小鼠β趋化因子受体CCR5基因的克隆

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂ ｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用Ｍａｒａｔｈｏｎ ＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂ ｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｍ方法检测分析该ＡＤＬＤ，Ｎｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，     

趋化因子受体CCR5的研究进展

CCR5为趋化因子CC受体家族成员,属7次跨膜G蛋白耦联受体,配体为CCL3 (MIP-1α)、CCL4( MIP-1β)、CCL5( RANTES).CCR5主要表达于单核/巨噬细胞和淋巴细胞,与其配体介导CCR5+免疫细胞的趋化、募集过程.因此,多种免疫性疾病的发生和发展过程均有CCR5参与.CCR5是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)入侵时的重要辅助受体,而在肿瘤细胞和各类肿瘤相关间质细胞的表面也可见其表达,并介导肿瘤增殖、浸润等多种生物学过程.随着相关研究技术的发展,进一步加深了对CCR5的结构、功能、信号通路及其在相关疾病中的作用的认识.     

我国人群中人类免疫缺陷病毒1感染的协同受体CCR5△32基因突？…

目前 ,中国人群对人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)的遗传易感性已引起我国学者的高度关注。我们取中国人外周血单个核细胞来源的基因组ＤＮＡ ,应用ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ序列分析等技术 ,分析ＣＣＲ5Δ32基因纯合子和杂合子在中国人群中的分布 ,初步评估我国人群ＨＩＶ 1感染的遗传易感性。此外 ,希望从分子遗传学角度为我国卫生主管部门对艾滋病防治的决策提供科学依据。一、材料与方法1 标本来源 :我们收集了 915例土生土长的中国人外周静脉血标本 ,他们均为中国人民解放军第三○二医院的住院病人 (主要是患各种急慢性肝炎、菌痢、高血压和肿瘤等…     

人趋化因子受体5基因5'侧翼区功能分析

目的：分析人趋化因子受体5（CCR5）基因5’侧翼区的调控序列。方法：构建CCR5基因不同长度5’侧翼区的萤光素酶报告基因载体,分别转染人Jurkat细胞中,检测分析其萤光素酶活性。结果：CCR5基因5’侧翼区-1006bp至-1bp、-804bp至-1bp、-586bp至-1bp和-478bp至-1bp区段的pGL3重组质粒在Jurkat细胞中能表现出明显的萤光素酶活性。结论：CCR5基因5’侧翼区-478bp至-1bp序列中存在基因转录的主要上调元件。     

趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的 探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系.方法 用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠(CBA/J×DBA/2,n=14)、正常妊娠模型组小鼠(CBA/J×BALB/c,n=13)和正常非孕组小鼠(CBA/J,n=11)外周血、脾脏以及胸腺中CD4+T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达.结果 自然流产模型组外周血CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01),CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05,P<0.01);但三个指标与正常非孕组相比,差异均无统计学意义(P>0.05).自然流产模型组脾脏CD4+ T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01).高于正常非孕组(P<0.05);而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05),但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05).自然流产模型组胸腺CD4+ T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.05),高于正常非孕组(P<0.01);而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组(P<0.05).但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05);CCR5与其他两组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 CD4+T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用.     

沉默CC型趋化因子受体5对人乳腺癌细胞黏附及迁移的影响

构建CC型趋化因子受体5(CCR5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默CCR5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测CCR5的基因表达,选择CCR5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人CCR5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shCCR5-1 和shCCR5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测CCR5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默CCR5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默CCR5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。     

趋化因子及其受体与肿瘤研究进展

近年来,趋化因子及其受体在肿瘤侵袭和转移中的作用越来越受到人们的关注,随着分子生物学、分子免疫学及其相关技术的发展,越来越多的趋化因子及其受体的发现,研究的进一步深入,趋化因子基因治疗与基因疫苗的研制应用有望成为新的肿瘤治疗策略和手段。     

趋化因子及受体与微环境促进乳腺癌生长转移

趋化因子在生理以及肿瘤细胞转移过程中起着非常重要的作用,包括诱导各种炎症细胞向炎症部位的浸润,淋巴器官的形成,控制肿瘤的淋巴细胞浸润、调节肿瘤相关血管生成、激活宿主对肿瘤的特异性免疫应答、以自分泌或旁分泌方式刺激肿瘤细胞增殖、控制肿瘤细胞运动等。不同的肿瘤表达不同的趋化因子受体,而有些器官则表达其相应的趋化因子,肿瘤细胞籍趋化因子与受体的特异性结合,最终向这些器官特异性迁移。本文就趋化因子及受体在生理及乳腺癌形成、转移中的作用做一综述。     

趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系。方法用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠（CBA／J&#215;DBA／2，n=14）、正常妊娠模型组小鼠（CBA／J&#215;BALB／c，n=13）和正常非孕组小鼠（CBA／J，n=11）外周血、脾脏以及胸腺中CD4^＋T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达。结果自然流产模型组外周血CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．01），CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组（P〈0．05，P〈0．01）；但三个指标与正常非孕组相比，差异均无统计学意义（P〉0．05）。自然流产模型组脾脏CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．01），高于正常非孕组（P〈0．05）；而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组（P〈0．05），但与正常非孕组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。自然流产模型组胸腺CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．05），高于正常非孕组（P〈0．01）；而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组（P〈0．05），但与正常非孕组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；CCR5与其他两组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD4^＋T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用。     

趋化因子及受体与乳腺癌转移的关系

乳腺癌已成为妇女最常见的恶性肿瘤,其发病率占妇女恶性肿瘤的第1位,且逐年有上升趋势.     

Rab5A与CXCR4在乳腺癌组织中的表达及其相关性

目的探讨乳腺癌组织中Rab5A与CXCR4蛋白的表达及其相关性.方法应用免疫组织化学S-P法检测106例术后乳腺癌标本、30例乳腺良性肿瘤标本Rab5A与CXCR4蛋白的表达.结果 Rab5A与CXCR4蛋白在乳腺癌组的表达率显著高于良性肿瘤组;Rab5A和CXCR4蛋白在有淋巴结转移的乳腺癌组中的表达率显著高于在无淋巴结转移组中的表达率,并且二者的表达程度均与淋巴结状态相关,二者的表达程度增强,发生淋巴结转移的概率增加.结论 Rab5A和CXCR4蛋白在乳腺癌的发生发展、侵袭转移中可能起到协同作用.两者联合检测对于早期诊断乳腺癌及判断其预后有重要的临床意义.     

人乳腺癌干细胞中CCR5的表达及意义

目的:探讨人乳腺癌干细胞和乳腺癌细胞中CCR5的表达及意义。方法:采用流式分选技术从人乳腺癌细胞系MCF-7中分选出乳腺癌干细胞,并利用SYBR实时PCR技术测定不同亚群乳腺癌细胞中CCR5的表达。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实PCR反应的特异性;相对定量结果显示,乳腺癌干细胞CD44+CD24-/low的CCR5表达水平为对照组CD44+CD24+乳腺癌细胞的6.14倍(P<0.05)。结论:高表达CCR5的乳腺癌干细胞与乳腺癌细胞相比具有更强的侵袭转移能力,可能是乳腺癌转移关键因素之一。     

趋化因子受体CCR7促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭

目的:研究趋化因子受体CCR7的表达对乳腺癌细胞趋化活性与侵袭活性的促进作用.方法:RT-PCR法测定3株乳腺癌细胞MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-361中CCR7的表达;在CCR7的配体SLC作用下,通过趋化小室法检测不同乳腺癌细胞的趋化活性与侵袭活性;检测CCR7的封闭对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性的影响. 结果: 3株乳腺癌细胞中均存在不同程度CCR7的表达,其配体SLC对3种乳腺癌细胞均存在不同程度的趋化活性和侵袭活性,CCR7的封闭也能够在不同程度上抑制乳腺癌细胞的这种趋化活性和侵袭活性. 结论: 趋化因子受体CCR7的表达能够促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭,从而可能在乳腺癌细胞向淋巴结转移中发挥重要作用.     

靶向趋化因子受体5短肽的筛选及活性初步分析

目的筛选人趋化因子受体5(CCR5)的亲和短肽。方法采用噬菌体十二肽库对稳定表达CCR5的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(CHO/CCR5)进行筛选,得到30个阳性克隆,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)分析,发现其中17个克隆含有AFDWTFVPSLIL基序。结果含有该序列的噬菌体和合成肽AFDWTFVPSLIL能阻止单克隆抗体2D7与CHO/CCR5细胞的结合;并能竞争性地抑制RANTES对CHO/CCR5细胞的结合。结论小分子肽AFDWTFVPSLIL能特异性地结合CCR5,并有可能成为CCR5的拮抗剂。     

Relationship between expression of chemokine receptors CCR3, CCR5 and CXCR3 on CD4+ T cells and spontaneous abortion in mice

Background Previous studies have shown that local immune cells in the feto-maternal interface are recruited from peripheral blood, and that chemokines and their receptors play an initial and key role in this recruitment process. In this study, we aimed to determine whether spontaneous abortion is associated with the expression of chemokine receptors CCR3, CCR5, and CXCR3 on CD4^＋ T cells.
Methods Peripheral blood, spleen, and thymus were collected from the spontaneous abortion mouse model CBA/JxDBA/2 （SA group, n=14）, the normal pregnant mouse model CBA/JxBALB/c （NP group, n=13）, and normal non-pregnant CBA/J mice （NNP group, n=11）. The number of chemokine receptors CCR3, CCR5, and CXCR3 expressed on CD4^＋ T cells was measured by double-label flow cytometry （FCM） method.
Results In peripheral blood, the SA group had significantly lower CCR3 expression （P 〈0.01） and higher CCR5 and CXCR3 expression （P 〈0.01） on CD4^＋ T cells than did the NP group. But comparing these chemokines between the SA and NNP groups, there was no significant difference （P 〉0.05）. In spleen, the SA group expressed significantly lower CCR3 expression （P 〈0.01） and higher CCR5 and CXCR3 expression （P 〈0.05） on CD4^＋ T cells than did the NP group. When compared with the NNP group, the SA group had significantly higher CCR3 expression （P 〈0.01）, but was not statistically different with regards to the other two chemokines （P 〉0.05）. In thymus, the SA group had significantly lower CCR3 expression （P 〈0.05） and higher CXCR3 expression （P 〈0.05） on CD4^＋ T cells than the NP group, with no significant difference in CCR5 expression （P 〉0.05）. Compared with the NNP group, the SA group had higher CCR3 expression （P 〈0.01）, but there was no statistical difference in CXCR3 and CCR5 expression （P 〉0.05） between the two groups.
Conclusion The abnormal expression of CCR3, CCR5 and CXCR3 on CD4^＋ T cells may play an important role in the pathogenesis of spontaneous abortion.     

趋化因子受体CCR5胞外段重组蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的:构建趋化因子受体5(CCR5)胞外段重组蛋白(命名为:rCCR5)原核表达载体,并进行诱导表达.对表达产物进行纯化和鉴定.方法:截取CCR5胞外结构4个片段N-Term,ECL1, ECL2和ECL3的氨基酸序列,应用柔性linker分别串联,模拟CCR5胞外结构,依据大肠杆菌偏爱密码子人工合成基因.运用基因重组方法在大肠杆菌中进行表达,表达产物经纯化、复性后进行Western blot鉴定.结果:目的蛋白以包涵体形式存在,经包涵体洗涤、变性溶解,SephacrylS-300凝胶过滤层析及SephacrylS-100凝胶柱复性获得了纯化的蛋白质,目的蛋白能与CCR5 mAb特异性结合.结论:获得了大量纯化的rCCR5重组蛋白,可作为研制CCR5自体蛋白疫苗以阻断HIV-1感染的候选抗原蛋白.