实验性骨质疏松症大鼠模型的制备

目的：探讨骨质疏松症大鼠动物模型的制备条件及理想的方法。方法：wistar大鼠随机分3组，即去卵巢大鼠组，假性去卵巢大鼠组和正常对照组，用去卵巢办法制备骨质疏松症动物模型，用双能X线骨密度测定仪测骨密度，观察不同时期大鼠骨密度的改变。结果：去卵巢大鼠在10周可见其全身骨密度的下降（P＜0．05），而12周下降更明显（P＜0．01），同时其股骨及胫骨的骨密度也下降（P＜0．01），此外，去卵巢大鼠还表现为毛发稀疏，活动迟缓，反应迟钝等症状的改变，, 大鼠骨质疏松症模型以10周较为理想，测定全身或股骨及胫骨骨密度均能反映其骨密度的改变，故测定其中任何一个部位均有临床意义。     

去卵巢骨质疏松大鼠骨密度的变化

目的 探讨雌激素减少对骨密度的影响并确定去卵巢骨质疏松大鼠模型的建立时间.方法 用雌性大鼠去势建立绝经后骨质疏松症动物模型,观察去势后3、6及12周大鼠腰椎骨骨密度的变化,并与假手术组作对比.结果 实验组去势第3周和第6周骨密度与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而去势12周实验组骨密度明显低于对照组(P<0.01).结论 去卵巢大鼠骨质疏松症动物模型约在12周后就可以建立.     

骨质疏松小鼠模型中骨组织Caveolin-1表达

目的 探讨骨质疏松小鼠模型中骨组织Caveolin-1表达变化.方法 双侧卵巢切除法建立小鼠骨质疏松模型;用双能X线骨密度仪测骨矿密度;HE染色观察骨组织变化;免疫组织化学法检测骨组织Cave-olin-1表达.结果 去卵巢12周小鼠股骨骨矿密度明显下降,同时其HE染色组织学改变符合骨质疏松症病理变化.骨质疏松组小鼠骨组织Caveolin-1表达明显低于对照组,Caveolin-1在小鼠幼年组表达最高.结论 去卵巢骨质疏松模型小鼠骨组织Caveolin-1表达降低,Caveolin-1信号分子可能具有抑制骨质疏松形成与发展作用.     

降钙素对骨质疏松性骨折骨痂血管内皮生长因子表达的作用

目的：观察降钙素对去卵巢大鼠股骨骨折愈合过程中骨痂组织血管内皮生长因子表达的作用。方法选择3月龄雌性SD大鼠80只,随机分为假手术组（n＝10）、卵巢切除组（n＝10）、对照组（n＝30）和用药组（n＝30）。卵巢切除后4周处死假手术组和卵巢切除组大鼠,测量右股骨骨密度。卵巢切除4周后,对照组和用药组行右股骨中段骨折,分别皮下注射生理盐水和降钙素（16 IU/kg）,隔日1次,于骨折后3、6、9周处死大鼠取右股骨测骨密度,行苏木精-伊红染色（HE染色）,血管内皮生长因子免疫组化染色。结果与假手术组比较,卵巢切除组大鼠体重显著增加（P＜0．05）,股骨骨密度显著降低（P＜0．05）。 HE染色：骨折后3周,两组骨折愈合以软骨内成骨过程为主,骨密度无显著性差异（P＞0．05）;骨折后6周,两组骨小梁排列较有序,用药组股骨骨密度较对照组升高（P＜0．05）;骨折后9周,两组均以骨性骨痂为主,骨小梁排列紧密,骨密度在两组间具有显著性差异（P＜0．05）。对照组与用药组在骨折后3、6、9周骨痂组织的血管内皮生长因子（VEGF）免疫组化染色结果无显著性差异（P＞0．05）。结论降钙素治疗能增加骨质疏松性骨折骨密度,对骨痂组织VEGF的表达无明显影响。     

去势对大鼠骨密度的影响

目的研究去势对大鼠骨密度的影响。方法选3个月龄体重240～260g雌性SD大鼠16只,随机分为卵巢切除组与假手术组各8只。术后8周处死,测量腰椎和股骨骨密度。结果与假手术组比较,手术组腰椎、股骨骨密度下降,前者明显（P均〈0．01）。结论去势后大鼠骨密度明显下降,符合绝经后骨质疏松症改变。     

骨质疏松大鼠胰岛素样生长因子—1血清水平和转化生长因子β1骨表达的实验研究

目的：观察骨质疏松大鼠不同时期骨密度（BMD）、血清胰岛素样生长因子－1（IGF－1）的浓度以及骨组织中转化生长因子β（TGF-β1）的表达，进一步探讨绝缘后骨质疏松与细胞因子的相关性。方法：将60只10－12月龄的SD大鼠随机分成实验组和对照组，用摘除双侧卵巢的方法制备实验大鼠骨质疏松模型，实验组行摘除双侧卵巢术，对照组行假手术，仅切除卵巢周围的脂肪组织，应用HOLOGIC第4代双能X线4500W骨密度仪测量去卵巢不同时期（术后8，12，16周）大鼠全身骨密度和腰椎感兴趣区域（L1－L4）骨密度，并采用ELISA法和免疫组伦的方法，检测去卵巢大鼠不同时期血清IGF－1水平和骨组织中TGF－β1表达。结果：全身骨密度、去卵巢组大鼠在术后第8周和第12周，全身骨密度与对照组（假手术组）无明显差异（P＞0．05），在术后第16周，开始出现全身骨密度降低,与对照组相比，有显著差异（P＜0．01）。腰椎（L1－L4）骨密度；从术后第8周－第16周，去卵巢组血清IGF－1浓度值均低于对照组（P＜0．05）。骨组织TGF－1浓度：从术后第8周－第16周，去卵巢组血清IGF－1浓度值均低于对照组（P＜0．05）。骨组织TGF－β1表达：去卵巢组在术后第8周骨组织中软骨细胞、成骨细胞、骨基质TGF-β的表达程度与对照级有明显不同（见图1，2）。结论：绝经后骨质疏松的发病与IGF－1、TGF－β1的关系密切。     

小鼠骨质疏松合并骨性关节炎模型的建立及评价

[目的]探讨骨质疏松合并骨性关节炎的小鼠动物模型的制备方法.[方法]ICR雌性小鼠20只,随机分成对照组和模型组各10只.模型组采取切除双侧卵巢4周后膝关节注射碘乙酸制备模型,对照组不作任何处理.碘乙酸注射8周后对小鼠进行X-ray活体成像观察,并测定骨密度;取膝关节及腰椎做病理切片行HE染色观察.[结果]模型组小鼠骨密度明显下降,关节间隙变窄,骨赘形成,HE染色见关节面不平整,出现凹陷及软骨缺损,腰椎骨小梁变少变细,结构不完整.[结论]切除双侧卵巢及膝关节注射碘乙酸的方法能为研究骨质疏松合并骨性关节炎提供较为理想的动物模型.     

去卵巢大鼠骨质疏松模型特点及尼尔雌醇对其干预作用的研究

目的：多角度分析去卵巢大鼠骨质疏松模型的特点以及考察尼尔雌醇对绝经后骨质疏松的干预作用。方法：将45只12月龄SD♀大鼠随机分为4组,即空白对照组（CONT组）、假手术组（SHAM组）、模型组（OVX组）、尼尔雌醇组（NILE组）。通过测量12周后骨密度、雌激素、子宫脏器系数、股骨三点弯曲测试、股骨干骺端矢状面切片HE染色和扫描电镜观察,分析去卵巢大鼠骨代谢变化情况,并通过该模型的建立,考察了尼尔雌醇对该病的干预作用。结果：模型组的BMD、BMC、雌激素水平和子宫脏器系数、最大载荷、刚度均显著低于对照组（P〈0.05、P〈0.01）,股骨干骺端矢状面的HE染色及扫面电镜显示,与对照组相比,模型组骨小梁的网状结构遭到严重破坏;假手术组的上述指标与对照组比较没有差异,而尼尔雌醇组的上述指标与模型组比较均有显著提高（P〈0.05）,而与对照组比较无差异。结论：去卵巢大鼠骨质疏松模型因双侧卵巢被摘除而缺乏雌激素导致骨量严重丢失,骨松质三维结构被严重破坏,骨组织生物力学性能显著下降;尼尔雌醇能够通过上调雌激素水平而增加骨量,但对生物力学性能的改善作用不明显。     

尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨组织中Ⅰ型胶原代谢及组织蛋白酶K表达的影响

目的观察尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨组织中Ⅰ型胶原蛋白代谢及组织蛋白酶K表达的影响。方法27只雌性SD大鼠随机分成三组：假手术组为阴性对照组，模型组为阳性对照组，尼尔雌醇组给予尼尔雌醇（每日0．1mg／kg）治疗12周。测定大鼠全身骨密度和尿Ⅰ型胶原氨基束端交联肽／肌酐（NTx／Cr）比值，采用免疫组织化学法测定Ⅰ型胶原蛋白和组织蛋白酶K的含量。结果12周后，尼尔雌醇可以增加去卵巢大鼠的全身骨密度（P〈0．05），且使Ⅰ型胶原的表达升高。组织蛋白酶K的表达及尿中NTx／Cr水平明显下降。结论尼尔雌醇可能通过促进大鼠骨组织中Ⅰ型胶原蛋白的合成、抑制其水解吸收．从而提高大鼠骨密度、改善骨质量。     

卵巢切除大鼠皮质骨骨密度与生物力学特性

目的：探讨雌激素减少对皮质骨骨密度及生物力学特性的影响,方法：用雌性大鼠去势发色经后骨质疏松症动物模型,观察去势后6wk及12wk大鼠胫骨骨密度及股骨屈服点载荷,载荷／变形,最大应力以及弹性模量的变化,结果：去势6wk骨密度与屈有点载荷,载荷／变形,最在 力以及弹性模量与对照组相比无显差异（P＞0．05）,而去热12wk组骨密度明显低于对照组（P＜0．01）,而屈服点载荷,载荷／变形,最大就力以及弹性模量均低于对照组（P＜0．05）,结论：骨密度和生物力学参数的测量对于骨质疏松症动物模型的建立及治疗骨质疏松症药物疗效的判断有重要的意义。     

大鼠卵巢去势骨质疏松模型的制作

目的建立大鼠卵巢去势骨质疏松模型模拟妇女绝经后骨结构变化。方法 20只3月龄雌性SD大鼠随机均分为2组:假手术组(Sham,n=10)、卵巢去势组(OVX,n=10),分别进行假手术和卵巢去势术,12周后活体测量腰椎、胫骨骨密度,处死动物后取胫骨行扫描电镜观察,取子宫称重。结果腰椎、胫骨骨密度检测显示OVX组出现系统性骨密度下降,Sham组为(302.50±25.92)g/cm3,(205.90±15.07)g/cm3;OVX组为(264.10±20.10)g/cm3,(163.20±11.15)g/cm3,Sham组显著高于OVX组(P<0.05);电镜下骨形态学表现也支持骨密度测量结果;Sham组大鼠体质量低于OVX组,而子宫质量和子宫系数均高于OVX组。结论大鼠卵巢去势骨质疏松模型建立成功。     

补肾法对大鼠绝经后骨质疏松模型的影响

目的:研究补肾法对大鼠绝经后骨质疏松模型激素含量及骨密度等作用,揭示补肾法治疗骨质疏松的机制.方法:将健康雌性SD大鼠32只,随机分成4组:正常组、模型组、西药组、补肾组,各8只. 除正常组外对其他组大鼠进行摘卵巢手术制造绝经后大鼠模型(去势后大鼠). 术后1 wk,西药组灌服浓度为50 mg/L的尼尔雌醇,每只灌服5 mL/wk,其他时间灌服等量生理盐水;补肾组灌服浓度为200 g/L的补肾中药,每只灌服5 mL/d ;正常组和模型组每日同时灌服等量生理盐水. 投药8 wk 后进行摘眼球取血,取左侧股骨. 采用双能X线骨密度仪测量大鼠股骨骨密度(BMD),采用ELISA法测定血清雌二醇(E2)含量.结果:正常组、西药组、补肾组与模型组相比,BMD和E2: P值均＜0.01. E2: 正常vs西药(P＜0.01);正常vs中药(P＜0.01).结论:补肾法能够增加去势大鼠BMD、血清E2,从而对绝经后骨质疏松有治疗作用.     

二仙汤对去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的:研究二仙汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用.方法:去卵巢诱导大鼠骨质疏松症,12周后,取胫骨近端行不脱钙制片进行骨组织形态计量学分析;双能X射线骨密度仪测量股骨骨密度.结果:二仙汤能显著增加骨小梁面积百分比和骨小梁厚度(P＜0.01),减少骨小梁分离度(P＜0.05);增加骨形成参数:矿化沉积率(MAR)、骨形成率(BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV)(P＜0.05, P＜0.01);减少破骨细胞数(P＜0.01)且显著增加去卵巢大鼠股骨骨密度(P＜0.05).结论:二仙汤对去卵巢大鼠骨质疏松有保护作用,主要是通过促进骨形成、抑制骨吸收、提高骨密度.     

新型β-链蛋白结合药物SAHPA1治疗去卵巢小鼠骨质疏松

目的 评估新型β-链蛋白(β-catenin)结合药物SAHPA1在绝经后骨质疏松小鼠模型中的治疗效果.方法 选取C57雌性小鼠作为实验对象.将实验动物分为3组,分别为假手术组、骨质疏松模型组(模型组)、骨质疏松模型治疗组(治疗组),每组5只小鼠.假手术组仅暴露卵巢后缝合切口;模型组和治疗组动物行双侧卵巢切除,建立去卵巢骨质疏松模型.治疗组在切除卵巢后即刻开始每日肌注β-catenin结合药物SAHPAl (10 mg/kg),假手术组和模型组每日注射同剂量的生理盐水.8周后,利用骨组织切片HE染色、micro-CT等方法观察小鼠股骨干骺端骨小梁形态并进行形态学计量分析,评估SAHPA1对去卵巢骨质疏松的治疗效果.结果 与假手术组比较,模型组小鼠骨密度、骨小梁数量、骨小梁厚度均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).经SAHPA1治疗后,小鼠骨密度和骨小梁数量增高(P＜0.05),骨小梁厚度与模型组比较虽有一定提升但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 新型β-catenin结合药物SAHPA1对绝经后骨质疏松小鼠模型有一定治疗作用.     

补肾益气生精中药对去卵巢大鼠骨质疏松发生机制的调节作用

目的研究补肾益气生精中药对去卵巢(OVX)大鼠骨组织中信号转导分子Smad2的表达,以及在骨质疏松症发病中的作用机制。方法用去卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症模型,给予补肾益气生精中药防治12周,以尼尔雌醇为阳性对照,用双能-X线骨密度仪检测大鼠离体股骨骨密度,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、W estern blot方法分别检测Smad2的mRNA、蛋白表达。结果卵巢切除大鼠离体股骨骨密度显著下降,骨组织中Smad2的蛋白及mRNA表达水平均下降。补肾益气生精中药能够提高去卵巢大鼠的骨密度,并且可以从蛋白及mRNA水平提高骨组织中Smad2的表达。结论骨组织中信号转导分子Smad2表达水平的下调可能是原发性骨质疏松症发生的重要机制,补肾益气生精中药通过上调Smad2的表达而有效改善骨密度。     

补肾中药与阿法骨化醇联合应用对卵巢摘除大鼠原发性骨质疏松的防治作用

 目的 研究补肾中药与阿法骨化醇联合应用对卵巢去势（ovariectomy,OVX）大鼠原发性骨质疏松的防治作用。方法 手术摘除6月龄雌性大鼠双侧卵巢,随机分成4组：OVX组（ovariectomy,OVX）、OVX给予补肾中药组（OVX administrated with Bushen Chinese drugs,OVX+TCM）、OVX给予补肾中药和阿法骨化醇组（OVX administrated with Bushen Chinese drugs and alfacalciferol,OVX+TCM+VD）和OVX给予尼尔雌醇组（OVX administrated with nilestriol,OVX+CEE₃）,另设假手术对照组（SHAM）。术后35 d起给予药物至13周后处死取血、子宫、腰椎、股骨等标本,并测定比较各组以下变化：取子宫称重,计算子宫重/体重、子宫内膜厚度;放免法血测血清雌二醇（E₂）应用固体物理密度仪自动测量左股骨和腰椎L₂的骨密度;应用图像分析仪IPP计量软件分析椎体骨的组织病理形态计量;以万能材料测试仪检测右股骨与腰椎L₃的骨生物力学性能的指标;自动生化仪检测血清碱性磷酸酶（ALP）;酶免法检测尿吡啶酚（Pyd）,测尿肌酐（Cr）,计算Pyd/Cr作为骨代谢生化标志物,综合判断骨质疏松情况。结果 OVX大鼠双侧卵巢摘除完全,雌激素缺乏诱发骨质疏松指标明显;联合给药组骨量明显增加,骨结构明显改善,抗骨折性能明显提高,骨形成和骨吸收生化标志物降低;其防治骨质疏松的作用优于单用补肾中药组,并与尼尔雌醇组相仿。结论 补肾中药与阿法骨化醇联合应用对卵巢去势大鼠原发性骨质疏松有明显防治作用,避免了雌激素引起的子宫内膜增生等毒副作用。     

指数曲线电刺激治疗原发性骨质疏松

目的    探讨指数曲线电刺激治疗原发性骨质疏松症的可行性及作用机制。方法    取7个月龄未交配雌性SD大鼠24只,随机分为3组。A组为假手术组,B组为骨质疏松对照组,C组为骨质疏松后指数曲线电刺激治疗组。除A组外,B、C组均通过切除双侧卵巢法制成骨质疏松模型,12周后造模完成,24周分别测定腰4椎体的骨密度及生物力学参数,Masson三色染色法显示腰2的骨胶原形态,HE染色法显示腰3的骨小梁形态。结果    ① C组的骨密度、生物力学参数与A、B组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;② C组的骨胶原形态和骨小梁形态优于B组。结论    指数曲线电刺激是治疗原发性骨质疏松的一种有效方法。     

PEMF对OVX-OP大鼠骨组织IL-6表达的影响及意义

目的 观察脉冲电磁场(PEMF)对骨质疏松的治疗作用,从IL-6变化的角度探讨其治疗骨质疏松的机理.方法 6月龄雌性未孕Wistar大鼠40只,按体质量随机分为模型组(OVX)、假手术组(Sham)、PEMF组(PEMF OVX PEMF)、雌激素治疗组(Estrogen OVX E).OVX、PEMF、E组行双侧卵巢切除术,Sham组行假手术.术后第9周开始治疗:E组行苯甲酸雌二醇肌肉注射,0.5mg/kg,1次/2周.PEMF组大鼠暴露于脉冲电磁场治疗,1h·次-1·d-1,OVX、Sham组不予以任何处理,作为对照组.治疗10周后处死各组实验动物,测量腰椎骨密度、椎体的最大载荷.采用免疫组化检测椎体骨组织中IL-6表达情况并以图像分析进行组间比较.结果 IL-6主要表达于成骨细胞、骨细胞.PEMF治疗组IL-6的表达较OVX组明显增强;骨组织结构较OVX明显改善;骨密度、生物力学性能优于对照组.结论 PEMF对OVX-OP大鼠具有明显治疗作用;其治疗作用与IL-6在成骨细胞、骨细胞中的表达减弱密切相关.     

利塞膦酸钠抑制大鼠骨髓内脂肪细胞分化及脂肪细胞核因子κB受体活化因子配体蛋白的表达

目的研究利塞膦酸钠（RIS）对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响及对骨髓内脂肪细胞来源的核因子κB受体活化因 子配体（RANKL）的调节作用,为阐明RIS抗骨质疏松的机制提供新的理论依据。方法大鼠骨髓间充质干细胞成脂诱导及非 成脂诱导14 d,期间以浓度梯度0、1、5、10、25 μmol/L的RIS进行药物干预,观察并计算成脂率,提取蛋白通过Western blot实验 检测RANKL蛋白表达。将24周的SD大鼠随机分成假手术组及OVX组,12周后OVX大鼠再次随机分为RIS干预组（2.4 μg/kg, 皮下注射,3次/周）及对照组。8周后行骨密度检查,并取大鼠左股骨远端骨骼标本行病理检查,观察RIS对大鼠骨髓内脂肪含 量的影响。结果体外实验发现RIS呈浓度依赖性抑制大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化,并且,随着RIS浓度的升高,骨 髓内脂肪细胞RANKL蛋白的表达逐渐降低（P<0.05）。体内实验发现RIS药物干预后,OVX大鼠骨密度显著提升的同时,骨髓 内脂肪的含量明显降低（P<0.05）。结论RIS可有效抑制大鼠骨髓间充质干细胞的成脂分化,降低骨髓内的脂肪含量,并通过下 调脂肪细胞RANKL的表达,抑制破骨细胞的生成和功能,这可能是RIS发挥抗骨质疏松作用的机制。