强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用

目的探讨强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用及其可能机制。方法健康雄性SD大鼠18只,右颈静脉及左心室插管,随机均分为3组:假伤组,大鼠给以假烫;烧伤组,制作30%TBSAⅢ度烫伤后,常规给以液体复苏;强化组,烫伤后给以强化胰岛素治疗,液体总量同烫伤组。测定伤后0、1、2、3、4、5、6h的血糖及左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LV-EDP)。伤后6h处死动物,留取左心室组织,分别用ELISA和定量PCR法测定TNF-α蛋白及其mRNA水平,Westernblot观察p-IκBα和IκBα变化。同时用烧伤血清培养新生鼠心肌细胞,观察胰岛素及其活化抑制剂LY294002对p-IκBα水平的影响。结果与假伤组比较,烧伤组动物伤后出现应激性高血糖反应,LVSP降低,LVEDP升高,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平升高,p-IκBα蛋白表达增高,IκBα蛋白表达降低(P<0.05或0.01)。烧伤大鼠经强化胰岛素治疗后,血糖维持在4.5～5.2mmol/L之间,左心室功能得到明显改善,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平显著降低,κBα的磷酸化和降解明显减轻(P<0.05或0.01)。LY294002能够消除胰岛素对烧伤血清培养心肌细胞κBα磷酸化的抑制作用。结论强化胰岛素可能通过减少IκBα的磷酸化降解而降低NF-κB活化,进而抑制心肌细胞TNF-α的转录与表达,发挥改善心肌功能的作用。     

脓毒症大鼠肾组织高迁移率族蛋白-1对肿瘤坏死因子-α表达的影响

采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型 ,探讨脓毒症时肾组织高迁移率族蛋白 1(HMG 1)的改变及其对TNF α表达的调节作用。动物分为正常对照组 (10只)、CLP组 (2 0只 )及正丁酸钠治疗组 (2 0只 ) ,CLP后 12h和 2 4h处死动物 ,留取肾组织和血标本分别检测HMG 1和TNF αmRNA表达、组织TNF α蛋白水平和血清肌酐含量。结果显示 ,CLP组 12h及 2 4h肾组织HMG 1和TNF αmRNA表达均显著增强 (P <0 0 5或 0 0 1)。正丁酸钠处理可显著抑制CLP后 12h及 2 4h肾组织HMG 1mRNA表达 (P <0 0 5 ) ,并明显下调 2 4h组织TNF αmRNA表达 (P <0 0 5 )及TNF α水平(P <0 0 1) ,同时血清肌酐含量比未治疗组亦显著降低(P <0 0 5或 0 0 1)。提示脓毒症时肾组织HMG 1表达可促进局部TNF α的合成与释放 ,从而诱导脓毒症动物急性肾功能损害。     

脓毒症时骨骼肌细胞糖皮质激素受体表达与低氧诱导因子关系的研究

目的研究脓毒症时骨骼肌中糖皮质激素受体(GR)表达与低氧诱导因子(HIF-1α)的关系,进一步阐明脓毒症时骨骼肌蛋白高分解代谢的机制。方法 54只Balb/c小鼠随机分为对照组、脓毒症组和治疗组。脓毒症组通过采用腹腔注射脂多糖(10mg/kg)诱导脓毒症(n=24);治疗组(n=24)在伤前2h分别使用糖皮质激素受体拮抗剂(RU38486(10mg/kg)灌胃,余处理同脓毒症组。同时设立对照组(n=6),于伤后24、6、1、2h取材。利用蛋白免疫印迹(western blot)测定肌组织重链肌球蛋白(MHC),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GR和HIF-1αmRNA的表达变化。结果在内毒素注射6h后,脓毒症小鼠骨骼肌MHC的含量较对照组显著减少,伤前使用糖皮质激素受体拮抗剂RU38486灌胃,于6h后骨骼肌MHC含量增多,后期均高于脓毒症组。脓毒症小鼠GR与HIF-1αmRNA表达在整个实验过程中显著增加;使用RU38486灌胃后,于伤后6h GR mRNA的表达明显降低(P<0.05),并维持在较低水平,在整个治疗过程中HIF-1α明显降低。相关性分析表明,脓毒症中GR与HIF-1α的表达呈正相关。结论体内GR表达增高是脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解显著增加的原因之一,其作用可能是在基因水平与HIF-1α协同作用,进而导致骨骼肌蛋白分解增强。     

胰岛素治疗对烫伤脓毒症骨骼肌蛋白高降解的影响

目的探讨胰岛素对烫伤脓毒症骨骼肌蛋白高降解的调节。方法沸水烫伤并注射内毒素建立烫伤和脓毒症兔模型,使用胰岛素控制血糖。检测伸趾长肌蛋白降解率和蛋白酶体的基因与蛋白表达变化。结果胰岛素治疗显著降低了伤后骨骼肌蛋白降解率和蛋白酶体的表达。结论胰岛素能抑制泛素-蛋白酶体途径活性的增强,减轻烫伤和脓毒症时骨骼肌蛋白高降解。     

脓毒症大鼠肝组织凝溶胶蛋白表达变化及血必净注射液干预的影响

目的 观察脓毒症大鼠肝组织凝溶胶蛋白(GSN)表达规律及中药血必净注射液干预的影响. 方法雄性Wistar大鼠104只,按随机数字表法分为正常对照组(8只)、假手术组(32只)、盲肠结扎穿孔(CLP)组(32只)、血必净组(32只),后两组采用CLP制备脓毒症大鼠模型.血必净组于术后2,12,24,36,48,60 h静脉注射血必净注射液,每次剂量4 ml/kg.分别于术后6,12,24,72 h处死大鼠留取血和肝组织标本,检测肝功能生化指标和肝组织GSN、Gc球蛋白含量及GSN mRNA表达水平. 结果与正常对照组(2.28±0.34)ng/mg和假手术组比较,CLP组大鼠肝组织GSN含量显著下降(P＜0.05),12 h其含量最低,为(1.42±0.50)ng/mg;而肝组织GSN mRNA表达于CLP后6 h即明显上调,72 h仍高于假手术组(1.203±0.053比1.030±0.084,P＜0.05);CLP组6～72 h肝组织Gc球蛋白含量较正对照常组、假手术组均有不同程度的升高(P＜0.05).血必净治疗6～72 h肝组织GSN含量均显著高于CLP组(P＜0.05),6,12,24 h血清ALT、AST水平则明显低于CLP组(P＜0.05).血必净干预对肝组织GSN mRNA表达和Gc球蛋白水平均无明显影响(P＞0.05).结论 脓毒症时肝组织GSN含量持续降低,血必净可通过增加动物肝组织GSN含量,减轻脓毒症所致的肝功能损伤.     

胰岛素治疗时机对严重多发伤合并应激性高血糖患者预后的影响

应激性高血糖作为严重多发伤患者不良预后的预警指标,在多发伤救治中日益得到认同.临床上胰岛素治疗则作为控制血糖的主要手段,但在胰岛素使用时机上尚存在争议.笔者通过对严重多发伤合并应激性高血糖的患者进行监测,分析不同时机使用胰岛素治疗对其预后的影响.     

脓毒症大鼠内毒素增敏系统改变与高迁移率族蛋白-1表达的关系

目的　探讨脓毒症时组织脂多糖结合蛋白 (LBP)和脂多糖受体CD14的改变及其与高迁移率族蛋白 - 1(HMG - 1)诱生的关系。　方法　采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)致脓毒症模型 ,大鼠随机分成正常对照组、假手术组、CLP组及杀菌 通透性增加蛋白治疗组 (rBPI2 1治疗组 )。检测肝、肺、肾和小肠组织LBP、CD14及HMG - 1基因表达的变化。　结果　CLP组术后 2h ,肝、肺、肾和小肠组织LBP CD14mRNA表达均有不同程度增高 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。与CLP组比较 ,rB PI2 1治疗组CLP后 12h和 2 4h肝、肺组织LBPmRNA表达明显受抑制 (P <0 .0 1) ,12h各组织及2 4h小肠CD14mRNA表达亦明显降低 (P <0 .0 5 )。同时 ,CLP组术后 6h肝、肺、小肠HMG - 1mR NA表达显著增高 (P <0 .0 5 ) ,2 4h达峰值 (P <0 .0 1) ,并持续至 72h。rBPI2 1早期治疗可显著降低12h各组织和 2 4h肝、小肠HMG - 1mRNA的表达。相关分析表明 ,CLP后肝、肺、肾及小肠组织LBP CD14mRNA表达与相应组织的HMG - 1mRNA表达均呈显著正相关。　结论　脓毒症时LBP CD14增敏系统可能参与了晚期炎症介质HMG - 1的诱生过程。     

强化胰岛素治疗重度烧伤并发应激性高血糖的临床研究

目的 探讨强化胰岛素治疗重度烧伤患者应激性高血糖的效果.方法 大面积烧伤合并应激性持续高血糖患者32例,根据降糖治疗方法不同分为两组,短效胰岛素组(A组)和强化胰岛素组(B组),对两组治疗7 d内平均血糖变化、7d内平均胰岛素用量、第一次术前占床天数进行分析.结果 强化胰岛素组在患者入院后7d内,平均随机血糖明显降低,在4.1 ～ 6.3 mmol/L之间波动,平均胰岛素用量14.6～19.4 U,明显低于短效胰岛素组;第一次术前占床天数强化胰岛素组为3.4～5.8 d,明显缩短.结论 在烧伤重症患者中,选择强化胰岛素能更及时、有效地控制血糖,缩短第一次术前占床天数,是重度烧伤时高血糖理想的治疗措施.     

严重烧伤后脓毒症合并高血糖的强化胰岛素治疗

目的探讨烧伤后早期强化胰岛素治疗对脓毒症合并高血糖患者体内过度炎性反应、脓毒症的发生、发展、并发症的出现及其预后的影响。方法依据治疗方法的不同将40例患者分成常规组和强化组。脓毒症并发高血糖期间胰岛素持续泵入,其中常规组血糖（BS）维持在10.1～11.1 mmol/L,强化组为4.4～6.1 mmol/L,同时监测两组患者血清中TNF-α、IL-6、IL-18和CRP等炎性介质及前白蛋白（PA）、尿素氮（BUN）的水平,并对脓毒症引起的并发症及死亡率进行分析。结果强化组于治疗后10、14、21 d,血清中TNF-α、IL-6、IL-18、CRP和BUN水平明显低于常规组（P〈0.05）,而PA明显高于常规组（P〈0.05）。强化组脓毒症的预后明显优于常规组。结论烧伤后早期强化胰岛素治疗减缓了脓毒症的进一步发生、发展,从而减少并发症的发生,降低了死亡率。     

胰岛素强化治疗对重度烧伤并发应激性高血糖老年患者早期认知功能及预后的影响

目的探讨胰岛素强化治疗对重度烧伤并发应激性高血糖老年患者早期认知功能、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100β含量和预后的影响。方法 80例重度烧伤并发应激性高血糖老年患者,按随机数字表法分为强化组(40例)和常规组(40例),强化组患者入院后即行胰岛素强化治疗,将血糖水平控制在6.0~8.0mmol/L,常规组患者入院后予以临床常规治疗,胰岛素控制血糖水平在8.1~10.0mmol/L。分别于入院即时(T0),治疗开始第1天(T1)、第2天(T2)、第3天(T3)、第5天(T4)和第7天(T5)测定简易精神状态量表(MMSE)评分、评价认知功能障碍的发生率,并检测血清NSE和S100β含量。观察两组患者多器官功能衰竭综合征(MODS)、脓毒症、低血糖发生率及病死率。结果治疗第2~7天,强化组MMSE评分显著高于相应时间点常规组,认知功能障碍发生率、血清NSE和S100β含量明显低于常规组(P0.05)。与入院即时比较,常规组和强化组分别从治疗第5~7天和第2~7天MMSE评分升高,认知功能障碍发生率和血清NSE、S100β含量下降(P0.05)。与常规组比较,强化组治疗近期MODS及脓毒症发生率显著下降(P0.05),低血糖发生率及病死率组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论胰岛素强化治疗可以改善重度烧伤老年患者早期认知功能,减少MODS和脓毒症发生率,降低患者血清NSE和S100β含量。     

胰岛素强化治疗与重组人生长激素在危重烧伤救治中的联合应用

目的 从代谢角度评估在危重烧伤患者救治中联合应用胰岛素强化治疗与重组人生长激素(rhGH)的临床价值.方法 选择2001～2007年15例重度烧伤患者,根据血糖水平而采取不同的降糖治疗措施,其中常规胰岛素加rhGH治疗组(常规组)9例,胰岛素强化治疗和rhGH联合应用治疗组(强化组)6例.两组均于伤后4天内手术切、削痂植皮,术后连续14天每晚皮下注射rhGH(0.3U/kg),常规组在静脉营养的葡萄糖注射液中按常规比例加入中性胰岛素,强化组同时给予持续静脉泵入胰岛素,动态观察两组患者血糖、血浆氨基酸谱、前白蛋白、血清K 及尿中3-三甲基组氨酸(3-MH)水平的变化.结果 强化组治疗3天后血糖、血钾、氨基酸及尿3-MH水平均显著低于常规组(P《0.05),而血浆前白蛋白水平显著高于常规组(P《0.05).结论 危重烧伤患者联合应用胰岛素强化治疗和rhGH可显著促进蛋白合成,有效控制烧伤后的高血糖反应,消除单独应用rhGH后血糖波动的副作用,有益于危重烧伤后高代谢的调节.     

脓毒症大鼠多器官白介素18表达及其与内毒素血症的关系

目的　观察盲肠结扎穿孔术 (CLP)所致脓毒症大鼠重要脏器白介素 18(IL 18)基因表达的变化规律 ,并初步探讨IL 18与内毒素血症的关系。方法　5 4只Wistar大鼠随机分为正常对照组 (n =6 )、CLP组 (n =36 )和重组杀菌 /通透性增加蛋白 (rBPI2 1)治疗组 (n =12 ) ,检测动物肝、肺、肾组织中IL 18mRNA表达水平、内毒素水平和器官功能指标的改变。结果　CLP大鼠肝、肺组织内毒素水平迅速升高 ,于 2h达峰值 (P <0 0 1) ,4 8～ 72h又再度回升 ;肾组织内毒素水平升高较晚 ,于 12h达峰值 (P <0 0 1)。rBPI2 1治疗后各组织内毒素水平均显著降低 (P <0 0 5或 0 0 1)。CLP术后各组织中IL 18mRNA表达显著升高 ,分别于 6～ 12h达峰值 (P <0 0 5 ) ,其后下降。rBPI2 1治疗可显著抑制CLP术后 12h大鼠肺、肾组织IL 18mRNA表达 (P <0 0 5 ) ,肝脏IL 18mRNA表达也降至正常范围。此外 ,与CLP组相比 ,rBPI2 1治疗动物血清谷丙转氨酶、肌酐水平和肺组织髓过氧化物酶活性均显著降低。结论　严重腹腔感染后大鼠体内IL 18mRNA表达明显上调 ,其改变与内毒素的刺激作用密切相关 ;IL 18作为一种重要的促炎细胞因子参与了脓毒症的发生、发展过程。     

胰岛素强化治疗对高血糖严重烧伤患者血清脂联素和C反应蛋白的影响

目的探讨胰岛素强化治疗对高血糖严重烧伤患者血清脂联素和C反应蛋白的影响。方法 40例重度烧伤患者随机分为胰岛素强化治疗组（血糖控制在4.4～6.1mmol/L）和胰岛素常规治疗组（血糖控制在10.0～11.1mmol/L）,分别于治疗前和治疗24h、3d、10d抽血测定脂联素和CRP水平。结果胰岛素强化治疗组血清脂联素较治疗前及常规治疗组明显升高（P〈0.01）,CRP较常规治疗组明显降低（P〈0.01）。结论胰岛素强化治疗使血糖控制在4.4～6.1mmol/L,可拮抗烧伤后机体呈现的高炎状态,改善胰岛素抵抗。     

帕立骨化醇上调糖尿病大鼠肾脏中胰岛素受体的表达

目的观察维生素D受体(VDR)激动剂-帕立骨化醇对糖尿病大鼠肾脏胰岛素受体表达的影响。方法 SD大鼠腹腔注射链脲菌素75 mg/kg建立糖尿病(DM)模型,将诱导成功的20只DM大鼠随机分为糖尿病组(DM组)、DM+帕立骨化醇治疗组(DA组)。另设相配的10只SD大鼠为对照组(NC组)。第10周测体质量(BW)、收缩压(SBP),空腹血糖(BG)、血肌酐(Cr),24 h尿蛋白定量(24 h UP)及尿液足细胞(UPC)的排泄;RT-PCR检测肾组织nephrin、desmin、胰岛素受体α(IRα)的mRNA表达水平;Western boltting检测肾组织IRα蛋白和磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)的表达水平。结果 DM组BG、Cr、24 h UP较NC组显著升高,BW显著降低,SBP、UPC无统计学差异。DM组nephrin mRNA、IRαmRNA及蛋白质,P-Akt蛋白质的表达较NC组显著降低;desmin mRNA的表达较NC组显著增加。帕立骨化醇降低DM大鼠的Cr、24 h UP,恢复肾组织nephrin、IRα、P-Akt的表达,抑制desmin的表达。结论帕立骨化醇上调nephrin并抑制desmin的表达,对足细胞起保护作用;改善胰岛素受体α的表达及磷酸化Akt水平,增强胰岛素信号通路,抑制高糖诱导的胰岛素对抗。     

一次性力竭运动对小鼠肝脏和骨骼肌内质网应激的影响

目的:观察一次性力竭运动对小鼠肝脏和骨骼肌组织内质网应激的影响。方法:16只雄性C57/BL6小鼠随机分为安静组和运动组,每组8只。运动组进行一次性力竭游泳,4小时后取材;安静组不运动,取材时间和方法同运动组。测定肝脏和股四头肌内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、磷酸化和非磷酸化的双链RNA依赖的蛋白激酶样内质网类激酶[double-stranded RNA-dependent protein kinase(PKR)-like ER kinase,PERK]、磷酸化和非磷酸化的肌醇需酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE1)的蛋白表达量及GRP78、剪切型的X盒结合蛋白1(X box binding protein 1 splicing,XBP1s)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、生长停滞和诱导DNA损伤基因34(growth arrest and DNA damage-inducible gene 34,GADD34)mR-NA的表达量,测定血糖、肝糖原和肌糖原水平,光镜下对肝脏和骨骼肌组织进行形态学观察。结果:与安静组相比,运动组肝脏和股四头肌内质网应激标志性蛋白GRP78、p-PERK/PERK、p-IRE1/IRE1及GRP78、XBP1s、CHOP、GADD34的mRNA表达均显著增加(P<0.01),血糖、肝糖原和肌糖原均显著下降(P<0.05)。运动组糖原含量与内质网应激标志物表达量呈负相关(P<0.01),部分肝细胞胞浆水肿。结论:一次性力竭性游泳可引起内质网应激增强。肝糖原和肌糖原的储备和消耗可能与内质网的应激程度有关。