杀伤细胞及相关免疫细胞在血液系统恶性肿瘤应用研究

过继性免疫细胞治疗是生物治疗的一种,应用的效应细胞可以分为两大类,一类包括淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）、自然杀伤细胞（NK）、树突状细胞（DC）,这些细胞可以直接从外周血中分离,经相关因子诱导刺激获得.CIK细胞技术已比较成熟,目前广泛用于临床,并取得较好成效.另一类细胞为肿瘤抗原特异性T细胞包括肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,两者均是被肿瘤抗原激活的细胞毒性T细胞,具有识别自身MHC,高度特异性等特点.我们就CIK及相关免疫细胞在血液系统恶性肿瘤应用研究现状作一综述.     

树突状细胞调节和细胞因子诱导的杀伤细胞的抗肿瘤机制及其在结直肠癌治疗中的应用前景

利用细胞因子诱导树突状细胞（dendritic cell，DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK细胞），以肿瘤抗原冲击DC，将经过抗原冲击的DC和CIK细胞按一定比例混合进行共培养，得到一种新的免疫效应细胞群，即DC调节和细胞因子诱导的杀伤细胞（DCIK细胞）。DCIK细胞具有识别和特异性杀伤恶性细胞的作用，打破了放化疗“敌我不分”的状况。DCIK细胞不但存活率高，增殖能力强．而且对肿瘤细胞具有特异性杀伤能力，为肿瘤免疫治疗开创了一条新的途径。     

负载食管癌抗原的DC诱导特异性CTL对食管癌细胞体外杀伤作用观察

目的观察负载食管癌抗原的树突状细胞（DC）活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）对食管癌细胞的体外杀伤作用。方法冻融法获取食管癌细胞抗原,联合应用粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、白细胞介素4（IL-4）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导培养外周血DC并负载肿瘤抗原,激活自体T淋巴细胞,制备特异性CTLs。将其加入食管癌细胞中培养48 h,用MTT法检测食管癌细胞裂解率,ELISA法检测γ干扰素（γ-IFN）水平。结果负载食管癌抗原的DC激活的CTLs表现出对食管癌Eca109细胞的特异性杀伤作用,γ-IFN水平为（1 625±37.55）pg/ml;而对A549细胞仅有微弱的杀伤作用,γ-IFN水平为（169.04±13.81）pg/ml。未负载食管癌抗原DC刺激的CTLs对食管癌细胞几无杀伤作用。结论负载食管癌抗原的DC激活的CTLs在体外对食管癌细胞能产生高效而特异性的杀伤作用。     

肝癌治疗的新靶位 MAGE抗原：肝细胞癌的治疗靶位

癌症免疫疗法中有挑战性的目标是寻找免疫系统针对恶性细胞选择性的细胞破坏机制。这种靶向作用需要特异性，由肿瘤细胞所表达和效应杀伤淋巴细胞所识别的蛋白质序列来决定，具有非常好的专一性和选择性。肿瘤抗原被定义为一种抗原生物分子(大多数通常是蛋白质)，它选择性地在恶性细胞上被表达，通过抗原呈递途径提呈，能被杀伤T细胞所识别。根据表达模式的不同，     

树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床观察

形成慢性乙型肝炎的重要原因之一是树突状细胞（DC）功能缺陷。已知DC是功能最强的抗原递呈细胞，也是惟一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞，在T淋巴细胞介导的细胞免疫中起重要作用。当用特异性病毒抗原负载DC时，有可能通过诱导抗原特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性而特异性杀伤表达病毒抗原的靶细胞。     

人类免疫缺陷病毒感染中的特异性细胞毒T淋巴细胞反应(一)

特异性细胞毒T淋巴细胞（Cytoxic T　Lympho-cyte,CTL）是一类可以杀伤表达特异性抗原靶细胞的T细胞亚群。CTL是抗细胞内感染（病毒、单核细胞增多性李斯特菌等）、急性同种异型移植物排斥反应和杀伤肿瘤的重要效应细胞[1]。 大多数CTL表达CD8分子,由其TCRαβ识别源于细胞内合成的外源抗原肽。该抗原肽自身MHC-I类分子形成复合物,在靶细胞表面上表达。近年的研究发现,HIV特异性CD8 T淋巴细胞是机体抗HIV的最主要的免疫细胞。这类细胞与被病毒感染的细胞特异性结合后,可以分泌各种细胞因子,杀死靶细胞。在艾滋病病毒感染的急性期,患者血浆病毒     

负载酸洗脱食管癌抗原肽的脐血树突状细胞对CTL杀伤活性的影响

分离脐血中的单个核细胞,以酸洗脱食管癌抗原肽负载获得分化成熟树突状细胞（DCs）,检测其对特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的诱导和体外杀伤效应的影响。结果发现,负载食管癌抗原肽的脐血DCs诱导的CTL对酸洗前食管癌细胞株T.Tn的杀伤率显著高于酸洗后组和各对照组（P均〈0．05）,而对无关肿瘤细胞株Hep2无显著杀伤作用。认为负载食管癌抗原肽的脐血DCs体外可诱导CTL产生特异性杀伤效应。     

肿瘤过继性细胞免疫治疗中效应细胞的应用及研究进展

机体对肿瘤的免疫反应主要通过细胞免疫发挥作用。免疫细胞识别肿瘤细胞表面的肿瘤抗原后,通过抗原递呈细胞和协同刺激因子的共同作用,增殖分化为免疫效应细胞。该效应细胞通过释放穿孔素和诱导Fas/Fas L介导的细胞凋亡来杀伤肿瘤细胞。肿瘤过继性细胞免疫治疗即是利用此理论,将患者体内的免疫细胞分离出来,在体外加入特异性抗原和细胞因子使其活化,通过筛选获得能特异性杀伤肿瘤细胞的免疫效应细胞,大量扩增后回输给患者。其核心技术和关键步骤是效应细胞的选择和应用。本文对肿瘤过继性细胞免疫治疗中效应细胞的应用及研究进展进行了综述。     

人类白细胞E抗原和G抗原在HIV感染中的作用（二）

HLA基因型和细胞毒性T细胞 HLA抗原通过在与CTL相互作用的细胞表面上形成抗原一呈递结合物来刺激细胞应答，介导它们抑制受感染细胞并通过表面分子的杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）家族相互作用来激活先天免疫应答的自然杀伤（NK）细胞。重要证据表明，免疫应答可有效地削减HIV疾病的感染和传播。[第一段]     

负载MB49肿瘤细胞抗原的DC疫苗对膀胱癌的抑制效应及机制

目的探讨负载MB49肿瘤细胞抗原的树突状细胞疫苗（DC疫苗）治疗膀胱癌的可行性及机制。方法采用反复冻融法提取MB49抗原并用其致敏DC2.4,制备DC疫苗。将24只膀胱癌荷瘤小鼠随机分为两组各12只。DC组皮下注射DC疫苗,对照组注射PBS。注射3周观察两组肿瘤体积变化,计算肿瘤抑制率;分离两组脾脏T淋巴细胞进行培养,MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对MB49的杀伤率;ELISA法检测培养上清中IFN-γ水平。结果 DC组肿瘤抑制率及细胞杀伤率均明显高于对照组,P〈0.01;IFN-γ水平亦明显高于对照组,P〈0.01。结论以DC2.4为基础的DC疫苗体内具有抑制肿瘤细胞MB49增长的作用;其机制可能为激活T淋巴细胞。     

CD4+ T细胞克隆对自体非霍奇金淋巴瘤具有特异的肿瘤杀伤作用

目的:研究CD4 T细胞的抗肿瘤能力。方法:利用1例滤泡B淋巴细胞淋巴瘤患者的外周血淋巴细胞,将缺乏人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)的恶性CH1细胞株作为惟一的刺激源,以梯度稀释法,得到3种自体的、细胞毒性的、具有肿瘤杀伤特异性的CD4 T细胞克隆。结果:3种T细胞克隆可以杀伤来自于新鲜恶性B细胞的自体HLA-Ⅰ分子缺乏的淋巴瘤细胞株,但却对EB病毒(EBV)阳性的正常B细胞或K562细胞无杀伤溶解作用。3种肿瘤特异杀伤的CD4 T细胞均为TCR Vβ17-Dβ1-Jβ1.2,并具有同样的CDR3。结论:研究表明,CD4 T细胞克隆能够被扩增,其能够特异性地杀伤从自体淋巴瘤细胞衍生的细胞株。通过产生CD4 T细胞来杀伤肿瘤细胞及其相应的过继转移,特别是在肿瘤逃避CD8 T细胞介导的免疫杀伤作用时,CD4 T细胞能起到替代作用。     

树突状细胞在大肠癌免疫治疗中的应用

树突状细胞(DC)是最有效的抗原提呈细胞，在触发和调节免疫反应、产生免疫应答方面起重要作用。造血干细胞在分化成为DC后，主要分布于外周非淋巴组织，进一步分化成具有诱发免疫应答或免疫耐受的DC。DC摄取并提呈肿瘤相关抗原(TAA)给初始T细胞，T细胞活化后通过识别TAA产生特异性主动免疫，杀伤肿瘤细胞。大肠癌作为恶性肿瘤的一种，可以利用其特异性表面抗原作为TAA，诱导主要组织相容性复合体(MHC)限制性细胞毒反应，产生杀瘤细胞作用。临床前和临床研究证明以DC为基础的主动性免疫治疗在大肠癌手术后微小残存病和控制肿瘤生长方面发挥了一定作用。     

树突状细胞瘤苗对老年非小细胞肺癌自体癌细胞的杀伤作用

目的研究老年非小细胞肺癌（NSCLC）患者的树突状细胞（dendritic cell,DC）瘤苗对细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokines-induced killers,CIK）的促生长作用,及CIK在体外对患者自身肿瘤细胞的杀伤作用。方法提取老年NSCLC患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,分别培养成DC与CIK;将患者自身的肿瘤组织分离,培养出肿瘤细胞,制备肿瘤细胞冻融物作为抗原,用于负载DC,制备成Ag-DC,同时以单纯DC作为对照,各组DC经OK-432激活后,流式细胞仪检测DC表面分子的表达;将DC与CIK共培养,制备成DC-CIK、Ag-DC-CIK,同时以单纯CIK作为对照,四氮唑盐（MTT）法测定各组CIK对自身肿瘤细胞的杀伤力。结果负载肿瘤细胞冻融抗原的Ag-DC其表面CD1a、CD80、CD86、CD83、人类主要组织相容性抗原（HLA-DR）的表达上调,明显高于未负载肿瘤抗原的DC（P〈0.05）。各组DC与CIK共培养后,Ag-DC-CIK的增殖速度明显加快,其中CD3＋CD56＋细胞的含量增加,对自身肿瘤细胞的杀伤力亦明显加强,其作用均强于其他各组DC-CIK及CIK（P〈0.05）。结论老年NSCLC患者PBMC来源的DC在负载自身肿瘤细胞冻融抗原后,可分化为成熟DC,该DC可促进CIK的增殖,提高CIK对自身肿瘤细胞的杀伤力。     

肝细胞癌的免疫治疗（下）

5．肿瘤逃逸机制 肿瘤从免疫系统产生了很多逃逸机制来抑制抗肿瘤反应。产生免疫抑制因子、增加调节性T细胞、下调肿瘤抗原和MHC分子都是肿瘤细胞用以逃避免疫识别的机制。已有很清楚的证据显示发生HCC能导致肿瘤特异性免疫反应受到抑制。尤其是我们已经证实尽管在超过50％的HCC患中检测到肿瘤特异性的细胞和体液免疫反应，但是HCC仍然有所进展。虽然有抗原特异性T细胞的出现但HCC肿瘤仍然进展，这增加了对免疫治疗该肿瘤的有效性的关注。因为下面会展示，HCC的发展导致一系列不同的免疫机制，结果就是HCC患中肿瘤特异性免疫反应的抑制。[第一段]     

两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗对Lovo细胞的体外杀伤作用

目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原（CEA）基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。体外培养CTL并检测其活性;MTT法检测两组CTL对kovo细胞的杀伤作用。结果两种方式致敏DC均可诱导激活CTL并分泌INF-γ,而重组痘苗病毒转染Dc组CTL诱导率高于细胞裂解物组;重组痘苗病毒转染组诱导的CTL对Lovo细胞的特异性杀伤活性显著高于细胞裂解物组。结论两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗均能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性,而使用重组痘苗病毒转染CEA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,为DC疫苗用于结肠癌的免疫治疗奠定基础。     

负载肿瘤抗原的DC体外诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

目的 研究自体及同种异体树突状细胞(DC)体外负载肿瘤抗原后刺激T淋巴细胞增殖及诱导抗肿瘤免疫反应的能力.方法 利用细胞因子诱导人骨髓单个核细胞生成DC,尼龙毛柱法分离T淋巴细胞,3H-TdR掺入法检测负载肺癌细胞凋亡小体的自体及同种异体DC体外刺激T细胞增殖反应,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测负载肺癌细胞凋亡小体的自体及同种异体DC刺激的T细胞对肺癌细胞和乳腺癌细胞系MCF-7的杀伤作用.结果 骨髓细胞诱生的自体及同种异体DC负载肿瘤抗原后,均具有刺激T淋巴细胞增殖的能力,负载肿瘤抗原的自体及异体DC激活的T淋巴细胞后均可杀伤两种靶细胞,T细胞对MCF-7的杀伤力明显低于对患者肺癌细胞的杀伤力. 结论人自体或异体DC体外负载细胞性肿瘤抗原后,可有效地刺激T淋巴细胞的增殖,产生特异性肿瘤杀伤作用.     

树突状细胞疫苗在抗肿瘤免疫治疗中的研究进展

树突状细胞(dendrtic cell DC)起源于造血干细胞(hemopoieticstemcell),是目前发现的功能最强大的抗原提呈细胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力,是目前发现的惟一能激活未致敏初始型T细胞的APC,DC不仅能够以抗原特异的形式启动T细胞,识别和杀伤肿瘤细胞,而且还可以激发免疫记忆保护,在宿主再次受到肿瘤细胞攻击时发挥保护作用。     

树突状细胞在大肠癌免疫治疗中的应用

树突状细胞(DC)是最有效的抗原提呈细胞,在触发和调节免疫反应、产生免疫应答方面起重要作用。造血干细胞在分化成为DC后,主要分布于外周非淋巴组织,进一步分化成具有诱发免疫应答或免疫耐受的DC。DC摄取并提呈肿瘤相关抗原(TAA)给初始T细胞,T细胞活化后通过识别TAA产生特异性主动免疫,杀伤肿瘤细胞。大肠癌作为恶性肿瘤的一种,可以利用其特异性表面抗原作为TAA,诱导主要组织相容性复合体(MHC)限制性细胞毒反应,产生杀瘤细胞作用。临床前和临床研究证明以DC为基础的主动性免疫治疗在大肠癌手术后微小残存病和控制肿瘤生长方面发挥了一定作用。     

B7-2对肝细胞癌特异性免疫的影响

T细胞的激活需要两种信号刺激，第二信号为非抗原特异性，主要由协同刺激分子B7-2家族介导产生。我们将B7-2真核表达载体转染高度表达组织相容性复合物I(MHC-I)分子而缺乏MHC-Ⅱ分子的肝癌细胞株HMC7721，观察B7-2对CD8^ T细胞分化和肿瘤特异性免疫的影响。     

外周血前列腺素2及CD69水平对慢性乙型肝炎感染者免疫状态的影响

乙型肝炎病毒（HBV）感染早期,特异性免疫应答产生之前自然杀伤（NK）细胞可溶解被病毒感染的细胞.已知前列腺素（PGE）2在体外对细胞和体液免疫反应有明显的抑制作用.在特异性免疫方面，已有证据表明HBV携带者体内存在免疫紊乱，CD4^＋T／CD8^＋T细胞比例下降，而CD69是T淋巴细胞激活后最早表达的表面抗原，当其表达后，可作为共刺激信号促进T细胞进一步活化和增殖。