维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响

目的 探讨维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响.方法 以质粒pBR322超螺旋DNA为底物,采用凝胶电泳分别检测维康醇对拓扑异构醇Ⅰ (Topo Ⅰ)和拓扑异构醇Ⅱ(TopoⅡ)介导的pBR322 DNA解旋反应的影响.结果 维康醇对TopoⅠ介导的pBR322解旋反应无明显的抑制作用,而对TopoⅡ的活性有明显的抑制作用.结论 维康醇的直接作用靶点可能是DNATopoⅡ,该药可能成为新的TopoⅡ抑制剂.     

PBR322:RSF1010重组质粒的构建

分别从大肠杆菌HB802(pBR322)及C600CRSF1010菌株中抽提质粒,用EcoRI酶切后,再用T_4DNA连接酶将它们连接,转化大肠杆菌C_(600)菌株,共获得253株转化子。经琼脂糖凝胶电泳及电镜摄影证实质粒PSMMI是pBR322:RSF1010重组体,可使宿主菌C_(600)获得对ApTc及Sm的抗性。本文对重组体pSMMI中pBR322和RSF1010的连接方向及这一重组质粒未能转化恶臭杆菌AC_(10)菌株的原因,进行了讨论。     

人乳头瘤病毒11型的DNA分子克隆

以E coli C300为受体菌,利用人乳头瘤病毒11型DNA与pBR322的重组质粒(pBR322-HPV11DNA),成功地进行了HPV11DNA的转化,经筛选获得61株重组子,随机对15株转化子以碱变性法及清亮裂解法抽提了pBR322-HPV11DNA的重组质粒,纯化后经BamHI酶切及琼脂糖凝胶电泳,以λDNA/HindⅢ作参考分子量测定,初步结果证实存在有分子量为5.5×10~6(约8.1kb)的HPV11DNA。这为HPV11DNA的分子扩增,基因探针的制备及HPV11型量鳞癌的研究提供了方便。     

大鼠肝DNA拓扑异构酶Ⅰ的提纯及其与B_2蛋白的鉴别

DNA拓扑异构酶Ⅰ(拓扑酶Ⅰ)催化DNA单链的暂时断裂、解缠及重新接合而使超螺旋DNA转变成松弛DNA。它存在于原核细胞及各种真核生物细胞核中,可能参与DNA的复制、转录和重组,亦可能参与基因表达的调节。     

以拓扑异构酶Ⅱ为靶点的抗肿瘤药研究进展

DNA拓扑异构酶(ToPo)广泛存在于原核和真核生物细胞中，是通过改变DNA的α值而影响其拓扑结构，引起拓扑异构反应的酶。拓扑异构酶可分为两类：类型Ⅰ的酶(包括．ToPoⅠ，ToPoⅢ)能使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量；类型Ⅱ的酶(即指ToPoⅡ，ToPoⅣ)能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，当它引入超螺旋时需要由ATP供给能量：。     

拓扑异构酶抑制剂的研究进展

拓扑异构酶(Topoisomerase，Topo)是70年代发现的一种能催化DNA拓扑异构体相互变换，调节DNA三维结构的核酶。其作用是通过两个连续的转酯化反应，断开和连接DNA主链的磷酸二酯键，介导DNA单链或双链的瞬时断裂和再连接，使DNA的拓扑结构发生变化，与有丝分裂期超螺旋染色质或染色体的组装与分组装、基因组复制、     

慢性进行性舞蹈病一家系五例临床及基因分析

目的:调查舞蹈病的家系资料并对其成员外周血白细胞DNA进行基因分析.方法:对该病进行家系调查,应用巢式PCR及琼脂糖凝胶电泳技术检测患者、HD症前高风险成员、正常人(CAG)n片段的长度,进行基因分析.结果:该家系符合常染色体显性遗传病特征,患者DNA电泳显示两条扩增区带,正常人显示一条扩增区带.该家系中2例高风险成员未见基因异常,DNA电泳显示一条扩增区带.结论:舞蹈病为常染色体性遗传病,患者相关基因分端(CAG)n重复序列存在异常扩增.     

乙型肝炎病毒adr亚型全基因组分子克隆的建立

从单一人份HBsAg(adr)携带者血清中分离纯化HBV DNA,将其插在质粒pBR 322DNA的BamHI切点,转化大肠杆菌。经筛选得到了含完整乙型肝炎病毒(HBV)基因组的分子克隆,确定了8种限制性内切酶的切点数和位置,并用已知DNA序列的adw_2亚型HBV DNA基因特异性探针进行了基因定位。     

在改进EB作为核酸染色剂中的发现

溴乙锭(EB)是最常见的核酸电泳染色剂,使用该试剂的方法一般有两种,一是将EB加入电泳缓冲液或琼脂糖凝胶中,一是核酸电泳后再在EB溶液中染色。笔者设想电泳前首先将EB与DNA结合为复合物,电泳后就可以直接在紫外灯下观察结果,这不仅背景清晰干净,节约EB用量,减少EB污染,减轻对实验人员的健康危害,也简化了操作。1　材料和方法1.1　溴化乙锭及pBR322/MSPI(0.5μg/μl):亚美公司生产。1.2　方法:1常规铺2%的琼脂糖凝胶。2将溴化乙锭配成10mg/μl的母液,然后分别将母液稀释成1/25,1/50,1/100,各取2μl,与等体积的pBR322/MSPI混合(则…     

盘状电泳及其光密度简易描记法

盘状电泳技术带电物质在电场的作用下,向着其带异电荷的电极移动的现象做电泳。常用的电泳可分为自由界面电泳和区带电泳两类。区带电泳是在各种不同情性支持物中进行的电泳,不同组分经过电泳分离后可形成带状区间。因支持物的不同,区带电泳又可分为纸电泳、粉末电泳和凝胶电泳。盘状电泳是用聚丙烯酰胺作为支持物的一种凝胶电泳。     

质粒pBR32与pCRI体外重组的研究

质粒已被广泛用作把特定的基因片段从一种有机体细胞转移到另一种有机体细胞中去的运载体。本文研究两株大肠杆菌的质粒PBR322与PCRI的体外重组及其对受体菌的转化和表达。材料与方法(一)菌种和酶大肠杆茵C600(Leu~-,Thr~-,V_81~-)受体菌;大肠杆菌8021,所含质粒如pBR322带有抗氨基苄青霉素和四环素(AP～r,Tc~r)的基因标记。上述菌株由中国科学院生物物理所提供;大肠杆菌C600所含质粒pCRI带有抗卡那霉素(Km~r)的基因标记,中国科学院微生物所提供;噬菌体T4DNA连接酶,4000单位/毫升,中国科学院生物物理所提供;限制性内切酶EcoRI自制。     

鸭血清脂蛋白的研究Ⅲ.鸭血清高密度脂蛋白主要载脂蛋白的分离、提纯及其某些性质的研究

经醇醚混合液及乙醚反复脱脂、提纯的鸭血清高密度脂蛋白在8M尿素中用SephadexG-200凝胶过滤可分离成三个组份。根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,组份Ⅰ主要由组份Ⅱ的聚合体和一些高分子成份组成,后者很可能是组份Ⅱ不可逆的聚合体。组分Ⅱ是HDL的主要蛋白成份,在电泳中显示单一的蛋白染色带,凝胶电泳测定其分子量为26,300道尔顿,由237个氨基酸残基组成,不含半胱氨酸。由于该成分与人的apoA-Ⅰ有相似的物理化学性质,称其为鸭apoA-Ⅰ。     

枯草杆菌克隆体系载体研究Ⅰ.杂合质粒pHE1-a和pHE1-b的重建

枯草杆菌质粒pUB110和大肠杆菌质粒pBR322藉EcoRI切点进行体外重组,得到两个大小相同而连接方向相反的重组体,命名为pHE1-a和pHE1-b。绘制了它们的酶切图谱。杂合质粒的分子量约5.6×10~8d,为共价闭合的环状DNA,带有Ap,Tc,Km和Nm四种抗菌素抗性,能同时转化枯草杆菌168,BR151和大肠杆菌C600。     

两种不对称含氧钒配合物的合成及其生物活性研究

目的 设计合成2个不对称钒配合物水杨醛缩氨基硫脲-菲啰啉钒（IV）[VO（hntdtsc）（phen）]（1）和2-羟基-1-萘甲醛缩氨基硫脲-菲啰啉钒（IV）[VO（satsc）（phen）]（2）,评价其体外抗肿瘤活性和DNA断裂作用.方法 凝胶电泳法研究了配合物对pBR322 DNA的断裂作用,采用MTT法研究两种钒配合物对SH-SY5Y、SK-N-SH和MCF-7等三种肿瘤细胞增殖的抑制作用.结果 两种钒配合物1和 2 都能很好地断裂pBR322 DNA,对肿瘤细胞的增殖具有很好的抑制作用,配合物1的抑制活性甚至明显优于顺铂.结论 不对称Schiff碱钒配合物具有良好的抗肿瘤活性和DNA断裂效果.     

三例特征血清蛋白电泳图谱的说明

血清蛋白电泳技术自 1937年由Ｔｉｓｅｌｉｕｓ发明。区带电泳是指带电荷的分子在具有渗透能力的支撑介质上的迁移。如醋酸纤维膜或琼脂糖凝胶电泳。其带电离子在每单位电场强度 (Ｅ ｃｍ)下的泳动速度 ,即电泳迁移率 (μ)为 :μ =Ｑ 6πｒηｃｍ2 (ＶＳ) (其中Ｑ为化学基因上所带净电荷 ;ｒ为溶质的离子半径 :η为电泳缓冲液的粘滞度 )。典型的正常人血清蛋白电泳区带分布如右图所示 :常分成五个区带 ,即白蛋白区带、α1 球蛋白区带、α2球蛋白区带、β球蛋白区带和γ球蛋白区带。其各区带的主要组份如图所示。以下是近期我们分析至的一些…     

芦荟大黄素苷与DNA相互作用的研究

目的探讨芦荟大黄素苷与DNA的相互作用。方法采用电子吸收光谱,荧光发射光谱,粘度实验以及凝胶电泳实验进行研究。结果与结论芦荟大黄素以插入方式与DNA分子结合;较高浓度的芦荟大黄素苷能够使Bel-7402肝癌细胞DNA由超螺旋构型转化为缺刻构型。     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：用缺血－再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法（TUNEL）。结果：缺血－再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞。Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低。结论：缺血－再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡。     

结核病核酸疫苗纯化过程的初步研究

对结核病核酸疫苗的质粒DNA的制备性纯化过程进行了初步研究。此工艺主要包括以简化的碱裂解法处理大肠杆菌、超滤与离心法除大部分杂质并浓缩样品、Q-Sepharose阴离子交换层析、DNA B ioSepharTMFF亲和层析等步骤,以去除细胞RNA和蛋白等杂质,并对不同分子结构的质粒DNA作分离。结果表明:以碱裂液中质粒DNA为计算基准的得率为56.61%、超螺旋质粒DNA的电泳纯度100%。     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:用缺血-再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响.方法:琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法(TUNEL).结果:缺皿-再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞.Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低.结论:缺血-再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡.     

庆大霉素耐药基因的分子克隆及DNA探针制备的研究(简报)

作者首次从流行的致病性大肠杆菌(EPEC)中的多重耐药菌株E2出发,经药敏测定,R质粒的接合传递,质粒DNA的消除试验及质粒DNA的电泳检测,确证庆大霉素耐药基因在可传递性质粒pEFM2上。质粒pEFM2经限制性内切酶切割成15个片段,以pBR322为截体,利用“鸟枪法”随机克隆,获得了1000株重组子的克隆库。从中筛选出1株仅表达庆大霉素(Gm)和四环素(Tc)抗性的重组子85/HB101。它的重组质粒pBY101经数种限制性内内切酶单切、双切,绘制了物理图谱。继而利用EcoRI酶切pBY101,再经连接亚克隆获得