凝胶电泳法测定麦胚凝集素的分子量

凝胶电泳法测定蛋白质分子量的方法已经广泛应用,但该法测定植物凝集素分子量的报道很少.因植物凝集素大都是糖蛋白,用凝胶电泳法测定往往出现拖尾现象.笔者介绍了用平板凝胶电泳法测定麦胚凝集素的最佳条件,其测定结果与文献报道的一致.     

从麦胚中快速分离纯化麦胚凝集素

用改良的鸡卵类粘蛋白Sepharose 4B亲和层析法从麦胚中纯化的麦胚凝集素有较高的血凝活性,每100g麦胚丙酮粉的麦胚凝集素平均产率为58.74±6.56mg;纯化的麦胚凝集紊在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上为单一区带;其表观分子量为34 400;它的专一性半抗原糖为N-乙酰葡糖胺和唾液酸。     

麦胚凝集素对红细胞膜变形性的影响

利用分子生物学方法和激光衍射仪研究了红细胞变形性。结果,低粘滞系数(η=2cp)的磷酸缓冲液(PBS)悬浮红细胞,在低切变率((?)=150s~(-1))时红细胞的变形指数(DI)随麦胚凝集素(WGA)浓度的增大而增加;高粘滞系数(η=15cp)的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)悬浮红细胞,在高切变率((?)=800s~(-1))时,WGA浓度增大,红细胞变形指数随之减小。     

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 ,可用于实验室中细胞膜受体的研究     

麦胚凝集素简易提取及在α-淀粉酶测定中的应用

目的:通过麦胚凝集素对唾液淀粉酶(AMYs)的抑制,建立胰淀粉酶(AMYp)的检测方法。方法:从食用淀粉中简易提取麦胚凝集素,对其抑制AMYs的能力进行检测,并计算出抑制率。结果:麦胚凝集素对AMYs的平均抑制率为88.4%。通过对抑制后的淀粉酶活性测定,比较真实地反映AMYp的水平。结论:日常工作中检测淀粉酶的活性为总活性,用简易方法获得的麦胚凝集素加以抑制,然后测定AMYp的活性,对急性胰腺炎有鉴别诊断价值。     

RP-HPLC法测定口服麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素

目的:建立RP-HPLC方法,测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。方法:利用逆相蒸发-超声法制备麦胚凝集素修饰胰岛素脂质体,反相高效液相色谱法测定脂质体中胰岛素含量和包封率。利用Phenomenex-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.01％三氟乙酸(300:700)为流动相,测定波长为210nm,建立了HPLC测定胰岛素含量的方法。结果:HPLC测定方法线性范围5～100μg/ml,线性关系良好。普通胰岛素脂质体的包封率为(30.30±2.77)％(n=3),麦胚凝集素修饰脂质体包封率为(69.33±4.54〕％(n=3)。结论:建立的RP-HPLC方法便捷准确,重现性好,可用于测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。     

Localization of WGA Receptors in Liver Tumor Tissues

Receptors of wheat germ agglutinin (WGA) in liver tumors, such as hepatocellularcarcinoma (HCC), intrahepatic cholangioccflular carcinoma(ICC)and so on, were histologicallylocalized by avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) method. Normal, cirrhotic andpericancinomatous liver tissues were used as controls. The results showed that WGA receptors inHCC were irregularly distributed, which was significantly different from the band-like distributionof WGA receptors in the controls and from the distribution in ICC After the treatment withneuraminidase, the distributions of WGA receptors changed apparently. It is suggestedthat the characteristics of WGA receptor distributions in cells could be helpful to thediagnosis and differential diagnosis of liver tumors.     

急性淋巴细胞白血病细胞分化与花生凝集素受体表达

用系列单抗与标记的花生凝集素（ＰＮＡ）对３８例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）细胞行免疫分型与确定分化阶段，检测ＡＬＬ细胞ＰＮＡ受体表达情况，与正常成熟淋巴细胞（ＮＭＬ）对照。发现Ｔ－ＡＬＬ，Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ细胞大多表达ＰＮＡ受体，而ＮＭＬ细胞极少表达ＰＮＡ受体，两者有显著差别（Ｐ＜０．０１）。经神经氨酸酶（ＮＡ）预处理后，Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ与ＮＭＬ细胞ＰＮＡ受体表达明显增加（Ｐ＜０．０５），以ＮＭＬ为甚，而Ｔ－ＡＬＬ细胞ＮＡ处理前后ＰＮＡ受体表达未见明显区别；ＡＬＬ细胞ＰＮＡ受体表达与细胞分化程度存在显著的等级相关（ｒ８＝－０．３５７，Ｐ＜０．０５）。结果表明ＡＬＬ细胞上大多存在Ｄ－半乳糖－β（１－３）－Ｎ－乙酰氨基半乳糖基（Ｄ－Ｇａｌ－β（１－３）－Ｎ－ＧａｌＮＡＣ）；ＡＬＬ细胞分化程度越高。细胞上Ｄ－Ｇａｌ－β（１－３）－Ｎ－ＧａｌＮＡＣ连接唾液酸末端越多。     

p53蛋白和PCNA在肝癌及其癌周肝组织中表达的对比研究

用免疫组织化学方法检测40例原发性肝癌及其癌周肝组织中突变型p53基因蛋白(mp53)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果表明:mp53和PCNA的表达均定位于细胞核内,表达分布是弥漫、局灶、散在3种表现.其阳性表达率:在原发性肝癌(PHC)中,mp53蛋白为45.0%(18/40),PCNA为72.5%(29/40);癌周肝组织中,mp53蛋白为2.5%(1/40),PCNA为40.0%(16/40);癌周肝硬变中mp53蛋白为11.1%(1/9),PCNA为33.3%(3/9).结果提示:mp53蛋白主要是在肿瘤细胞中表达的标志物,并能反映癌周肝细胞中存在少量癌细胞的转移;PCNA可能是各种不同细胞异常增殖处于不同细胞周期阶段很有价值的标记物.mp53基因蛋白和PCNA对原发性肝癌的发生和发展可能有重要的影响.mp53蛋白可能与正常肝细胞的恶性转化有较密切的关系,涉及一些包括PCNA以及有关细胞增殖和分化的基因调控在内的其它多种因素有关.     

Studies on the Electron Microscopic Localization of Con A and WGA Receptors in Human Peritoneal Macrophages

The electron microscopic topology of Con A and WGA receptors was investi-gated in human peritoneal macrophagcs by utilizing avidin-gold colloids.Our observa-tions confirmed that both the receptors were distributed on the cell membranes,yet thereceptor expression showed variations among the individual cells.Some cells had abun-dant receptors,while others had only few receptors.The data obtained in the presentstudy indicate that human peritoneal macrophages may be a functionally andbiochemically heterogenous population,and the study may also serve as a theorcticalreference for future clinical exploitation of human peritoneal macrophages.     

人腹腔巨噬细胞Con A与WGA受体的电镜定位研究

作者应用卵白素-胶体金方法,对人腹腔巨噬细胞的Con A受体及WGA受体进行了电镜定位研究.观察表明,Con A受体与WGA受体均定位于巨噬细胞的膜表面,但膜受体的表达密度并非一致.有些巨噬细胞密度较高,有些则较低.这一结果提示,人腹腔巨噬细胞可能系功能上与生化上异质性细胞群.本研究结果为今后深入开展人腹腔巨噬细胞的有关临床应用研究提供了理论上的参考材料。     

Rapid Purification of Wheat Germ Agglutinin from Wheat Germ

Wheat germ agglutinin(WGA)with a higher activity of hemagglutina-tion was purified from wheat germ by a modified method of ovomucoid-Sepharose4B affinity chromatography.The average yield of the purified WGA from 100gwheat germ acetone powder was 58.74±6.56mg.WGA showed a single band onsodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis with an apparentmolecular weight of 34400.The specific haptens of WGA were sialic acid and N-acetylglucosamine.     

人红细胞老化过程中麦芽凝集素受体电镜细胞化学定量研究

选用青年人和老年人周围血红细胞,经聚庶糖密度梯度离心,分别将两组人血红细胞分层并获取早期红细胞和老化红细胞。应用胶体金标记的麦芽凝集素（ＷＧＡｇ）分别对青年人和老年人的两类红细胞进行细胞化学标记、电镜观察,每组所获电镜照片进行计算机图像分析处理。结果显示,青年人老化红细胞膜上ＷＧＡｇ颗粒明显低于早期红细胞。老年人老化红细胞膜上ＷＧＡｇ颗粒也有明显降低,但将老年人与青年人进行比较,同期的红细胞膜上ＷＧＡｇ颗粒密度差异不明显。推测红细胞老化过程中ＷＧＡｇ受体细胞化学的变化可能与老化细胞处理机制有关。     

正常骨和骨肿瘤组织雌激素受体分析

用葡聚糖—活性炭Scatchard作图法测定15例不同骨恶性肿瘤组织(其中转移性骨肿瘤3例)及13例正常对照骨组织胞浆的雌激素受体(ER)含量和亲和常数。结果显示,ER平均含量正常对照组(15.12±14.68fmol/mg蛋白)高于骨恶性肿瘤组织(8.04±6.71fmol/mg蛋白)(P<0.05)。ER亲和常数正常对照组(39.91±20.13×10~(-11)mol/L)高于骨恶性肿瘤组织(18.46±27.10×10~(-11)mol/L)(P<0.025)。ER阳性率在正常对照组织(23.1％)和恶性骨肿瘤组织(26.7％)无明显差别(P>0.05)。本研究表明,骨组织中胞浆ER含量及亲和力变化可能与肿瘤的发生有关;骨恶性肿瘤组织胞浆受体含量降低,而亲和力增加,提示该组织甾体激素受体系统功能的改变或损害。