周期性流体静压力对牙周膜干细胞分化的影响

目的观察周期性流体静压力对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)分化的影响。方法酶消化法分离人牙周膜细胞,采用单克隆法分离hPDLSCs。流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,结晶紫染色观察hPDLSCs克隆形成。hPDLSCs成骨、成脂诱导分化后采用茜素红、油红O染色,观察hPDLSCs的多向分化能力。利用自主研发的力学加载装置,对PDLSCs加载0~120 kPa的周期性流体静压力7 d,采用Real-time PCR检测hPDLSCs中过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)、抗Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性螺旋-环-螺旋转录因子(Scleraxis)及牙骨质蛋白1(CEMP1)的表达量。结果单克隆法分离的hPDLSCs高表达干细胞表面标志物CD90(95.2%)、CD105(95.5%),而低表达CD45(1.3%)、CD34(1.36%)。hPDLSCs具有克隆形成能力,并且成骨、成脂诱导后细胞出现红色钙结节和脂滴。经周期性力学刺激后,hPDLSCs中Scleraxis的表达显著高于对照组,而PPAR-γ、Runx2及CEMP1的表达与对照组相比无显著差异。结论周期性力学刺激可以维持hPDLSCs向牙周膜韧带成纤维细胞分化的潜能。     

人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞与人牙周膜干细胞成骨分化能力的对比研究

目的:比较人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesechymal stem ceils,hUCWJMSCs)与人牙周膜干细胞(periodontal mesenchymal stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力.方法:体外培养hUC-WJMSCs和hPDLSCs.MTT法检测细胞增殖情况;成骨诱导后测定细胞的ALP活性,茜素红染色检测细胞矿化能力,Real-timePCR分析OPN和Runx2基因的表达.结果:hUCWJMSCs增殖能力高于hPDLSCs;经矿化诱导后hPDLSCs ALP表达、矿化结节形成高于hUCWJMSCs(P＜0.05);Runx2在hPDLSCs中表达高于hUCWJMSCs(P ＜0.05);而hUCWJMSCs中OPN表达高于hPDLSCs(P＜0.05).结论:hUCWJMSCs、hPDLSCs均具有成骨分化能力,hPDLSCs成骨分化能力较强.     

miR-203介导TNFα调控牙周膜干细胞成骨分化

目的:体外研究miR-203介导TNFα调控人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cell,hPDLSCs)成骨分化能力及其分子机制.方法:qPCR检测人牙周膜干细胞成骨诱导前后TNFα和成骨基因的表达;qPCR及茜素红染色检测TNFα对牙周膜干细胞成骨分化能力及miR-203...     

静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响。方法用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性。结果流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)%、(49.89±0.75)%、(55.77±1.57)%,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)%。MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04。结论适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖。     

糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化能力影响的研究

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs-HSA)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)骨向分化能力的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,流式细胞仪检测牙周膜细胞表型分子CD44、CD146、stor-1、CD90,对其进行干细胞鉴定,将培养出的牙周膜干细胞与不同浓度的AGE-HSA共同培养,并矿化诱导后茜素红染色观察钙结节形成情况、碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(real timePCR)检测成骨基因表达情况。结果:流式细胞仪细胞表型分析CD44、CD146、stor-1、CD90表达呈阳性。成骨诱导21 d后茜素红染色,对照组和实验组均出现不同程度的矿化结节,定量分析显示1、10、100、200μg/mLAGEs组矿化能力均比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间矿化能力均有统计学差异(P<0.05),且随着AGEs浓度的升高,矿化能力逐渐降低。成骨诱导7 d ALP染色比较发现各实验组均比对照组减弱。成骨诱导1周后RT-PCR检测各实验组的成骨基因ALP、Runx-2、Col-1、Runx-2 mRNA表达水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度的实验组之间各成骨基因的表达也有统计学差异(P<0.05)。结论:AGEs能抑制HPDLSC的骨向分化,并在一定范围内呈浓度依赖性。     

周期性动态压力对人牙周膜干细胞中力生长因子表达的影响

目的:探讨周期性动态压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)膜片中力生长因子(MGF)表达的影响。方法:取第3代h PDLSCs及其膜片,并按照不同压力将其随机分为0(对照)、0~90、0~120、0~150 KPa组后,置于细胞压力加载室内以0.1 Hz频率连续加载1 h。分别于加压后0、12、24、36 h各时间点,用CCK-8法检测各组细胞的增殖;RT-PCR法检测各组h PDLSCs膜片中MGF、ALP、Col-ⅠmRNA的表达。结果:0~120 KPa组可显著促进h PDLSCs增殖(P<0.05),其次为0~150 KPa组;各周期性动态压力作用于h PDLSCs膜片后12 h均能明显上调其MGF mRNA表达水平(P<0.05),受力后24 h达到峰值;36 h后表达水平下降,除0~120 KPa组仍明显高于对照组(P<0.05)外,其他两组均回到对照组水平。其中以0~120 KPa组的MGF mRNA表达水平最高(P<0.05),且在该压力条件下还能明显促进h PDLSCs膜片中Col-Ⅰ、ALP mRNA的表达(P<0.05)。结论:0~120 Kpa/1 h周期性动态压力能促进h PDLSCs膜片中MGF mRNA的表达,促进该细胞的增殖与分化潜能。     

miR-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的：研究 miR-20a 对人炎症牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法：分离培养人牙周膜干细胞后用 qRT-PCR检测 miR-20a 的表达,并且在瞬时转染 miR-20a mimics 和 inhibitor 后成骨诱导,用茜素红染色,Western Blot 和 PCR 的方法检测成骨能力的改变。结果：人炎症牙周膜干细胞中 miR-20a 表达降低,转染 mimics 后成骨能力升高,转染 inhibitor 后成骨能力降低。结论：miR-20a 可以促进人炎症牙周膜干细胞成骨分化。     

釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的研究釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响并探究其可能的机制。方法原代培养人牙周膜干细胞,经过流式鉴定后选取第3代细胞进行实验。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)的釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响;通过Trichrome染色和Von Kosa’s染色检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞胶原合成和矿化结节形成的影响;不同浓度釉基质衍生物和DDK1作用人牙周膜干细胞之后,通过Western blot和qRT-PCR检测β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ及NLK表达情况。结果釉基质衍生物对人牙周膜干细胞的增殖具有明显的促进作用,并呈现剂量和时间依赖性;釉基质衍生物处理人牙周膜干细胞之后,矿化结节形成和胶原合成显著增多,骨钙素、Ⅰ型胶原、RunX2的表达明显增多;另外,釉基质衍生物处理能显著增加β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ和NLK的表达,且该作用可被DDK1抑制。结论釉基质衍生物对体外培养的人牙周膜干细胞有促进增殖和成骨分化的作用,其作用可能是通过Wnt/β-连环蛋白实现的。     

大气压常温等离子体对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究大气压常温等离子体(atmospheric room temperature plasma, ARTP)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs)成骨分化的影响。方法:原代培养人牙周膜细胞,采用免疫磁珠法从中分选出hPDLSCs,通过成骨和成脂诱导培养检测其分化潜能;利用不同时长ARTP处理hPDLSCs,行成骨诱导培养,测定细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,茜素红染色(alizarin red staining, ARS)及半定量分析法观察细胞矿化结节形成状况,RT-qPCR测定细胞成骨相关基因的表达状况,测定细胞内活性氧粒子(reactive oxygen species, ROS)含量变化。结果:采用免疫磁珠法分选出的hPDLSCs呈长梭形、多角形,表现出良好的成骨和成脂分化潜能;ARTP处理时长1 min可提高hPDLSCs的ALP活性,增加细胞内矿化结节形成量;能够提升hPDLSCs成骨相关基因ALP、COL-I、RUNX2的表达水平;ARTP提高了hPDL...     

静压力大小对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达影响的研究

目的研究不同大小静压力对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响。方法采用第4代人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs）,对照组不加力,实验组用静压力加载装置分别施加15 kPa、30 kPa、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后立即收集样本,用免疫细胞化学染色技术检测细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达情况,用彩色病理图像分析仪分析各组细胞的阳性表达。结果与对照组比较,15 kPa压力下,实验组Ⅰ型胶原蛋白表达显著增多（t=5.806,P〈0.05）;30 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达有所下降但仍高于对照组（t=4.933,P〈0.05）;45 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组明显减少（t=5.654,P〈0.05）。结论适当大小的静压力能促进人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达,但静压力过强则会抑制其表达。     

低氧对人牙周膜干细胞骨向分化影响的实验研究

基因,如碱性磷酸酶、骨钙素和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白的表达,从而抑制了人牙周膜干细胞骨向分化.     

微重力环境下Smads信号通路对人牙周膜干细胞成骨向分化的影响

目的:了解Smads信号通路在模拟微重力条件下对人牙周膜细胞成骨向分化的影响。方法:自手术拔除的人牙周膜中培养获得牙周膜细胞,利用有限稀释法培养获得人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)。采用旋转细胞培养系统(rotary cell culture system,RCCS)建立模拟微重力环境,将细胞分为对照组(正常重力组)、模拟微重力组,应用实时定量PCR检测Smads信号分子表达及加入Smads抑制剂后成骨标志物的表达,流式细胞仪检测磷酸化Smad表达。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学处理。结果:与对照组相比,模拟微重力组Smads 2、3、4 mRNA表达量显著增加,呈时间依赖性,在2h达到峰值,随后开始下降。Smads7在2h时开始上升,观测时间内未捕捉到其下降。流式细胞检测发现,p-Smads在30min时开始出现高表达(29.39%),2h时达到峰值,表达量为91.32%。加入Smads抑制剂后,p-Smads表达下降至5.3%,成骨标志物COL1、ALP、OCN表达显著下降(P<0.05)。结论:模拟微重力环境下,Smads信号通路参与了hPDLSCs成骨向分化。     

人牙周膜干细胞向神经细胞诱导分化的实验研究

目的:体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其体外向神经细胞分化的能力,为牙周组织工程提供可靠的种子细胞来源.方法:采用有限稀释法克隆分离纯化人牙周膜干细胞,将获得的第5代细胞用神经诱导体系连续培养,观察细胞形态变化;通过免疫组织化学染色技术检测诱导后神经胶质细胞标志物(GFAP)、神经元标志物(NSE)的表达.结果:人牙周膜细胞在体外诱导后出现了神经胶质样、神经元细胞分化的形态学改变,并有相应标志蛋白的表达,结论:人牙周膜干细胞在体外神经诱导体系作用下出现向神经细胞的分化.     

IGF-1对人牙周膜干细胞成骨能力的影响

目的探讨IGF-1是否影响人牙周膜干细胞的成骨能力。方法分离、培养牙周膜干细胞,实验分为两组：对照组和实验组（经IGF-1诱导）,进行矿化能力检测、实时定量RT-PCR检测、ALP活性检测。结果实验组人牙周膜干细胞体外矿化能力明显强于对照组。实验组人牙周膜干细胞Runx2,Collagen type I,Osteocalcin的表达以及ALP活性明显高于对照组。结论 IGF-1影响人牙周膜干细胞在体外的成骨能力。     

GSK126通过Wnt/β-catenin信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化能力

目的体外研究GSK126对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化能力的影响及调控机制。方法分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后EZH2和H3K27me3的表达;新型EZH2抑制剂(GSK126)加入成骨诱导液培养后,qPCR检测EZH2和成骨基因(RUNX2、ALP、OCN)mRNA水平的表达;Western blot检测H3K27me3及β-catenin蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;检测Wnt/β-catenin抑制剂(XAV939)对GSK126作用后细胞成骨分化能力的影响。结果成骨诱导后牙周膜干细胞中成骨基因(RUNX2、ALP、OCN)的表达水平明显升高,而EZH2和H3K27me3的表达水平显著下调;GSK126可显著抑制EZH2、H3K27me3的表达,但明显促进hPDLSCs的成骨分化能力及β-catenin蛋白水平的表达;进一步实验结果表明XAV939可逆转GSK126对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用。结论 GSK126可通过Wnt/β-catenin信号通路调控人...     

低强度高频振动对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究低强度高频振动（low-magnitude high frequency vibration,LMHFV）对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）增殖、迁移、成骨分化能力的影响。方法 体外分离培养hPDLSCs;流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物;加载LMHFV（加速度=0.3 g,频率=40 Hz,时间=15 min/24 h）刺激后,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力;通过qRT-PCR、Western免疫印迹检测成骨相关基因、蛋白表达水平,通过茜素红染色检测细胞成骨分化能力。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 加载振动刺激后,hPDLSCs的增殖能力增强,迁移能力上升;RUNX2、ALP、Col-1、OCN的mRNA表达量和蛋白表达量均上升,茜素红染色结果与qRT-PCR、Western免疫印迹结果一致。结论 LMHFV可提高hPDLSCs的增殖、迁移能力和成骨分化能力。     

乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响

目的：观察乳铁蛋白（lactoferrin,LF）对体外培养的人牙周膜细胞（HPDLCs）增殖、迁移和成骨分化的影响。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,稳定传代后用 MTT 比色法、Transwell 法及划痕试验检测浓度分别为0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白对牙周膜细胞增殖和迁移的影响;矿化条件下,0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白作用牙周膜细胞后,茜素红染色法和实时荧光定量 PCR 检测矿化能力及成骨相关基因的表达。结果：10、20μg／ml 乳铁蛋白均能促进 HPDLCs 增殖、迁移（P ＜0．05）。10、20μg／ml 乳铁蛋白组矿化结节数量增多（P ＜0．05）,碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）、骨桥蛋白（OPN）表达量均有升高（P ＜0．05）。结论：乳铁蛋白能够促进人牙周膜细胞增殖、迁移与成骨分化。