焦炉工人周围血细胞p16基因甲基化研究

目的分析焦炉工人周围血细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化状态,寻找焦炉工人肺癌辅助筛查的生物标志物。方法以74名男性焦炉工人为接触组,以47名供水厂男性职工为对照组。采集2组人员的班后尿,用高效液相色谱法检测其内暴露指标1-羟基芘(1-OH-Py)的水平;同时采集晨起空腹肘静脉血,分离周围血单个核细胞,用彗星实验检测DNA损伤情况;并提取基因组DNA,用甲基化特异性聚合酶链反应技术检测p16基因启动子区CpG岛甲基化发生情况。结果接触组尿1-OH-Py水平[(0.46±0.12)μmol/mol Cr]和DNA拖尾的Olive尾距[(0.41±0.25)μm]高于对照组[(0.17±0.06)μmol/mol Cr、(0.32±0.12)μm],差异有统计学意义(P<0.05)。接触组p16基因的异常甲基化的检出率(36.49%)高于对照组(4.26%),差异有统计学意义(P<0.01);并且p16基因的异常甲基化检出率随着尿1-OH-Py的水平升高逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论周围血p16基因异常甲基化可能是焦炉工人肺癌早期筛查有效的生物标志物。     

乳腺癌血浆抑癌基因p16甲基化的分析

[目的]探讨抑癌基因p16在乳腺癌患者血浆中的异常甲基化情况. [方法]对36例乳腺癌和15例乳腺良性肿物患者选用抑癌基因p16启动子区域CpG岛采用甲基化特异性聚合酶链式反应(Methylation-Specific PCR,MSP),检测该基因的异常甲基化. [结果]2例乳腺增生伴钙化患者在抑癌基因p16启动子区域CpG岛出现异常甲基化,甲基化率为13.3%,14例乳腺癌患者甲基化率为38.9%.抑癌基因p16甲基化状态与乳腺癌临床分期和淋巴结转移密切相关,统计学分析有意义. [结论]抑癌基因p16异常甲基化是乳腺癌中常见的分子改变,可能是乳腺癌发生的早期事件之一,可能作为乳腺癌早期诊断依据之一及判断预后的一个指标.     

职业性镍接触工人外周血淋巴细胞微核率观察

[目的]探讨职业性镍接触对工人外周血淋巴细胞微核率的影响以及染色体损伤作用。[方法]根据生产工艺的不同,选取某钢铁企业男性炼钢工、轧钢工及钢渣处理工共231人作为镍接触组,同时选择该企业的男性水泵工75人为对照组。采用人外周血淋巴细胞胞质分裂阻滞微核试验检测各组淋巴细胞的微核率;采用丁二酮肟分光光度法检测尿中镍的含量。[结果]不同镍接触组细胞微核率分别与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）,相关分析显示淋巴细胞微核率与尿镍含量呈正相关性（r=0．971,P〈0．05）;不同工龄组细胞微核率分别和对照组相比较,差异也有统计学意义（P〈0．01）,相关分析．显示,工龄与细胞微核率和尿镍含量均呈正相关性（r微核率=0．923,P〈0．05;r尿镍=0．915,P〈0．05）;不同镍接触组尿镍含量分别与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;不同工龄尿镍含量分别与对照组比较,除工龄“0年～”和“6年～”组以外,各组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）。[结论]职业性镍接触使工人外周血淋巴细胞微核率增加．对染色体有捐伤作用。     

职业性镍接触工人DNA链断裂的研究

[目的]观察不锈钢冶炼职业性镍接触对工人淋巴细胞DNA损伤的影响。[方法]对某不锈钢冶炼厂相关作业环境进行监测,根据作业工种的不同,选取该厂镍接触的炼钢工（60名）、钢渣处理工（65名）及轧钢工（40名）,共165名男性工人为接触组,同时选取该企业67名水处理工为对照组,通过问卷调查收集研究对象的一般情况、职业暴露、吸烟和饮酒情况等,应用彗星试验检测工人外周血淋巴细胞的DNA损伤。[结果]炼钢工的尾惯量为（23．33±7．10）％,钢渣处理工为（22．87±10．67）％;轧钢工为（21．67±9．32）％,3组均高于对照组（10．53±5．08）％（P〈0．01）;炼钢工的尾长为（1．20±0．21）μm,钢渣处理工为（1．18土0．22）μm,轧钢工为（1．14±0．24）μm,3组也均高于对照组（0．91±0．19）μm（P〈0．01）;炼钢工、钢渣处理工和的轧钢工Olive尾矩（olive tail moment,OTM）分别为0．495±0．055、0．455±0．045和0．429±0．069,均高于对照组（0．103±0．054）（P〈0．01）。各工龄组之间OTM差异均有统计学意义（P〈0．01）;吸烟与非吸烟组之间比较,OTM值差异也有统计学意义（P〈0．05）。经相关分析表明：OTM与尿镍浓度呈正相关（r=0．576,P〈0．01）。[结论]淋巴细胞DNA损伤可能是镍职业接触工人的早期损害之一。     

维生素E对氯化镍染毒大鼠肺组织p15基因甲基化过程的影响

[目的]探讨维生素E（VE）对氯化镍染毒大鼠肺组织p15基因甲基化过程的影响。[方法]以0．1、0．2、0．4和0．8mg／mL氯化镍灌胃染毒大鼠,并设立对照组（生理盐水）和拮抗组（0．8mg／mL氯化镍＋5mg／mL VE）,持续6周。染毒结束后处死大鼠,制备肺组织匀浆,采用分光光度法,测定谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平的变化;以荧光定量PCR法检测肺组织中抑癌基因p15的表达水平;以甲基化PCR法检测p15启动子甲基化状态;以Western-blot检测DNA甲基转移酶1（DNMT1）和蛋氨酸腺苷转移酶2A（MAT2A）的表达水平。[结果]随着氯化镍染毒剂量的增加,MDA含量显著升高,GSH含量显著下降（P〈0．01）;与相同剂量染毒组相比,拮抗组大鼠肺组织中MDA含量降低,GSH含量升高（P〈0．05）;对照组大鼠肺组织p15启动子为非甲基化状态,染毒组大鼠肺组织p15启动子甲基化和非甲基化条带均有表达;各染毒组p15mRNA表达量与对照组相比均显著性降低（P〈0．01）,使用抗氧化剂VE后p15mRNA表达量与相同剂量染毒组相比显著性增高（P〈0．05）;随着染镍剂量的增高,DNMT1和MAT2A表达量显著性升高,与对照组相比,最高剂量染镍组DNMT1和MAT2A的表达量分别增高了1．52倍和1．49倍。使用拮抗剂VE后,与相同剂量染镍组相比DNMT1和MAT2A的表达量分别降低了10％和29％;双变量相关分析显示大鼠肺组织中GSH含量与DNMT1和MAT2A蛋白表达水平呈负相关关系,相关系数分别为r=-0．889（P=0．018）和r=-0．821（P=0．044）。[结论]维生素E可能通过影响GSH在氯化镍染毒大鼠肺组织中的含量而影响p15基因的甲基化过程。     

煤焦沥青职业接触人群DNA甲基化和端粒损伤研究

目的 研究煤焦沥青职业接触人群p16、FHIT和RASSF 1A基因启动子甲基化及端粒损伤情况,探讨煤焦沥青职业接触有效的生物标志.方法 选择某碳素厂180例煤焦沥青职业接触工人为接触组,同期在郑州大学第一附属医院进行体检的健康人145例为对照组.用实时荧光定量PCR的方法检测外周血DNA相对端粒长度,实时荧光定量甲基化特异性PCR方法检测外周血DNA p16、RASSF 1A和FHIT基因甲基化率,比较两组端粒相对长度和基因甲基化率情况并分析影响因素.结果 接触组外周血白细胞DNA端粒相对长度[0.83 (0.71～0.90)]低于对照组端粒相对长度[1.13(0.72～1.45)],差异有统计学意义(Z=-5.395,P＜0.01).两组p16、FHIT和RASSF 1A基因启动子甲基化率的差异无统计学意义(P＞0.05).经过性别、年龄和是否吸烟的分层分析后发现,在年龄≤40岁时接触组p16基因启动子的甲基化率高于对照组,差异均有统计学意义(Z=-1.914,P=0.011).结论 煤焦沥青职业接触可引起人外周血白细胞DNA端粒长度缩短,对p16、FHIT和RASSF1A基因启动子甲基化率无影响.     

贵州兴仁县燃煤型砷中毒患者p16基因甲基化研究

目的了解抑癌基因p16启动子区CPG岛在燃煤型砷中毒患者中甲基化的情况和意义。方法分别采集燃煤型砷中毒患者与正常人群外周血标本各51例和52例,采用酚一氯仿法提取DNA。紫外分光光度法测定DNA的含量,将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果燃煤型砷中毒患者与正常对照p16基因启动子区CPG岛甲基化检出率分别为94．1％（48／51）和71．1％（37／52）,两者间差异有统计学意义。结论p16启动子区CPG岛甲基化与燃煤型砷中毒有关联。     

p53-Bax线粒体凋亡通路DNA甲基化与胆管癌病理生物学的关系

目的探讨p53-Bax线粒体凋亡通路抑癌基因启动子区的甲基化状态与胆管癌病理生物学行为的关系。方法采用甲基化PCR检测36例胆管癌患者癌组织和癌旁组织中抑癌基因甲基化诱导静止基因（TMS1／ASC）、死亡相关蛋白激酶（DAPK）和p14启动子区甲基化状态,并对p53基因外显子5～8进行DNA测序,分析以上基因的突变与胆管癌生物学行为的关系。结果24例（66．7％）胆管癌患者癌组织中至少有1个抑癌基因启动子区存在甲基化,p14、DAPK和TMS1／ASC的甲基化率分别为25％、30．6％和36．1％。5例（13．9％）患者的癌旁组织中存在抑癌基因启动子区甲基化,其中TMS1／ASC启动子区甲基化3例（8．3％）,DAPK启动子区甲基化2例（5．6％）。DNA测序显示,22例（61．1％）胆管癌患者癌组织中p53基因外显子5～8存在突变。其中14例（38．9％）p53基因外显子突变伴1个以上抑癌基因启动子区甲基化,与胆管癌的病理类型、浸润深度、分化程度显著相关（P〈0．05）。抑癌基因非甲基化及p53突变阴性组（4例）术后1、2、3年的生存率分别为70％、43％、28％,抑癌基因甲基化及p53突变阳性组（14例）术后1、2、3年的生存率分别为28％、5％、0％,前者的生存率显著高于后者（X^2=9．060,P=0．03）。结论p53-Bax线粒体凋亡通路中抑癌基因启动子过甲基化是胆管癌组织中常见的分子事件,癌旁组织中TMS1／ASC和DAPK基因甲基化程度虽然较低,但可能对胆管癌有早期诊断意义。p53突变伴抑癌基因甲基化与胆管癌的病理生物学行为有关,趋向于较高的恶性程度和较低的生存率。     

砷接触工人尿甲基砷酸水平与P53基因损伤的关系

[目的]观察砷职业暴露人群尿甲基砷酸水平与P53基因损伤的关系,深入认识砷的遗传毒性。[方法]选取砒霜厂95名砷接触工人作为暴露组,另选对照组55人,采集外周血和晨尿。用氢化物发生原子吸收分光光度法检测尿中各形态砷化合物和总砷含量,并计算一、二级甲基化指数。实时荧光定量PCR扩增人群外周血淋巴细胞P53基因外显子5和8,通过循环阈值推算损伤后扩增效率,间接计算损伤指数。[结果]暴露组工人尿中无机砷（iAs）、甲基砷酸（MMA）、二甲基砷酸（DMA）均明显高于对照组;暴露组工人二级甲基化指数明显低于对照组;暴露组工人P53基因外显子5和8的损伤指数均明显高于对照组;尿中砷一级甲基化指数与P53基因第5外显子损伤指数存在明显的正相关,尿中砷二级甲基化指数与P53基因第5外显子损伤指数存在明显的负相关。[结论]职业砷暴露工人二级甲基化指数明显增加,体内存在较多甲基砷酸,可能是P53基因外显子5损伤的主要原因。     

二甲基乙酰胺职业接触及与尿中甲基乙酰胺的关系

[目的]探讨职业二甲基乙酰胺（DMAC）接触与尿中甲基乙酰胺（NMAC）的相关性。[方法]对3家氨纶生产企业6个工种201名工人进行空气中DMAC暴露浓度监测及工作周末班末尿样采集,同时对20名纺丝工连续一周空气样品和班末尿样的采集;分别用气相色谱测定空气中DMAC和尿中NMAC含量。[结果]氨纶生产过程中组件清洗工、纺丝工接触DMAC水平最高（P〈0.0033）,中位数分别为32.10、22.02mg/m3,其尿中NMAC浓度较其他工种高（P〈0.0033）,中位数分别为30.09、22.72mg/gCr;工作周末班末尿NMAC含量与空气中DMAC浓度呈直线相关,直线方程为log（U-NMAC）=0.685＋0.455×log（A-DMAC）（r=0.698,P=0.001）;长期DMAC接触者,接触2d后尿中NMAC呈较高水平（P〈0.0033）;个体DMAC接触代谢转化为NMAC的相对内暴露指数（RIE）与DMAC接触浓度呈负相关（rs=-0.781,P=0.001）。[结论]工作周末班末尿NMAC含量与空气中DMAC浓度呈良好对数线性关系。     

某荧光灯制造企业汞接触工人职业健康状况及影响因素

[目的]了解某荧光灯制造企业汞接触工人职业健康状况,分析影响尿汞水平的因素。[方法]根据国家相关职业卫生标准对工作场所进行职业卫生学调查,并按照《工作场所空气中有害物质监测的采样规范》（GBZ159-2004）中规定的采样原则在每个岗位设置了一个采样点。对汞接触人员进行职业健康检查,检查内容包括问诊,内、外科,口腔科,实验室检查,B超,心电图等。共调查汞接触工人1031名,其中男性351名,女性680名,年龄20～57岁。[结果]该企业122个检测点空气中汞浓度范围为0．001～0．013mg／m3,均未超标。1031名工人尿汞浓度范围为0．22～58．71μg／m3,中位数为3．26μg／g肌酐,9人尿汞浓度超标,超标率0．87％。尿蛋白阳性198人,阳性率19．20％;神经系统异常113人,异常率10．96％。女性工人的尿汞水平（中位数为3．38μg／g肌酐）商于男性（中位数为3．07μ∥g肌酐）（P=0．036）;年龄与尿汞浓度呈正相关（r=-0．089,P=0．011）;工龄与尿汞浓度无相关。[结论]该企业各岗位空气中汞浓度均低于O．02mg／m。,O．87％的工人尿汞浓度超标。性别和年龄可能为尿汞浓度的影响因素。     

铅作业工人尿铅、血红蛋白和红细胞检测分析

目的了解铅对作业工人的健康影响,分析尿铅与血红蛋白和红细胞的关系。方法对202名铅作业工人和213名对照人群进行尿铅、血红蛋白和红细胞检测。结果铅作业组的尿铅≥0.34μmol/L的占70.8%,明显高于对照组(P<0.01);铅作业组血红蛋白明显低于同性别对照组(男性P<0.01,女性P<0.05);铅作业组红细胞与同性别对照组比较,差异无统计学意义(P>0.01)。多元回归分析表明,血红蛋白与尿铅水平呈负相关。结论长期职业接触铅可引起尿铅含量增高和血红蛋白降低含量,血红蛋白含量与尿铅水平呈负相关。     

镍接触者尿中镍的石墨炉原子吸收光谱测定法

目的建立尿中镍的石墨炉原子吸收光谱法测定职业镍接触者的尿镍水平,并与非职业镍接触者尿镍进行比较。方法用石墨炉原子吸收光谱法直接进样测定职业和非职业镍接触者尿中镍浓度,然后进行统计分析。结果该方法在2～100μg/L范围内有良好的线性关系,r=0.999 9,检出线为1.3μg/L,回收率93.9%～106.2%,RDS2.4%～5.5%。职业镍接触者尿镍浓度高于非职业接触者,经统计分析,两者的差异具有统计学意义(P<0.01)。结论该方法可作为监测职业镍接触者体内镍摄入水平。     

甲基叔丁基醚对加油站职业人群血清淋巴细胞DNA的损伤

[目的]探索汽油添加剂甲基叔丁基醚（methyltert—butylether,MTBE）对加油站职业暴露人群DNA的损伤。[方法]选择华南地区8家加油站工作人员100名为调查对象（其中暴露组61人,对照组39人）,进行健康检查和问卷调查;调查对象各抽取外周静脉血样5mL,分离血清和淋巴细胞,运用气相色谱一质谱（GC／MS）联用技术测定血清MTBE含量;运用彗星试验（cometassay）,分析外周静脉血淋巴细胞DNA损伤情况;运用Pearson相关分析探索样本人群血清MTBE含量与淋巴细胞DNA损伤的相关性。[结果]接受体检的加油站调查对象未发现身体健康状况不合格者,均符合汽油从业人员的职业卫生要求;暴露组血清MTBE含量平均值为（6．230±2．369）μg／L,高于对照组[（5．164±2．139）μg/L]（P〈O．05）;暴露组0live尾矩平均值为（0．060±0．045）gm,也高于对照组I（0．039±0．038）μm]P〈0．05）;Pearson相关分析显示,暴露组血清MTBE含量与淋巴细胞DNA损伤程度之间呈正相关关系（r=0．859,P〈0．05）。[结论]血清MTBE含量与淋巴细胞DNA损伤可能存在相关性。     

铅作业工人血铅、尿铅和锌原卟啉测定结果分析

目的比较铅作业工人和非铅作业工人血铅、尿铅浓度、红细胞锌原卟啉和血常规的差异,探讨铅作业工人红细胞锌原卟啉和血铅、尿铅浓度的相关性。方法以蓄电池企业的252名铅作业工人作为接铅组,电子厂205名非铅作业工人作为对照组,测定血铅、尿铅浓度、红细胞锌原卟啉和血常规,并对结果进行统计学处理。结果接铅组血红蛋白含量低于对照组(P0.05),白细胞和红细胞、血小板则无差异(P0.05),接铅组红细胞锌原卟啉、血铅、尿铅浓度均显著高于对照组(P0.01),尿铅与红细胞锌原卟啉的相关系数(r)=0.166,血铅与红细胞锌原卟啉的相关系数r=0.406。结论长期接触铅可导致血铅、尿铅浓度和红细胞锌原卟啉升高,血红蛋白降低,对白细胞、红细胞、血小板无明显影响,血铅与红细胞锌原卟啉的相关性较尿铅与红细胞锌原卟啉的相关性好。     

短期苯暴露对工人外周血象及淋巴细胞染色体的损伤

[目的]探讨短期苯暴露对鞋厂工人外周血象及淋巴细胞染色体的损伤。[方法]测定作业场所空气中苯浓度,检查203名苯暴露工人（暴露组）与当地未暴露苯和其他有毒有害物质的178名健康工人（对照组）的血常规指标。应用外周血淋巴细胞胞质分裂阻滞微核（CBMN）试验结果评价研究对象外周血淋巴细胞染色体损伤。[结果]暴露组外周血红细胞计数（RBC）、血细胞比（HCT）、血小板计数（PLT）、红细胞分布活力（RDW）降低的阳性率和平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）异常率与对照组比较,差异均有统计学意义,χ2值分别为38．21、21．37、18．02、22．17、36．59、41．23,P均〈0．01;将暴露组按接苯工龄分为≤8个月、9～15个月和16～24个月3组,中性粒细胞（GRAN）减少的阳性率随着工龄的增长而有增高的趋势,且差异具有统计学意义（F=7．47,P〈0．05）;进一步按性别分类,发现暴露组女工HCT、平均红细胞体积（MCV）、PLT、血红蛋白含量（HGB）、RDW异常率明显高于男工,矿值分别为21．04、36．26、6．94、71．62、12．91,P均〈0．01。暴露组CBMN率[（2．98±1．49）‰]明显高于对照组[（0．39±0．72）‰],P〈0．001。[结论]短期苯暴露对作业工人的血液系统及染色体损伤有一定影响,并且上述指标的改变早于白细胞的异常,在职业性苯中毒的早期诊断中具有一定意义。