织细胞几乎未见表达,靶细胞的NKG2DLs表达水平直接关系到免疫效应细胞（NK、DC、CTL细胞等）对其的杀伤活性。NKG2DLs的转录与表达可受多种因素影响,分子靶向药物可以诱导肿瘤细胞高表达NKG2DLs,NK细胞对高表达NKG2DLs的肿瘤细胞有较高杀伤活性,而对正常组织无杀伤作用,具有杀伤靶向性;NKG2DLs的高表达也增强了肿瘤细胞对其他免疫效应细胞的杀伤敏感性,具有良好的应用前景。分子靶向药物联合过继性细胞免疫治疗将使肿瘤患者获得更好的临床疗效,预示了肿瘤生物治疗新的发展方向——分子靶向-过继性细胞免疫治疗新模式的来临。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells.CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody,Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞,具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子,这就提出一个问题:用抗CD3单抗和rIL-2诱生扩增的CD3AK与单用rIL-2诱生扩增的LAK有什么区别。本文比较了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的CD3AK与常规LAK细胞在增殖动力学,细胞毒活性及表型特征上的差别,探讨了这些差别的发生机制及可能的理论意义。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅰ 抗CD3单抗和rIL-2共刺激对PBMC的激活作用

本实验结果表明采用抗CD3单抗和rIL-2共刺激外周血单个核细胞(Peripheral blood mononueleacells，PBMC)可诱导其增殖、活化、分化为具有杀瘤活性的抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞 (Anti CD3 monoclcnal anybody activated killer cells．CD3AK)。(1)抗CD3单抗和rIL-2共刺激可诱导PBMC增殖，     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)辅以少量的基因重组人白细胞介素2(rIL-2)和植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞,成功地研制出具有抗肿瘤活性的CD3McAb激活的杀伤细胞(anti-CD3monoclonal antibody activated killer cells)简称CD3AK细胞.结果表明,微量的CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,30ng/ml的CD3McAb就能激活CD3AK细胞,而且激活作用为一次性完成,并能保持至少16天的增殖生长趋势;当CD3McAb浓度增加到100ng/ml时,细胞扩增倍数为27±3.67,与LAK细胞扩增倍数相接近;当CD3McAb浓度提高到300ng/ml时,CD3AK细胞的扩增倍数为192±9.36明显高于LAK细胞扩增倍数28±6.13(P<0.05);当CD3McAb浓度提高到500ng/ml时,CD3AK细胞扩增倍数可达864±9.31倍.CD3AK细胞是以CD3~ 、CD8~ 和CD4~ 为主的异质性细胞群,CD3~ 和CD8~ 细胞百分率随培养时间延长而增加.培养至第4天的CD3AK细胞已开始具有明显的杀伤活性,并逐渐增强,至第10天达到高峰,随后开始下降,其抗瘤效应最佳时期在     

DC／CIK细胞在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

树突状细胞／细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cells／cytokine－induced killer cells,DC／CIK）是新型的异质性免疫效应细胞群,其主要的效应细胞同时表达CD3＋和CD56＋两种膜蛋白分子,兼有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和自然杀伤（natural killer,NK）细胞的非主要组织相容性复合体（non－major histocom-patibility complex,MHC）限制性杀瘤特点。其与手术、放疗、化疗等方法相结合治疗非小细胞肺癌（non－small cell lung cancer,NSCLC）,可以使患者获得更高的生存率,显著提高患者的生活质量。DC／CIK由于其强大的体外扩增能力和抗肿瘤活性而迅速成为目前过继免疫治疗的有效方法之一。     

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

CD3AK细胞是用抗T细胞表而CD3分子的单克隆抗体激活的新型杀伤细胞，在肿瘤的免疫疗法中愈来愈受到重视。本文用抗CD3单克隆抗体(北医太免疫室提供)和rIL-2(日本盐野义制药株式会社产品)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，诱导CD3AK细胞，系统地研究了其生物特性及其体外抗肿瘤活性并与LAK细胞作比较。     

CD3AK/iNOS细胞对白血病细胞体外杀伤的研究

背景与目的:LAK细胞已用于临床移植物净化。CD3AK细胞是CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞。本研究旨在经逆转录病毒介导iNOS基因转染人免疫活性细胞CD3AK建立CD3AK/iNOS细胞,并探讨其对白血病细胞株K562及其耐药株K562/ADM的杀伤作用。方法:培养PA317/pLNC-iNOS细胞获得病毒上清;CD3McAb联合小剂量的IL-2激活分离的外周血单个核细胞;含逆转录病毒颗粒的细胞培养上清感染靶细胞CD3AK细胞。测定CD3AK/iNOS、CD3AK细胞培养上清NO含量以及iNOS活性。MTT法观察CD3AK/iNOS、CD3AK对K562和K562/ADM细胞杀伤活性。结果:(1)CD3AK/iNOS、CD3AK中NO含量分别为(378.60±41.57)μmol/L,(98.07±22.31)μmol/L(P<0.001);CD3AK/iNOS、CD3AK中iNOS活性分别为(20.77±2.49)U/ml,(9.81±1.96)U/ml(P<0.001)。(2)MTT法观察CD3AK/iNOS对K562和K562/ADM杀伤活性分别为(64.85±18.13)%,(63.80±9.93)%。CD3AK杀伤活性分别为(45.66±17.46)%,(47.85±12.01)%。CD3AK/iNOS与CD3AK相比差异有显著性(P<0.05)。结论:CD3AK/iNOS分泌的NO含量、iNOS活性较CD3AK明显提高,且对K562及K562/ADM杀伤作用也更强;但CD3AK/iNOS对K562及K562/ADM杀伤作用无显著性差异。     

表皮生长因子受体抑制剂在肿瘤治疗方面的研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DC)作为体内的专职抗原提呈细胞,具有强大的激发初次免疫应答的独特功能,在肿瘤免疫治疗中已显示出其重要的应用价值[1-2].CD3AK细胞(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells,CD3AK),具有高效而广谱的抗肿瘤作用[3].本实验旨在探讨DC与CD3AK细胞联合应用能否产生协同抗肿瘤作用,为肿瘤临床治疗提供新的思路.     

CIK细胞抗白血病的研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer,CIK)是由多种细胞因子诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞,且是一种非主要组织相溶性复合体(MHC)限制的免疫效应细胞,同时表达CD3和CD56,其增殖能力强、杀瘤活性高、副作用小,是目前白血病细胞免疫疗法中最具前景的细胞之一。文章综述了CIK细胞的特点、抗白血病机制和科研及临床的应用现状。     

脐血CD_3AK细胞的制备、生物活性测定及临床应用初探

 目的　研究用脐血单个核细胞制备CD3 AK细胞的抗肿瘤作用 ,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法　分离脐血单个核细胞 ,分别用IL 2和IL 2 +CD3 Ab诱导LAK和CD3AK细胞 ,并测其扩增数量和对K5 6 2细胞的杀伤活性 ;测定肿瘤患者用CD3 AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果　脐血LAK细胞和脐血CD3 AK细胞均于培养后第 11天时扩增倍数最高 ,分别是培养前的 18倍、2 4倍 ,对K5 6 2的杀伤活性分别是培养前的 2 .6倍和 3.2倍 ;肿瘤患者输注CD3 AK细胞一疗程后 ,其PBMC的NK杀伤活性由 6 2 %升高到 82 % ,平均升高 32 %。结论　 (1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3 AK细胞良好的前体细胞。 (2 )LAK和CD3 AK细胞的数量和杀伤能力在培养的第 11天时达高峰 ,而且CD3 AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。 (3)CD3 AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。 (4 )肿瘤病人PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数     

胰腺癌的细胞治疗新进展

胰腺癌的细胞治疗为生物治疗的一个分支,它是通过在体外培养效应细胞后回输至患者体内,激发和增强机体的免疫功能,以达到杀伤肿瘤细胞并控制肿瘤的目的。胰腺癌的细胞免疫治疗已有较长的历史,从淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphocyte activated killer cells,LAKs)、肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)到近年来研究较多的细胞因子诱导的杀伤性细胞(cytokine induced killer cells,CIKs)、树突状细胞(dendritic cells,DCs)以及传统的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)。同时,生物科学技术的发展使研究得以大规模分析,并且借由这些统计分析,基础医学和药物研发及临床治疗已不再相互孤立存在。近几年,以上几种类型的细胞在胰腺癌的传统治疗基础上又有了一些新的改进与突破。本文就近几年来胰腺癌细胞治疗中常用的五种细胞在临床转化中的研究新进展做一介绍。     

中高度恶性淋巴瘤在化疗的基础上应用CD3AK生物细胞治疗的疗效研究

CD3AK细胞是由抗CD3单克隆抗体和IL-2共同激活诱导的肿瘤细胞,具有高效激活与扩增、长期存活、低IL-2依赖性、体内外抗肿瘤活性高及低毒副反应的特点.其抗肿瘤机理:(1)直接杀伤肿瘤细胞;(2)CD3非特异性激活的淋巴细胞介导的MHL非限制性溶瘤作用;(3)CD3单抗通过识别T细胞表面的CD3/TCR复合体,促使其产生TNF和IFN等多种细胞因子而杀伤肿瘤细胞;(4)CD3诱导癌细胞程序性死亡[1,2].     

肝细胞癌CIK免疫治疗的研究现状和展望

细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞是体外扩增的异质性T淋巴细胞,兼具T淋巴细胞的抗肿瘤活性和自然杀伤(natural killer,NK)细胞的非主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)限制性杀瘤特性。CIK细胞主要通过直接杀伤肿瘤细胞、释放大量炎性因子杀伤肿瘤细胞以及诱导肿瘤细胞凋亡这3种途径发挥抗肿瘤作用,而且可提高机体的免疫力,清除微小残余病灶,降低肿瘤复发率,最终延长患者的生存期。因此,CIK免疫疗法用于肝细胞癌的辅助治疗具有安全、有效的重要价值。本文对CIK细胞在肝癌治疗方面的研究现状进行综述,一方面总结了CIK细胞的来源、扩增方法、对肝癌细胞的杀伤机制以及临床应用现状,另一方面对CIK细胞的应用前景进行展望。     

无血清培养基对体外激活的A-NK细胞的支持作用

目的多方面比较无血清培养基AIMV与完全培养基对体外细胞因子激活的NK细胞的支持作用.方法分别用AIMV及完全培养基培养粘附NK细胞(A-NK)和非粘附NK细胞(NA-NK),比较细胞的增殖能力、杀伤肿瘤细胞的能力、表达粘附分子CD11c的能力.结果与完全培养基培养细胞相比,AIMV培养细胞增殖能力、杀伤肿瘤细胞的能力、表达CD11c的能力与之相当;在同一培养条件下A-NK细胞的增殖能力、杀伤活性高于NA-NK细胞.结论无血清培养基可替代完全培养基用于A-NK细胞的培养;A-NK细胞用于治疗肿瘤的过继免疫疗法要优于NA-NK细胞.     

树突状细胞对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞影响的研究

目的:研究人外周血树突细胞(dendriticcell,DC)对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞的影响,以期获得具有抗原特异性杀伤功能的细胞毒活性细胞,并分别对CIK、LAK和CD3AK的杀伤效果进行比较。方法:采用某一肺腺癌肿瘤患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMNC),经体外诱导分别扩增出CIK、LAK、CD3AK和DC细胞,再将靶细胞抗原孵育过的DC同三种细胞共同培养,通过镜下动态观察CIK联合DC对癌性胸腔积液中肿瘤细胞的杀伤活性,并利用MTT法检测CIK联合DC体外杀伤人肺腺癌细胞系(SPC-A1)的活性,同时比较CIK、LAK和CD3AK三种细胞的体外杀瘤活性。结果:CIK-A-DC的杀伤活性最强为92.3%,明显高于单纯CIK的59.7%和DC-CIK的79.8%,(P值分别为0.025和0.042),提示CIK-A-DC细胞对肿瘤杀伤的特异性。而DC-CIK的杀伤活性为79.8%,也高于单纯CIK对照组59.7%,P=0.034,说明DC具有明显增强CIK细胞杀瘤活性的功能。同时,不论从单纯CIK、LAK、CD3AK细胞毒活性,或是从三种细胞联合DC的细胞毒活性比较,CIK细胞较后两种细胞都具有更强的杀伤活性,P值分别为0.038和0.022。联合DC的自体CIK细胞体外杀瘤活性显著增强,CIK细胞的杀伤活性显著高于LAK、CD3AK两种细胞。结论:DC可明显提高自体CIK细胞的体外杀瘤活性。     

双特异抗体介导的CD_3AK对人小细胞肺癌细胞株的细胞毒作用

目的 :研究在双特异性抗体的介导下CD3AK细胞 (CD3单克隆性激活的杀伤细胞 )对人小细胞肺癌细胞株LTEP sm1的细胞毒作用。方法 :用51Cr Na2 CrO4 释放试验检测单抗 (2D6、UCHT1)和双特异性抗体 (WST H7)与CD3AK共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。结果 :双特异性抗体体外能明显增强CD3AK细胞对人小细胞肺细胞株LTEP sm1的杀伤活性。结论 :与单纯CD3AK相比 ,加入双特异性抗体后的CD3AK细胞的细胞毒活性显著增强     

CIK治疗晚期原发性肝癌

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer，CIK细胞)是一种新型免疫活性细胞。其主要效应细胞表面既有T细胞表面标志(CD3)，也有NK细胞表面标志(CD56)，因而兼有T细胞抗瘤活性和NK细胞非MHC限性性杀瘤的特点。与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)