细胞裂解物的O''''Farrell电泳

本实验室建立了O'Farrell 1975年提出的一种新型双向电泳(2-DE)技术,采用含脲与中性去污剂的等电聚焦技术(IEF)为第一向,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)为第二向.此技术将上述两种分离方法的特点结合起来,显著提高了对蛋白质多肽的电泳分辨率.O'Farrell电泳技术已成为现今所有蛋白质多肽分离分析技术中分辨率最高的一种,在基因表达、遗传变异、癌变过程的研究中应用日益广泛.     

小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组的初步研究

目的 提取小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳技术对其进行分离. 方法 提取小鼠肝细胞线粒体蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,质谱鉴定感兴趣的蛋白点. 结果 成功提取了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白,并通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组图谱. 结论 磷酸化蛋白纯化技术与二维凝胶电泳分离技术的结合是研究亚细胞器磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面鉴定和研究线粒体磷酸化蛋白的功能打下了基础.     

不同剂量γ线照射后狗血浆蛋白质聚焦电泳分析

用等电聚焦电泳法连续分析四个剂量组γ线照射后狗血浆蛋白质,发现照射后极期动物有两组蛋白质增多,暂称为极期反应性蛋白质(A₁,PI=4.3;A₂,PI=4.8)。此蛋白质增多的量与动物存亡有关。同时,初步分析了此蛋白质变化的意义。     

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组.方法取正常小鼠肝脏,裂解肝脏后利用磷酸盐金属亲和层析（PMAC）树脂提取磷酸化蛋白.将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,再将一维收集的pH值在8.5至4.0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离.最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析.结果成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白,并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI/UV图谱.其中,一维色谱聚焦分离pH值在8.5至4.0之间共收集16个组分,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图.结论磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下了基础.     

等电点聚焦法分离纯化限制性内切核酸酶BglⅡ

等电点聚焦法是分离蛋白质的一项新技术,我们应用这项技术纯化了限制性内切核酸酶BglⅡ。现将具体操作及其结果综述如下。材料和方法 1.菌株 系中国科学院微生物所张静娟同志惠赠.     

蛋白质纯度的微乳液毛细管电动色谱分析法

目的：为克服毛细管壁对蛋白质的吸附,探索一种用毛细管电泳分离蛋白质的新模式。方法：在毛细管中,以SDS-正丁醇-正己烷组成的微乳液为分离介质,对蛋白质混合物进行分离,研究温度、pH值、电压、离子强度、SDS浓度、烷烃链长等对蛋白质分离的影响,探索微乳液毛细管电动色谱分离蛋白质的机理。同时,还与毛细管区带电泳和胶束毛细管电动色谱进行比较。结果：微乳液毛细管电动色谱在分离蛋白质时,分离度受温度、电压和SDS浓度影响较大,受pH值和离子强度的影响较小,并用本法成功地分析了重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组人肿瘤坏死因子半成品的纯度。结论：本文建立的方法,可有效地用于同时分析酸性和碱性蛋白质混合物。     

氨基酸组成分析直接鉴定SDSPAGE分离的研究简报蛋白质

蛋白质组学是后基因组时代研究的重要领域。蛋白质组研究的基本技术包括双向凝胶电泳分离技术、蛋白质鉴定技术、计算机图像数据处理与蛋白质组数据库构建等。氨基酸组成分析[1,2 ] 作为蛋白质组研究中的鉴定方法之一 ,对质谱鉴定、Ｎ端氨基酸序列鉴定等具有补充及验证作用。蛋白质是由 2 0种氨基酸通过肽键连接起来的生物大分子 ,测定蛋白质的氨基酸组成可获得蛋白质的基本信息。本研究以马心肌红蛋白和细胞色素Ｃ为样品 ,优化实验条件 ,以此建立一种高灵敏度、高准确度的鉴定双向凝胶电泳分离后的蛋白质点方法。该方法还可用于分析天然蛋…     

蜡样芽孢杆菌总蛋白双向电泳方法的建立和优化

目的探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础。方法以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解液、pH梯度和不同上样量对B.cereus蛋白双向电泳结果的影响。结果与结论采用15 min超声破壁提取B.cereus总蛋白,选用新型蛋白质裂解,用长24 cm、pH 4～7的IPG胶条,采用80μg上样量进行等电聚焦,于60 V 15 min、120 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱,建立一套用于B.cereus蛋白质组分析的双向电泳方法。     

蛋白质组分析中双向聚丙烯酰胺电泳技术的初步建立与优化

目的：初步建立并优化用于蛋白质组分析的双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：以ＨｅｐＧ２细胞为例，对以固相ｐＨ梯度为第一向的双向电泳的关键因素与环节，如样品处理、电泳参数和凝胶浓度进行一系列的优化。结果与结论：本研究采用增溶、排异的裂解法处理样品，选择适中的样品量，用预制固相ｐＨ梯度——ＩＰＧ胶条（ｐＨ＝３～１０）第进行第一向等电聚焦，并选用１２％～１４％的梯度胶进行第二向ＳＤＳ分离，可获得质量较好的双向电泳图谱     

胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化

为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。采用刮取手术胃粘膜组织 ,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果以固相pH梯度———IPG胶条 (pH =3～10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 ,成功地得到了胃粘膜组织的双向凝胶电泳图谱     

2DE技术及其在辐射损伤研究中的应用

2DE(二维聚丙烯酰胺凝胶电泳)技术是蛋白质组学研究中的主要分离技术,其分别以蛋白质的等电点和分子质量这两个独立的参数为基础,实现蛋白质混合物的分离。2DE在探讨疾病发生机理,寻找肿瘤早期诊断指标,及药物开发研究等方面均有较好的应用,在辐射损伤研究中的应用也有广泛的前景。     

蛋白质组研究中肽质量指纹图制备与鉴定方法初探

蛋白质组（ｐｒｏｔｅｏｍｅ）是指一个基因组、一种细胞或组织所表达的所有蛋白质成分。蛋白质组的研究是为了识别及鉴定一种细胞或组织所表达的全部蛋白质及它们的表达模式〔１，２〕。蛋白质组研究技术包括对细胞内所有蛋白质的分离以及对分离得到的蛋白质的鉴别和认定...     

骨激素

美国一家公司(Collegen Corporation)已分离并试验了一种在天然条件下加速骨创伤后修复的物质,这种物质是一种蛋白质激素,称为软骨诱生因子(CI-F),它刺激细胞形成软骨,这是骨质形成的第一步。CIF最早是从研磨成粉的牛小腿骨中分离的。在分离过程中,将骨脱钙,然后抽提出蛋白成分。此公司现正进行人体中相应蛋白的分离。一旦鉴定了此蛋白     

乙酰胆碱酯酶两个酶解肽片氨基酸序列分析

以亲和层析法分离提纯了中国丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱酯酶.纯化的酶比活性达224mmol ACh/h/mg蛋白质,提纯49倍,活性产率29%,达到聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳纯标准.以胰蛋白酶对乙酰胆碱酯酶进行了限制性切割.用反相高效液相色谱法测定了乙酰胆碱酯酶的特征性肽图谱,并用微量蛋白质顺序自动分析仪测定了其中两个胰蛋白酶水解肽片的部分氨基酸顺序.     

2DE技术及其在辐射损伤研究中的应用

2DE（二维聚丙烯酰胺凝胶电泳）技术是蛋白质组学研究中的主要分离技术，其分别以蛋白质的等电点和分子质量这两个独立的参数为基础，实现蛋白质混合物的分离。2DE在探讨疾病发生机理，寻找肿瘤早期诊断指标，及药物开发研究等方面均有较好的应用，在辐射损伤研究中的应用也有广泛的前景。     

生长相关蛋白-43与周围神经损伤及再生

生长相关蛋白(ＧＡＰ-43)是一种胞膜磷酸蛋白质,与神经再生关系密切,周围神经损伤后,其含量可增加20～100倍,近年对其研究日渐深入。笔者就周围神经损伤和修复与ＧＡＰ-43的关系综述如下。一、ＧＡＰ-43的生化特征ＶａｎＤｏｎｇｅｎ等将调节磷酸肌醇代谢的突触蛋白质命名为Ｂ-50;Ｎｅｌｓｏｎ等将海马中与持久电位有关的蛋白质命名为Ｆ1;Ｍｅｉｒｉ等将从生长锥分离的主要磷酸化蛋白质称为ＰＰ46;Ｂｅｎｏｗｉｔｚ等[1]分析了上述蛋白质的性质、分布及功能,确认其实际上是同一种蛋白质,分子量为43000～57000,等电点为4.3～4.5。近年来多用…     

蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统在多蛋白质复合体研究中的应用

多蛋白质复合体（MPCs）是蛋白质在体内发挥功能的重要形式之一。鉴定MPCs对于整体理解决定蛋白质功能和细胞行为的蛋白质-蛋白质相互作用网络具有至关重要的意义。鉴定MPCs的限制因素之一是MPCs的分离方法。蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）系统是研究这些复合体的强有效的工具。BN-PAGE系统是一种依赖于染料考马斯亮蓝（CBB）G-250给蛋白质加上负电荷的非变性蛋白分离方法,适用于分离相对分子质量10×103至10×106范围的MPCs。近年来,有关BN-PAGE系统用于哺乳动物细胞MPCs研究的报道有了很大的增长。本文重点对BN-PAGE系统的原理、发展及应用进行综述。     

单克隆抗体在载脂蛋白E多态性研究中的应用及其临床意义

以制备的抗人血清载脂蛋白E(ApoE)单克隆抗体作为一抗,通过脱脂血清等电聚焦电泳(IEF)后免疫印迹的方法分析ApoE表型及其多态性。94例汉族正常人中发现五种多态性表型,其分布为:E2/21.06％、E3/3 70.21％、E4/4 1.06％、E4/3 12.77％、E3/2 14.90％。ApoE等位基因频率分别是ε_2=0.0905、ε_3=0.8404、ε_4=0.0691。本法与常规方法所测结果一致。但本法省去了常规超速离心分离人血清极低密度脂蛋白(VLDL)的过程,只需微量血清,便于临床应用。     

重组人白细胞介素6部分理化生物学性质的鉴定

目的：对Ｎ端缺失５个氨基酸的重组人白细胞介素６纯品的理化生物学性质进行分析鉴定。方法：用蛋白序列自动分析仪,紫外及可见光扫描仪,ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳,溴化氰裂解,等电聚焦电泳、蛋白质印迹法和ＭＴＴ比色法分别对ｒｈＩＬ－６缺失体Ｎ端氨基酸序列,紫外及可见光吸收光谱、相对分子质量、肽图,等电点（ｐＩ）,抗原特ｒｈＩＬ－６ｒｈＩＬ－６缺失体Ｎ端氨基酸序列,紫外及可见光吸收光谱、肽图、等电点（ｐＩ）     

心脏病直视手术后电机械分离的诊治

目的:探讨心脏直视术后电机械分离的原因及诊断与治疗。方法:对3例心脏直视术后电机械分离诊治的临床资料进行回顾性分析和追踪。结果:3例病人均于术后24~72 h恢复正常心律。随访心功能Ⅰ级。结论:心脏直视术后电机械分离是心肌温缺血导致心肌损害到某种程度的一种表现,早期发现,及时救治,预后良好。