利用ISSR和SSR分子标记构建北柴胡遗传图谱

以北柴胡 (Bupleurum chinense DC.) 种内杂交所得的F₁代96株植株为作图群体, 利用拟测交理论, 进行北柴胡遗传图谱构建。经父母本多态性筛选, 从30条ISSR (inter-simple sequence repeat, 内部简单重复序列) 和44对SSR (simple sequence repeat, 简单重复序列) 引物中筛选出28条ISSR和14对SSR多态性引物。对F₁代进行基因型和连锁分析, 初步构建了包含13个连锁群、80个 (72个ISSR和8个SSR) 位点的首张北柴胡遗传图谱。该图谱覆盖长度2 633.9 cM, 平均图距33.4 cM, 13个连锁群包含2～31个标记不等, 连锁群遗传距离15.4～1 295.7 cM。该图谱为北柴胡性状基因定位、图位克隆以及分子标记辅助选择育种等研究奠定了基础。     

基于SSR分子标记的柴胡遗传多样性与遗传结构分析

为探究柴胡遗传多样性和居群遗传结构,揭示柴胡的遗传变异情况,本研究利用18对SSR分子标记,对来自山西及周边省份的62个柴胡栽培和野生居群共619个植株进行遗传多样性以及居群遗传结构分析。结果显示:62个柴胡居群均具有较高的遗传多样性,柴胡野生居群的遗传多样性高于栽培居群, AMOVA分析表明柴胡居群内遗传变异大于居群间的变异。主坐标分析将柴胡居群分为3类,第一类为来自山西各地的野生柴胡居群,第二类由来自山西、河北、陕西、辽宁的栽培柴胡居群组成,第三类由来自山西和甘肃的34个栽培柴胡居群组成。STRUCTURE软件居群遗传结构分析预测62个柴胡居群的最佳分组数为2组,第一组组成与主坐标分析中分类为第三类的居群相同,第二组则包括有主坐标分析中划分为第一类和第二类的居群。主坐标分析、居群遗传结构分析以及NJ树聚类均将野生柴胡居群聚为一类,使其与栽培居群区分开来。本研究为柴胡的种质资源利用、遗传变异研究以及柴胡优质种质资源开发提供理论依据。     

利用ISSR及代谢产物标记检测贵州金钱草遗传多样性

目的：结合ISSR分子标记与金钱草主要代谢产物标记对贵州省共21份野生金钱草资源的遗传多样性进行分析,为其驯化种植及遗传改良提供理论依据。方法：以金钱草基因组DNA为模板,以优化的PCR体系筛选出引物进行ISSR标记扩增,应用NTsys 2.10e软件,对所得数据进行分析处理,并采用高效液相色谱法测定了主要代谢产物槲皮素和山柰素的含量,使用SPSS 19.0软件对测定数据进行统计分析与绘制聚类图。结果：用筛选出的15条ISSR引物共扩增出105条多态性条带,多态性条带占比达98.1%,各金钱草种质资源之间的遗传相似性系数范围在0.598 1~0.953 3之间,地理位置相距越近,遗传相似性越高,不同资源的槲皮素和山柰素含量差异较大,ISSR标记的聚类将21份金钱草资源分为2大类群6个亚群,代谢产物标记的聚类将其分为2大类群5个亚群。结论：贵州野生金钱草具有丰富的遗传多样性,应用ISSR及代谢产物槲皮素和山柰素标记均能较好地对金钱草资源进行聚类,但聚类结果存在差异,其亲缘关系与地理位置呈现一定的关联性。     

黄芩基因组SSR分子标记的开发及遗传多样性分析

本文通过生物信息学方法对黄芩基因组序列进行搜索,共得到12 775条SSR(simple sequence repeat)序列。黄芩基因组SSR重复主要以二核苷酸(68.32%)为主,其次为三核苷酸(18.63%);主要重复基序类型为CT/GA、TTC/GAA。通过SSR-PCR扩增,共筛选出9对扩增产物稳定性好,多态性及清晰度高的引物用于10个不同产地共50份黄芩材料的遗传多样性分析。结果显示,9对引物共检测出68个等位基因,平均每个SSR位点等位基因数是7个,有效等位基因数为3。He(expected heterozygosities)值为0.6,远远高于双子叶植物平均水平;PIC(polymorphism information content)平均值为0.72,大于0.5;Shannon’s信息指数为1.32,证明所收集的黄芩种质资源具有较高的遗传多样性。种间遗传分化系数(Gst)为0.131,即13.1%的遗传变异存在于居群间,86.9%的遗传变异存在于居群内。聚类分析结果表明,10个不同产地黄芩可分成两大类,但其与地理分布无显著关系。     

丹参、红花药材与丹红注射液指纹图谱相关性研究

目的 探讨丹参、红花药材与丹红注射液指纹图谱的相关性.方法 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以Kromasil C 18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,柱温30℃,检测波长263 nm.结果 丹红注射液标示26个共有指纹峰,有11个指纹峰来自丹参,14个指纹峰来自红花,表明丹红注射液与丹参、红花药材有良好的相关性.结论 所建立的高效液相色谱指纹图谱方法重复性好,可作为丹红注射液工艺与质量的控制标准之一.     

基于指纹图谱和成分定量的丹参化瘀颗粒质量评价研究

目的:建立丹参化瘀颗粒的HPLC指纹图谱及多成分定量分析方法,为其质量评价提供依据。方法:采用Agilent 5TC-C₁₈(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),以0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^-1,柱温30℃,进样量20μL,检测波长403 nm、230 nm及302 nm,测定12批次丹参化瘀颗粒指纹图谱,标定共有峰并进行归属分析及相似度评价,对采用对照品比对确认的成分进行含量测定。结果:12批丹参化瘀颗粒指纹图谱标定共有峰29个,其中8个来源于丹参、1个来源于天麻、2个来源于当归川芎药对、1个来源于红花、1个来源于芍药。通过对照品比对确认其中7个成分,分别为天麻素、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA。各批样品相似度均在0.99以上。结论:所建立的方法灵敏度高,专属性强,HPLC指纹图谱结合多成分定量测定能全面反映丹参化瘀颗粒内在质量,可用于其质量控制。     

丹参饮片、水煎液、配方颗粒的HPLC指纹图谱相关性研究

目的 研究丹参饮片、水煎液、配方颗粒指纹图谱的相关性。方法 采用HPLC法测定17批丹参饮片、水煎液、配方颗粒的指纹图谱,分别建立三者的对照指纹图谱,并进行相似度评价,并结合化学模式识别方法评价三者HPLC指纹图谱的相关性。结果 丹参饮片、水煎液、配方颗粒的HPLC指纹图谱均确定了8个相同的共有峰,并指认了其中7个共有峰分别为丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B。指纹图谱相似度评价结果显示,三者对照指纹图谱间的相似度均大于0.990;Pearson相关分析、聚类分析及主成分分析结果显示,丹参水煎液与配方颗粒质量更为接近;偏最小二乘法（PLS）分析结果表明,丹酚酸E、丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸B和峰8是影响指纹图谱信息分类的标志性成分。结论 丹参饮片、水煎液及其配方颗粒的化学成分基本一致,三者质量具有良好正相关性,可为丹参配方颗粒的生产全过程质量控制提供参考。     

丹参药材高效液相定量指纹图谱和抗氧化活性相关研究

目的建立丹参药材280 nm定量指纹图谱和测定其抗氧化活性,并对两者进行二值相关分析。方法利用HPLC方法构建丹参药材指纹图谱,并测定各样品羟自由基清除率,用系统指纹定量法对丹参进行整体定量鉴别,并采用相关分析方法研究HPLC指纹峰与抗氧化活性的联系。结果 10批样品中以样品S9抗氧化活性最大。HPLC-抗氧化活性相关分析结果表明,44个共有峰中有18个峰（峰2、3、9、10、11、14、16、18、19、21、23、24、29、31、32、34、35、43）与羟自由基清除率呈正相关,其余为负相关。结论本文建立了丹参药材280nm HPLC指纹的抗氧化谱效关系,为药材活性成分筛选和丹参质量控制提供一个参考方法。