大肠肿瘤p53蛋白过表达对原位Th1／Th2平衡的影响

目的：评价p53蛋白过表面对大肠腺瘤和大肠癌局部辅助T细胞（Th1/Th2)平均的影响,进而探讨大肠癌发生的免疫学机制,方法：研究对象包括大肠腺瘤30例,大肠癌38例,癌旁正常粘膜68例作为对照组。石蜡切片以免疫组化法检测p53蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肠组织培养上清液中4种细胞因子（IL－2,IL－4,IL－10,IFN－r)水平。结果：p53蛋白表达阳性组培养上清液的IL－2,IFN－r水平显著低于阴性组和对照组（P＜0．01）,而IL－10则高于阴性组及对照组（P＜0．05）,各组IL－4水平未显示差异（P＞0．05）,结论：p53蛋白表达引起原位Th1/Th2平衡失调,表现为由Th1向Th2漂移,初步推断：p53基因失活在大肠癌发生的免疫学机制中可能具有重要作用。     

子宫内膜癌患者外周血Th1和Th2细胞因子的表达及临床意义

目的：探讨子宫内膜癌患者外周．61Th1和Th2细胞因子的表达及其临床意义。方法：采用流式细胞小球微阵列术（Cytometrie Bead Array，CBA）检测52例子宫内膜癌患者、46例正常女性的外周血血清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-5、IL—10细胞因子的含量，然后进行比较分析。结果：子宫内膜癌组与正常对照组比较，IL-2、IL-4和IL-5的表达升高，TNF—α的表达降低，Th1/Th2（IFN-γ/IL4）比值下降（P〈0．001）。中晚期患者的Th1／Th2比值较早期患者进一步下降（P〈0．05）。不同病理类型及分级的细胞因子水平和Th1/Th2比值无差异（P〉0．05）。深肌层浸润、淋巴结转移患者Th2细胞因子水平上升（P〈0．05）。手术后患者的IFN-γ、TNF—α水平和Th1／Th2比值上升（P〈0．05）。细胞因子水平与预后无关。结论：子宫内膜癌患者中可见Th2细胞因子升高，Th1／Th2平衡向，Th2方向漂移。细胞因子水平、Th1／Th2比值与病理类型及病理分级无关（P〉0．05）。深肌层浸润、淋巴结转移患者的Th2型细胞因子水平偏高。手术可纠正Th1／Th2的失衡。     

宫颈癌患者Th1／Th2细胞因子表达水平的研究

  目的 检测宫颈癌患者外周血CD+4 T细胞分泌细胞因子的水平变化，分析Th1和Th2细胞的细胞因子免疫活动，为肿瘤的免疫治疗提供实验依据。方法 用刺激物刺激细胞，增加细胞内细胞因子的表达，再加入荧光标记的特异性抗细胞因子单克隆抗体，特异性抗原抗体结合，以流式细胞仪分析特异性细胞因子表达水平。结果 宫颈癌患者Th1型细胞因子白细胞介素-2（IL-2）表达水平较正常对照组降低，差异有统计学意义，而Th1 型细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）表达水平较正常对照组差异无统计学意义。Th2型细胞因子白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）表达水平较正常对照组显著升高，差异有显著性意义。结论 宫颈癌患者Th1型反应模式处于弱势状态，Th2型反应模式处于优势状态，Th1／Th2平衡失调，Th1／Th2平衡向Th2方向漂移，这可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸，从而导致肿瘤的发生或者转移的原因之一。     

肺癌患者Th1和Th2类细胞因子的基因表达及临床意义

目的观察肺癌患者体内Th1和Th2类细胞因子的基因表达及化疗对其表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测肺癌患者在化疗前、化疗后外周血单个核细胞（PBMC）Thl和Th2类细胞因子mRNA表达。结果正常对照及良性肺部疾病组Th1和Th2类细胞因子基因表达呈阴性或基本不表达；肺癌组IL4、IL．6、IL-10的mRNA表达水平显著高于良性肺部疾病组和正常对照组（P值均〈0．001）；IFN-γ无阳性表达（0／52），IL-2则仅有2例阳性表达，均较正常对照组及良性肺部疾病组明显减少（P值分别为0．006，0．007；0．004，0．003）；且Th1和Th2类细胞因子基因表达水平与肺癌的病理分型及临床分期无相关性（P值分别为0．925，0．752，0．868，0．780，0．949）。化疗后IL-4、IL-6、IL-10的阳性表达较化疗前显著减少（P值分别为0．003，0．001，0．002）。而IFN-γ、IL-2阳性表达较化疗前有显著增加（P值均〈0．001）。结论 肺癌患者Th1类细胞因子表达受抑，Th2类因子呈强势表达；化疗可使肺癌患者Th2类细胞因子的强势表达向Th1类逆转。     

食管鳞癌患者Th1/Th2漂移与临床病理因素之间关系的研究

目的：探讨食管鳞癌患者Th1/Th2转录因子和细胞因子的表达与临床病理因素之间的关系,为肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法：实时荧光定量PCR（RQ-PCR）检测食管癌患者及正常组外周血单个核细胞（PBMC）中转录因子T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4、IL-10的表达。结果：与正常对照比较,食管鳞癌患者PBMC中Th1型转录因子T-bet和血浆中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平显著降低（P〈0.01）;Th2型转录因子GATA-3和细胞因子IL-4、IL-10的表达水平显著升高（P〈0.01）,并且Th1/Th2漂移程度与肿瘤的CT分期和病灶长度相关（P〈0.05）,而与病变的部位、病理分型及分化程度无明显相关性（P〉0.05）。结论：食管鳞癌患者体内存在Th1/Th2漂移,这可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸的机制之一。     

微波固化保肢术对骨肉瘤患者Th1/Th2漂移的逆转

目的：研究微波组织固化保肢技术对患者免疫功能的影响。方法：应用放射免疫分析法以及酶联免疫分析法检测20例行微波组织固化保肢术组骨肉瘤患者及20例其它手术组患者手术前后血清IL－2,IL－4,IL－6,IL－10,IL－12的含量,应用流式细胞仪检测患者淋巴细胞亚群的变化。结果：与正常对照相比,骨肉瘤患者CD4^ T细胞,血清中IL－2,IL－12减少（P＜0．01）,CD8^ T细胞,IL－10,IL－4,IL－6含量升高（P＜0．01）,CD4／CD8比值降低（P＜0．01）,患者免疫功能受到抑制;术后30天截肢组及保肢组CD4^ T细胞,血清中IL－2,IL－12均升高,CD8^ T细胞,IL－10,IL－4,IL－6含量降低（P＜0．01）,CD4／CD8比值升高（P＜0．01）,患者免疫功能较术前改善;与截肢组比较,保肢组患者CD4^ T细胞、IL－2,及CD4／CD8比值30天上升幅度明显高于截肢组（P＜0．01）,CD8^ T细胞,IL－4,IL－6 30天降低幅度明显高于截肢组（P＜0．01）。IL－2,IL－12与CD4^ 细胞成正相关,IL－4,IL－6,IL－10与CD4^ T细胞成负相关。结论：微波固化保肢术可以加速逆转骨肉瘤患者Th1/Th2和Th2漂移,增强患者的免疫功能。     

原发性肝癌患者外周血淋巴细胞Th1/Th2型细胞因子表达的测定

目的　检测原发性肝癌患者外周血 Th1/ Th2类细胞因子基因的表达 ,为细胞因子免疫治疗提供依据。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法检测 30例原发性肝癌患者及 2 5例健康体检者外周血淋巴细胞IFN-γ、IL - 2、IL - 4及 IL - 10 m RNA的表达 ,以及用酶联免疫吸附 (EL ISA)方法检测血浆中 IFN-γ和 IL - 10的含量。结果　原发性肝癌患者 PBMC中 Th1型细胞因子 IL - 2 m RNA表达阳性率低于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ,Th2型细胞因子 IL - 4和 IL - 10 m RNA表达阳性率明显高于正常对照组 (P<0 .0 1) ;原发性肝癌 、 与 期 IL - 10 m RNA表达阳性率比较差异均有显著性 ,随临床分期升高 ,IL - 10表达阳性率升高 ; 、 与 期原发性肝癌患者血浆中IFN-γ明显低于正常对照组 (P<0 .0 1) ,而 IL - 10明显高于正常对照组 (P<0 .0 1)。结论　原发性肝癌患者外周血单个核细胞及血浆中存在 Th1/ Th2平衡失调 ,呈 Th2型细胞因子优势表达现象。 IL - 10表达水平的提高可能与原发性肝癌病变的进程有关     

化疗对乳腺癌患者外周血Th1和Th2类细胞因子基因表达的影响

[目的]探讨化疗对乳腺癌患者Th1和Th2类细胞因子的基因表达的影响。[方法]采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测乳腺癌患者化疗前后外周血单个核细胞（PBMC）Th1和Th2类细胞因子mRNA表达水平的变化。[结果]乳腺癌组IL-2mRNA（4）、IL-12mRNA（5）阳性表达均较正常对照组（10，14）及良性乳腺肿瘤组（11，16）明显减少（P〈0．05）；IL-6mRNA（19）、IL-10mRNA（16）较正常对照组及良性乳腺肿瘤组（8，5）显著增加（P〈0．05）；正常对照组及良性乳腺肿瘤组Th1和Th2类细胞因子mRNA表达无显著性差异fP〉0．051。乳腺癌化疗3个周期后，IL-6mRNA（8／36）和IL-10mRNA（6／38）阳性表达均较化疗前（19／25，16，28）显著降低（P〈0．05）；IL-2mRNA（14／30）和IL-12mRNA（15／29）阳性表达均较化疗前（4，40，5／39）显著升高（P〈0．05）。[结论]化疗可使早期乳腺癌患者Th2类细胞因子的强势表达向Th1类逆转，改善患者的免疫状况。     

调节性T细胞及Th1/Th2细胞因子在急性白血病中的表达及意义

目的:探讨调节性T细胞（Tregs）及Th1/Th2型细胞因子在急性白血病发病中的作用。方法:采用流式细胞术检测37例急性白血病患者［包括急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia,AML）24例,急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia,ALL）13例］及28例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs的比例,酶联免疫吸附法（ELISA）法检测血浆IL-2、IFN-γ、IL-10、IL-4和TGF-β水平。结果:AML和ALL患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例均高于健康对照组 (P＜0.05);AML及ALL患者血浆IL-4、IL-10和TGF-β水平均较健康对照组升高 (P＜0.05);IFN-γ水平较健康对照组降低 (P＜0.05);IL-2水平与健康对照组比较无明显差异 (P＞0.05)。结论:Tregs与Th1/Th2细胞因子同时参与了急性白血病的发生;急性白血病患者机体Th1/Th2细胞因子失衡,Th2占优势状态,这可能是导致急性白血病细胞免疫逃逸的原因之一;Tregs可能通过影响Th1/Th2细胞因子平衡参与急性白血病的发病。     

化疗对结肠癌Th1和Th2类细胞因子基因表达的影响及意义

目的：探讨结肠癌Th1和Th2类细胞因子的基因表达水平及化疗对其表达的影响。方法：采用RT-PCR技术．检测35例正常人、30例结肠息肉和67例结肠癌患者及结肠癌组化疗后外周血单个核细胞（PBMC）’rhl和Th2类细胞因子mRNA表达水平。结果：正常对照组及结肠息肉组Th1和Th2类细胞因子基因表达呈阴性或基本不表达。结肠癌组IL-4、IL-6、IL-10mRNA表达水平显著高于正常对照组及结肠息肉组（P〈0．05）；IFN-γ无阳性表达（0／67）．IL-2则仅有3例阳性表达。化疗后Th1类细胞因子表达增强，Th2类细胞因子的表达则减弱（P〈0，05）。结论：结肠癌患者呈Th2类细胞因子强势表达，细胞免疫受抑，化疗可纠正Th1／Th2的失衡状态，甚至使Th2类向Th1类漂移。     

高危型人乳头状瘤病毒载量和Th1/Th2不均衡表达预测宫颈癌变进程的研究

目的 比较高危型人乳头状瘤病毒载量(HR-HPV DNA)、Th1和Th2型细胞因子在不同宫颈局部微环境的表达差异, 探讨其预测宫颈癌变的可能性和意义。方法 将339例HR-HPV持续感染者分为宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌两组, 以HPV阴性且细胞学检查为正常宫颈的40例作为对照, 采用PCR荧光法和双抗体夹心ELISA法分别检测宫颈分泌物HPV-DNA以及Th1型细胞因子:白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)和Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10的表达水平, 以TNF-ɑ/IL-10比值作为衡量Th1/Th2免疫平衡的指标, 对数据资料进行单因素方差分析和多因素Logistic回归分析, 筛选宫颈癌预测指标。结果 单因素方差分析显示, HR-HPV DNA、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-ɑ、TNF-ɑ/IL-10在CIN和宫颈癌组均存在统计学差异(P＜0.05), 可以作为预测宫颈癌变的危险因素, 而多因素Logistic回归分析显示, 仅IL-10、IFN-γ、TNF-ɑ、TNF-ɑ/IL-10是宫颈癌发生的影响因素, 回归模型拟合优度检验Nagelkerke R²=0.982, 对CIN的预判率为99.5%, 宫颈癌的预判率为100.0%, 总的正判率为99.7%, 提示拟合效果好, 预测准确度高。结论 CINⅠ和CINⅡ有Th细胞因子的异常表达, 但不影响Th1/Th2平衡, CINⅢ阶段Th1/Th2失衡, Th2优势表达促进宫颈癌发生, 基于预测宫颈癌变的回归模型, 局部免疫失衡造成的宫颈免疫抑制微环境是HR-HPV持续感染和宫颈癌变的关键环节, 与HR-HPV DNA无关。     

宫颈癌患者血清Th1、Th2细胞因子表达水平及意义

目的 探讨宫颈癌患者血清Th1、Th2细胞因子表达水平及意义.方法 选取宫颈癌患者94例(观察组),同时选取健康女性90例作为对照组,检测两组患者干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4和IL-6.结果 观察组IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平分别为(52.13±9.55)pg/ml、(38.70±8.96)pg/ml、(27.61±6.22)pg/ml和(32.16±7.81)pg/ml,均高于对照组(P﹤0.05);Ⅲ~Ⅳ期患者IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P﹤0.05),Ⅱ期患者IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平高于Ⅰ期患者(P﹤0.05);不同分化程度患者IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平比较差异无统计学意义(P﹥0.05),有无淋巴结转移患者IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平比较差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 宫颈癌患者Th1/Th2细胞因子动态平衡紊乱,可能在肿瘤的发生发展中有一定作用.     

宫颈癌患者HPV感染状况及外周血Th1/Th2细胞因子变化研究

目的探讨宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及外周血Th1/Th2细胞因子变化,分析其在宫颈癌发生及发展中所起的可能机制,为宫颈癌的临床防治提供参考。方法选取80例宫颈癌患者为研究对象(宫颈癌组),选取同期门诊体检的健康女性80例为对照(对照组),采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测宫颈HPV-DNA,应用酶联免疫吸附法检测Th1/Th2细胞因子水平,包括白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)。结果宫颈癌组70例检出HPV,感染率为87.50%,对照组5例检出HPV,感染率为6.25%,比较差异有统计学意义(P<0.05),宫颈癌组HPV分型60例高危型、10例低危型,分别占85.71%、14.29%,38例单一感染、32例多重感染,分别占54.29%、45.71%,对照组HPV分型0例高危型、5例低危型,分别占0.00%、100.00%,5例单一感染、0例多重感染,分别占100.00%、0.00%,两组HPV分型及感染类型比较差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平分别为(43.08±8.56)pg/ml、(56.15±9.47)pg/ml、(28.55±6.39)pg/ml、(34.29±7.80)pg/ml,明显高于对照组(18.94±4.57)pg/ml、(28.28±7.78)pg/ml、(12.39±3.90)pg/ml、(16.62±3.49)pg/ml,比较差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组HPV感染患者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显高于无HPV感染患者,比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组HPV感染者外周血IL-2和IFN-γ、IL-4、IL-6水平明显高于无HPV感染者,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌患者存在HPV感染率增高及外周血Th1/Th2细胞因子紊乱,HPV感染可加重Th1/Th2细胞因子紊乱,HPV感染及外周血Th1/Th2细胞因子紊乱在宫颈癌的发生发展中可能起到了促进作用。     

Th1／Th2类细胞因子在卵巢癌患者检测的意义

 目的 探讨卵巢癌患者血浆中Th1／Th2类细胞因子的变化及其临床意义。方法 用流式细胞微球芯片捕获技术检测34例卵巢癌患者及14例健康妇女血浆中IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平。结果 卵巢癌患者较健康妇女血浆中IL-2、IFN-γ、TNF-α水平明显降低，而IL-4、IL-6、IL-10明显升高（其中IL-10升高无统计学意义），且这种变化随临床期别的升高更加明显。结论 卵巢癌患者外周血中Th1／Th2类细胞因子平衡失调，检测Th1／Th2类细胞因子可作为评价卵巢癌临床进展及预后指标。     

胃癌患者化疗前后Th1/Th2细胞因子的检测及其临床意义

目的 研究胃癌患者化疗前后CD4+T淋巴细胞中Th1、Th2类细胞因子的表达水平和Th1/Th2值的变化及其临床意义.方法 60例胃癌患者接受FOLFOX4方案化疗,应用流式细胞仪对化疗前后患者外周血特异性细胞因子的表达变化进行分析.结果 化疗后,全组胃癌患者外周血CD4+T淋巴细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)的表达水平为11.4%±5.0%,较化疗前升高(P＜0.05);白介素10(IL-10)的表达水平为3.6%±1.2%,较化疗前降低(P＜0.05);Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)的值为3.4±1.0,与化疗前比较,无明显变化(P＞0.05).15例化疗后疗效为部分缓解的患者,外周血CD4+T淋巴细胞分泌的IFN-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平分别为14.8%±8.0%和5.9%±2.0%,均较化疗前升高(均P＜0.05);Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)的值为4.0±1.5,明显高于化疗前水平(P＜0.01).结论 有效的化疗可减轻患者机体的肿瘤负荷,降低Th1类细胞因子向Th2类细胞因子漂移的程度;但胃癌化疗的有效率较低,因此对胃癌化疗者,改善机体免疫功能仍是很重要的治疗措施.     

化疗对晚期非小细胞肺癌外周血Th1/Th2细胞因子表达的影响

目的探讨化疗对非小细胞肺癌患者外周血Th1/Th2细胞因子表达的影响。方法应用ELISA方法,检测患者化疗前、化疗3个周期后和化疗6个周期后Th1/Th2细胞因子的表达水平。结果晚期非小细胞肺癌患者外周血Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ表达水平低于正常组(P<0.05),而Th2型细胞因子IL-6和IL-10表达水平显著高于正常组(P<0.05)。化疗3个周期后血IL-2、IFN-γ水平明显高于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05),IL-6和IL-10水平明显低于化疗前(P<0.05)。化疗6个周期后血IL-2、IFN-γ表达水平明显低于化疗3个周期,差异有统计学意义(P<0.05),而化疗6个周期后血IL-6和IL-10水平稍低于化疗3个周期,差异无统计学意义(P>0.05)。结论晚期非小细胞肺癌患者存在免疫相关因子紊乱,3个周期的化疗对改善机体的免疫平衡有效;6个周期的化疗未能进一步改善机体免疫功能,甚至出现免疫功能恶化。     

淋巴瘤与实体瘤患者Th1/Th2漂移状况比较

目的 比较淋巴瘤患者与实体瘤患者Th1/Th2的漂移状况,建立淋巴瘤生物治疗过程中免疫功能有效检测指标.方法 采集患者全血,淋巴瘤10例,实体瘤172例(其中上消化道恶性肿瘤36例;结直肠癌64例;肺癌43例,其他恶性肿瘤29例,健康对照30例.检测首先用刺激剂刺激细胞,增加细胞内因子表达,用荧光标记的特异性抗细胞因子单克隆抗体,特异性抗原抗体结合,最后应用流式细胞仪分析特异性细胞因子表达水平.结果 淋巴瘤与健康人外周血CD+4T细胞表达IFN-γ、IL-4阳性百分比以及IFN-γ/IL-4比值,差异均具统计学意义(P<0.05).淋巴瘤患者Th1/Th2(CD:胞内细胞因子INF-α/IL4)比值较上消化道肿瘤(食管和胃)明显降低差异具统计学意义(P=0.023);淋巴瘤与其他实体瘤(结直肠癌、肺癌、肾癌、乳腺癌及其他肿瘤)差异无统计学意义,但有下降趋势.结论 淋巴瘤患者免疫功能较实体瘤患者有降低趋势,免疫治疗是辅助化疗的必要途径,Th1/Th2(INF-α/IL4)比值有望成为有效的检测指标.

Abstract：

Objective To compare Th1/Th2 drift situation in patients with lymphoma with that in patients with solid tumors, and establish the effective immune function detectable criterion of lymphoma in biological treatment process. Methods The whole blood samples of 10 patients with lymphoma, 202 patients with solid tumors including 36 patients with upper digestive tract cancer, 64 colorectal cancer, 43 lung cancer and 20 the other malignancies, and 30 healthy persons as controls were collected. Stimulation agent was used to stimulate the cells in order to increase cell factor expression and fluorescent labeled specific anti-cytokine monoclonal antibody was used to bind with specific antigen. The expression of specific cytokines was detected by flow cytometry. Results Positive percentages of IFN- γ and IL-4 and ratio of IFN- γ /IL-4 in CD+4 T cells of human peripheral blood had statistically differences between in patients with lymphoma and controls (P < 0.05). The ratio of Thl/Th2 (CD+4 intracellular cytokine INF-α/IL-4) in patients with lymphoma was lower than that in patients with upper digestive tract cancers (esophagus and stomach cancers) (P = 0.023), however, had no statistical differences with that in patients with other solid tumors (colorectal, lung, kidney, breast and other tumors), but had a downward trend. Conclusion Immune functions in patients with lymphoma are lower than those in patients with solid tumors and immune treatment is a necessary to adjuvant chemotherapy. The ratio of Th1/Th2 (INF- α/IL-4) is expected to become effective detection criterion.