湿热瘀阻型类风湿关节炎外周血单个核细胞GPImRNA水平的研究

目的探讨湿热瘀阻型类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)外周血单个核细胞葡萄糖6-磷酸异构酶(GPI)水平与其他证型类风湿关节炎及正常人群之间的关系。方法采用荧光定量PCR方法检测GPImRNA水平,研究对象包括RA患者47例,其中湿热瘀阻型27例,痰瘀互结型20例,其他风湿病患者对照组20例,30名健康体检者。结果 RA湿热瘀阻组GPImRNA的相对表达量是健康对照组的25.9倍,差异有统计学意义(P0.05)。RA痰瘀互结组GPImRNA的相对表达量是健康对照组的6.54倍,而RA湿热瘀阻组与RA痰瘀互结组差异也有统计学意义(P0.05)。其他风湿病组GPImRNA的相对表达量是健康对照组的0.97倍,差异无统计学意义(P0.05)。结论GPI与RA活动性有关,同时证明湿热瘀阻证是RA活动期的证候之一。     

糖皮质激素受体在鼻息肉组织中的表达与意义

目的：观察糖皮质激素受体在鼻息肉组织中的分布、表达，探讨糖皮质激素治疗鼻息肉的合理性及机理。方法：利用免疫组化染色以及逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR反应)检测13例鼻息肉病、22例一般鼻息肉及23例正常下鼻甲组织的糖皮质激素受体。结果：糖皮质激素受体主要分布于鼻息肉表面上皮粘膜、粘膜下腺体、血管内皮细胞以及炎症细胞的胞浆与胞核内。糖皮质激素受体在鼻息肉病组、一般鼻息肉组与下鼻甲组中的表达无显著差异。结论：糖皮质激素受体通过与糠皮质激素受体相结合而发挥抗炎作用，糖皮质激素受体在鼻息肉病与一般鼻息肉组中的一致性表达提示糠皮质激素是治疗鼻息肉病及鼻息肉的一种可靠方法。     

儿童急性淋巴细胞白血病单个核细胞转铁蛋白受体2表达及其意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿单个核细胞转铁蛋白受体2(TFR2)基因表达情况,分析其与儿童ALL不同预后因素的相关性.方法 采用荧光定量逆转录聚合酶链反应法测定56例新发ALL患儿和15例对照患儿骨髓或外周血单个核细胞TFR2相对表达量.结果 泼尼松敏感组患儿TFR2相对表达量(中位数为0.0848)显著高于泼尼松不敏感组(中位数为0.0126,P=0.038).低危组、中危组和高危组TFR2相对表达量的中位数分别为0.1677、0.0728和0.0125.差异具有统计学意义(P=0.003).初诊时外周血白细胞(WBC)计数WBC<50×109/L、(50～100)×103/L和≥loo×103/L 3组患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0974、0.0294和0.0078,差异也具有统计学意义(P=0.013).另外,B细胞ALL,和T细胞ALL患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0636和0.0065,B细胞型TFR2表达水平显著高于T细胞型(P=0.004).秩相关统计分析表明,ALL患儿单个核细胞TFR2表达量与初始外周WBC总数、外周血幼稚细胞比例、幼稚细胞绝对计数的秩相关系数分别为-0.398、-0.307、-0.421,具有负相关关系(P分别为0.003、0.022、0.001).结论 TFR2可能为儿童ALL一个新的分子生物学预后因素,在ALL患儿预后评估和指导个体化治疗方面可能具有临床应用价值.     

正常人外周血单个核细胞TRAIL受体的表达及意义

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体在正常人外周血单个核细胞上的表达,并探讨其意义。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术,对TRAIL受体的表达分别进行RNA水平和蛋白水平的检测。结果:各受体经RT-PCR和流式细胞术检出的阳性率分别为DR4(50%、60%)、DR5(100%、100%)、DcR1(100%、100%)、DcR2(60%、70%),其中死亡受体DR5和诱骗受体DcR1的表达阳性率最高,均为100%。RT-PCR和流式细胞术均显示:能够诱导凋亡反应的死亡受体中,DR5表达显著高于死亡受体DR4P<0.05;能够竞争性阻断TRAIL诱导的凋亡反应的诱骗受体中,DcR1表达显著高于诱骗受体DcR2P<0.05。结论:DR5和DcR1是外周血单个核细胞PBMC上TRAIL受体系统的主要成员,在TRAIL诱导的细胞凋亡中起关键作用。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中糖酵解相关基因的表达

目的: 探讨糖酵解相关基因在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）中的表达及其意义。方法: 选取活动期RA患者19例,稳定期RA患者23例,采用Ficoll法分离PBMC,定量PCR检测糖酵解相关基因表达水平,并与健康对照进行比较。结果：与健康对照相比,活动期RA患者PBMC中糖酵解相关基因丙糖磷酸异构酶（triosephosphate isomerase,TPI）、烯醇化酶（enolase,ENO）、M型丙酮酸激酶（pyruvate kinase muscle,PKM）、单羧酸转运蛋白（monocarboxylic acid transporter member,MCT）表达量均增加(P<0.05),稳定期RA患者4种基因的表达略有升高,但差异无统计学意义。结论：RA患者存在糖酵解相关基因表达的改变。糖酵解反应有可能在RA疾病机制中具有重要的意义。     

脑膜瘤中糖皮质激素受体α的表达及意义

目的:探讨人脑膜瘤中糖皮质激素受体α(GRα)的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系。方法:应用RT-PCR法检测28例脑膜瘤GRα的表达,同时应用流式细胞术检测肿瘤的增殖指数(PI)、S期细胞比例(SPF),并比较GRα阳性和阴性组脑膜瘤的PI、SPF有无差异。结果:28例脑膜瘤GRα阳性率为78.6%,PI为(9.06±4.56)%,SPF为(2.48±2.27)%。虽然GRα阳性者的PI和SPF均高于GRα阴性者,但差异无统计学意义。结论:脑膜瘤中存在GRα的表达,但GRα的表达可能与肿瘤细胞增殖活性无关。     

喉癌病人外周血单个核细胞中MMP-9 mRNA的表达

①目的　探讨喉癌病人外周血单个核细胞 (PBMC)中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)mRNA的表达情况。②方法　提取PBMC中的总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 5 8例喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达 ,并以 2 0例正常人作为对照。③结果　不同分期喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达均明显高于对照组 ,差异有极显著性 (F =187.75 ,q =6 .13～ 33.38,P <0 .0 1) ,并随临床分期及病理组织分级增加而表达增强 (F =187.75、193.12 ,q=8.94～ 30 .95 ,P <0 .0 1)。④结论　喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达水平可作为喉癌预后的一项预测指标     

定量PCR检测类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Notch基因表达

目的:探讨4种Notch受体基因在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核中的表达及其意义.方法:采用免疫磁珠分离纯化RA患者外周血T,B及单核细胞,定量PCR检测4种Notch受体mRNA表达水平,并与正常人进行比较.结果:与正常人相比,RA患者T细胞Notch 2,Notch 3及Notch 4表达量增加(P＜0.01),其中Notch 3主要表达于活化的T细胞,而Notch 1水平在两者间未见明显差异.B细胞及单核细胞4种Notch受体表达均较低,且两者间亦未见显著差异.结论:RA患者存在Notch基因表达的改变,一群高表达Notch 3基因的活化T细胞可能在RA疾病机制中具有重要的意义.     

类风湿关节炎患者外周血中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关基因及其配体的表达和意义

目的:研究糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)与其配体(GITRL)在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达及其与临床指标的相关性,探讨GITR/GITRL 在RA中的意义.方法:采用实时荧光定量PCR法检测RA组(n=53)、骨关节炎(OA)组(n=35)及正常对照组(n=35)外周血GITR/GITRL mRNA含量,同时利用流式细胞仪检测上述三组患者的GITR在CD4+CD25+ T细胞的表达,并研究GITR mRNA与RA患者DAS28评分、抗环瓜氨酸(CCP)抗体、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)及类风湿因子(RF)的关系.结果:RA患者外周血GITR mRNA水平和GITRL mRNA水平(分别为12.38±5.72,16.41±10.16)明显高于正常对照组(分别为8.75±3.78,11.99±8.42)及OA组(分别为9.59±5.87,12.09±7.53;均P＜0.05).RA患者与OA组及正常对照组比较,外周血CD4+CD25+GITR+T细胞的比例也明显增高[分别为(28.12±16.85)%,(21.01±14.42)%,(19.98±9.40)%,均P＜0.05].RA患者GITR mRNA表达水平与DAS28评分及ESR呈明显正相关(r值分别为0.361和0.427,P＜0.01).结论:RA患者GITR/GITRL表达增多,与RA发病及疾病活动度有关.     

类风湿关节炎患者外周血白细胞介素-23和类风湿因子的表达研究

目的：检测类风湿关节炎（RA）患者体内白细胞介素（IL）-23和类风湿因子（RF）的表达,探讨IL-23在RA发病中的作用及其与RF的关系,为RA的早期诊断和进一步阐明RA的发病机制提供理论依据。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测66例RA患者和44例健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）中IL-23p19 mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-23浓度,采用免疫比浊法检测血清RF的浓度。结果：RT-PCR显示RA患者PBMC中IL-23p19 mRNA的表达[（45.2±11.7）%]显著高于健康对照组[（23.8±9.5）%],ELISA检测结果显示RA患者血清IL-23水平[（114.47±42.70）ng/L]显著高于健康对照组[（70.81±28.85）ng/L],差异均有统计学意义（均P〈0.05）。RA患者血清IL-23水平与RF含量无明显相关性（r=0.389,P〉0.05）。结论：RA患者体内IL-23在基因和蛋白水平均过表达,提示IL-23可能参与了RA的免疫病理过程,在RA的发病中发挥作用。     

原发性肾病综合征患者淋巴细胞糖皮质激素受体及基因测定的意义

目的 :研究原发性肾病综合征 (PNS)患者外周血淋巴细胞糖皮质激素受体α(GRα)水平及其部分基因结构与糖皮质激素 (GC)治疗反应的相关性。方法 :用放射配体结合法及聚合酶链反应 单链构像多态性 (PCR SSCP)、DNA测序法 ,分析 3 0例PNS患者及 2 0例正常对照外周血淋巴细胞GRα水平及其部分基因结构。根据对GC的治疗反应 (强地松 1mg/kg/d,8周 )分完全缓解、部分缓解、无效组。结果 :PNS患者GRα水平低于正常对照组。轻微病变及轻 中度系膜增殖性肾炎的患者 ,其病理类型与治疗反应之间无明显的相关性 ,但GRα水平在各治疗组有统计学差异 ,GRα水平高者对GC的治疗反应好。未发现GRα基因外显子 9有结构异常。结论 :外周血淋巴细胞GRα水平可预测PNS患者对GC的治疗反应。在PNS患者中未发现GRα基因外显子 9有结构异常     

外周血淋巴细胞中汉坦病毒基因检测对HFRS早期诊断的意义

目的　探讨外周血淋巴细胞中汉坦病毒 (HV)基因的检测对流行性出血热 (又名肾综合征出血热 ,HFRS)早期诊断的意义。　方法　用RT PCR法检测 40例发病 3～ 7日内的HFRS患者外周血淋巴细胞和血浆中的HVRNA ,并与特异性IgM检测结果进行比较。　 结果　淋巴细胞中HVRNA阳性率为 82 .5 % (3 3 /4 0 ) ,特异性IgM阳性率为 90 % (3 6/4 0 ) ,两种方法的检出率无显著性差异 (χ2 =3 .2 5 ,P >0 .0 5 ) ,其一致率为 82 .5 % (3 3 /4 0 ) ;血浆中HVRNA阳性率为 5 5 % (2 2 /4 0 ) ,明显低于淋巴细胞 (χ2 =10 .3 7,P <0 .0 1)。　结论　RT PCR检测外周血淋巴细胞中HVRNA对HFRS的早期诊断具有潜在的应用价值     

乳腺癌患者外周血CK19基因表达的检测及临床价值分析

目的探索外周血CK19基因表达的检测及在乳腺癌诊断中的应用价值。方法应用逆转录结合荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乳腺癌MDA-MB453细胞株血液标本模型和280例临床标本的CK19表达,同时检测三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)表达作为PCR方法的监控指标。结果逆转录结合FQ-PCR检测MDA-MB453细胞株血液标本模型的灵敏度为107个血细胞中含1个乳腺癌细胞的水平。280例外周血临床标本的CK19表达,乳腺癌组(38/120)与非乳腺癌组(20/80)比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌组(38/120)与正常对照组(2/80)比较,差异有统计学意义(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(21/53)与未见淋巴结转移组(17/67)比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌术后2年以上者,复发组(3/9)与未复发组(6/31)比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。GAPDH表达均阳性。结论CK19是上皮细胞性癌细胞的较特异指标,诊断乳腺癌的特异性不强,但可用作病理学检查的补充,或结合其他特异性指标共同诊断乳腺癌微转移和复发,具有一定的价值。     

外周血差异显示编码3mRNA定量检测在前列腺癌患者诊断与治疗监测中的初步应用

目的探讨外周血差异显示编码3（DD3）mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中意义。方法用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）方法对35例未治疗前列腺癌、58例内分泌治疗后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志愿者外周血DD3mRNA含量进行定量检测,并对DD3mRNA诊断及疗效监测价值进行评价。结果未治疗前列腺癌组外周血DD3mRNA含量明显高于治疗后前列腺癌组、前列腺增生组和健康男性志愿者组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。未治疗前列腺癌患者随着临床分期增加,外周血DD3mRNA含量也增高,差异具有统计学意义（P〈0．01）。当临界值为846拷贝／ml时,DD3mRNA曲线下面积为0．822（95％CI：0．725～0．919）,灵敏度、特异度分别为74．3％、89．8％。结论外周血DD3mRNA定量检测是前列腺癌诊断的良好指标,可作为内分泌治疗过程疗效监测的指标。     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达及意义

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,探讨其在RA致病中的作用.方法采用流式细胞仪检测RA患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,并设立正常对照组.结果RA患者外周血表达CD25的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比明显增多(P<0.01);关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞和表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比亦明显增多(P<0.01).结论外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HIA-DR的表达增高,在RA发病机制中起着重要的作用.     

D-二聚体、纤维蛋白原在类风湿性关节炎患者外周血中的含量测定

目的通过检测D-二聚体、纤维蛋白原在类风湿性关节炎（RA）中含量的变化,同时测定超敏C反应蛋白、红细胞沉降率及类风湿因子等指标,判断D-二聚体、纤维蛋白原与病情活动度的关系,以指导临床治疗。方法RA组50例、健康对照组30例、骨关节炎组30例,分别测定3组上述指标的变化,采用X2检验、各组之间进行LSD-t检验、直线相关统计学分析。结果RA组中D-二聚体、纤维蛋白原、超敏C反应蛋白、红细胞沉降率及类风湿因子水平均明显升高,RA治疗前后相比D-二聚体、纤维蛋白原、超敏C反应蛋白变化明显,而红细胞沉降率及类风湿因子水平变化不明显,提示D-二聚体、纤维蛋白原、超敏C反应蛋白对RA病情活动度的判断上更为敏感,且D-二聚体、纤维蛋白原均与超敏C反应蛋白、红细胞沉降率呈正相关,与类风湿性因子无相关性。结论RA患者中D-二聚体、纤维蛋白原水平升高,可与超敏C反应蛋白、红细胞沉降率等指标一起判断疾病活动度,上述指标联合检测有助于与其他类型关节炎相鉴别,同时为RA患者进行改善微循环治疗提供有力依据。     

类风湿关节炎患者治疗前后血清ＩＬ ８ ＩＬ １０ 的变化及其临床意义

目的：检测类风湿关节炎患者（RA）治疗前后血清IL-8、IL-10的变化,探讨其在RA发病机制中的作用及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IL-8、IL-10在类风湿关节炎治疗前后的变化,并分析小剂量糖皮质激素治疗的影响。结果① RA患者治疗前与正常对照比较IL-8浓度升高（P＜0．05）,治疗后IL-8浓度与治疗前相比降低（P＜0．05）,但仍高于正常对照组（P＜0．05）;② RA患者治疗前与正常对照比较IL-10浓度降低（P＜0．05）,治疗后IL-10浓度与治疗前比较升高（P＜0．05）,与正常对照比较差异无统计学意义（P＞0．05）;③RA组中血清IL-8、IL-10与ESR、CRP、PLT无相关性;④小剂量糖皮质激素治疗后患者血清IL-8浓度明显低于未进行激素治疗的患者。结论 IL-8可能在RA病理过程中起重要作用,可作为监测RA炎症过程的一个有价值指标;血清IL-10在RA发病中可能具有抗炎和免疫抑制作用;小剂量的糖皮质激素可有效抑制RA患者炎症反应。     

巢式PCR检测关节炎患者血清人细小病毒B19DNA

目的：探讨关节炎患者人细小病毒Ｂ１９（ＨＰＶＢ１９）的感染情况以及ＨＰＶＢ１９感染与类风湿性关节炎（ＲＡ）的相关性．方法：应用巢式ＰＣＲ方法对７４例单发或多发性关节炎患者以及对照组５０例非病毒感染相关性疾病、正常健康献血员及正常健康儿童血清进行ＨＰＶＢ１９－ＤＮＡ检测．结果：①病例组ＨＰＶＢ１９－ＤＮＡ阳性１５例（２０．３％）,其中６例为ＲＡ患者（４０％）,对照组阳性１例（２％）,相差非常显著（Ｐ