肠出血性大肠埃希菌O157:H7不同分型方法比较

目的探讨建立快速敏感的EHEC O157：H7诊断分型方法，有效地追踪溯源和控制传染源。方法分别用反向被动乳胶凝集试验(RPLA)、噬菌体分型、vt毒力基因PCR试验、脉冲场电泳胶(PFGE)4种实验方法对EHEC O157：m菌株进行分型。结果对同起事件菌株，4种方法均有较好的分型能力；PFGE对散发菌株有很强的分型能力，而RPLA与vt毒力基因PCR试验尚有不足，但其操作简便，实验要求相对不高，可以作为EHEC O157：H7致病毒素的初筛方法。结论几种分型技术联合使用比任一种技术单独使用能提供更为可靠的分型结果。     

我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157：H7脉冲电场凝胶电泳分型

目的 探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7菌株的分布，流行以及分型情况。方法 用脉冲电场凝胶电泳（PFGE）方法进行分型，辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株进行研究。结果 根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱，可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株分成8个PFGE型别（PFGE1-PFGE8），宁夏菌株为PFGE1型和2型，徐州菌株有6个PFGE型，1986-1988年的分离菌株属于PFGE7型，1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型，1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE5型，从家畜家禽的粪便，食品，蔬菜等标本分离的19株菌，可以分为PFGE3-6等4个型别，其中，PFGE5型占优势（10株菌）。结论 爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品，蔬菜等有关，从我国部分地区分离的EHECO157：H7菌株的PFGE型别有地区性差异。     

肠出血性大肠埃希菌实验室检测研究进展

肠出血性大肠杆菌O157：H7是一种新型致病性大肠杆菌,可引起出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征和血栓性血小板减少性紫癜。该茵致病性强,病死率高,通过食物和水传播。本文介绍该病原茵实验室检测技术的研究进展,包括：细菌的培养分离、胶体金免疫技术、免疫磁珠分离法(IMS)、免疫荧光酶标法(VIDAS和mini VIDAS)、直接PCR、多重PCR和荧光定量PCR等。     

肠出血性大肠埃希菌O157毒力因子研究进展

人类感染肠出血性大肠埃希菌(ＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ)Ｏ157∶Ｈ7和Ｏ157∶ＮＭ可出现多种临床表现,包括无症状感染、非出血性腹泻、出血性肠炎(ＨＣ),严重者可并发病死率极高的溶血性尿毒综合症(ＨＵＳ)或血栓形成性血小板减少性紫癜(ＴＴＰ)[1]。细菌毒力因子是细菌是否具有致病性的前提。对ＥＨＥＣ毒力因子进行研究有助于了解所致疾病的发生机制,为ＥＨＥＣ感染的诊断、治疗、预防及控制提供新的思路。ＥＨＥＣＯ157菌的毒力因子主要有志贺毒素、肠溶血素(ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ)、以…     

肠出血性大肠埃希菌1类整合子与耐药性关系

目的研究48株(国内28株，美国20株)肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的耐药特点以及1类整合子的分布，探讨整合子中耐药基因盒的种类及与细菌耐药性的相互关系。方法琼脂稀释法对18种抗生素进行耐药性监测和分析；PCR法鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序及分析。结果48株肠出血性大肠埃希菌中23株为O157：H7；2个地域的肠出血性大肠埃希菌对抗生素的耐药情况大多无差别，只存在对氨苄西林和红霉素耐药率的差异，前者为国内分离株(60．7％)高于美国分离株(30％)，后者为美国分离株(95％)高于国内分离株(60.7％)。耐3种以上抗生素的肠出血性大肠埃希菌18株(美国3，中国15)。48株分离株中有11株(22．9％)鉴定出1类整合子，PCR产物测序分析可见，9株携带aadA1基因盒，2株携带aadA2基因盒，传递对氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论1类整合子及其相关的基因盒广泛存在于肠出血性大肠埃希菌中，而且决定着对氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

湖北省首次分离出肠出血性大肠埃希菌O157：H7

目的：为了解肠出血性大肠埃希菌O157:H7（EHEC O157:H7）在我省的动物宿主种类和菌型特征，制定相应流行病防治对策。方法：采用传统方法，在6～10月份肠道传染病高发季节，对武汉市3大养殖场、屠宰场的肉猪、奶牛及武汉7大城区的农贸商场的水产品进行调查采样，共采集811份样品，进行EHEC O157:H7检测。结果：341份猪粪样品中检出1株EHEC O157:H7，阳性率为0.29%；255份奶牛粪便样品中检出7株EHEC O157:H7，阳性率为2.75%；其他类标本中未检出。分离的这8株阳性菌株与传统的EHEC O157:H7存在许多不同之处，他们均发酵山梨醇，大部分菌株不分解棉子糖，也存在不分解卫茅醇的菌株，而β-葡萄糖醛酸酶试验为阳性，在致病因子上，检测现有的几种毒力基因均为阴性。结论：在我省首次检出8株EHEC O157:H7，说明其普遍存在于动物体内，对环境、食品构成较大威胁。     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其质粒O157的研究进展

致病性大肠埃希菌根据毒力性质、病理机制、临床综合征及不同的血清分型被分成肠毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和扩散粘     

2000～2005年海盐县肠出血性O157:H7大肠埃希菌监测

目的：了解海盐县肠出血性O157：H7大肠埃希菌的分布及流行情况。方法：采取肠道门诊病人肛拭样和动物宿主粪便，采用免疫磁珠分离和大肠杆菌O157特异性单克隆抗体胶体金快速诊断技术以及特定培养基分离鉴定技术检测O157：H7大肠埃希菌。结果：从1例腹泻患者的大便中检了了1株O157：H7大肠埃希菌，不产生类志贺毒素；从动物粪便中检出7株O157大肠埃希菌。结论：海盐地区人群中感染率较低，且为非产毒株；猪、鸡是我地区O157：H7大肠埃希菌的主要贮存宿主动物。     

肠出血性大肠埃希菌双重实时荧光PCR检测方法的建立

目的建立快速、灵敏、特异、有效的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)双重实时荧光PCR检测方法。方法根据GenBank公布的EHEC的stx1和stx2基因序列设计相应的PCR引物和TaqMan探针,探针分别用FAM-BHQ1和HEX-BHQ1标记stx1及stx2,建立双重实时荧光PCR反应体系,并对方法的灵敏度、特异性及其重复性进行分析。结果建立了EHEC双重实时荧光PCR检测方法。结果显示该方法特异性、重复性好、灵敏度高,最低检出限可达102cfu/ml,117.5fg/μl。结论建立的双重实时荧光PCR方法可快速、灵敏、特异、有效地检出EHEC。     

出血性大肠杆菌O157∶H7的脉冲场凝胶电泳分型方法研究

目的应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对肠出血性大肠杆菌O157:H7进行基因分型,了解不同来源分离株的相关性。方法选择在广西食品污染物检测地区食品样本中分离到的7株出血性大肠杆菌O157:H7,采用琼脂糖包埋胶块法制备基因组DNA,以XbaⅠ限制性内切酶进行酶切,选定脉冲电泳参数进行脉冲场凝胶电泳,照相记录结果;Nei的公式计算相似性和遗传距离,并用PHYLIP程序非加权成对算术平均法聚类分析。结果PFGE可生成14~18条清晰条带的分离株DNA指纹图谱,由聚类分析树状图可将7株分离株分为6个基因群。结论广西不同地区食品分离O157:H7血清型菌株存在多个分子亚型,提示不是一个克隆株,研究发现脉冲场凝胶电泳分型技术重复性高,在分子流行病学研究中有较大的应用前景。     

大肠埃希菌O157:H7分离株MLVA分子分型

目的了解国内大肠埃希菌O157:H7菌株的分子流行特征。方法采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法对1999-2002年江苏、河南、安徽、山东、云南等地的大肠埃希菌O157:H7分离株135株进行分子分型,选取7个可变数目串联重复序列(VNTR)位点,应用PCR技术及毛细管电泳方法,检测分离株DNA多态性,使用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 135株大肠埃希菌O157:H7可分为3个群(A群、B群、C群)38个MLVA型别,其中A群占20.7%(28/135)、B群占23.7%(32/135)、C群占55.6%(75/135);MLVA型别存在一定地域性,同一暴发来源的菌株具有相同MLVA型别。结论大肠埃希菌O157:H7国内分离株存在丰富的基因多态性;MLVA方法具有较高分子分型能力,可以在溯源和流行病学调查中发挥重要作用。     

环介导等温扩增法应用于肠出血性大肠埃希菌O157:H7的检测

的仪器,非常适合基层检验部门及小型实验室与流行病学人员现场监测使用,具有较为广泛地应用前景.     

大肠埃希菌O157血清型分离株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区分离的产志贺毒素和不产志贺毒素大肠埃希菌O157菌株的分子流行病学特征。方法对杭州地区于1997～2005年间自散发腹泻患者和动物中分离的10株大肠埃希菌O157血清型菌株,PCR检测毒力基因stx1、stx2、eae和ehxA,eae阳性者进行eae基因分型;按标准化的脉冲场凝胶电泳法(pulsefieldgelelectrophoresis,PFGE)进行分子分型,并与国内其他省份分离的产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin_producingEscherichiacoli,STEC)O157∶H7菌株进行比较。结果杭州分离菌株HZ1_11携带毒力基因stx2、γ型eae和ehxA,为浙江省检获的首株STECO157∶H7;3株杭州O157∶NM分离菌株(2_1、26_1和SR05株)仅携带β型eae基因;其他6株杭州O157∶H?分离菌株中,均未检出毒力基因。PFGE揭示,在杭州人源O157菌株中,STECO157∶H7HZ1_11株与近年江苏和安徽分离STECO157∶H7菌株密切近缘,且其图谱与江苏菌株几乎完全相同;3株eae阳性的O157∶NM分离菌株聚类成与STECO157∶H7菌株较远的一簇,杭州1株stx阴性的O157∶H?(1_68株)则处于另一独立的一簇。5株杭州O157∶H?动物分离菌株与其他人源菌株图谱差异极大。结论浙江省首株STECO157∶H7可能是源自近年在江苏流行的STECO157∶H7菌株。β型eae阳性的大肠埃希菌O157∶NM菌株可能具有引起散发腹泻的能力。     

熔解曲线分析方法甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:采用熔解曲线分析技术,建立一种快速、简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7方法。方法:选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测靶基因,建立荧光PCR反应体系。结果:通过多种标准菌株试验,结果显示所建立的熔解曲线分析法可特异性地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7;纯培养的灵敏度达到2.8×101cfu/ml;检测108例临床样本,其中18例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,3例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,与常规培养方法的符合率达到100%。结论:本方法可简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7,结果可靠,通过进一步增加反应体系中引物的数量可同时对肠出血性大肠杆菌其他血清型进行鉴定。     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7疫苗的研究进展

O157:H7是肠出血性大肠埃希菌(EHEC)最常见的血清型.目前国内外尚无EHEC O157:H7疫苗问世,因此疫苗研究对防治EHEC O157:H7有着重大意义.外膜蛋白A(OmpA)作为抗EHEC O157:H7基础疫苗为疫苗研究提供了新的思路,此文对EHEC O157:H7疫苗研究的有关进展作了综述.     

Standardization of pulsed-field gel electrophoresis protocols for the subtyping of Escherichia coli O157:H7, Salmonella, and Shigella for PulseNet

Standardized rapid pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) protocols for the subtyping of Escherichia coli O157:H7, Salmonella serotypes, and Shigella species are described. These protocols are used by laboratories in PulseNet, a network of state and local health departments, and other public health laboratories that perform real-time PFGE subtyping of these bacterial foodborne pathogens for surveillance and outbreak investigations. Development and standardization of these protocols consisted of a thorough optimization of reagents and reaction conditions to ensure that the protocols yielded consistent results and high-quality PFGE pattern data in all the PulseNet participating laboratories. These rapid PFGE protocols are based on the original 3-4-day standardized procedure developed at Centers for Disease Control and Prevention that was validated in 1996 and 1997 by eight independent laboratories. By using these rapid standardized PFGE protocols, PulseNet laboratories are able to subtype foodborne pathogens in approximately 24 h, allowing for the early detection of foodborne disease case clusters and often aiding in the identification of the source responsible for the infections.     

Pulsed-field gel electrophoresis patterns of Escherichia coli O157 isolates from Kansas feedlots

This study investigated the prevalence and distribution of Escherichia coli O157 genetic types within and among feedlots using pulsed-field gel electrophoresis to separate XbaI-digested DNA. The study population consisted of 300 pens of cattle in 30 feedlots in Kansas that were sampled (feces, water, and water sediment) within a month of being shipped for slaughter. The prevalence of E. coli O157 was 8.5% in feces, 3.1% in water, and 4.5% in water sediment samples. A total of 424 E. coli O157 isolates were characterized by pulsed-field gel electrophoresis, and 139 subtypes (100% Dice similarity with no band differences) were identified. The majority of subtypes (70/139) was identified only once, but nine were identified 10 or more times. Identical subtypes were recovered from both feces and water tanks in 10 feedlots. The majority of subtypes were identified in only one feedlot, and the number of subtypes ranged from one to 23 within a feedlot and from one to seven within a pen. There were 10 feedlots with at least 15 positive samples. In these 10 feedlots, the most common subtype accounted for 16.9-78.6% of the isolates. Common subtypes differed among feedlots. In eight of the 10 feedlots, the most common subtype was identified in multiple pens. The results support a complex ecology for E. coli O157 in feedlot operations, with factors associated with exposure and transmission likely acting at a common level for multiple feedlots, within feedlots, and within pens of cattle.     

改良MLVF与MLVA及PFGE对医院流行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分型研究

目的旨在建立一种操作简便、分型分辨率高以及成本低的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分子分型方法,对多位点可变数量串联重复序列指纹法(MLVF)进行了方法学改良及分型能力比对评估。方法应用42株MRSA参考菌株对改良MLVF分型能力进行验证;应用116株东北三省六家医院的MRSA临床菌株对改良MLVF、脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)进行了方法学比对。结果改良MLVF对42株参考菌株分型率为100%;改良MLVF、PFGE和MLVA分别将116株临床菌株分成28个型(simpson's多样性系数[SID]=0.855),28个型(SID=0.854)和27个型(SID=0.816)。改良MLVF在区分国内最主要流行克隆CC239和其他克隆方面分辨率优于MLVA。改良MLVF在分群水平上与PFGE分型一致性(adjusted Rand’s,AR系数0.989)优于MLVA(AR指数0.765)。结论改良MLVF具有分辨率高、与金标准PFGE分型一致性好、操作简单、高通量、费用低的优点,适合常规实验室对MRSA进行分子分型,为常规感控工作及分子流行病学研究提供有力工具。     

Cross reactivity of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7-specific sera with non-O157 serotypes

Escherichia coli O157:H7 is an important food- and water-borne pathogen of humans, causing Hemorrhagic Colitis and Haemolytic Uremic Syndrome. Colonization of both cattle and human hosts is mediated through the action of effector molecules secreted via a Type III secretion system, a mechanism shared by other enterohemorrhagic E. coli (EHEC). We recently reported that vaccination of cattle with Type III-secreted proteins (TTSPs) resulted in decreased shedding of the organism following both experimental infection as well as under conditions of natural exposure. In order to extend this to non-O157 EHEC serotypes, we examined the serological cross reactivity of TTSPs of serotypes O26:H11, O103:H2, O111:NM and O157:H7. Western blotting experiments with polyclonal antisera directed against serotype O157:H7 TTSPs suggested that there was significant cross reactivity, although there was limited cross reactivity when two Tir- and EspA-specific monoclonal antibodies were used. Groups of cattle were then vaccinated with TTSPs produced from each of the above serotypes and the magnitude and specificity of the responses were measured. All animals responded well with antibodies to TTSPs of the homologous serotype. However, limited cross reactivity was observed against the others. No cross reactivity was observed against Tir and EspA of serotype O157:H7. These results suggest that vaccination of cattle with TTSPs as a means of reducing the risk of EHEC transmission to humans will induce protection that is serotype specific.