新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后细胞凋亡的研究进展

缺氧缺血性脑损伤后迟发性神经元死亡的发生与细胞凋亡密切相关。采用新生大鼠HIBD模型进行脑缺血缺氧后细胞凋亡的研究,对进一步理解新生儿缺氧缺血性脑损伤的发病机制,摸索确切的治疗途径很有意义。     

缺氧适应对缺血缺氧损伤鼠脑细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧适应对小鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用。方法 24只小鼠分成6组,对照组A;缺氧预处理组B;IH1组：缺血缺氧1组,在缺氧仓内放1h;IH2组：缺血缺氧2组,在缺氧仓内放2h;B IH1组,缺氧预处理后30min行缺血缺氧处理;B IH2组。采用DNA末端标记技术（TUNEL法）,观察缺血缺氧及缺氧适应后脑细胞凋亡的变化情况。结果 缺氧适应和缺血缺氧1组均可见凋亡细胞,严重缺血缺氧组几天凋亡细胞,缺氧适应增加了严重缺氧组凋亡细胞的数量。结论 缺氧适应可改善脑缺血缺氧超微结构损伤,对迟发性的神经原损伤有保护作用;缺氧适应诱导脑细胞凋亡;缺氧适应可使缺血缺氧脑细胞的归缩由坏死变成凋亡。     

死亡受体介导的信号转导与脑缺血再灌注损伤

脑缺血再灌注损伤与细胞凋亡密切相关，死亡受体介导的信号转导途径是诱导细胞凋亡的外在途径。脑缺血再灌注损伤中，出现TNFR1和TNF、Fas和FasL以及NF-kB的表达上调和，或活化。综述这些变化与缺血性脑损伤的关系，为更好的治疗缺血再灌注脑损伤提供新的思路。     

线粒体介导的凋亡途径与浅低温脑保护效应

低温有明显的神经保护作用，但其确切的作用机制尚未阐明。凋亡参与了缺血性脑损伤，且加重损伤程度。线粒体在凋亡过程中的作用越来越受到重视，多种促和抗凋亡因素作用于线粒体，引发线粒体功能和生化方面的改变，决定细胞损伤后的命运。最近在体和离体实验证实，凋亡及凋亡过程中的相关基因表达变化与浅低温的保护作用密切相关。就低温对线粒体介导的细胞凋亡效应作一综述。     

心肺复苏后延迟开始低温对新生猪缺氧缺血性脑损伤的影响

研究结果表明早期低温是治疗围生期新生儿缺氧缺血性脑损伤最有效的措施之一~([1]).在临床实践中,新生儿从诊断窒息性脑损伤到开始实施低温治疗需要一定的时间.本研究旨在观察低温治疗延迟至心肺复苏后4 h开始对新生猪缺氧缺血性脑损伤的影响.     

β淀粉样蛋白在缺氧/缺血性脑损伤中的作用研究

β淀粉样蛋白(Aβ)由β淀粉样前体蛋白在β-分泌酶和γ-分泌酶作用下产生。Aβ积累和聚集, 形成寡聚体和纤维, 并在大脑中沉积, 导致功能性神经元死亡、认知损伤。Aβ诱导炎性反应、氧化应激、自由基损伤、钙离子紊乱等造成神经细胞的坏死和凋亡。近期研究发现Aβ在缺氧/缺血性脑损伤中也发挥重要作用。本文综述Aβ在缺氧/缺血性脑损伤中的作用机制。     

死亡受体介导的信号转导与脑缺血再灌注损伤

脑缺血再灌注损伤与细胞凋亡密切相关,死亡受体介导的信号转导途径是诱导细胞凋亡的外在途径。脑缺血再灌注损伤中,出现TNFR1和TNF、Fas和FasL以及NF-κB的表达上调和/或活化。综述这些变化与缺血性脑损伤的关系,为更好的治疗缺血再灌注脑损伤提供新的思路。     

线粒体介导的凋亡途径与浅低温脑保护效应

低温有明显的神经保护作用,但其确切的作用机制尚未阐明。凋亡参与了缺血性脑损伤,且加重损伤程度。线粒体在凋亡过程中的作用越来越受到重视,多种促和抗凋亡因素作用于线粒体,引发线粒体功能和生化方面的改变,决定细胞损伤后的命运。最近在体和离体实验证实,凋亡及凋亡过程中的相关基因表达变化与浅低温的保护作用密切相关。就低温对线粒体介导的细胞凋亡效应作一综述。     

颅脑创伤后缺氧诱导因子-1α表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的 探讨缺氧诱导因子－1α（HIF－1α）在颅脑创伤后的表达及其对细胞凋亡的调控作用。方法 制作液压冲击大鼠脑创伤模型30只，用免疫组织化学方法（SP法）测定脑损伤后3、12、24、48、72h脑细胞HIF－1α蛋白表达、末端脱氧核苷酸介导的X－dUTP制品末端标记法（TUNEL）测定细胞凋亡、并用免疫组织化学和TUNEL双重标记法研究脑细胞HIF－1α表达与细胞凋亡的相互关系。结果 对照组，有少量细胞轻度HIF－1α和TUNEL阳性表达，在脑挫伤区和伤灶周围水肿区均出现较多的细胞HIF－1α阳性表达，48h达高峰，受伤3h有少量散在TUNEL阳性细胞，48h达高峰；双重标记法得出，在挫伤区和周围水肿区，3h后有逐渐增多的HIF－1α阳性细胞，在HIF－1α阳性表达较多区域TUNEL阳性表达也增多（两者相关系数r＝0.62），个别细胞还有HIF－1α和TUNEL同时表达。结论 颅脑创伤后继发性脑组织缺血缺氧可引起细胞凋亡，HIF－1α对细胞凋亡有促进作用。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤缺氧诱导因子1α表达与神经元凋亡

目的探讨缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemia braindamage，HIBD）时缺氧诱导因子1α（hypoxiainducible factor 1α，HIF—1α）表达与神经元凋亡的相关性，探索HIF—1α在神经元凋亡中的作用及对损伤神经修复重建的意义。方法新生10dSD大鼠40只，随机分为对照组和实验组，每组20只。实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎，氮氧混合气（92％氮气、8％氧气）缺氧2．5h，即为HIBD模型；对照组分离颈总动脉，不结扎，不作缺氧处理。分别于术后4、8、24、48及72h处死两组动物取脑组织，应用免疫组织化学法检测HIF—1α、活化的半胱天冬氨酸酶3（cleavedcaspase 3，CC3）的表达，应用TUNEL检测凋亡细胞。结果实验组H1F～1a蛋白表达在术后4h明显升高，8h达高峰，24h后下降；CC3蛋白于术后4h开始表达，8h有少量表达，24h明显升高，48h及72h维持较高水平。对照组各时间点HIF1α和CC3均有极少量弱阳性表达。实验组HIF—1α和CC3蛋白表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。TUNEL染色显示实验组术后随时间延长阳性细胞数逐渐增多，72h达高峰；但对照组TUNEL阳性细胞极少。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF—1α与促凋亡蛋白CC3表达趋势相反，HIF—1α对新生儿HIBD神经元可能具有保护作用，可望对缺氧缺血神经的修复重建发挥一定作用。     

一氧化氮合酶、p38MAPK、Caspase-3介导缺氧神经细胞凋亡机制的研究

目的探讨缺氧引起PC12细胞凋亡和NOS、p38MAPK和(Caspase-3在缺氧后神经细胞凋亡中的共同作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法测定缺氧对PC12细胞的生长抑制率,荧光显微镜观察缺氧对PC12细胞损伤,比色法测定PC12细胞在缺氧环境下乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术(FCM)检测缺氧PC12细胞NT阳性细胞百分比,以及细胞周期改变和细胞凋亡率, RT-PCR半定量分析nNOS、iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA的表达。结果MTT法测定缺氧抑制PC12细胞生长趋势;AO荧光染色缺氧24 h时PC12细胞可见凋亡小体;缺氧时间延长,LDH渗出量增多,NT阳性细胞百分比增大,S期细胞增多,细胞凋亡率升高,缺氧24 h调亡率达到45.67%;PCR结果分析显示nNOS mRNA在缺氧早期表达,iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA主要在缺氧晚期表达。结论缺氧能够引起PC12细胞凋亡现象,nNOS、iNOS分别在缺氧早期和晚期发挥神经毒性作用,NOS,p38MAPK和Caspase-3三种基因共同介导缺氧后PC12细胞凋亡。     

大鼠缺氧再灌注脑损伤时核因子-κB的表达

核因子κB(NF-κB)是一种广泛存在于各种细胞(包括神经元)核内的转录调节因子，在免疫、应激反应、炎症和细胞凋亡等方面具有重要作用。但是NF-κB的活化对神经元具有保护作用还是损伤作用并不十分清楚。本研究拟应用Western印迹分析技术检测缺氧再灌注后大鼠脑皮质内NF-κB的表达，并通过观察其下游靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的变化以期阐明NF-κB在缺氧再灌注脑损伤过程中的作用。     

吗啡延迟预处理对小鼠缺血性脑损伤的影响及经典型蛋白激酶C在其中的作用

目的 评价吗啡延迟预处理对小鼠缺血性脑损伤的影响及经典型蛋白激酶C(cPKC)在其中的作用.方法 雄性BALB/C小鼠40只,体重20～22 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10):假手术组(S组)、缺血性脑损伤组(ICI组)、吗啡延迟预处理组(MP组)和cPKC抑制剂Go6983组(G组).采用大脑中动脉阻塞法制备缺血性脑损伤模型.MP组于模型制备前24h时腹腔注射吗啡10 mg/kg；G组于模型制备前24h时腹腔注射吗啡10 mg/kg,并于模型制备前即刻侧脑室注射5μlGo6983(6 nmol).模型制备后6h时,进行神经功能缺陷评分,随后处死小鼠,取脑组织,测定脑水肿率和梗死体积,计算细胞凋亡率.结果 与S组相比,ICI组、MP组和G组神经功能缺陷评分、脑梗死体积、水肿率和细胞凋亡率升高(P＜0.01)；与ICI组相比,MP组神经功能缺陷评分、脑梗死体积、水肿率和细胞凋亡率降低(P＜0.01),G组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡延迟预处理可减轻小鼠缺血性脑损伤,机制与激活cPKC信号通路有关.     

缺氧、氧损伤对肾小管上皮细胞α3整合素表达及粘附性的影响

目的 观察体外培养肾小管上皮细胞缺氧，氧损伤后细胞粘附性及α3整合素的改变，为细胞粘附性改变在急性缺血性肾功能衰竭发病机制中的作用提供理论依据。方法 采用化学缺氧与氧损伤模型。免疫荧光激光共聚焦显微镜观察培养人肾小管上皮细胞α3整合素分子表达及分布的改变，微管吸吮法观察细胞与基质以及细胞间粘附力的改变。结果 单纯氧损伤后肾小管上皮细胞α3整合素的表达无显著改变，缺氧损伤后其极性分布减弱，缺氧-氧损伤后极分布改变显著，这种分布改变与细胞和基质间的粘附性减弱和细胞间粘附性增强显著相关，结论 缺氧，氧损伤后肾小管上皮细胞α3整合素的极性分布改变对肾小管与基质和细胞间的粘附性均有显著影响。这种改变有可能在急性缺血性肾功能衰竭中发挥作用。     

新生鼠缺血性脑损伤行人脐血间充质干细胞移植两种注射途径比较

目的比较颈外静脉注射、腹腔注射途径用于人脐带间充质干细胞在缺氧缺血性脑损伤鼠的移植效能。方法选取38只SD新生大鼠制备缺血性脑损伤动物模型,采用颈外静脉注射、腹腔注射途径行人脐带间充质干细胞移植,选用Morris水迷宫测试方法,了解干细胞干预后鼠学习记忆力改善情况,采用免疫组化方法,了解干细胞在鼠脑组织内的定植。结果 Morris水迷宫测试,颈外静脉注射组潜伏逃避时间较腹腔注射组缩短;脑片单位面积内DiI阳性细胞数,颈外静脉注射组较腹腔注射组增多。结论颈外静脉途径移植人脐带间充质干细胞进入缺氧缺血性脑损伤鼠脑内的效能明显高于腹腔途径移植。     

烧伤后细胞凋亡对肠黏膜屏障的影响

较大面积烧伤不仅引起皮肤或其深层组织的损伤，还会引起机体各个脏器和系统功能、代谢和形态学发生明显变化。其中严重烧伤后肠道病理变化的致病作用已得到广泛重视。过去人们认为严重创伤后肠道缺血、缺氧导致肠黏膜细胞坏死脱落，造成肠道内细菌和内毒素移位。近几年来，细胞凋亡的研究不断深入，创伤后缺血、缺氧条件下肠上皮细胞凋亡与肠黏膜屏障损伤的关系已引起了各国学者的关注，认为细胞凋亡在维持肠黏膜上皮细胞稳态中起重要作用。现将烧伤后细胞凋亡对肠黏膜屏障功能与结构的影响综述如下。     

新生鼠缺血性脑损伤行人脐血间充质干细胞移植两种注射途径比较

目的 比较颈外静脉注射、腹腔注射途径用于人脐带间充质干细胞在缺氧缺血性脑损伤鼠的移植效能.方法 选取38只SD新生大鼠制备缺血性脑损伤动物模型,采用颈外静脉注射、腹腔注射途径行人脐带间充质干细胞移植,选用Morris水迷宫测试方法,了解干细胞干预后鼠学习记忆力改善情况,采用免疫组化方法,了解干细胞在鼠脑组织内的定植.结果 Morris水迷宫测试,颈外静脉注射组潜伏逃避时间较腹腔注射组缩短;脑片单位面积内DiI阳性细胞数,颈外静脉注射组较腹腔注射组增多.结论 颈外静脉途径移植人脐带间充质干细胞进入缺氧缺血性脑损伤鼠脑内的效能明显高于腹腔途径移植.     

NAC对缺氧复氧后肾小管上皮细胞凋亡的干预作用

目的：研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞凋亡的表达及N-乙酰半胱胺酸（NAC）对其的影响。方法：选用人肾小管上皮细胞（HK2）建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度（1mmol／L、5mmol／L、10mmol／L）NAC干预组。流式细胞术检测细胞内氧化应激水平与细胞凋亡表达。结果：缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,HK2细胞凋亡细胞和死亡细胞数量增多,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,凋亡细胞和死亡细胞数量逐渐增多;NAC呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系减少凋亡细胞和坏死细胞的数量。结论：缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导HK2细胞凋亡和死亡;NAC可以通过抑制细胞内氧化应激减少细胞和坏死细胞的数量。     

脑外伤后神经细胞功能障碍的机制

创伤性脑损伤后受损区的神经元细胞常可发生继发性损伤，其机制包括细胞凋亡、兴奋性氨基酸的作用、钙离子的作用等，并且在动物模型上都得到了证实。