使用PCR—SSP方法检测HLA—DR抗原

目的　采用顺序特异引物聚合酶链反应 (PCR -SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法 .方法　合成 2 9个特异性引物和 1对阳性对照引物 ,组成 2 0个PCR反应用于DR位点 ,建立一步法PCR -SSP .结果　所有样本PCR -SSP基因分型获得成功 ,分型结果经标准DNA ,限制性核酸内切酶分析证实符合 ,特异性和重复性 10 0 % .结论　PCR -SSP检测HLA -DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点 ,适合临床应用 .     

HLA-DR、DQ等位基因与精神分裂症相关性的研究

目的 证明HLA-DR、DQ等位基因与精神分裂症的发病密切相关。方法 HLA-DR、DQ等位基因检测：PCR-SSP分型。结果 发现在大连地区随机选择的精神分裂症患者的HLA-DQ8基因的频率(9．0％)明显高于正常对照(2．5％)。精神分裂症患者的HLA-DR、DQ等位基因的某些位点与免疫指标的改变有相关性。结论 ①HLA-DQ8基因与精神分裂症有关联，可以认为HLA-DQ8基因可能是精神分裂症的易感基因。②HLA-DR、DQ等位基因的某些组合可能是精神分裂症发病的危险组合模式，对预测精神分裂症的基因易感性具有潜在的应用价值。③精神分裂症的免疫指标的改变与HLA-DR、DQ等位基因的某些位点有相关性，说明精神分裂症与它的免疫指标的变化可能有内在的联系。     

HLA—B27的分型方法

本文综述了ＨＬＡ－Ｂ２７的分开型方法以及各种方法的优缺点。至今建立的ＨＬＡ－Ｂ２７分型方法有补体依赖性微量淋巴细胞毒法、流式细胞术法、玫瑰花法、等电聚焦法、酶陪免疫法和聚合酶链反应（ＰＣＲ）法。这些方法虽各有其特点，但ＰＣＲ法分型ＨＬＡ－Ｂ２７亚型将是未来的发展方向。     

顺序特异性引物聚合酶链反应技术对HLA-DR DNA的分型

目的：应用顺序特异性引物聚合酶链反应技术(PCR—SSP)进行临床肾移植供受者HLA—DR位点DNA的分型。方法：设计并合成HLA—DR位点16对特异性引物和1对阳性对照引物，建立PCR—SSP法，对52份临床肾移植供受者的外周血淋巴细胞样本进行DR位点基因的分型。结果与微量PCR—SSP基因分型试剂盒分型方法比较。结果：所有临床样本的PCR—SSP基因分型均获得成功，结果与微量PCR—SSP基因分型试剂盒分型方法完全相同，分型时间3h，特异性和重复性100％。结论：应用合成引物为临床肾移植供受者进行HLA—DR位点PCR—SSP基因分型简便快捷，重复性好，适合于临床应用。     

慢性乙肝病人外周血T细胞表面HLA-DR抗原的表达

本文采用单克隆抗体间接免疫荧光法,对15个慢性活动性肝炎病人以及1对照者外周血中T淋巴细胞膜表面的HLA-DR表达进行了测定。结果是慢性乙型活动性人外周血中的TDR~+细胞的百分率明显高于正常对照(P<0.001),并且增高的T细胞是以性细胞为主。     

HLA-B新等位基因B*9534的测序分析及其单链扩增技术的建立

目的 分析HLA-B新等位基因HLA-B*9534的核苷酸序列,并建立HLA-B * 9534单链扩增技术.方法 采用商品化快速抽提试剂盒抽提标本基因组DNA,采用PCR技术扩增先证者HLA-B基因的第1～8外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析第2、3、4外显子.应用序列特异性引物PCR建立HLA-B*9534单链扩增技术,获得HLA-B*9534等位基因的单链产物,并对单链产物进行第2、3、4外显子测序分析.结果 先证者标本存在2个HLA-B等位基因,直接测序结果经软件分析显示与最接近的HLA-B*1518和B*4601组合存在1个碱基不匹配,即第593位A/G杂合.单链扩增技术将先证者等位基因分离后,测序得到两个等位基因为HLA-B*4601和HLA-B*9534.与最接近的HLA-B*1518的第2～4外显子序列相比,HLA-B*9534仅在第3外显子存在一个碱基的不同,即第593位A→G的改变,导致第174位氨基酸天冬酰胺改变为丝氨酸,该等位基因序列已递交GenBank(EU046491),并经世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA-B*9534.结论 发现一个新的HLA-B*9534等位基因,建立的HLA-B*9534单链扩增技术是可行的.     

北方汉族过敏性紫癜与HLA相关性研究

为了研究过敏性紫癜（ＡＰ）的发病机理中是否有免疫遗传因素参与，采用国际通用的ＮＩＨ标准微量淋巴细胞毒试验方法检测４０例ＡＰ患者的ＨＬＡ－Ⅰ类抗原，并与１００例北方汉族正常人ＨＬＡ－Ⅰ类抗原频率进行比较。利用聚合酶链反应－序列特异性引物技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）对其中３０例ＡＰ患者进行ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型，并与１０４例北方汉族正常人的ＨＬＡ－Ⅱ类基因频率进行了比较。发现ＡＰ患者ＨＬＡ－Ａ３０＋３１、Ｂ１３、Ｂ３５、Ｂ４０抗原频率较对照组明显增高（Ａ３０＋３１：Ｐｃ＜０．０１，ＲＲ＝７．９７；Ｂ１３∶ＰＣ＜０．０１，ＲＲ＝６．００，Ｂ３５∶Ｐｃ＜１０－５，ＲＲ＝１０．４０；Ｂ４０∶Ｐｃ＜０．０５，ＲＲ＝３．８５）。ＨＬＡ－ＤＲ１０基因频率在ＡＰ患者较正常对照组明显增高（ＤＲ１０∶Ｐｃ＜１０－５，ＲＲ＝２１．８８），而ＨＬＡ－ＤＱ３、ＤＱ６基因频率较正常对照组明显降低（ＤＱ３∶Ｐｃ＜１０－５，ＲＲ＝０．１３；ＤＱ６∶Ｐｃ＜０．０５，ＲＲ＝０．２３）。提示ＡＰ与ＨＬＡ－Ａ３０＋３１、Ｂ１３、Ｂ３５、Ｂ４０、ＤＲ１０正相关，与ＨＬＡ－ＤＱ３ＤＱ６负相关。     

白血病患儿巨细胞病毒感染的PCR与抗原检测方法比较

目的 对不同种类标本应用ＰＣＲ检测巨细胞病毒（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）ＤＮＡ,并与外周血白细胞ＣＭＶ抗体检测比较,以了解ＰＣＲ方法在诊断白血病患儿活动性ＣＭＶ感染时的意义。方法 实验组为３１例白血病患儿,对照组为３１例免疫功能正常儿童,两组儿童的年龄、性别无差异。应用ＰＣＲ方法检测血清、尿液和脑脊液ＣＭＶ ＤＮＡ,间接免疫荧光方法检测外周血白细胞ＣＭＶ抗原,ＥＬＩＳＡ方法检测血清抗     

乙型肝炎病毒基因聚合酶链反应分型方法的建立

根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的Ｓ区序列设计了３条引物：ＨＢＳ１、ＨＢＳ２和ＨＢＳ３，与ＨＢＳ１和ＨＢＳ２配对，经２次聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。即可在检测有无ＨＢＶ－ＤＮＡ存在的同时对其基因型分类，可检出１０ａｇ的ＨＢＶ－ＤＮＡ，比免疫学方法更灵敏和特异。２５份不同亚型的标准血清中的绝大多数用Ｓ－ＰＣＲ和ＡＧＩＤ／ＲＰＨＡ的分型结果一致，Ｓ－ＰＣＲ的另一突出优越性的于能够对ＨＢｓＡｇ低滴度和阴性标本     

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增（阳性率为６６．７％）。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例（４０．０％），１８型１例（１０．０％），１６／１８型５例（５０．０％），未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。     

Detection of Isospora belli by Polymerase Chain Reaction Using Primers Based on Small-Subunit Ribosomal RNA Sequences

 The aim of the present study was to use small-subunit (SSU)-rRNA sequences of Isospora belli to design specific primer pairs and a hybridization probe for the detection of Isospora belli in human samples by PCR and Southern blot hybridization. PCR amplification with the primer pairs produced correct DNA fragments with target DNA from samples of Isospora belli-infected patients and from cloned SSU-rRNA of Isospora belli. The nature of the PCR products was confirmed by Southern blot hybridization. No amplification was seen with template DNA extracted from other parasites. Although Isospora belli infections can be easily diagnosed using light microscopy, molecular-based techniques may prove useful as an additional diagnostic tool.     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

Detection of MYCN Amplification in Serum DNA Using Conventional Polymerase Chain Reaction

Neuroblastoma (NB) is the most common extra-cranial solid tumor of childhood and is characterized by a wide range of clinical behaviors. Amplification of MYCN is a well-known poor prognostic factor in NB patients. As the MYCN amplification status is usually tested using tumor specimens, lengthy and invasive procedures are unavoidable. To evaluate the possibility of detecting MYCN amplification without invasive procedure, we performed conventional polymerase chain reaction (PCR) analysis to identify MYCN amplification using the preserved serum DNA. PCR of serum DNA was done in 105 NB patients whose MYCN status had been confirmed by fluorescence in situ hybridization. MYCN amplification was evaluated as the ratio of signal intensities between MYCN and NAGK (M/N ratio). When regarding the tissue FISH results as a reference, 10 patients had MYCN-amplified (MNA) NB, and 95 had non-MNA NB. The M/N ratio of the MNA group (median 2.56, range 1.01-3.58) was significantly higher than that of the non-MNA group (median 0.97, range 0.67-5.18) (P < 0.001). In the receiver operating characteristic curve analysis, the area under the curve was 0.957 (95% confidence interval 0.898–1.000; P < 0.001), and it showed 90.9% sensitivity and 97.9% specificity with the selected cut-off value set as 1.6. The detection of MYCN amplification using conventional PCR analysis of serum samples seems to be a simple and promising method to evaluate the MYCN status of NB patients. Further study with a larger set of patients is needed to confirm the accuracy of this result.     

Chronic Cystitis Caused by Corynebacterium urealyticum Detected by Polymerase Chain Reaction

 The case of a 73-year-old man with chronic cystitis due to Corynebacterium urealyticum was complicated by hematuria and urinary stone formation. The diagnosis was based on an amplification product obtained using polymerase chain reaction for mycobacterial species on urine and a bladder biopsy specimen. A specific 212 bp amplification fragment that did not hybridize with a Mycobacterium-specific probe was recognized. Sequence analysis of the fragment revealed Corynebacterium urealyticum. Routine urine cultures were negative, but prolonged culture on sheep blood agar led to the isolation and identification of Corynebacterium urealyticum. Identification was confirmed by polymerase chain reaction on the colonies. The patient was treated successfully with vancomycin. Integration of molecular laboratory diagnostics with conventional microbiology and pathology was synergistic for the diagnosis.     

改良聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎

目的：建立改良的聚合酶链反应的实验方法，快速诊断结核性脑膜炎。方法：应用二步控温洽酶链反应技术检测脑脊液结核杆菌微量ＤＮＡ。结果：经是 铲的４０例结核性脑膜炎聚合酶链反应扩增脑脊液ＤＮＡ全部阳性，２４例不明原因的中枢神经系统感染患者，１６例为阳性，而其它病原体引起的中枢神经系统感染和正常对照组均无扩增反应。结论：二步控温聚合酶链反应技术快速诊断结核性脑膜炎与传统的检验方法相比较，具有快速、敏感、高     

免疫捕捉PCR技术及其应用

通过免疫捕捉结合PCR扩增来检测微量抗原的方法称为免疫捕捉PCR,它的检测对象是完整的病原体,具有非常高的特异性和敏感性,在传染病的诊断、流行病学调查以及环境微生物的检测等诸多领域有着广阔的应用前景。