靶序列三链DNA对质粒pBR322的Amp^r基因表达的抑制

利用ＣａＣｌ２法成功地将寡核苷酸导入大肠杆菌ＪＭ１０９细胞。质粒ｐＢＲ３２２转化结果表明,寡革酸片段５’－ＡＧＣＧＧＧＡＡＴＡＡＧＧＧＡＡ－３’在转化前（或后）与靶序列结合均能抑制β－内酰胺酶基因的表达,细菌生长受到抑制。体外聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,该片段能与靶序列形成三链结构。这些结果表明多聚嘌呤寡核苷酸是通过与靶序列形成三链ＤＮＡ来抑制β－内酰胺酶基因的表达。     

维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响

目的 探讨维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响.方法 以质粒pBR322超螺旋DNA为底物,采用凝胶电泳分别检测维康醇对拓扑异构醇Ⅰ (Topo Ⅰ)和拓扑异构醇Ⅱ(TopoⅡ)介导的pBR322 DNA解旋反应的影响.结果 维康醇对TopoⅠ介导的pBR322解旋反应无明显的抑制作用,而对TopoⅡ的活性有明显的抑制作用.结论 维康醇的直接作用靶点可能是DNATopoⅡ,该药可能成为新的TopoⅡ抑制剂.     

The Construction fo Hybrid Plasmid pBR322:RSF1010

The plasmids pBR322 and RSF1010,extracted from E.coli HB802 and E.coliC600 respectively,were treated with restrictive endonuclease EcoRI andligated with T4 DNA Iigase.C600 strains were then transformed with thehybrid plasmid(pSMMl),and thus253transformants were obtained.Thefigures of gel electrophoresis and electromicrograph proved that pSMMlwas a pBR322:RSF1010 composite hybrid.In E.coli C600 pSMMl obtainedresistance against ampieilline(Ap),tetracycline(Tc)and streptomycin(Sm).The orientation of pBR322 and RSF1010 in hybrid pSMMl and the failureof introduction of this hybrid into P.putida AC10 were discussed.     

由pBR322缺失重组构建的一个小质粒的结构特征

我们在构建昆虫杆状病毒转移载体的过程中,发现了一个小质粒pQS145,其长2.0 kb,拷贝数很高,有EcoR I、Pst Ⅰ单一位点和3个Hinf Ⅰ位点,有抗氨苄青霉素基因,能与pBR 322探针杂交。用双酶消化法构建了此质粒3个酶的物理图谱。pQS 145是由pBR322缺失重组而来,实验结果与推导结果完全一致。     

拓扑异构酶抑制剂的研究进展

拓扑异构酶(Topoisomerase，Topo)是70年代发现的一种能催化DNA拓扑异构体相互变换，调节DNA三维结构的核酶。其作用是通过两个连续的转酯化反应，断开和连接DNA主链的磷酸二酯键，介导DNA单链或双链的瞬时断裂和再连接，使DNA的拓扑结构发生变化，与有丝分裂期超螺旋染色质或染色体的组装与分组装、基因组复制、     

DNA拓扑异构酶的研究进展

DNA拓扑酶广泛存在于生物体细胞核内,能调节核酸空间结构动态变化,是控制核酸生理功能的关键酶。其参与DNA的重组、修复、转录及复制过程。本文就拓扑异构酶的结构,功能,生物学特性进行综述。1DNA拓扑异构现象在生物体的整个生命过程中,细胞遗传物质DNA起着十分重要的作用,DNA分子中核苷酸的排列顺序构成DNA的一级结构;双螺旋结构构成其二级结构;真核生物DNA分子很大,     

DNA拓扑异构酶治疗癌

有两种酶叫做拓扑异构酶1和拓扑异构酶2.这些酶的名称是由于它们在催化DNA的局部结构异构体之间的转化中具有十分重要的作用而起。它们帮助松开和过度卷曲DNA,使DNA缠绕成环、打结和再解开结,而且它们可以起到旋轴的作用,以便在DNA被RNA聚合酶转录时减少扭转应力.DNA拓扑异构酶阻止DNA的双螺旋在必须分成两股时缠结在一起不能解开。它们能够在一股链(拓扑异构酶1)或在两股链(拓扑异构酶2)上制造一个缺口,允许一股链或两股链通过这个缺口,然后     

DNA拓扑异构酶与细胞凋亡

细胞凋亡 (又称细胞程序性死亡 )的调控由多种基因、核内外酶、信号蛋白等成分协同完成 ,其中DNA拓扑异构酶认为是细胞凋亡过程中核内相关的调控因素。作者就近年来对DNA拓扑异构酶的认识及其抑制物诱导细胞凋亡的机制和在细胞凋亡中的作用作一综述     

DNA拓扑异构酶Ⅱ与细胞增殖

细胞增殖的核心事件是DNA复制与细胞分裂，DNA拓扑异构酶Ⅱ在该过程中起重要作用。由于传统细胞增殖标记物的局限，DNA拓扑异构酶Ⅱ作为细胞增殖标记物的意义正逐渐被人们所关注。作者就近年来人们对DNA拓扑异构酶Ⅱ的认识及其作为细胞增殖标记物的价值进行如下综述。     

DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂研究进展

DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)参与DNA复制、转录、重组、修复等所有关键的细胞核内过程,已成为极其重要的抗癌药物研究新靶点.目前,美国国立癌症研究所药物机制分析电脑网络系统已将TopoⅠ抑制剂列为重点研究的六大类抗肿瘤药物之一.近年来,Topo Ⅰ抑制剂研究出现了新的高潮,已有数个喜树碱类化合物进入临床研究,还发现了一些结构新颖、活性较好的非喜树碱类TopoⅠ抑制剂.本文简单介绍TopoⅠ的拓扑结构与活性位点,重点了各类Topo Ⅰ抑制剂研究的最新进展.     

羟乙基葛根素的旋转异构现象

目的:合成并研究羟乙基葛根素的旋转异构现象。方法与结果:用环氧乙烷作为羟乙基化试剂合成了羟乙基葛根素,在分析其波谱数据时,发现了羟乙基葛根素的旋转异构现象。运用变温核磁共振技术结合碳谱的波谱数据分析以及高效液相色谱的纯度检测,证实了羟乙基葛根素分子具有旋转异构现象。结论:首次报道了羟乙基葛根素旋转异构现象,从而为羟乙基葛根素分析和纯度鉴定提供了科学依据。     

DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的研究

测试了172种化合物对拓扑酶Ⅰ的抑制作用,发现聚阴离子DIVEMA、FMA、FMAHA及中药盐酸小檗碱、槲皮素、黄岑素甙、楤木皂甙A及昆明山海棠总提出物对拓扑酶Ⅰ有抑制作用,其中聚阴离子的抑制作用特别强烈,     

DNA拓扑异构酶I与肿瘤化疗

DNA拓扑异构酶 (topoisomerase ,TOPO )是一种基本的核酶 ,催化超螺旋结构的双链 DNA中某一条链的断裂和再接反应 ,从而改变 DNA的拓扑学状态 ,参与细胞DNA的复制和转录。TOPO 抑制剂是一类以 TOPO 为靶点的抗肿瘤药物 ,肿瘤细胞对 TOPO 抑制剂的耐药机制是复杂多样的 ,其中最主要的是 TOPO 基因突变和 TOPO 表达水平下降以及 TOPO 酶活性降低。笔者就近年来关于这方面的研究作一文献综述。1　 TOPO 及其抑制剂的作用机制人的 TOPO 是由 2 0号染色体上单拷贝基因编码的、分子量为 10 0 k Da的蛋白质。TOPO 催化 DN…     

DNA拓扑异构酶与肿瘤相关性研究

1　ＤＮＡ拓扑异构酶的生物学特性ＤＮＡ拓扑异构酶 (Ｔｏｐｏ)普遍存在于各类生物种群中 ,包括病毒、原生动物、真菌、植物、昆虫、两栖类、鸟类及哺乳动物的正常和肿瘤细胞中 ,是调节核酸空间结构动态变化 ,控制核酸生理功能的关键酶 ,其生理学特性与肿瘤相关性的研究引起人们的广泛关注拓扑性是指具有在形状或图像逐一连续变化时保持不变的特性。ＤＮＡ具有该性质。在闭环ＤＮＡ中 ,无论ＤＮＡ在双螺旋结构的基础上如何盘绕扭曲而构成复杂的空间结构 ,其碱基对组成、数目、顺序均不改变。ＤＮＡ的拓扑异构体分打结 (ｋｎｏｔｔｉｎｇ)与…     

DNA拓扑异构酶在卵巢癌细胞拓扑替康耐药中的作用

目的 探讨DNA拓扑异构酶(Topoisomerase,Topo)在卵巢癌拓扑替康(TPT)耐药细胞A2780/TPT中的作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测该细胞株对TPT、米托蒽醌(MX)、喜树碱(CPT)、阿霉素(ADM)、鬼臼乙叉甙(VP-16)、顺铂(cDDP)的耐药指数.Western blot法检测Topo Ⅰ及TopoⅡ的蛋白含量,超螺旋DNA松解法检测Topo Ⅰ的酶活性.结果 A2780/TPT细胞对Topo Ⅰ抑制剂TPT及CPT的耐药指数分别为25.1及3.1,对MX的耐药指数为19.0,对cDDP及Topo Ⅱ抑制剂ADM、VP-16仍保持敏感.耐药株的Topo Ⅰ含量约为亲本细胞的40%,且Topo Ⅰ活性下降(P<0.05),而TopoⅡ含量约为亲本细胞的2.2倍(P<0.05).结论 Topo Ⅰ含量的下降及TopoⅡ含量的增加是卵巢癌TPT耐药细胞对Topo Ⅰ抑制剂及Topo Ⅱ抑制剂产生不同药敏情况的原因.     

染苯小鼠体内DNA加合物的检测

应用同位素＾３２Ｐ后标记方法，对腹腔注射染苯小鼠外周血白细胞ＤＮＡ加合物进行检测。结果表明，苯在体内可形成至少２种加合物，并经Ｄ５层析排除了游离同位素产生的假斑。提示该方法对苯毒作用及致癌机理研究和对职业人群早期生物学监测具有重要意义。     

染苯小鼠体内DNA加合物的检测

应用同位素３２Ｐ后标记方法，对腹腔注射染苯小鼠外周血白细胞ＤＮＡ加合物进行检测。结果表明，苯在体内可形成至少２种加合物，并经Ｄ５层析排除了游离同位素产生的假斑。提示该方法对苯毒作用及致癌机理研究和对职业人群早期生物学监测具有重要意义。     

DNA拓扑异构酶与肿瘤药物治疗研究

DNA拓扑异构酶是广泛存在于生物体,能够调节核酸空间结构动态变化的、控制核酸生理功能的关键酶。其生理学特性及肿瘤化学药物方面的研究越来越引起人们的关注。研究发现DNA拓扑异构酶与肿瘤细胞耐药性有关,本文就此作一综述。 1.DNA拓扑异构酶的生物学特性及其功能大量研究证明,拓扑异构酶普遍存在于各类生物种群中,肿瘤细胞中也存在。可以调节DNA