丁内酯-Ⅰ对小鼠卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

目的:观察丁内酯-Ⅰ(BL-Ⅰ)对小鼠未成熟卵的体外成熟及发育能力影响。方法:用不同浓度的BL-Ⅰ培养液培养小鼠未成熟卵3h或6h,观察卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的发生率。将6.25μmol/L和100μmol/L的BL-Ⅰ培养液分别培养未成熟卵3h和6h,以抑制其核的成熟,然后移入成熟培养液继续培养成熟,行体外受精,观察受精率和胚胎发育至囊胚的能力,并与对照组进行比较。结果:BL-Ⅰ培养液培养3h时,6.25μmol/LBL-Ⅰ就可抑制未成熟卵发生GVBD;培养6h时,100μmol/L才能抑制未成熟卵的GVBD。两种情况下,各组间的成熟率无差异。6.25μmol/L组卵母细胞的受精率(83.1%)和囊胚形成率(25.4%)虽低于体内成熟组(93.3%和46.4%),但显著地高于体外成熟组(59.9%和4.9%)。结论:BL-Ⅰ能可逆性地抑制小鼠未成熟卵的核成熟且不影响其成熟能力,适量的BL-Ⅰ对核成熟的短暂性抑制可显著提高小鼠未成熟卵的发育能力。     

冻融体外受精-胚胎移植周期人未成熟卵母细胞的体外成熟及纺锤体结局

目的:探讨冻融的不同状态人未成熟卵母细胞体外成熟后纺锤体状态与受精率的关系。方法:随机收集本中心108个体外受精-胚胎移植周期(IVF)中183枚不同状态废气的成熟卵母细胞,分为:卵丘-卵母细胞复合物组,48枚;裸卵组,135枚,其中第一次减数分裂中期(MI)65枚,生发泡期(GV)70枚。玻璃化冷冻保存,经解冻、体外培养成熟后,应用Polscope成像系统观察纺锤体,然后行卵胞浆内单精子显微注射受精,记录各指标情况。结果:①卵丘-卵母细胞复合物组与裸卵组的存活率、体外成熟率、纺锤体出现率、受精率比较,均无统计学差异(P>0.05);②GV组的存活率显著高于MI组(P<0.05),而前者的体外成熟率显著低于后者(P<0.05);③各组体外成熟后有纺锤体出现的卵母细胞受精率均显著高于无纺锤体组(P<0.05,P<0.01)。结论:冻融IVF周期不同状态的人未成熟卵母细胞都有一定发育潜能;有纺锤体出现的冻融人未成熟卵母细胞质量较高。     

冷冻保存人类未成熟卵母细胞对其发育潜能的影响

目的 评价冷冻保存人类未成熟卵母细胞对其发育潜能的影响。方法 收集常规胞质内单精子显微注射-胚胎移植（ICSI-ET）中不成熟的卵母细胞168个,根据成熟程度分为生发小泡期（GV）卵母细胞103个和第1次减数分裂中期（MI）卵母细胞65个,再将各期卵母细胞分别分为冷冻组和对照组,冷冻组细胞经慢速冷冻-快速融解（慢冻-速融）后在体外培养成熟,对照组直接进行体外培养成熟。最后进行免疫荧光染色并观察。结果 GV冷冻组和GV对照组卵母细胞之间体外成熟率（分别为69．1％、74．3％）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;GV冷冻组和GV对照组卵母细胞之间纺锤体形态正常率（分别为28．9％、53．9％）和染色体形态正常率（分别为23．7％、50．0％）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;MI冷冻组和MI对照组卵母细胞之间体外成熟率（分别为68．6％、88．0％）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。MI冷冻组和MI对照组卵母细胞之间纺锤体形态正常率（分别为20．8％、54．6％）和染色体形态正常率（分别为25．0％、63．6％）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;GV冷冻组和MI冷冻组之间各项结果比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论 应用常规慢冻．速融方案并不能很好地保存未成熟卵母细胞的体外成熟后的纺锤体形成能力,未成熟的卵母细胞的发育潜能从而受损。     

氯化锶不同浓度及作用时间对小鼠孤雌胚类原核数量的影响

目的:探讨不同浓度及作用时间的氯化锶(SrCl2)对小鼠卵母细胞孤雌激活胚胎中出现类原核数量及发育潜能的影响,建立能模拟精子效应的小鼠孤雌的激活体系。方法:分别用5 mmol/L、10 mmol/L、15 mmol/L、20 mmol/L浓度的SrCl2激活小鼠卵母细胞,观察激活胚的类原核数量及发育潜能,然后在最佳刺激浓度的SrCl2的激活液中分别处理4 h、6 h、8 h,观察类原核数目及形态,分析SrCl2浓度对小鼠卵母细胞激活效果的影响。结果:hCG注射后18 h取小鼠卵母细胞,在10 mmol/L SrCl2浓度下激活6 h,出现双原核(2PN)百分比显著高于其它浓度SrCl2处理组(P0.01),且与小鼠体外受精6 h后的2PN率及囊胚形成率无统计学差异(P0.05)。结论:10 mmol/L SrCl2条件下激活小鼠卵子6 h产生的孤雌胚胎中出现2PN率及发育潜能最高,提示10 mmol/L SrCl2激活处理6 h可以模拟精子对卵子的激活条件。     

人黄体期卵母细胞的体外成熟及玻璃化冷冻的实验研究

目的:探讨未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)技术联合玻璃化冷冻保存黄体期卵母细胞对某些女性肿瘤患者的生育能力的保存情况。方法:采集因妇科肿瘤等行卵巢切除手术过程中穿刺获取的256枚未成熟卵母细胞,按取卵时患者的月经周期分为卵泡期组(143枚)与黄体期组(113枚),每组再随即分为新鲜对照组及玻璃化冷冻组。分别进行IVM后行新鲜卵胞质内单精子注射(ICSI)授精和玻璃化冻融卵ICSI授精,比较各组间IVM后MII卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率。结果:①卵泡期与黄体期卵母细胞的IVM率差异无统计学意义;而组间复苏存活率(68.0%vs 48.1%)有统计学差异(P<0.05);卵泡期与黄体期卵母细胞新鲜组间受精率、卵裂率、优质胚胎率无统计学差异,冷冻组间差异亦无统计学意义。②与新鲜组相比,玻璃化冷冻使卵泡期与黄体期卵母细胞的受精率均降低(P<0.01)。结论:黄体期未成熟卵母细胞可以体外成熟并有继续发育为优质胚胎的能力;玻璃化冷冻使卵母细胞受精率、卵裂率下降。IVM和冻融后体外授精是某些女性肿瘤患者保存生育能力的一种有临床应用前景的方式。     

氨基双吡酮对小鼠卵母细胞成熟的影响

目的研究氨基双吡酮(氨力农)对体外和体内小鼠卵母细胞成熟的抑制作用,检测磷酸二酯酶(PDE)3抑制剂氨力农能否作为一个潜在的避孕药。方法将不同浓度药物作用于体外培养的不成熟小鼠卵母细胞,以及注射于小鼠体内,观察其对卵母细胞成熟的阻滞作用并找出合适的浓度。卵母细胞成熟后进行卵胞质内单精子注射(ICSI),并进行移植,观察其受精率、胚胎形成情况以及出生后代比较。并监测体内注射组小鼠的不良反应情况。结果 (1)随着浓度的增加,氨力农导致减数分裂阻滞呈剂量依赖性,体外有效浓度为1μmol/L,而在体内为300 mg/kg。(2)其作用是可逆的。药物去除后,减数分裂恢复,小鼠卵母细胞成熟,并呈正常染色体排列和纺锤体组织。(3)与对照组比较,ICSI受精后,卵母细胞表现出正常的形态、受精率、卵裂、囊胚形成。(4)其出生后代表现出相似的体质量和生育能力。(5)在体内,注入一定浓度药物后小鼠表现为不孕,停药后恢复。结论氨力农可以抑制体外和体内小鼠卵母细胞的成熟,并且是可逆的;交配实验证明氨力农可能可作为一种避孕药物。     

原癌基因c-erbB_2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨原癌基因c-erbB2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法:建立小鼠卵 母细胞体外培养模型,用不同浓度反义c-erbB2寡脱氧核苷酸(c-erbB2ASODN)和反义c-myb寡脱氧 核苷酸(c-myb ASODN)分别与未成熟卵母细胞共孵育,观察c-erbB2ASODN和c-myb ASODN对 卵母细胞体外成熟的影响。结果:c-erbB2ASODN和c-myb ASODN均能呈剂量依赖方式抑制24h 卵母细胞的GVBD率和PB1排出率,并显著延迟其成熟的时间,而无义tat寡脱氧核苷酸则无此 作用。结论:原癌基因c-erbB2和c-myb均在卵母细胞成熟过程中起着重要的作用。     

体内外成熟过程中小鼠卵母细胞纺锤体形态和皮质颗粒分布的比较

目的:了解体内外成熟过程中小鼠卵母细胞减数分裂进程、纺锤体形态、皮质颗粒分布的差异。方法:分别收集体内和体外成熟2h、4h、8h、16h的卵母细胞,用免疫荧光法标记微管,Hochest33258标记染色体,FITC-LCA标记皮质颗粒,分别观察卵母细胞减数分裂进程、纺锤体形态和皮质颗粒分布,并进行比较。结果:与体外成熟卵母细胞相比,体内成熟的卵母细胞减数分裂进程高度一致。体内成熟的卵母细胞减数分裂中期的纺锤体呈两端逐渐变细的"纺锤状",且靠近卵膜(100%);而大多数体外成熟的卵母细胞的纺锤体两端宽大,呈"桶状",在第一次减数分裂中期和第二次减数分裂中期各有34.29%和43.24%靠近卵膜。体外成熟卵母细胞在第一次减数分裂中期和第二次减数分裂中期出现无皮质颗粒区的比例(分别为12.5%和75%)明显低于体内成熟卵(均为100%)。结论:体内和体外成熟的卵母细胞在减数分裂进程、纺锤体的形态和运动、皮质颗粒分布等方面均存在巨大的差异。体外成熟的卵母细胞在这些方面的变化可能与其发育能力下降有关。     

细胞松弛素B预处理人卵行玻璃化冻融后纺锤体与染色体变化的研究

目的:探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,CCB)预处理对改善人卵玻璃化冷冻的效果。方法:收集常规IVF-ET或ICSI-ET周期中成熟卵母细胞71枚,随机分成4组行玻璃化冷冻。A组(17枚)、B组(20枚)、C组(17枚)分别用CCB预处理20min、30min、40min后行玻璃化冷冻,D组(17枚)不用CCB处理直接玻璃化冷冻。冻存3周后融冻卵母细胞,复苏的卵母细胞行荧光染色固定,在共聚焦显微镜下观察各组卵母细胞纺锤体及染色体形态结构。结果:A、B、C、D各组间的复苏率(70.59%、64.71%、50.00%和64.71%)无统计学差异(P>0.05),4组间的纺锤体及染色体正常形态率(27.27%,30.00%,45.46%及33.33%)亦无统计学差异(P>0.05)。结论:冷冻使成熟卵母细胞纺锤体及染色体的正常形态结构受到一定程度的破坏,CCB并不能保护卵母细胞纺锤体及染色体在冻融过程中的损伤。     

不同浓度促性腺激素对促排卵周期中人类未成熟卵子体外成熟的影响

目的:研究体外成熟培养基中添加不同浓度促性腺激素(卵泡刺激激素和黄体生成激素)对卵子体外成熟培养以及其受精和后续的早期胚胎发育的影响。方法:收集生殖助孕治疗中废弃的人类未成熟卵子,将生发泡(GV)期未成熟卵子随机分为3组,添加终浓度分别为75 U/L的低浓度促性腺激素(低浓度组)和750 U/L的高浓度促性腺激素(高浓度组),以及不添加促性腺激素(空白对照组)进行体外成熟培养20小时,每组入组的卵子数分别为80、83和82枚。将成熟卵子进行卵胞质内单精子显微注射,研究卵子的体外成熟率、受精率以及卵裂率、可用胚胎率和优质胚胎率。结果:低浓度组的卵子体外成熟率最高(80.00%),空白对照组最低(76.83%),但差异无统计学意义(P0.05);低浓度组的受精率最高(67.19%),空白对照组最低(65.08%),但差异无统计学意义(P0.05);高浓度组的卵裂率最高(70.45%),空白对照组最低(63.41%),但差异无统计学意义(P0.05);低浓度组的可用胚胎率最高(28.57%),空白对照组最低(19.23%),但差异无统计学意义(P0.05);高浓度组的优质胚胎率最高(16.13%),空白对照组最低(3.85%),但差异无统计学意义(P0.05)。结论:不同浓度促性腺激素对促排卵周期中人类未成熟卵子的体外成熟和受精,及其后续的早期胚胎发育没有发现显著的影响。     

长效孕激素炔诺酮庚酸酯及复方18甲基炔诺酮对血清性激素结合球蛋白的影响

24例妇女肌注炔诺酮庚酸酯200 mg,肌注前血清性激素结合球蛋白(SHBG)为53.32±23.23 nmol╱L。注射后5天为41.99±17.06nmol/L(P<0.05),21天降至最低值14.72±10.01 nmol/L,以后逐渐回升,直至注射后84天仍未回复到原来水平(34.46±20.39 nmol/L)。10例妇女单次口服18甲基炔诺酮6 mg+炔雌醚3 mg,服药前血清SHBG水平为42.76±13.89 n mol/L,服药后7天为62.53±10.90 nmol/L(P<0.01),14天达峰值为71.33±5.77 nmol/L,以后持续此高水平,直至服药后56天;8例连续3次口服18甲+炔雌醚,每次间隔23天,服药前血清SHBG水平为44.94±15.36 nmol/L,第1次服药后9天为83.46±10.08 nmol/L(P<0.01),16天达峰值为91.74±2.28nmol/L,以后持续高水平直至第3次服药后30天,第2、3次重复给药对业已升高的SHBG水平无影明显响。第2、3次服药后LNG峰值明显高于首次服药后峰值6倍。     

甲状腺功能减退症与勃起功能障碍关系的初步探讨

甲状腺功能减退(HT)即甲状腺激素分泌不足的状态下,脂质代谢紊乱产生的高脂血症、血管内皮细胞功能障碍、血管平滑肌细胞舒张性下降等均可影响阴茎勃起功能。NO、CO、H2S及内皮素等在HT中起着重要作用。通过对高脂血症、高血糖、心血管病变的治疗及补充睾酮等,可明显改善阴茎勃起功能,因而积极治疗HT,对改善HT所致阴茎勃起功能障碍(ED)具有重要意义。内皮功能障碍被认为是ED的主要发病机制,因此治疗HT时同时改善内皮功能,也会对ED发挥治疗作用。同时HT引起的神经损伤也参与了ED。通过对这些物质、神经及其功能的深入研究,可为今后临床上治疗ED提供理论依据。     

新型左炔诺孕酮/炔雌醇复方避孕贴剂的家兔药代动力学研究

目的:探讨新型左炔诺孕酮(levonorgestrel,LNG)和炔雌醇(ethynylestradiol,EE)在家兔体内的药物动力学特征,评价多次给药后是否出现药物蓄积情况。方法:家兔在单次和多次给药及停止给药后不同时间点耳缘静脉采血,选择放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)法测定各时间点各组家兔雌/孕激素的血药浓度,使用药物动力学软件计算各药物动力学参数并对其进行统计分析。结果:单次给药后受试贴剂低(10cm2)、中(20 cm2)和高剂量(40 cm2)组血清LNG峰浓度(Cmax)分别为1.04±0.12 ng/ml、2.42±0.60 ng/ml和4.90±1.39 ng/ml,3组间有显著差异(P<0.05)。血药浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为49.93±9.79h.ng/ml、115.14±34.25 h.ng/ml和251.22±80.55 h.ng/ml,3组间有显著差异(P<0.01);血清EE峰浓度(Cmax)分别为112.00±45.50 pg/ml、139.23±28.23 pg/ml和290.26±66.62 pg/ml,中、高剂量组间有显著差异(P<0.05),而中、低剂量组间无统计学差异(P>0.05)。EE血药浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为4.70±1.34 h.ng/ml、6.59±1.23h.ng/ml和16.59±2.33 h.ng/ml,中、高剂量组之间有显著差异(P<0.01)。Evra参比避孕贴剂组血清LNG浓度的Cmax为3.16±1.00 ng/ml,AUC为155.29±46.14 h.ng/ml,与LNG/EE避孕贴剂中剂量组(拟采用的临床试验剂量)相比,两者无显著差异(P>0.05)。中剂量组血清EE浓度与Evra避孕贴剂的相比显著降低(P<0.05)。多次给药后LNG/EE避孕贴剂10 cm2组和20 cm2组在重复给药10次的过程中未出现LNG和EE血药浓度蓄积现象,Evra贴剂组在重复给药4次的过程中未出现LNG和EE血药浓度蓄积现象。结论:中剂量的LNG/EE避孕贴剂具有良好的避孕效果,同时其副作用可能小于Evra。     

Polycystic ovary syndrome and the single nucleotide polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase: a pilot observational study

Polycystic ovary syndrome (PCOS), insulin resistance and overall mortality due to diabetes and coronary artery disease are higher in South Asians than in Caucasians. Aims: We compared the prevalence of the C677T and A1298C single nucleotide polymorphisms in the methylenetetrahydrofolate reductase gene in South Asian and Caucasian women, its association with folate and homocysteine (Hcy) metabolism, and its relevance to future atherogenic events. Methods and results: 71 women were recruited for the study: South Asian PCOS (21) plus controls (9) and Caucasian PCOS (25) plus controls (16). Anthropometric and laboratory parameters were compared. South Asian PCOS women were significantly hyperandrogenic and exhibited a greater degree of insulin resistance. Caucasian PCOS women had higher plasma Hcy concentrations with a 1.9 times higher frequency of the T allele than the South Asian PCOS group. In the presence of this variant allele, plasma Hcy levels appear to be higher in both PCOS groups. The South Asians had a 1.8 times higher frequency of the C allele than the Caucasians; however, the overall frequency was comparable in the two PCOS groups. The frequency of homozygosity, i.e. TT677 and CC1298, was 7.2% and 4.9% in the Caucasians and 0% and 16.6% in the South Asian recruits, respectively.

Dietary inadequacies in the South Asian women can influence their plasma folate and B12 concentrations resulting in hyperhomocysteinemia which, in combination with dyslipidaemia and insulin resistance, can lead to long-term atherogenic consequences. Conclusions: Current data suggests that the mechanisms of atherothrombosis have separate pathways in the two ethnic groups. Larger studies exploring the current theme need to be carried out in the PCOS groups to obtain adequate insight.     

鸟氨酸脱羧酶对人滋养细胞分泌绒毛膜促性腺激素的调控作用

本实验应用无血清短周期培养方法，研究了人滋养层细胞（ＣＴＣ）分泌ｈＣＧ的调节机制。实验发现：ＣＴＣ经８ｈ培养具有良好的ｈＣＧ分泌功能。这些细胞的匀浆液具有鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）的活性，而且对二丁酰ｃＡＭＰ、多胺、放线菌素Ｄ和二氟甲基鸟氨酸（ＤＦ－ＭＯ）呈现不同的应答效应。ＯＤＣ的活性与ＣＴＣ的数量及各试剂的剂量都有密切的相关性。ＯＤＣ活性的改变又与细胞分泌ｈＣＧ功能有关。它们在ＣＴＣ分泌的调控中可能是一个重要的因素．     

Associations between toxic metals in follicular fluid and in vitro fertilization (IVF) outcomes

Purpose

We previously reported associations between trace concentrations of Hg, Cd and Pb in blood and urine and reproductive outcomes for women undergoing in-vitro fertilization (IVF). Here we assess measurements in single follicular fluid (FF) specimens from 46 women as a presumably more relevant marker of dose for reproductive toxicity.

Methods

FF specimens were analyzed for Hg, Cd and Pb using sector field-inductively coupled plasma-mass spectrometry (SF-ICP-MS). Variability sources were assessed by nested ANOVA. Multivariable regression was used to evaluate associations for square root transformed metals with IVF outcomes, adjusting for confounders.

Results

An inverse association is detected for FF Pb and fertilization (relative risk (RR) = 0.68, P = 0.026), although positive for Cd (RR = 9.05, P = 0.025). While no other statistically significant associations are detected, odds ratios (OR) are increased for embryo cleavage with Hg (OR = 3.83, P = 0.264) and Cd (OR = 3.18, P = 0.644), and for embryo fragmentation with Cd (OR = 4.08, P = 0.586) and Pb (OR = 2.22, P = 0.220). Positive estimates are observed for Cd with biochemical (RR = 19.02, P = 0.286) and clinical pregnancies (RR = 38.80, P = 0.212), yet with very low precision.

Conclusions

We have identified associations between trace amounts of Pb and Cd in FF from a single follicle, and oocyte fertilization. Yet, the likelihood of biological variation in trace element concentrations within and between follicles, coupled with levels that are near the limits of detection suggest that future work should examine multiple follicles using a ‘one follicle-one oocyte/embryo’ approach. A larger study is merited to assess more definitively the role that these environmental factors could play with respect to egg quality in IVF programs.     

取卵日血清脑源性神经营养因子与辅助生育结局的相关性

目的:探讨取卵日血中脑源性神经营养因子(BDNF)能否预测卵母细胞质量和其后的卵胞质内单精子注射(ICSI)的妊娠结局。方法:总共纳入57例进行ICSI患者,在取卵日清晨抽取空腹静脉血,测量BDNF,E2和P的浓度。比较妊娠组与非妊娠组的相关数据,并分析取卵日BDNF水平与E2、P、年龄和IVF相关数据之间的相关性。结果:妊娠组与非妊娠组的BNDF浓度无明显差异;取卵日BDNF浓度与E2和P呈明显正相关。BDNF与获卵数和成熟卵母细胞数成正相关。结论:尚不能用取卵日BDNF来预测ICSI的妊娠结局,但BDNF可能在卵母细胞发育成熟过程中发挥着重要作用。     

Persistent increase of PRL after oral contraceptive treatment

 Background: The mechanism involved in estrogen induced hyperprolactinemia is not completely known, although one of the possible theories suggest inhibition of dopaminergic tone. Our objective was to study the mechanism implied in the increment of PRL levels as a consequence of oral contraceptive treatment and possible modifications in TSH levels. Material and methods: We performed a trial on 21 healthy women, nulliparas. We administered 35 μg of Etinil-Estradiol (EE) and 2 mg of Ciproterone Acetate (CA) for a period of 12 months. Stimulation tests with Metoclopramide and TRH were carried out before treatment, after 3, 6 and 12 months of treatment and finally 6 months after cessation of treatment. Results. Basal levels of PRL (×–₁=12.62 ng/ml) increased significantly (p<0.05) during the year of treatment (×–₁₂=17.04 ng/ml) and maintained higher levels 6 months after cessation (×–₁₈=17.53 ng/ml). Maximum values obtained in response to metoclopramide (×–₁=154.78) were significantly higher after 12 months (×–₁₂=173.29), persisting 6 months after cessation of treatment (×–₁₈=245.28). We also observed significant differences in the maximum response of TSH to metoclopramide during the same period of study (×–₆=2.45), (×–₁₂=2.76) and (×–₁₈=2.07) respectively (p<0.05). We did not find changes in PRL and TSH responses to TRH stimulation after a year of treatment with EE and CA. Conclusion: Treatment with EE (35 μg) and CA (2 mg) induces an increase in PRL levels that persist 6 months after cessation of treatment. Our results rule out the possibility that this increase in PRL is due to a decrease in dopaminergic tone or an increase in TRH sensitivity. Received: January 1999 / Accepted: 4 May 1999