不同的液体方法对痰液DNA提取的影响

为探讨不同固定液化方法对痰液中ＤＮＡ提取的影响，应用３种不同的痰液液化固定方法：即Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法，ＤＴＴ法；Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ法联合应用。对经３种方法处理的痰液分别提取ＤＮＡ，应用分光光度仪测量其波长为２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处光密度值（ＯＤ值），以ＯＤ２６０／ＤＤ２８０作为衡量ＤＮＡ纯度的指标。结果表明用Ｓａｃｌｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ活联合应用方法了液化的痰液中ＤＮＡ提取效果最     

电洗脱法纯化DNA片段

电洗脱法纯化ＤＮＡ片段汪渊，桂淑玉分子生物学研究方法作为一类十分有用的技术已在生物学科的各个领域得到广泛的应用。ＤＮＡ片段的纯化是获得目的ＤＮＡ的手段，是分子生物学的基本方法，是各种分子生物学研究方法的基础。目前，ＤＮＡ片段的纯化方法众多，如电洗脱法...     

水牛角四种不同提取方法的实验研究

本文用四种不同的提取方法对水牛角中的氨基酸进行了分类与定量测定，结果总氨基酸含量以酸碱混合水解法为最高。     

DNA提取方法的比较及改良

用于处理DNA检材以分离和提取DNA的方法很多。不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同。在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求。本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较。     

DNA提取方法对桑树内生菌多样性研究的影响

【目的】基于聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）对桑树根、茎、叶组织内生菌多样性的分析,结合浓度、纯度、 PCR扩增性等指标,比较4种DNA提取方法之优劣。【方法】采用常见的DNA提取方法十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、缓冲液振荡（SPBS）法、液氮研磨（LNG）法和试剂盒（KIT）法提取桑树各组织DNA,从PCR-DGGE多样性等多方面对4种方法进行比较。【结果】对于桑树根和茎, DNA提取浓度最高的方法是LNG法,最低的是SPBS法;桑树叶情况则完全相反。桑树各组织, KIT法获得的DNA纯度均最高。桑树各组织通过16S rDNA PCR-DGGE比较内生细菌多样性,适宜的DNA提取方法是LNG法或CTAB法,不宜采用KIT法提取DNA。内生真菌ITS PCR-DGGE分析结果完全不同,最佳提取方法是KIT法,最不适宜的DNA提取方法因组织不同而异。【结论】对于桑树内生菌研究,最佳的DNA提取方法因组织不同而异,还与研究的内生菌种类有关系。     

日本血吸虫基因组DNA的提纯与鉴定

本研究采用酚─氯仿法提纯了日本血吸虫基因组ＤＮＡ，并对基因组ＤＮＡ进行了定量分析及微电泳鉴定。结果表明，１００ｍｇ日本血吸虫成虫（湿重）可提纯出约８０μｇ的ＤＮＡ，其基因组ＤＮＡ的大小＞３１Ｋｂ。该法提取的血吸虫基因组ＤＮＡ较纯，适合于以后进行ＤＮＡ限制性核酸内切酶谱分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。     

痰中结核杆菌DNA提取方法比较

痰中结核杆菌ＤＮＡ提取方法比较陈秀珍内江市二医院为了快速提取ＤＮＡ，缩短ＰＣＲ技术检测时间，提高阳性率，减少标本污染，我室比较了三种提取痰标本中结核杆菌ＤＮＡ的方法，现介绍如下。１材料和方法１．１结核组２４份痰标本，系本院传染科根据临床表现，胸片及细...     

真核细胞基因组DNA的制备

介绍本实验室常用基因组DNA的提取方法:对来源于培养的细胞或血细胞,一般采用蛋白酶K和去垢剂温和破碎的方法,而对于组织来源的细胞,还要先采用物理方法如匀浆法、超声波法、液氮破碎法等破碎细胞,再行分离.     

从银杏叶中提取黄酮苷方法的改进

该文介绍了一种从银杏叶中提取黄酮苷类有效成分的改进方法。系采用脱脂棉吸附除去叶绿素以及纸浆共沉除去难于沉降的杂质。实验表明，此法能很好地除去叶绿素和其他脂溶性杂质，黄酮苷提取率为７３％。     

两种微量DNA提取方法的比较

目的：比较Promega Wizard Genomic DNA纯化试剂盒（PWGDPK）和国产星普液体微量DNA提取试剂盒（SLDPK）提取DNA的效果,探讨从冷冻保存的人外周血中提取基因组DNA的最佳方案。 方法：采用反复冻融3次并在-20℃冻存1年的12例健康成人外周血样品,分别应用两种试剂盒提取基因组DNA,并采用吸收光谱法、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增等方法分别对提取的基因组DNA进行对比鉴定。 结果：PWGDPK提取的DNA浓度为15.0~130.0 mg·L^-1［（74.8±39.3）mg·L ^-1］,而SLDPK为15.5~37.0 mg·L^-1［（26.6±6.2）mg·L ^-1］,前者显著高于后者（t=4.119,df=11,P＜0.005）。但两种试剂盒提取的基因组DNA纯度都不高,大多数样品A₂60/A₂80比值偏离了1.8～2.0范围。PWGDPK提取的12个基因组DNA样品,琼脂糖凝胶电泳后都可见电泳带,9个条带较深,3个条带较浅。SLDPK提取的样品中,只有7个可见较浅的电泳带。应用两种试剂盒提取的12个基因组DNA样品作为模板进行PCR反应后,在rs1171558 SNP位点均有11个样品（91.7%）获得目的片段;在rs2248745 SNP 位点,应用SLDPK只有4个样品（33.3%）获得目的片段,应用PWGDPK有10个样品（83.3%）获得目的片段,后者明显优于前者。 结论：PWGDPK比SLDPK更适合于从长期冷冻保存且反复冻融过的全血中提取基因组DNA。     

氚-胆固醇标记血浆脂蛋白方法的研究

本研究用~3H-胆固醇标记血浆脂蛋白,血浆经3.75％PAGE,可将脂蛋白分成HDL、LDL和VLDL。分别测定各脂蛋白的每分钟计数(cpm),并计算放射化学纯度。HDL、LDL和VLDL的放射化学纯度分别为99％、96％和94％。本法标记的脂蛋白具有一定的化学稳定性,不改变生物活性和其他理化性质等优点。可通过制备性PAGE纯化~3H-胆固醇标记的脂蛋白。该方法操作简单,~3H-胆固醇半衰期长,可广泛应用于血浆脂蛋白代谢的研究。     

胃粘膜脱落细胞端粒酶活性半定量的研究

目的 :探讨胃镜直视下刷取胃粘膜脱落细胞中端粒酶活性对胃癌的诊断价值。方法 :采用TRAP -PCR -ELISA法对 5 6例胃镜下活检组织和胃粘膜刷落细胞进行端粒酶活性分析。结果 :胃癌组端粒酶活性水平 (平均A值0 .745 )明显高于胃炎组 (平均A值 0 .0 6 8)。胃刷落细胞的与活检组织的端粒酶活性水平是相近的。端粒酶在胃癌组的阳性率为 90 % ,明显高于胃刷落细胞涂片的阳性率 (6 6 .7% )与血CEA的阳性率 (5 6 .7% )。同时 75 %的胃粘膜不典型增生者其端粒酶活性水平也显著增高。结论 :测定胃粘膜脱落细胞的端粒酶活性可作为诊断胃癌有效而敏感的方法     

Lewis肺癌浸润淋巴细胞的进一步纯化及体外抗癌特点的研究

为探索进一步纯化肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的方法及其体外抗瘤作用特点,为临床应用ＴＩＬ治疗肺癌提供依据,用不连续密度梯度离心法从接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内的Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）瘤体中分离提取ＴＩＬ,过夜贴壁,剔除贴壁细胞后,可明显提高ＴＩＬ的纯度。纯化的ＴＩＬ在含１０００Ｕ／ｍｌＩＬ ２的完全培养基中继续培养。免疫荧光表型分析发现,ＴＩＬ中ＣＤ＋４、ＣＤ＋８初为０９１±０１２,培养后为０８３±００７,体外ＴＩＬ对ＮＫ敏感的Ｌ９２９细胞有一定的杀伤作用,效靶比为２００∶１和１００∶１时的杀伤率高于５０∶１（Ｐ＜００５）,表明ＬＬＣ浸润淋巴细胞体外的杀伤活性具有一定的非特异性。     

宫颈癌患者阴道脱落细胞巨细胞病毒抗原的检测

应用敏感性高的辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法(PAP)通过对宫颈癌患者阴道脱落细胞巨细胞病毒抗原的检测,探知 HCMV 与宫颈癌的关系结果表明:宫颈癌患者阴道脱落细胞 HCMV 抗原阳性率(78%)较正常人群组(31%)高,差异有显著性。     

视网膜电图振荡电位在糖尿病性视网膜病变早期诊断的价值

目的：探讨视网膜电图振荡电位（oscillatory potentials,OPs)在糖尿病性视网膜病变早期诊断中的价值，以及与糖尿病病程、血糖和血压的关系。方法：测定102例2型糖尿病患者的视网膜电图振荡电位，分析暗适应OPs的波幅及潜时，并将OPs、眼底荧光血管造影和检眼镜检查三者对糖尿病性视网膜病变的异常检出率进行比较；同时测定患者的血压、空腹血糖及糖化血红蛋白，与OPs进行相关分析。结果：在糖尿病性视网膜病变前期组，暗适应OPs总波幅、OPs各子波波幅（OP1－OP4）降低及OP1、OP2潜时延长，均与对照组有显著性差异（P＜0．01），且与糖尿病性视网膜病变各期有明显的相关性，其中以OPs总波幅的相关性最好；OPs、眼底荧光血管造影及检眼镜检查三者对糖尿病性视网膜病变的异常检出率依次为67．6％、52．9％和45．1％；OPs总波幅与血糖、病程、血压（包括收缩压和舒张压）均呈负相关。结论：暗适应OPs总波幅是目前诊断早期糖尿病性视网膜病变最敏感的指标，它不仅能早期发现病变，还能反映视网膜的进行性损害；及早发现和控制高血糖、高血压，对减少和延缓糖尿病性视网膜病变的发生发展有重要意义。     

改良反汤氏位对颧弓骨折诊断及辐射防护价值的探讨

对２１例临床拟诊颧弓骨折的外伤患者进行常规颧弓轴位及改良反汤氏位投照，并用ＲＧＤ＿３型热释光剂量仪对其中６例患者颜面部Ｘ线辐射剂量进行了测试。结果：两种投照位置照片，对颧弓骨折诊断的阳性率相同，但对骨折线及骨折错位程度的显示，后者优于前者。在患者颜面部接受Ｘ线辐射剂量上，改良反汤氏位约低于常规颧弓轴位的１９～２３倍。在投照方法学上，改良反汤氏位简便，易行，医患双方均易接受。     

多发性硬化患者淋巴细胞亚群及胎儿胸腺悬液输注的影响

目的：探讨淋巴细胞亚群在多发性硬化免疫病理中的作用及胎儿胸腺细胞移植的影响。方法：采用间接免疫荧光法对胎儿胸腺细胞悬液治疗前后多发性硬化患者淋巴细胞亚群进行研究。结果：ＭＳ活动期患者外周血ＣＤ＋４、ＣＤ＋８较对照组降低,ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值较对照组明显升高。经胚胎胸腺细胞移植治疗后,ＣＤ＋８细胞较治疗前升高,而ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值下降。结论：多发性硬化发病与淋巴细胞免疫有关,给予胎儿胸腺细胞移植治疗,具有免疫重建作用。     

乳腺原发癌与其相应淋巴结转移癌细胞的CD44v及nm23-H1表达的对比研究

目的：探讨肿瘤转移相关基因CD44和nm23-H1在乳腺原发癌和转移癌中的表达情况。方法：采用病理形态学观察和免疫流式细胞光度术定量对比分析了34例乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌细胞CD44v及nm23-H1在蛋白水平上的表达情况。结果：本组乳腺原发癌CD44v和nm23-H1表达的阳性率分别为82．35％和64．71％。乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌对比分析揭示，乳腺癌腋窝淋巴结转移癌细胞CD44v和m23-H1表达的阳性率分别略高和略低于其相应原发癌，但23．53％（8／34）病例可见转移癌细胞CD44v的表达低于其相应的原发癌（P＜0．05），17．65％（6／34）病例转移癌细胞呈现nm23-H1的高表达（P＜0．05）。结论：乳腺原发癌和转移癌细胞CD44v和nm23-H1的表达存在相当程度的差异，在乳腺癌研究中应充分考虑基因表达的异质性。     

HSV-Ⅰ亚单位疫苗新制备方法的初步探讨

本实验从Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染的 Hep-2细胞提取单纯疱疹病毒的亚单位疫苗。以去污剂 NP-40溶解下病毒的亚单位以及与细胞膜结合的病毒特异性糖蛋白,用超速离心的方法将其分离出来。经免疫双扩散方法检测.提取物亚单位疫苗显示了特异的抗原性。疫苗接种小鼠之后,以间接免疫荧光技术测得小鼠血清中出现的 HSV-1抗体。     

图像分析仪定量大鼠心房肌特殊颗粒及线粒体的应用

为了解决透射电镜图像某些特征信息不能直接用图像分析仪全自动方式定量的问题。我们应用ＩＢＡＳ图像分析仪半自动方式人工识别心房肌特征结构心房特殊颗粒及线粒体。结果表明此种方法能较准确测定全自动方式灰度识别不能测定的特征结构。因此，图像分析仪与人工识别相结合的半自动方式比全自动方式灰度识别具有更广泛的应用价值。