复方三七消痛软膏治疗兔膝骨性关节炎的疗效及其对软骨细胞caspase-3表达的影响

目的观察外擦复方三七消痛软膏治疗兔膝骨性关节炎疗效及其对软骨细胞caspase-3表达的影响。方法 15只新西兰大白兔随机分为A、B、C组(每组各5只);A、B 2组均行右侧膝关节ACLT术,C组不予任何处理;术后6周A组以复方三七消痛软膏外擦并结合拍打患处,B、C2组不予任何干预,正常饲养。干预2周后取材,HE染色法观察软骨组织形态并行改良Mankin评分,免疫组化法检测软骨细胞caspase-3表达。结果 1)改良Mankin评分比较:A组(5.15±1.14)明显低于B组(8.50±1.10),但明显高于C组(2.40±1.35),差异均有统计学意义(P0.01);2)caspase-3 IOD:与B组(23 865.80±7 666.48)相比,A组(2 994.35±1 215.28)阳性表达明显下降(P0.01);与C组相比(453.80±265.24),B组阳性表达显著升高(P0.01)。结论外擦复方三七消痛软膏结合拍打兔膝骨性关节炎模型可以延缓兔膝骨性关节炎的进展,其机制可能与调节软骨细胞caspase-3的表达,抑制软骨细胞凋亡有关。     

止痛健骨方对膝骨关节炎兔软骨TNF-α的影响及TNF-α与软骨评分的相关性分析

目的:观察止痛健骨方对膝骨关节炎兔软骨TNF-α的影响及TNF-α与软骨评分的相关性。方法:将90只白兔随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物组、止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组,每组18只,采用木瓜蛋白酶制备兔膝骨关节炎模型,止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组分别给予止痛健骨方低剂量、高剂量药物灌胃,阳性药物组给予盐酸氨基葡萄糖片灌胃(0.0672 g/kg),正常对照组和模型对照组予生理盐水灌胃。在模型验证、灌胃第4周、第8周,各组随机选择6只白兔,观察软骨Mankin评分,并检测软骨TNF-α表达水平。结果:在模型验证、实验干预第4周、第8周时,模型对照组、阳性药物组、止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组软骨TNF-α表达、软骨Mankin评分均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。第4周、第8周,阳性药物组、止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组TNF-α表达均低于模型对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson直线相关性分析发现软骨TNF-α表达增加,对应软骨评分也上升,两者呈直线正相关(r=0.903,P=0.000)。结论:止痛健骨方能降低兔KOA模型关节软骨TNF-α表达,降低软骨Mankin评分,且两者成正向直线相关,这可能为其治疗KOA的作用机理。     

止痛健骨方对兔膝骨关节炎软骨MMP-1的影响及与MRI分级的相关性分析

目的观察止痛健骨方对兔膝骨关节炎软骨MMP-1的影响及与MRI分级的相关性分析。方法将90只白兔随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组,每组各18只,采用木瓜蛋白酶制备兔膝骨关节炎模型,止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组分别给与止痛健骨方低剂量、高剂量药物灌胃,阳性药物组给与盐酸氨基葡萄糖片灌胃,0.0672g/kg,正常对照组和模型对照组则给与生理盐水灌胃。在模型验证、实验灌胃第4周、第8周三个时间点,各组随机选择6只白兔,进行膝关节MRI扫描,并检测软骨MMP-1表达水平,进行对比比较。结果在实验干预前、实验干预第4周、第8周,与正常对照组比较,模型对照组、阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组软骨MMP-1表达、MRI软骨分级均上升,差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组比较,阳性药物组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组第4周、第8周MMP-1表达下降,差异有统计学意义(P0.05)。采用等级Spearman等级相关分析发现软骨MMP-1表达增加,对应软骨MRI分级也上升,两者呈直线正相关(r=0.815,P=0.000)。结论止痛健骨方能降低兔KOA模型关节软骨MMP-1表达,降低软骨MRI分级,且两者成正向直线相关,这可能为其治疗KOA的作用机理。     

仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎大鼠关节软骨损伤的修复作用及机制研究

目的观察仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨损伤的修复作用并探讨其机制。方法 SD大鼠100只,根据体质量随机分成5组:对照组、模型组、仙鹿健骨汤各剂量组;模型组、仙鹿健骨汤各剂量组构建KOA大鼠关节软骨损伤模型,并于造模成功第1天开始给予相应药物灌胃,持续给予3个月,对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠注射液。试验结束后,测定大鼠膝骨性骨关节炎软骨Mankin′s评分、p38m RNA、NF-κB mRNA、p38、NF-κB、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白水平。结果与对照组比较,模型组、仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-кB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P 0.05);与模型组比较,仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显降低(P 0.05),且随着仙鹿健骨汤给药剂量的增加,KOA软骨Mankin′s评分、p384、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P 0.05)。结论仙鹿健骨汤能明显减轻软骨细胞损伤程度,对KOA关节软骨损伤具有一定程度的修复作用,其机制与仙鹿健骨汤组能通过抑制炎症信号通路p38、NF-κB m RNA、蛋白表达水平的表达进而抑制细胞因子MMP-9、MMP-13、IL-1β的表达有关。     

针刀“解结法”对膝骨关节炎兔软骨形态学及影像学的影响

目的:观察针刀"解结法"对膝骨关节炎(KOA)兔软骨形态学及影像学的影响,为临床针刀治疗KOA提供实验依据。方法:健康雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组,每组8只。采用改良Videman法左后肢伸直位石膏固定制动6周复制KOA模型。针刀组采用针刀"解结法"治疗,治疗点包括"鹤顶次""髌内下""髌外下""成腓间""委阳次""阴陵次",每7 d干预1次,共干预4次。干预结束后1周,用Lequesne膝关节级别评估法评价兔左膝关节Lequesne评分;用X线和MRI影像学观察兔左膝关节间隙、积液、软骨光滑度,并进行MOAKS评分;肉眼观察左膝关节软骨表面光滑度并进行软骨肉眼观评分;用HE染色及Mankin评分评价软骨病理改变。结果:与空白组比较,模型组左膝关节Lequesne评分明显增高(P<0.05),关节间隙变窄,关节腔内积液增多、软骨面欠光滑,MOAKS评分、软骨肉眼观评分、Mankin评分均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,针刀组Lequesne评分明显降低(P<0.05),关节间隙增宽(P<0.05),关节腔积液减少,软骨面变光滑,MOAKS评分、软骨肉眼观评分、Mankin评分均明显降低(P<0.05)。结论:基于经筋理论针刀"解结法"能有效提高KOA兔模型膝关节行为能力,并修复软骨病理形态,其作用机制可能与调整关节间隙、减少关节腔积液有关。     

智能治疗仪对兔膝骨关节炎软骨结构和关节液IL-lβ、IL-6、TNF-α、MMP-3、HA含量的影响

目的观察智能治疗仪对兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织形态及关节液中IL-lβ、IL-6、TNF-α、MMP-3、HA的影响。方法采用改良Hulth法建立KOA模型,将64只新西兰大白兔按随机数字表法分为空白组、模型组、对照组和治疗组。对照组采用低频电子脉冲治疗仪干预,治疗组采用智能治疗仪干预,空白组和模型组未进行干预,各组分别干预8周和16周后取材。采用光镜和电镜观察软骨组织显微和超微结构,改良番红O-固绿染色观察软骨组织蛋白多糖分布情况,ELISA法测定关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3及HA含量。结果HE染色、改良番红O-固绿染色和Mankin’s评分结果显示:空白组软骨组织边缘平整光滑,4层结构清晰,蛋白多糖分布较均匀;模型组软骨组织边缘毛糙,软骨细胞成簇或减少,细胞排列紊乱,蛋白多糖含量明显减少且分布较不均匀,软骨组织Mankin’s评分与同疗程空白组相比增高(P0.05,P0.01);对照组和治疗组软骨组织边缘稍不规则,软骨细胞排列紊乱,蛋白多糖含量减少,总体表现介于空白组和模型组之间,软骨组织Mankin’s评分与同疗程模型组相比降低(P0.05,P0.01)。超微结构结果表明:与空白组相比,模型组软骨细胞形态不规则,细胞器减少或固缩,部分细胞变形、坏死,胶原原纤维减少。与模型组相比,对照组和治疗组软骨细胞形状较稍不规则,细胞器结构较好,胶原原纤维较多。ELISA结果显示:与空白组相比,模型组中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3含量均明显升高(P0.01),HA明显降低(P0.01);与模型组相比,对照组和治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3含量均降低(P0.01),HA明显升高(P0.01);与对照组相比,治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3和HA含量无明显差异。此外,与疗程8周相比,疗程16周的模型组、对照组和治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3和HA含量变化存在统计学意义(P0.01)。结论智能治疗仪能有效改善KOA软骨组织退变,抑制蛋白多糖降解,其作用机制可能与调节IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3和HA表达有关。     

针刀干预对KOA兔关节软骨病理学及股四头肌收缩性能的影响

目的:通过观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔HE染色及Mankin评分、股四头肌收缩性能的影响,探讨针刀治疗KOA的作用机制。方法:28只清洁级新西兰雄兔,随机分成正常组、模型组、电针组和针刀组。采用改良Videman左后肢伸直位固定制动法复制KOA模型,针刀组、电针组分别采用针刀和电针疗法治疗4周。采用光镜、电生理的方法对软骨形态学情况、股四头肌收缩性能进行检测。结果:造模后,模型组兔膝关节软骨HE染色显示软骨结构紊乱、破坏,Mankin评分较正常组明显升高(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较正常均显著降低(P 0. 05或P 0. 01)。电针、针刀干预后,电针组兔膝关节软骨HE染色较模型组有所改善,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组无显著差异(P 0. 05);针刀组兔膝关节软骨HE染色较模型组改善明显,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组显著升高(P 0. 05或P 0. 01),且与电针组相比Mankin评分显著降低(P 0. 05),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较电针组显著升高(P 0. 05)。结论:针刀干预能改善关节软骨退变,促进关节软骨修复,并能提高股四头肌的收缩性能。提高股四头肌的收缩性能是针刀干预KOA的重要机制。     

复方三七消痛软膏超声导入对兔膝骨性关节炎治疗作用及机制研究

目的:探讨复方三七消痛软膏用超声波(US)导入对兔KOA疗效及其作用机制。方法:将4月龄新西兰大白兔40只按随机数字表法分为复方三七消痛软膏超声波导入组(A组)、普通US组(B组)、舒筋止痛水外擦组(C组)、假US组(D组)和正常对照组(E组)各8只,除E组外各组动物均行双侧前交叉韧带离断术造模。6周后A、B、C、D组分别给予复方三七消痛软膏超声波导入普通US、假US、舒筋止痛水外擦干预10 d,E组不给予任何干预。干预后软骨切片HE染色光镜观察形态结构及Mankin评分;采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡阳性比率;采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡阳性率,Western-blot技术检测软骨细胞caspase-9、caspase-3蛋白水平表达。结果:A组关节软骨病变明显轻于B、C、D组但较E组严重;A组Mankin评分低于B、C、D组、高于E组,差异有统计学意义。干预后A组软骨细胞凋亡阳性率以及caspase-9和caspase-3蛋白表达均低于B、C、D组,高于E组,差异有统计学意义。结论:复方三七消痛软膏超声波导入能更好地延缓KOA软骨退变,其机制可能是通过抑制caspase-9和caspase-3表达从而抑制软骨细胞凋亡实现。     

针刀干预对膝骨关节炎模型兔膝关节软骨应力变化的影响

目的：观察针刀对膝骨关节炎（KOA）兔膝关节软骨退变、膝关节整体应力、关节软骨应力变化以及肿瘤坏死因子-ɑ（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法：将28只兔随机分为空白组、模型组、电针组、针刀组,每组7只。除空白组均进行6周兔左后肢制动,建立兔KOA模型,电针组、针刀组均干预3周。采用苏木精-伊红（HE）法光镜下观察兔软骨病理改变,并评价软骨退变程度;运用有限元技术模拟KOA模型兔膝关节屈曲60°进行检测,观察膝关节整体应力及关节软骨最大应力变化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测滑液中TNF-α、IL-1β表达水平。结果：与空白组比较,模型组Mankin评分升高(P<0.05）,膝关节整体应力、关节软骨最大应力显著降低（P<0.01）,TNF-α、IL-1β水平均显著升高（P<0.01）;干预后,与模型组比较,电针组、针刀组Mankin评分均显著降低(P<0.05),膝关节整体应力、关节软骨最大应力均升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β水平均明显降低(P<0.01）;与电针组比较,针刀组Mankin评分降低(P<0.05),膝关节整体应力和关节软骨最大应力较电针组升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β水平较电针组显著降低(P<0.01）。结论：针刀干预能够调节膝关节整体应力及关节软骨的最大应力,进而恢复膝关节应力环境、抑制炎症介质释放,从而改善关节软骨退变,达到治疗KOA的目的。     

电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15 min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:电针"内膝眼""犊鼻"可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13的表达,减少炎性因子IL-1β的生成,从而抑制软骨基质的降解和软骨细胞的凋亡,改善软骨形态结构。     

基于OPG/RANKL及Notch1信号通路探讨温针灸对膝骨性关节炎兔软骨下骨损伤的影响

目的：观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨下骨的骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化子配体(RANKL)及Notch1信号通路的影响，探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法：选取新西兰雌雄兔共50只(6个月),随机分为空白组、模型组、药物组和温针灸组。采用管型石膏伸直位固定法建立兔KOA模型。经6周实验干预后采用HE染色观察各组软骨下骨形态结构，蛋白质印迹法检测OPG、RANKL及Notch1蛋白表达，实时荧光定量PCR检测各组软骨下骨中OPG、RANKL及Notch1 mRNA含量。结果：与模型组比较，药物组和温针灸组软骨表面相对光滑完整，结构较为清晰，软骨下骨处细胞分布较为整齐均匀。与空白组比较，模型组Lequesne MG评分、Mankin评分、RANKL mRNA、Notch1 mRNA、RANKL及Notch1蛋白表达水平均明显升高，差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，药物组和温针灸组Lequesne MG评分、Mankin评分、RANKL mRNA、Notch1 mRNA、RANKL及Notch1蛋白表达水平均明显降低，差异具有统计学意义(P<0.01),而OPG mRNA、OPG蛋白、OPG/RANKL及OPG/Notch1比值均明显升高，差异具有统计学意义(P<0.01)。温针灸组Lequesne MG评分及Mankin评分均明显低于药物组，差异具有统计学意义(P<0.01),而OPG蛋白、OPG/RANKL及OPG/Notch1水平均高于药物组，差异具有统计学意义(P<0.01)。结论：温针灸可促进OPG表达，抑制RANKL及Notch1表达，通过调控OPG/RANKL及Notch1信号通路，减轻KOA兔软骨下骨的损伤，从而起到治疗KOA的作用。     

针刀干预对中期膝骨关节炎兔软骨下骨压缩力学性能的影响

目的 研究针刀对中期膝骨关节炎（KOA）兔软骨下骨压缩力学性能的影响。方法 24只新西兰雄兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组。除空白组外,其余3组采用改良后Videman法制动9周建立模型,分别干预3周。采用蕃红O/固绿染色法光镜下观察各组兔膝关节软骨及软骨下骨病理改变,参照Mankin评分标准对软骨退变程度进行评分,对软骨下骨进行压缩力学性能测试,观察最大位移、最大载荷、压缩强度和弹性模量。结果 1）蕃红O/固绿染色及Mankin评分：模型组显示软骨层明显变薄,结构紊乱破坏,软骨下骨板明显增厚,Mankin评分明显升高（P <0.01）;针刀组、电针组染色情况改善,Mankin评分显著降低（P <0.01）;针刀组与电针组相比,Mankin评分较低,两组间差异有统计学意义（P <0.01）。2）压缩力学测试：模型组软骨下骨最大位移、最大载荷、压缩强度和弹性模量显著降低（P <0.01）;针刀组、电针组最大位移、最大载荷、压缩强度、弹性模量显著升高（P <0.01或P <0.05）,针刀组和电针组之间差异无统计学意义（P> 0.05）,但...     

加味阳和汤对膝骨关节炎大鼠模型基质金属蛋白酶调控及软骨保护作用研究

目的:观察加味阳和汤对软骨细胞MMP-3,9,13及Col2a调控作用及对碘乙酸诱导KOA模型大鼠的软骨保护作用。方法:软骨细胞提取于3周龄SD大鼠关节软骨,第三代软骨细胞加入梯度浓度加味阳和汤干预后使用IL-1β诱导炎症。MTT检测加味阳和汤最佳干预浓度。Western Blot检测MMP-3,9,13及Col2a表达。组织病理学切片KOA大鼠模型软骨退变情况并行Mankin评分。结果:Western Blot结果示加味阳和汤能有效下调异常增高的MMP-3、9、13并上调Col2a表达。Mankin评分结果提示加味阳和汤能有效延缓退变。结论:加味阳和汤可通过抑制MMPs表达从而保护软骨。     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

艾灸治疗对兔KOA软骨损伤及MMP-1和TIMP-1表达调节作用的实验研究

目的:探讨艾灸治疗对膝骨性关节炎(KOA)软骨损伤及MMP-1和TIMP-1的表达调节作用,为艾灸治疗KOA的机理提供实验依据。方法:对兔膝关节注射木瓜蛋白酶制造KOA模型,经艾灸和药物治疗6周后,病理组织评分判断软骨损伤情况,定量图像分析技术检测膝关节软骨中MMP-1和TIMP-1光密度的改变,并计算MMP-1与TIMP-1的比值(MMP-1/TIMP-1)变化情况。结果:艾灸组软骨病理评分和MMP-1光密度均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),TIMP-1的光密度与模型组比差异无统计学意义(P>0.05),但MMP-1/TIMP-1明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),艾灸治疗作用与药物组相似。结论:艾灸能够起到减轻KOA软骨破坏,减轻关节病损的作用,其对KOA的治疗机制可能是通过减轻MMP-1的破坏作用,降低MMP-1/TIMP-1实现的。     

温针灸对膝骨性关节炎兔软骨及软骨下骨形态学的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨及软骨下骨形态学的影响,探讨温针灸能否减轻关节软骨及软骨下骨的退变从而减缓KOA的发展。方法:40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组及阿仑膦酸钠组,每组10只。采用管型石膏伸直位固定法固定兔右后肢6周制备KOA模型。温针灸组给予"内膝眼""外膝眼"及"鹤顶"温针灸治疗,每次15 min,每日1次,连续4周;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液灌胃(150μg·kg^-1·d^-1),连续4周。治疗结束后对所有新西兰兔膝关节行X线、磁共振成像(MRI)检查。X线结果采用K-L分级法对关节间隙、软骨下骨增生程度进行分级;MRI结果采用Recht分级法对软骨退变程度进行分级,采用WORMS评分法对骨髓水肿程度进行评分;HE染色法观察膝关节软骨组织形态学改变,采用Mankin评分评价软骨退变程度;扫描电镜观察膝关节软骨表面的形态学改变;透射电镜观察膝关节软骨细胞的超微结构。结果:与空白组比较,模型组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显升高(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示模型组软骨缺损严重;透射电镜显示模型组软骨细胞变性肿胀,细胞器减少、形态紊乱,细胞外基质胶原纤维分布混乱。与模型组比较,温针灸组和阿仑膦酸钠组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。扫描电镜显示,温针灸组软骨无明显缺损,软骨表面较平坦;阿仑膦酸钠组软骨有缺损,但再生软骨组织表面平坦。透射电镜显示,温针灸组软骨细胞形态基本正常,细胞器形态明显改善、数量明显增多,胞外基质胶原纤维较丰富,分布较为均匀;阿仑膦酸钠组细胞外形正常,细胞器数量较多,形态紊乱,胞外基质胶原纤维分布较混乱。与阿仑膦酸钠组比较,温针灸组Mankin评分降低(P<0.01)。结论:温针灸治疗可以有效减缓KOA兔软骨及软骨下骨退变,从而起到减缓KOA发展的作用。     

右归丸经IL-6/STAT3信号通路对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织退变的调控机制

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠软骨组织信号转导和转录激活因子3(STAT3)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别给予右归丸4.8,2.4,1.2 g·kg^-1灌胃,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g·kg^-1灌胃,连续给药8周。干预结束24 h后股动脉采血处死各组大鼠,取鼠膝关节软骨,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中STAT3,超氧化物歧化酶3(SOD3)和Wnt抑制因子1(WIF1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测软骨组织中IL-6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组关节软骨组中WIF1蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织STAT3在蛋白水平上的表达明显增加和IL-6 mRNA水平上的表达显著增加,WIF1在蛋白水平上的表达显著降低(P<0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分,STAT3的在蛋白水平上的表达明显降低,右归丸各干预组IL-6 mRNA水平上的表达显著降低,WIF1在蛋白水平上的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能显著改善KOA大鼠的关节软骨退变,抑制KOA中软骨组织的炎症反应,这可能与其抑制STAT3和IL-6的表达有关。     

基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响

目的基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL-1β、TNF-α水平;Western blot及RT-PCR检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF-κB p65入核表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α水平上升(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达上调(P0.05,P0.01),CollagenⅡ蛋白及mRNA表达下调(P0.01),NF-κB p65入核表达升高(P0.05)。与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL-1β、TNF-α水平降低(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达下调(P0.05,P0.01),NF-κB p65入核表达降低(P0.05,P0.01);散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P0.05,P0.01)。结论散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF-κB p65入核表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL-1β、TNF-α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展。     

补肾活血方对膝骨关节炎大鼠MMP-3、MMP-13及OPG/RANKL轴的影响

目的:检测不同质量分数的补肾活血方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型膝关节软骨组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化受体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)轴相关因子mRNA表达的影响,探讨补肾活血方对KOA大鼠模型骨重建及治疗作用的机制。方法:采用随机数字表法将48只Wistar大鼠分为正常对照组,模型对照组,依托考昔片组,补肾活血方中药小、中、大剂量组6组,每组8只。采用木瓜蛋白酶膝关节腔内注射法制备KOA大鼠模型。确认造模成功后,依托考昔片组给予依托考昔3.125μg/g混悬液灌胃,补肾活血方小、中、大剂量组分别给予补肾活血方0.52,1.04,2.08 g/kg混悬液灌胃,正常对照组和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,1d1次,连续4周。给药结束后,对KOA模型鼠进行关节软骨退行性改变组织学分级评分(Mankin′s评分),采用实时荧光定量核酸扩增检测系统检测关节软骨内MMP-3、MMP-13、OPG、RANKL的mRNA表达水平。结果:KOA造模后大鼠膝关节软骨Mankin′s评分较正常对照组升高,差异有统计学意义(P0.05);经各治疗组药物治疗后,评分有所下降(P0.05)。模型对照组大鼠MMP-3、MMP-13及RANKL的mRNA表达较正常对照组显著上调,而OPG mRNA有所下降(P0.05);经依托考昔及中药治疗后,MMP-3、MMP-13及RANKL的mRNA表达有不同程度下降,其中大剂量组与依托考昔片组相近;经依托考昔及中、大剂量补肾活血方治疗后,OPG mRNA表达有所上升(P0.05)。结论:补肾活血方能提高模型鼠膝关节软骨内OPG的mRNA表达,降低MMP-3、MMP-13和RANKL的mRNA表达水平,可能是通过调节关节腔内的骨代谢平衡来改善关节软骨损伤、延缓骨关节炎病情进展的。     

止痛健骨方对兔膝骨关节炎软骨IKKα及NF-κB mRNA的影响

目的:观察止痛健骨方对兔膝骨关节炎软骨IKKα及NF-κB mRNA的影响。方法:将90只白兔随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组,每组各18只,采用木瓜蛋白酶制备兔膝骨关节炎模型,止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组分别给与止痛健骨方低剂量、高剂量药物灌胃,阳性对照组给与盐酸氨基葡萄糖片灌胃,用量0.067 2g/kg,正常对照组和模型对照组则给与生理盐水灌胃。在模型组、实验组灌胃第4周、第8周三个时间点,各组随机选择6只白兔,检测软骨IKKα及NF-κB mRNA表达水平,进行对比分析。结果:在实验干预前、实验干预第4周,与正常对照组比较,模型对照组、阳性对照组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组软骨IKKα及NF-κB mRNA表达增加,差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组比较,阳性对照组、止痛健骨低剂量组、止痛健骨高剂量组第4周、第8周软骨IKKα及NF-κB mRNA表达下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:止痛健骨方能降低兔KOA模型关节软骨IKKα及NF-κB mRNA表达,这可能为其治疗KOA的作用机理。