人胚胎胸腺细胞系HBT8810的建立和改造(简报)

据报道,人胚胎细胞及其提取物在临床上用于治疗肿瘤及某些危难病症,已取得较好疗效。本实验在体外建立了可供长期传代培养的人胚胎细胞系。经多次筛选培养,于1988年10月从1例经产妇人工流产的6月龄胎儿中取得胸腺,经分离培养获得1株人胎儿细胞,在体外连续传代培养已15个月以上,共传100余代,经液氮常规冻存复苏后细胞生长良好。该细胞经严格的8-AG诱变改造,在含20μg/ml 8-AG的培养液中能够生存繁殖;而在HAT选择培养基中则失去独立生存能力;已改造成为HGPRT酶缺陷型细胞     

人胎儿角膜缘干细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨人胎儿角膜缘干细胞的体外培养及鉴定方法。方法 应用消化培养法对人胎儿角膜缘上皮组织进行体外培养并观察记录培养细胞的生长特性；对胎儿角膜缘组织及培养细胞采用一系列单克隆抗体进行免疫酶细胞化学染色检测；并用扫描电镜观察原代细胞的表面状况。结果 胎儿角膜缘上皮细胞原代培养时生长旺盛，传代培养时保持高增殖速率。免疫酶细胞化学染色见培养前胎儿角膜缘组织基底层有多量AE5阴性、AE1和PCNA阳性细胞，并见较多HLA-DR阳性细胞；原代细胞绝大部分AE5和HLA-DR染色阴性，AEI和PCNA阳性；传代培养至第3代时AE5阴性细胞仍占大部分；扫描电镜观察原代细胞以球形或短圆柱形为主，表面多突起和微绒毛。结论 采用消化培养法可成功培养出具有高增殖力和低抗原性的人胎儿角膜缘干细胞．为临床眼表重建开辟了新的思路。     

小鼠胸腺基质细胞株MTSCc的建立及其细胞学特性

目的：在体外建立性质稳定、长期存活的胸腺基质细胞株。方法：用内含６５０ｍｇ／Ｌ Ｄ缬氨酸的ＤＭＥ培养液培养Ｃ５７ＢＬ／６小鼠胸腺基质细胞，结果：３个月时基质细胞大量凋亡，６个月时纤维生长稳定，此时经克隆化培养得到一能在体外长期生长的基质细胞株，在体外已连续传代２００代，命名为ＭＴＳＣｃ；细胞呈棱形，有长突起，能与胸腺细胞高比例结合，有接触性抑制的特点。免疫细胞化学和透射电镜技术显示：ＭＴＳＣｃ表达     

兔骨髓间质干细胞的体外分离、培养及活性鉴定

目的：建立一种体外分离培养自体兔骨髓间质干细胞（ Ｍ ａｒｒｏｗ Ｓｔｒｏｍ ａｌ Ｃｅｌｌｓ， Ｍ Ｓ Ｃｓ）的方法。方法：抽取兔骨髓液３～５ ｍ ｌ，经密度梯度离心得骨髓单个核细胞，以１６×１０４／ｃｍ ２ 细胞浓度培养，１２～１４ ｄ 后得到贴壁生长的单层细胞，随后进入传代培养，每传一代约 ５～７ ｄ。结果：原代培养的、以及传代后培养的细胞均为贴壁生长的、均匀一致的纺锤形细胞。两种细胞经体外特殊环境诱导后均可转化为骨髓网状间质细胞和成骨细胞。结论：该细胞经体外长期培养后仍具有多潜能转化活性，确系骨髓间质干细胞。为该细胞的广泛应用奠定基础。     

人胚胎胰腺源nestin阳性细胞的快速获取

目的：建立一种胰腺nestin阳性细胞的快速培养方法。方法：解剖分离12～24周龄胎儿胰腺，通过胶原酶V消化获得胰岛样细胞团(ICCs)；经原代培养及传代培养后获得nestin阳性细胞。结果：免疫荧光法观察发现，传代培养4次后即可获得单纯的nestin阳性细胞。结论：从胎儿胰腺中可快速获取单纯的nestin阳性细胞。     

人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导人胚食管上皮永生化

提要人乳头状瘤病毒18型E6E7AAV感染胎儿食管，建立一株新的人食管，上皮细胞株（SHEE），这株细胞成为永生化并继续繁殖超过60代。经过长时间的传代培养，其10代细胞表型保留原始上皮细胞培养物的特征，表现为单层生长和锚使依赖性生长，在软琼脂培养不形成克隆，接种裸鼠未成瘤。SHEE细胞系电镜检查可见张力原纤维，免疫组化检查细胞角质蛋白阳性，证实为鳞状上皮来源。荧光原位杂交和PCR检测显示有HPV18E6E7基因。结论：我们提供这株用HPV18E6E7基因成功地诱导永生化细胞株SHEE，支持HPV18可能和食管癌病因有关，它可用以…     

铁筷子多糖抑制鼠S180生长的形态学观察

目的观察铁筷子多糖(Heborus thibetanus Franch polysaccharose，HFPS)对小鼠体内肉瘤S180生长的影响及荷瘤鼠肉瘤、胸腺组织的组织学变化。方法设立正常对照组、肿瘤模型组、铁筷子多糖处理组和阳性对照组(复方天仙胶囊处理组)。用小鼠肉瘤S180细胞株建立动物肿瘤模型，灌胃给予荷S180小鼠HFPS后，计算抑瘤率及观察荷瘤鼠胸腺组织及肉瘤组织的形态变化。结果铁筷子多糖有明显抑制S180肉瘤细胞体内生长的作用；对照鼠S180肉瘤模型，多糖(HFPS)治疗组荷瘤小鼠胸腺皮质厚度较明显增加，胸腺细胞增多；小鼠肉瘤组织中肉瘤细胞发生不同程度的变性和坏死以及中性粒细胞、淋巴细胞为主的炎细胞浸润。结论铁筷子多糖有抑制S180细胞体内生长的作用。     

体外培养细胞的酸性磷酸酶显示法

本实验对体外传代培养的小鼠胸腺基质细胞用偶氮偶联法显示ACP ase,较清楚地显示了胸腺内各种基质细胞此酶的活性反应。     

4种与胸腺细胞发育相关的小鼠cDNA文库的建立

为深入研究胸腺细胞与胸腺基质细胞间相互作用的机制,我室制备了一系列抗胸腺基质细胞抗体,发现其中的两株单抗PF18-3和RS21-C6显示出非常有意义的作用.为克隆上述单抗识别分子的编码基因,我们成功地构建了分别来自早期T细胞株C320、ConA活化胸腺细胞、胸腺上皮样细胞株和胸腺树突状细胞株的4个高质量cDNA文库.     

测定白细胞介素Ⅱ生物学活性的两种方法的建立和比较

通过IL-2依赖性生长的TH细胞系(FI_2)微量培养[~3H]TdR参入法及国内尚未报道的小鼠胸腺细胞增殖改良法进行了IL-2活性检测。结果提示:前法敏感性高,重复性好,其测定成功之关键在于细胞良好生长状态,后法不需细胞传代培养,简单易行。     

护理干预对初始拒绝高频热疗肿瘤患者的疗效分析

目的探讨肿瘤患者拒绝高频热疗的原因并采取有效的护理干预,以提高热疗的疗效。方法选择肿瘤科在初始阶段拒绝高频热疗的患者70例,采用一对一访谈调查其拒绝原因,知情访谈后拟将同意进行热疗的70例患者作为试验人群,采用随机数字表对入组的病例随机分为两组,对照组35例采用常规护理与劝导;干预组35例在常规护理基础上进行有针对性的护理干预。最后使70例患者全部接受高频热疗,但两组患者呈现出不同的热疗效果。结果认知缺陷、心理问题、家庭经济负担等是患者拒绝高频热疗的主要原因,分别占访谈人次的75.71%、72.86%和38.57%。干预组和对照组患者呈现出不同的热疗效果;干预组患者疗效总体满意为33例（94.3%）,显著高于对照组的17例（48.6%）,有显著性差异（P〈0.001）。结论当肿瘤患者对高频热疗有拒绝心理时,热疗师应积极参与就相关原因进行分析,采取相应、正确的护理干预措施,可使曾拒绝高频热疗的肿瘤患者接受该辅助治疗并提高其疗效,延长肿瘤患者的生存期和提高其生存质量。     

以表皮细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤

目的 体外扩增培养表皮细胞，复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，以促进其进一步临床应用。方法 将人表皮细胞进行体外培养扩增后，以生长良好的表皮细胞接种于制备好的异种（猪）无细胞真皮支架上，行气液界面联合体外培养，构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及复合皮结构。结果 培养的表皮细胞扩增良好，脱细胞真皮支架去细胞完全，表皮细胞在脱细胞真皮上可以生长，可体外构建复合皮肤。结论 利用体外扩增的表皮细胞及制备的脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤。     

胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响

本文采用流式的细胞仪研究了小鼠胸腺细胞体外培养对细胞内ＤＮＡ合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果表明：胸腺细胞体外培养引起ＤＮＡ合成抑制，细胞有丝分裂延迟，体外培养后４小时即表现出明显的ＤＮＡ合成抑制。８～１２ｈ抑制最深，２４ｈ蛋白质的合成开始恢复，细胞凋亡则表现时间依赖性增高。     

大鼠膝关节软骨细胞体外培养去分化时间的实验研究

目的:观察大鼠膝关节软骨细胞体外培养后自然退变时间,为骨关节炎研究提供合适靶细胞。方法:大鼠膝关节软骨细胞体外培养,传代,行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,通过Western Blot检测其特征性Ⅱ型胶原的表达情况对传代软骨细胞表型进行鉴定。结果:大鼠膝关节第5代软骨细胞和前4代比较,Ⅱ型胶原表达明显减少(P<0.05),结论:大鼠膝关节软骨细胞体外培养前4代能维持正常的软骨细胞表型,第5代开始发生退变,前4代可以做为软骨细胞研究的靶细胞。     

大鼠附睾上皮细胞的体外培养与研究

目的：对体外培养的大鼠附睾上皮细胞进行动态观察与鉴定,了解体外条件下精子与附睾上皮细胞共同培养后精子活动力的变化。方法：用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行培养,观察与体尾部上皮细胞复合培养的精子鞭毛摆动与前向直线运动能力变化的情况。结果：培养的细胞呈多角形态并保持其形态１２ｄ以上;电镜证实细胞表面存在微绒毛,有丰富的滑面内质网;复合培养的精子运动能力明显增加。结论：体外条件下培养的细胞具有明显上皮细胞特征,精子在复合培养后,能逐渐获得授精所必需的运动能力,从而达到功能的成熟     

人眼小梁网细胞的体外培养

目的 探讨体外培养人眼小梁网细胞的方法并观测其生物学特性。方法 采用组织块培养方法进行体外细胞培养，二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法、倒置显微镜、透射电镜，免疫细胞化学等方法观察体外培养细胞的生物学特性并进行鉴定。结果 组织块培养7～15d后可见细胞从其边缘向外生长。倒置显微镜下成梭形、圆形、椭圆形、并有多个突起；电镜可见小梁网细胞表面有较多微绒毛，细胞间缝隙连接，胞质内见很多次级溶酶体。免疫细胞化学检测纤维黏连蛋白、层黏连蛋白和神经元特异性烯醇化酶染色阳性。这些特征可与角膜内皮细胞和巩膜成纤维细胞相鉴别。结论 组织培养方法能够成功体外培养人眼小梁网细胞。     

双胸蚓溶栓酶对胎鼠大脑神经元突起生长的影响

应用神经细胞体外培养技术观察了不同剂量双胸蚓溶栓酶作用下的1～30日内Wistar胎鼠大脑神经细胞的生长发育过程。结果显示,不同剂量溶栓酶对神经元突起数量以及轴索的形成和发展均有促进作用。     

体外扩增大鼠肌源性干细胞的安全性研究

目的:研究经体外扩增的大鼠肌源性干细胞的安全性,为将来肌源性干细胞移植治疗压力性尿失禁的临床应用提供参考。方法:分离培养出大鼠肌源性干细胞,在体外传代培养,对传至第10代(PP6-10)的细胞进行刀豆球蛋白A(ConA)凝聚实验、双层软琼脂培养实验初步分析细胞表面结构和生长特性是否发生恶变;采用免疫细胞化学的方法检测PP6-10的端粒酶活性以及c-myc,p53,c-fos肿瘤相关基因的表达情况;采用裸鼠皮下致瘤实验观察其是否具备致瘤性。结果:体外培养至第10代以内的大鼠肌源性干细胞在培养瓶底分布均匀,贴壁后多为纺锤形或梭形,与原代培养的肌源性干细胞形态相比无明显改变;在不同浓度的ConA溶液中,PP6-10均未产生凝聚反应;将PP6-10置于双层软琼脂中培养12d,未见细胞克隆形成,培养至20d,细胞数量明显减少;通过免疫细胞化学方法检测PP6-10中的c-myc,p53和c-fos等肿瘤相关基因的表达结果均为阴性,PP6-10中的端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达结果呈弱阳性;将不同浓度的PP6-10接种于裸鼠皮下,观察4个月后接种部位没有肿块形成,病检其接种部位以及肝脏、肺脏均无异常表现。结论:大鼠肌源性干细胞体外培养至第10代后没有发生突变,不具备体内致瘤性,初步证实了体外传至第10代的大鼠肌源性干细胞的安全性。     

组织培养下胎儿卵巢卵泡的发育

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否发育以及胎儿胰腺条件培养液对其发育的影响。方法 :取 16例 2 0～ 2 8周和 11例 >2 8周中期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,经直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养后 ,观察培养前后的组织学变化。结果 :胎儿卵巢经组织培养后 ,较成熟卵泡比例增加 ,P <0 .0 0 5 ;加胎儿胰腺条件培养液组与未加胎儿胰腺条件培养液组相比 ,较成熟卵泡比例增加更为明显 (P <0 .0 0 5 )。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能继续发育 ,胎儿胰腺条件培养液有促进卵泡发育的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养成年大鼠海马神经前体细胞ERK1/2活性的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外培养成年大鼠海马神经前体细胞增殖和细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK)活性的影响。方法　体外培养成年大鼠海马神经前体细胞经预处理后 ,分别加入BrdU(10μmol)和bFGF(2 0ng/ml)进行培养 ,采用流式细胞仪和Westernblot方法测定海马神经前体细胞DNA合成和磷酸化ERK1/ 2活性。结果　流式细胞仪结果显示加入bFGF进行培养的海马成年神经前体细胞BrdU阳性标记率为(19.5± 3.2 ) % ;对照组为 (10 .5± 1.4 ) % ,两组具有显著性差异 (P <0 .0 1)。同时 ,Westernblot方法测定结果表明bFGF刺激后 ,海马成年神经前体细胞磷酸化ERK1/ 2活性升高 ,15min时为峰值 ,6 0min后恢复到基础水平。结论　bFGF通过激活ERK1/ 2信号转导途径促进成年海马神经前体细胞胞核内DNA的合成 ,进而促进其增殖