TRAIL及其受体DR4、DCR1在多囊卵巢综合征大鼠卵泡发育中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)及其受体——死亡受体4(death receptor 4,DR4)、诱骗受体1(decoy receptor 1,DcR1)在PCOS大鼠卵泡发育中的作用。方法:采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,免疫组织化学染色、RT-PCR分析观察TRAIL及其受体DR4、DcR1在PCOS大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果:①免疫组织化学结果显示,TRAIL蛋白在PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞的表达较对照组明显增强(P<0.05),在窦前卵泡颗粒细胞的表达两组无显著性差异(P>0.05)。DR4蛋白在两组大鼠窦前卵泡和窦状卵泡的表达无显著性差异(P>0.05)。DcR1蛋白在PCOS组大鼠卵巢窦状卵泡颗粒细胞的表达较对照组明显减弱(P<0.01),在窦前卵泡颗粒细胞的表达两组无显著性差异(P>0.05)。②RT-PCR分析显示,PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞TRAIL mRNA的表达较对照组明显增强(P>0.01),DR4mRNA的表达两组无显著性差异(P>0.05),DcR1 mRNA的表达较对照组明显减弱(P<0.01)。结论:TRAIL及其受体DR4、DcR1在PCOS大鼠卵泡发育颗粒细胞凋亡中发挥了调控作用。TRAIL及其受体DR4、DcR1在PCOS颗粒细胞的表达异常可能是导致PCOS卵泡发育障碍的机制之一。     

u-PA、u-PAR和PAI-1在睾酮联合hCG致多囊卵巢大鼠中的表达与意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、其受体(u-PAR)和其抑制剂-1(PAI-1)在PCOS发病机制中的作用。方法:采用睾酮或孕酮联合hCG刺激建立PCOS大鼠模型;免疫组化S-P法测定u-PA、u-PAR和PAI-1在模型动物卵巢组织中的分布与表达。结果:u-PA、u-PAR在PCOS组颗粒细胞和泡膜细胞中的染色比正常对照组明显减弱(P<0.05),PAI-1在泡膜细胞及间质细胞中的染色均比正常对照组明显增强(P<0.05)。结论:u-PA、u-PAR及PAI-1的表达异常可能参与PCOS的发病。     

哺乳动物黄体生成素(LH)峰效应由颗粒细胞向卵母细胞传递的分子通路

血液中黄体生成素(luteinizing hormone,LH)在排卵前形成一个极大的峰值,LH与壁层颗粒细胞中的LH受体(LHR)结合诱导类表皮生长因子(EGF)的表达,通过自分泌和旁分泌的作用激活颗粒细胞与卵丘细胞中的EGF受体(EGFR)、大鼠肉瘤病毒致癌基因(KRAS)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),激活的ERK1/2诱导表达前列腺素合成酶2(PTGS2)、类固醇合成快速调节蛋白(STAR)、透明质酸合成酶2(HAS2)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNFAIP6)产生的前列腺素又和卵丘细胞上的PTGER2结合,激活p38MAPK,这一LH作用的信号转导通路最终刺激卵丘扩展卵母细胞成熟并最终排卵。     

TGF-β_1在PCOS卵巢间质纤维化形成中的作用

目的:探讨TGF-β1在PCOS大鼠卵巢间质纤维化、包膜硬化形成中的作用。方法:利用脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射的方法建立PCOS病理模型大鼠20只,用微粒子酶免分析法测定血清性激素E2、T、LH、FSH、LH/FSH、空腹胰岛素(FINS)水平,及光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构,透射电镜观察细胞超微结构来验证模型。采用免疫组化法检测PCOS组(n=20)卵巢细胞因子TGF-β1的表达,并与20只正常大鼠相比照。结果:TGF-β1在PCOS组各阶段卵泡卵母细胞、颗粒细胞的表达强度与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。而在窦状卵泡膜细胞和卵巢间质细胞中的表达,PCOS组显著高于对照组(P<0.01,P<0.05)。结论:多囊卵巢中TGF-β1表达异常,可能是导致多囊卵巢间质纤维化、包膜增厚的原因之一,TGF-β1也参与PCOS卵泡发育、闭锁的调控。     

雌、孕激素受体、生长激素受体、胰岛素样生长因子1受体与子宫内膜容受性的关系

辅助生殖技术(ART)经过近40年的发展,已取得突飞猛进的进展。但是临床妊娠率仍然徘徊在30%~40%。决定能否成功妊娠的因素主要包括2个方面,一是胚胎发育的质量,二是子宫内膜对胚胎的容受性。而在临床工作中,即使胚胎质量良好,种植率仍然不能令人满意。因此,如何提高子宫内膜容受性已经成为辅助生殖领域一个亟待解决的问题,了解影响子宫内膜容受性的相关因素,对于在种植窗期如何调节母体的内膜达到最佳的接纳胚胎的状态,具有重要的指导性意义。本文着重阐述子宫内膜容受性与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、生长激素受体(GHR)之间的关系,期望对临床判断子宫内膜容受性有所帮助。     

米非司酮影响早孕滋养细胞的信号传导和凋亡的机制研究

目的　探讨米非司酮 (RU486 )在早孕滋养细胞信号传导及其凋亡中的影响。方法　 2 19例服用RU486早孕药物流产者 ,对其有效组 30例 ,失败组 2 3例 ,人流组对照 16例 ,以免疫组化法分别标记孕激素受体(PR)、雌激素受体 (ER)、表皮生长因子受体 (EGFR)、酪氨酸蛋白激酶C(αPKC)、分裂激活蛋白激酶 (MEK - 1)、细胞转化分裂介质 (raf- 1)和抗凋亡蛋白 (Bcl- 2 )。三组均计数凋亡指数 (AI)。有效组与失败组各 5例观察透射电镜下凋亡改变。结果　有效组PKC、raf- 1、MEK - 1、Bcl- 2的表达有明显抑制 (P <0 0 5 ) ;AI为 0 19%。失败组信号传导受抑主要为PR、ER和EGFR(P <0 0 1) ,AI为 0 11%。结论　RU486抑制早孕滋养细胞PKC信号通路及raf- 1瀑布激酶链和分裂激活蛋白 ,抑制增生分裂分化并诱导凋亡发生 ;而失败组可能在PR、ER和EGFR信号传导初始阶段发生受体介质功能紊乱和抑制     

氯化镉(CdCl_2)对大鼠卵泡颗粒细胞中分拣蛋白1(Sort1)表达的影响

目的:探讨镉(Cd)引起卵泡细胞凋亡与分拣蛋白(Sort1)表达的关系。方法:利用流式细胞仪检测大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;利用免疫组织化学技术检测大鼠卵巢中Sort1的表达部位,在此基础上利用实时荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术检测CdCl2处理后大鼠卵泡中Sort1表达量的变化。结果:5μmol/L、20μmol/L和50μmol/L 3个浓度的CdCl2染毒处理均可引起大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;Sort1主要表达于大鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞中;3个浓度的CdCl2均可使大鼠卵巢中Sort1的表达量显著增加(P<0.05)。结论:Sort1可能参与Cd诱导的卵泡颗粒细胞的凋亡过程。     

MMP-1/PAR-1通路在宫颈癌侵袭转移中的作用

目的:探索基质金属蛋白酶-1(MMP-1)/蛋白酶活化受体-1(PAR-1)通路在宫颈癌侵袭转移中的作用。方法:RT-PCR法检测59例临床宫颈鳞癌组织和15例正常宫颈组织的MMP-1mRNA表达;Transwell实验检测添加重组人MMP-1及干扰PAR-1对宫颈癌Hela细胞转移侵袭能力的影响。结果:宫颈癌组织中的MMP-1(rhMMP-1)表达高于正常宫颈组织,并与侵袭转移程度相关;rhMMP-1能促进Hela细胞的转移能力,并与浓度相关;干扰PAR-1后能抑制MMP-1介导的Hela细胞转移能力。结论:MMP-1/PAR-1通路参与宫颈癌的侵袭转移,可能成为宫颈癌治疗的新靶点。     

生长激素对卵泡黄素化颗粒细胞分泌雌、孕激素的影响

目的探讨人卵泡黄素化颗粒细胞中生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体的表达,以及GH在体外对人卵泡黄素化颗粒细胞产生雌、孕激素的影响。方法 2010年5月至7月在广州医学院第三附属医院,采用免疫细胞化学染色法,收集24例行体外受精-胚胎移植治疗患者的卵泡液,提取黄素化颗粒细胞,测定其GH和IGF-1受体的表达;并将黄素化颗粒细胞在不同浓度的GH(0、4.7、9.4、18.8nmol/L)作用下单独及与促卵泡素(FSH,75IU/L)共同培养72h,用酶联免疫吸附法测定黄素化颗粒细胞培养液中的IGF-1,用化学发光法测定培养液中雌二醇(E2)和孕酮(P)含量。结果 80%以上黄素化颗粒细胞的GH和IGF-1受体阳性;黄素化颗粒细胞在基础状态下能自分泌一定量的IGF-1(140.00±27.13)μg/L、E2(444.67±67.25)pmol/L和P(655.00±70.07)nmol/L;分别用浓度为4.7、9.4、18.8nmol/L的GH刺激黄素化颗粒细胞合成IGF-1、E2和P,测其含量分别为(140.33±18.60)、(139.08±31.81)、(154.72±32.19)μg/L,(489.00±91.27)、(658.00±219.67)、(660.83±207.95)pmol/L和(821.67±101.27)、(995.00±109.68)、(1193.31±138.80)nmol/L,与基础状态下分泌比较差异无统计学意义(P>0.05);同样浓度GH协同75IU/LFSH刺激黄素化颗粒细胞合成IGF-1、E2和P的含量分别为(149.41±50.30)、155.34±36.34)、(154.33±46.05)μg/L,(627.83±98.44)、(680.17±160.18)、(773.50±80.84)pmol/L和(1785.02±321.61)、(2096.71±344.71)、(3430.02±1538.38)nmol/L,IGF-1与GH剂量相关分析,差异无统计学意义(P>0.05),E2、P水平与GH剂量行相关分析,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢黄素化颗粒细胞存在GH及IGF-1受体;黄素化颗粒细胞能自分泌IGF-1和一定量的E2、P;GH不能直接促进黄素化颗粒细胞分泌E2、P,但能协同FSH促进黄素化颗粒细胞合成E2、P,且呈剂量依赖关系。     

白介素β1及凝血酶降低孕早期蜕膜细胞同源框A10基因的表达

目的:探讨炎症及出血导致流产的作用机制。方法:选择复发性流产(RSA)及正常妊娠孕6~10周的蜕膜组织各10例,并在体外分离培养正常妊娠的蜕膜细胞,加入雌、孕激素、白介素β1(IL-β1)及凝血酶处理后,用实时荧光定量RT-PCR及Western blotting检测RSA患者、正常妊娠者蜕膜组织及培养处理的各组蜕膜细胞内的同源框A10(HOXA10)的表达情况。结果:1HOX A10基因在孕早期蜕膜细胞中有表达;与正常妊娠者相比,RAS患者蜕膜组织HOXA10的表达明显下降(P0.05)。2雌、孕激素处理组的蜕膜细胞HOXA10 mRNA的表达显著增加(P0.05),是未处理组的9.5倍。3进一步加入IL-β1或凝血酶后,HOXA10 mRNA表达显著下降(P0.05);与雌、孕激素组相比,分别下降89.5%和74.9%。结论:1 HOXA10基因在孕早期蜕膜细胞中有显著表达,在RAS患者中的表达显著下降。2雌、孕激素促进HOXA10的表达,而IL-β1及凝血酶抑制HOXA10的表达。     

类赖氨酰氧化酶1、转化生长因子β1在子宫腺肌病中的表达及临床意义

目的:探讨类赖氨酰氧化酶1(LOXL1)、转化生长因子β1(TGFβ1)在子宫腺肌病(AM)中的作用及临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测30例AM患者在位内膜和异位内膜组织及20例正常子宫内膜组织中LOXL1、TGF-β1的表达,并对其蛋白表达量进行相关性分析。结果:LOXL1在AM异位内膜组、AM在位内膜组及对照组中表达的平均光密度(MOD)值分别为:0.22±0.10、0.15±0.09、0.15±0.06。AM异位内膜组LOXL1的表达高于AM在位内膜组和对照组(P<0.05),而AM在位内膜组和对照组的LOXL1表达无统计学差异(P>0.05);TGFβ1在AM异位内膜组、AM在位内膜组及对照组的相对表达量分别为:0.26±0.02、0.16±0.03、0.15±0.02,AM异位内膜组TGFβ1的表达高于AM在位内膜组和对照组(P<0.05),AM在位内膜组和对照组间TGF-β1的表达无统计学差异(P>0.05)。AM异位内膜组LOXL1蛋白与TGFβ1蛋白的表达呈正相关(r=0.402,P<0.05)。AM在位内膜组LOXL1蛋白与TGFβ1蛋白的表达无相关关系(r=0.24,P>0.05)。LOXL1在子宫大小>孕12周及腺肌瘤>5 cm的AM异位内膜组表达强于子宫大小≤孕12周和腺肌瘤≤5 cm的AM异位内膜组(P<0.05),LOXL1的表达量与患者痛经与否、月经量差异亦无明显关系(P>0.05)。TGFβ1在AM异位内膜中表达与患者痛经、月经量、AM病灶大小的差异均无明显相关性(P>0.05)。结论:LOXL1、TGFβ1在子宫腺肌病的异常表达可能参与子宫腺肌病的发生和发展。     

肾损伤分子-1、β2-微球蛋白、内皮素-1和肌酐在妊娠期高血压疾病并发急性肾损伤的临床研究

目的:探讨血清肌酐(SCr)、内皮素-1(ET-1)、肾损伤分子-1(KIM-1)和β2-微球蛋白(β2-MG)的水平在妊娠期高血压疾病并发早期肾损伤的临床意义。方法:将妊娠期高血压疾病并发肾损伤的孕产妇40例设为肾病组,同期正常孕产妇40例设为对照组,分别在孕龄30周、32周、34周、36周检测孕妇血SCr、ET-1、尿KIM-1和β2-MG的水平。结果:1肾病组与对照组比较,患者的年龄、孕次和流产史均无统计学差异(P0.05),尿量、尿素氮(BUN)、SCr及尿蛋白定量均存在统计学差异(P0.001);2肾病组和对照组整体比较,SCr、ET-1、KIM-1和β2-MG的组间、时间点间的交互作用均有统计学差异(P0.05);3孕36周SCr、孕32周KIM-1及孕34周ET-1和β2-MG水平肾病组与对照组组间存在统计学差异(P0.05);4对照组组内不同孕周间SCr、ET-1、KIM-1和β2-MG水平无统计学差异(P0.05);肾病组组内与孕30周时比,KIM-1水平在孕32周显著升高(P0.05),在孕34周、36周进一步升高(P0.01);ET-1和β2-MG水平在孕34周显著升高(P0.05),而SCr在孕36周显著升高(P0.05)。结论:妊娠期高血压疾病孕妇产前监控中,联合检测SCr、ET-1、KIM-1和β2-MG能及时发现肾损伤的存在;妊娠期高血压疾病并发肾损伤时KIM-1、ET-1和β2-MG的改变早于SCr的改变。     

多囊卵巢综合征患者卵泡液LIF、IL-1β及性激素水平与IVF-ET结局关系的研究

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡液中白血病抑制因子(LIF)、白细胞介素-1β(IL-1β)及性激素水平与IVF-ET结局的关系。方法:用酶联免疫双抗夹心法和时间分辨免疫荧光法前瞻性研究了行IVF-ET的11例PCOS患者、14例对照组患者卵泡液中IL-1β、LIF及雌二醇(E2)和孕酮(P)的定量表达。结果:PCOS组卵泡液中LIF为21.1±11.1pg/mL,P为191.9×103nmol/L,明显低于对照组(33.5±11.8pg/mL,305.9×103nmol/L,P<0.05);而PCOS组卵泡液IL-Iβ为39.9±11.5pg/mL,E2浓度为3334.00nmol/L,明显高于对照组(28.3±10.6pg/mL,2138.1nmol/L),P<0.05。PCOS组胚胎种植率为8.8%,临床妊娠率为18.2%,明显低于对照组(16.7%,42.9%),P<0.05;PCOS组OHSS发生率为27.3%,明显高于对照组(7.1%,P<0.05)。LIF与E2在两组患者呈负相关(r=-0.442,P=0.027)、LIF与LH/FSH比值在PCOS组呈负相关(r=-0.682,P=0.021);IL-Iβ与E2在PCOS组呈正相关(r=0.612,P=0.045);LH/FSH比值与P在PCOS组呈负相关(r=-0.780,P=0.005);LIF与IL-Iβ水平两者间无明显相关性。结论:LIF可能是PCOS患者低种植率的关键因子;IL-Iβ可能是PCOS患者在控制性超排卵过程中易发生OHSS的一个致病因子;卵泡液IL-Iβ、LIF受卵巢激素调控。     

一氧化氮与大鼠离体黄体细胞凋亡的关系及白细胞介素-1β对其影响

目的 :探讨一氧化氮在黄体退化中的作用及细胞因子对其影响。方法 :以孕马血清促性腺激素 -人绒毛膜促性腺激素处理的雌性 Wistar大鼠为模型 ,分离制备了黄体细胞。采用 3'-末端标记 (TUNEL)法分析了 NO供体硝普钠 (SNP)、白细胞介素 -1 β(IL-1 β)对离体黄体细胞凋亡的作用。应用比色法及高效液相色谱仪分别检测了 IL-1 β对大鼠离体黄体细胞 NO合酶 (NOS)活性和 NO释放量的影响。结果 :SNP可以剂量方式诱导黄体细胞凋亡 ,1 μmol/ L SNP即可显著增加大鼠离体孵育 1 2 h的黄体细胞凋亡率 (为对照组的 1 33±1 8% ,P<0 .0 5)。IL-1 β(1 0 ng/ ml)可增强 SNP的作用。此外 ,IL-1 β可显著增加离体孵育1 2 h黄体细胞的总 NOS活性 (由 0 .2 0 1± 0 .0 51 U/ mg protein增高到 0 .382± 0 .1 0 6 U/mg protein,P<0 .0 1 ) ,促进 NO生成。结论 :NO-NOS系统可能通过诱导黄体细胞凋亡的途径参与黄体退化过程 ,IL-1 β可增强 NO-NOS系统的活性     

Tumor necrosis factor receptor 1 expression and early spontaneous abortion.

OBJECTIVES: To compare tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1) protein expression in women with unexplained early spontaneous abortion (UESA) and normal pregnancy. METHODS: In a prospective study, 62 women with UESA and 60 with normal pregnancy were studied. Decidual membrane TNFR1 was detected by flow cytometry and immunohistochemistry, and serum soluble TNFR1 were by ELISA. Statistical analyses of resulting data employed the student's t test, the Fisher's Exact, and the nonparametric Wilcoxon test RESULTS: The percentage of membrane tumor necrosis factor receptor 1 (mTNFR1) positive decidual cells was 16.42+/-7.1 for women with UESA and 12.47+/-5.3 for women with normal pregnancy (p<0.05). The number of mTNFR1 positive cells was more in decidual stromal and vessel endothelial cells in women with UESA, and serum soluble tumor necrosis factor receptor 1 (sTNFR1) concentration was significantly higher than in women with normal pregnancy (554.56+/-126.7 pg/ml vs. 175.3+/-52.4 pg/ml; p<0.001). CONCLUSION: The overexpression of TNFR1 may contribute to the development of ESA.     

Production of interleukin-1-like molecules by human sperm cells

Objective: To characterize and localize interleukin (IL)-1 and IL-1β in human sperm cells.

Design: Prospective and comparative study.

Setting: Andrology clinic of a university hospital.

Patient(s): Two groups of normogonadotropic men: 17 fertile men (donors with proved fertility) and 8 oligoteratoasthenospermic infertile men.

Intervention(s): None.

Main Outcome Measure(s): Evaluation of IL-1 and IL-1β levels and expression in sperm cells by immunohistochemical staining, immunoassay, and Western blot analysis.

Result(s): Both types of IL-1–like molecules (IL-1 and IL-1β) were expressed in the tail, neck, and head of sperm cells of fertile men and patients with oligoteratoasthenospermia. Swim-up sperm cells from fertile men and patients with oligoteratoasthenospermia secreted similar levels of IL-1–like molecules. The levels of IL-1β–like molecules were higher than those of IL-1–like molecules in both groups. The expressed IL-1–like molecules were characterized by the presence a 60-kd protein for both IL-1–like and IL-1β–like molecules. In some samples of both fertile men and infertile men with oligoteratoasthenospermia, 17-kd, 33-kd, and 45-kd IL-1β–like molecules were detected. Impairment of sperm function, such as decreased sperm count and motility and/or impaired morphology, was not related to the capacity of sperm cells to produce IL-1–like molecules.

Conclusion(s): IL-1 molecules originating in sperm cells may play a role in the physiologic functions of sperm cells (autocrine effect) and/or in cell–cell interactions within the testis (paracrine effect).