骨髓间充质干细胞治疗骨折不愈合的实验研究

目的 观察经股动脉注入骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells, BMSCs)治疗骨折不愈合的疗效。方法 选取27只体质量2.5±0.5kg普通级雄性新西兰兔,随机均分为3组:A组为经股动脉注入干细胞组,B组为局部注射干细胞组,C组为PBS对照组。所有动物建立股骨骨折不愈合模型后给予相应干预,定期监测外周血中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)水平的变化,骨折端影像学表现以及病理组织学改变。结果 A组和B组术后5天ALP水平较治疗前明显升高(P<0.01),术后7天OCN水平较治疗前明显升高(P<0.01),C组治疗前后基本不变,且A和C、B和C的组间ALP与OCN水平比较差异均有统计学意义(P<0.01),但A、B两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后4周时A组骨痂形成情况较B组好(P<0.05),但术后8周时差异无统计学意义,C组未出现明显骨痂。治疗后A、B两组骨折端新生骨生成并连接骨折两端,C组骨折断端不连续。结论 经股动脉注入BMSCs治疗新西兰兔骨不愈合的疗效显著,且在促进早期骨痂形成上,血管介入法的作用强于局部注射法。     

同种异体骨复合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死

目的 研究与探讨微创减压联合同种异体骨复合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的临床治疗效果。方法 2011年3月~2018年3月期间采用微创减压,彻底刮除股骨头坏死区死骨,将同种异体骨复合骨髓间充质干细胞植入坏死区治疗40例48髋青壮年股骨头缺血性坏死, ARCOⅡB 14例,ARCOⅡC 34例。分别对术前、术后3个月、术后6个月、术后12个月的髋关节功能进行对比分析和治疗效果评价。结果 2例3髋失访,38例45髋得到完整随访(ARCOⅡB 14例,ARCOⅡC 31例),平均随访时间1年以上,其中36例43髋患者髋关节无明显疼痛及活动受限,X线显示坏死区形成新骨,坏死病变面积减小或消失。2例髋关节病变范围扩大,出现股骨头塌陷,髋关节功能障碍,最后行人工关节置换术。术前患者髋关节Harris平均分为43.02±7.32分,术后3个月髋关节Harris平均分为61.51±6.18分,术后6个月髋关节Harris平均分为75.53±6.33分,术后12个月髋关节Harris平均分为85.33±5.11分,术后12个月髋关节Harris平均分与术前髋关节Harris平均分比较,属于较好。结论 同种异体骨复合骨髓间充质干细胞可防止股骨头病变发展和塌陷,预防股骨头坏死,可作为治疗青壮年股骨头坏死ARCOIIB-C的一种选择。     

应用浓缩骨髓干细胞技术治疗骨折不愈合

目的 探讨应用浓缩骨髓干细胞技术治疗骨折不愈合及延迟愈合的临床效果.方法 对21例骨折不愈合及9例骨折延迟愈合病人,对抽取的自体骨髓血利用密度梯度离心原理进行细胞分选,取得高浓度的骨髓干细胞悬液,经皮注射于骨折端周围.术后3周、2、3及6个月及术后1年复查X光片观察骨折愈合情况,以骨折线消失,病人完全负重,骨折局部无疼痛感为骨折愈合标准.结果 浓缩的骨髓干细胞悬液显微镜下单核细胞计数达到105个/mL以上26例;骨折愈合25例,愈合时间5个月～2年,平均6.5个月;骨折未愈合5例.全部病例无穿刺点感染及异常疼痛等并发症.结论 应用浓缩骨髓干细胞技术,经皮注入自体骨髓干细胞,是一种微创、安全、高效的治疗骨折不愈合的方法.     

微波对骨折愈合过程中骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的 探讨微波电疗法对骨折愈合过程中骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移能力的影响.方法 将30只SD大鼠建骨折模型后随机分成两组(对照组、实验组各15只),实验组微波治疗30 d,对照组不予治疗,采用X线平片观察第10天及第30天两组大鼠骨折愈合的情况;另取3只SD大鼠分离BMSC体外培养,对照组正常培养,实验组进行0.5 W/cm2微波照射60 min,采用划痕实验、transwell小室实验评价两组BMSC的迁移能力;采用Western-blot检测两组BMSC中HIF-1、VEGF、FGF、PDGF、IGF-1的表达.结果 X线平片结果表明照射第10天对照组与实验组射线相对密度分别为(0.81±0.10)和(0.94±0.13),差异有统计学意义(P=0.02),而第30天两组分别为(0.96±0.12)和(0.99±0.09),差异无统计学意义.划痕实验对照组距离基线迁移距离(192±15)μm,实验组迁移距离(430±21) μm,差异具有统计学意义(P=0.01).Transwell小室实验对照组迁移细胞数(68±18)个,实验组迁移细胞数(112±25)个,差异具有统计学意义(P=0.02).Western blot结果表明,与对照组比较,实验组BMSC中HIF-1及VEGF表达显著升高(均P＜0.05),而FGF、PDGF、IGF-1表达两组间差异不显著.结论 微波可能通过促进骨髓间充质干细胞迁移而影响骨折愈合.     

骨髓间充质干细胞对大鼠骨质疏松股骨干骨折早期愈合影响的实验研究

目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠骨质疏松股骨干骨折早期愈合的影响.方法:骨质疏松大鼠股骨干骨折模型随机平分为三组,模型组、尼尔雌醇组与BMSCs组.模型组给予灌胃生理盐水,尼尔雌醇组给予灌胃尼尔雌醇,BMSCs组经尾静脉注入第三代BMSCs.两组都治疗观察4周,记录股骨干骨折早期愈合情况.结果:尼尔雌醇组...     

补肾填精法对兔骨折后不同时相骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的观察补肾填精中药对兔骨折后不同时点骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)分化为成骨细胞的影响。方法将20只白兔随机分成4组,即正常对照组、骨折模型组、中药治疗组、西药治疗组。分离培养骨折端BMSCs,取P3代BMSCs并向成骨细胞诱导分化,分别采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒、骨钙素(osteocalcin,OCN)试剂盒检测ALP活性、OCN水平。结果随着用药时间的延长,各骨折组ALP活性和OCN水平均逐渐增强。在骨折后第14、21天,中药治疗组ALP活性、OCN水平均高于其他3组。结论补肾填精法可促进兔骨折后不同时点BMSCs向成骨细胞分化。     

异体骨髓间充质干细胞移植治疗阿霉素性心肌病

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）移植后对阿霉素心肌病心脏功能的影响。方法健康日本大耳白兔随机分为3组：①细胞移植组（n=10）;②生理盐水注射组（n=10）;③正常组（n=7）。前2组动物用盐酸阿霉素静脉注射（1 mg/kg 2次/周共8周）诱导阿霉素心肌病模型。分离培养BMSC,模型诱导成功后的第2周采用直接注射途径将BMSC移植到心肌内,移植后2周评价各组动物的心脏结构和功能,并用HE染色观察阿霉素心肌病模型的心肌细胞的病理改变。结果静脉注射阿霉素可以引起心肌细胞的肥大,空泡变性以及坏死,导致心腔扩大、心脏功能下降。细胞移植2周后,细胞移植组与生理盐水组相比心脏功能有明显的改善,EF、LVAW、LVPW、LVSD、LVDD明显提高（P≤0.05）;LVDP、HR显著降低（P≤0.05）。结论BMSC移植到阿霉素性心肌病模型中能改善受损的心脏功能。     

骨髓间充质干细胞的研究进展

<正>骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是来源于中胚层的具有多向分化潜能的干细胞,主要存在于全身结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量最多,胎儿脐血中亦可分离得到。在一定的诱导条件下,BMSCs具有向中胚层细胞分化的能力;另外,BMSCs还能够支持造血,对造血干     

骨髓间充质干细胞的研究进展

骨髓间充质干细胞(MSCs)是目前倍受关注的一类具有多向分化潜能的成体干细胞,其广泛分布于各种不同的组织中,如骨髓、外周血、脐血、脂肪、胎肺、胎肾等组织。MSCs可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、肌肉细胞等多种组织细胞。另外,MSCs还能够支持造血,对造血干细胞有扩增作用,共移植造血干细胞和MSCs可以促进造血干细胞的植入。临床上MSCs可望应用于组织工程、细胞工程、基因治疗、细胞因子替代治疗等领域[1]。本文对MSCs的来源、生物学特性、分离纯化与培养、多分化潜能以及应用前景作一综述。1来源1.1骨髓:目前…     

自体骨髓间充质干细胞介入移植治疗脑梗死临床研究

目的:观察应用自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)介入移植治疗脑梗死的临床疗效和安全性。方法:选择脑梗死患者120例,随机分为干细胞移植组和对照组各60例。对照组给予常规药物治疗,治疗组在常规药物治疗基础上给予重组人粒细胞集落刺激因子150μg皮下注射,待血常规白细胞升高达30×109/L左右后可抽取自体骨髓200 ml。自体骨髓经干细胞分离试剂盒处理获取间充质干细胞。采用自体骨髓间充质干细胞进行干细胞介入移植术,将间充质干细胞超选入脑病变供血动脉。于治疗前、治疗后1个月、6个月进行神经功能FIM评分,应用国际通用的功能独立性评定量表评定其运动和认知能力。结果:120例患者全部进入结果分析,移植组治疗后1个月、6个月功能独立性评定量表评分显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),两组均无不良反应发生。结论:BMSCs移植可以一定程度地改善脑梗死患者症状,提高脑梗死患者的运动和认知功能,自体骨髓干细胞移植是安全有效的。     

人骨髓间充质干细胞端粒酶活性的表达

目的:探讨人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)端粒酶活性的表达以及深低温冻存和向脂肪细胞诱导分化对基因表达的影响.方法:联合应用密度梯度离心法和贴壁培养法分离人hMSCs,传代培养.深低温冻存hMSCs或诱导其向脂肪细胞分化,以TRAP(Telomerase repeat amplification protocol assay) 法分别检测新鲜的不同传代次数的hMSCs、冻存复苏后培养的hMSCs和诱导分化为脂肪细胞的hMSCs的端粒酶活性.结果:用TRAP法检测hMSCs(n=19)端粒酶活性(RTA)是(1.46±0.67)%,分化成脂肪的hMSCs(n=3)的RTA为(11.80±2.52)%(P<0.001);不同传代次数MSCs端粒酶活性的比较中,早期hMSCs(n=10)的RTA为(1.46±0.83)%,晚期hMSCs(n=9)的RTA为(1.46±0.47)%(P=0.99);在低温冻存对hMSCs端粒酶活性的影响中,新鲜的hMSCs(n=13)的RTA为(1.41±0.44)%,低温冻存的hMSCs(n=6)的RTA为(1.57±1.07)%(P=0.64).结论:hMSCs的端粒酶呈阴性,传代培养和低温冻存不影响基因表达水平.向脂肪细胞分化后hMSCs端粒酶活性表达水平增高,其确切机制尚需进一步研究.     

骨髓间质干细胞的体内成骨特性

目的:观察大白鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)的体内成骨方式,研究新生骨组织的生物学特点、形态及骨基蛋白的表达.方法:取2月龄SD大鼠的胫骨及股骨骨髓进行培养,体外培养的BMMSCs经成骨诱导剂诱导后分别与羟基磷灰石磷酸三钙陶瓷(hydroxyapatite/tricalcium phosphate ceramics, HA/TCP)、羟基磷灰石磷酸三钙陶瓷加藻酸钠(alginate sodium, AS)移植入BALB/C裸鼠皮下.2个月后取出种植物,组织切片观察成骨方式及成骨类型.用免疫组化法对新生骨骨基质蛋白的表达进行检测.结果:BMMSCs + HA/TCP与BMMSCs + HA/TCP +AS均为膜性骨发生,2个月内所成的骨为层板骨.此方法所成骨的骨涎蛋白、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原均有表达.结论:BMMSCs通过HA/TCP以膜性骨发生方式成骨,2个月内成的骨为层板骨.所成的骨与胚胎发育的骨在骨涎蛋白、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原的表达无区别.     

清创Ⅰ期植骨治疗胫骨感染性骨不连

目的：探讨胫骨感染性骨不连的治疗。方法：采用彻底清创，Ⅰ期植骨的方法对38例患者进行治疗。结果：38例中，35例感染控制达到骨性愈合，3例失败，其中感染复发2例，骨不连1例。结论：彻底清创，Ⅰ期植骨是治疗胫骨感染性骨不连的可行方法。     

端粒酶活性在骨髓间充质干细胞中的表达

目的：探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells MSCs)端粒酶活性的表达并检测其部分生物学特性。方法：取正常成人骨髓用含10%新生牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增。流式细胞仪行细胞表面抗原检测,细胞化学染色鉴定其生物学特性,观察其在地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C特定培养条件下向成骨细胞分化的能力,采用TRAP（Telomerase repeat amplification protoco1 assay)-银染法测定其端粒酶的活性。结果：分离培养获得的贴壁细胞,碱性磷酸酶染色阳性。流式细胞仪检测CD34、CD45呈阴性表达,CD29、CD44呈阳性表达。经向成骨细胞诱导3周后,可得到成骨细胞,经茜素红染色得到证实。TRAP-银染法证实MSCs表达一定的端粒酶活性。结论：体外分离培养的MSCs可以向成骨分化,表达一定的端粒酶活性,具有干细胞的特性。     

体内外环境对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响

目的:探讨体内外环境对骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的影响.方法:①DAPI体外标记MSCs后,直接注入大鼠大脑中动脉梗塞(MACO)模型(n=6)的脑内,2周后取脑组织,用免疫荧光检测MSCs来源细胞的巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.②体外用全反式视黄酸(ATRA)预诱导24h后,换用改良的神经细胞培养基(MNM)培养18h,免疫组化检测nestin、MAP-2、GFAP的表达.结果:①植入2周后,MSCs在注射部位及其周围广泛分布,仅有少许细胞表达nestin、MAP-2和GFAP.②MSCs在体外诱导后,nestin、MAP-2的阳性率分别为(92.3±3.4)%和(89.6 3.3)%,但不表达GFAP.结论:MSCs在脑内向神经细胞转化的转化率较低,而在体外转化为神经元的转化率相当高,体内外环境对MSCs向神经细胞的分化的过程及机理存在较大差异.     

胫骨骨不连髓内钉固定植骨与钢板内固定植骨治疗的探讨

目的：分析髓内钉固定植骨与钢板内固定植骨治疗胫骨骨不连的临床疗效。方法：选择胫骨骨不连患者50例作为研究对象,分为髓内钉固定植骨的观察组与钢板内固定植骨的对照组,比较两组患者的治疗效果。结果：观察组患者接受治疗后的临床疗效明显优于对照组患者（P〈0.05）;两组患者接受治疗的平均手术时间差异无统计学意义（P〉0.05）,观察组患者的平均住院时间及愈合时间均明显短于对照组患者（P〈0.05）;观察组患者的日常生活活动能力以及关节功能评分均明显高于对照组患者（P〈0.05）。结论：髓内钉固定植骨治疗胫骨骨不连可以取得更佳的临床效果,具有积极的临床意义。     

桡骨远端逆行带血管蒂植骨治疗舟状骨骨不连

目的探讨桡骨远端逆行带血管蒂植骨治疗舟状骨骨不连的疗效。方法从2003年3月—2009年5月我科收治舟状骨骨折骨不连病人16例,采用桡骨远端逆行带血管蒂植骨的方法进行治疗。结果平均随访时间12月,采用Herbert和F isher的舟骨骨折分级评价系统,所有病人骨折愈合,平均愈合时间2月,有较高的满意度和好的临床结果。结论桡骨远端逆行带血管蒂植骨治疗舟状骨骨折骨不连疗效好,可以作为治疗舟状骨骨不连的首选方法。     

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的技术探讨

①目的 探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记骨髓间充质干细胞的可行性。②方法 利用密度为1．073g／mL的Percoll分离骨髓的单核细胞，以含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs细胞，纯度可达95％左右。用BrdU标记骨髓间充质干细胞24、48、72和96小时后的检测标记率。③结果 随着标记时间的延长，标记率逐渐增高，标记72小时后标记率在85％以上。④结论 用BrdU标记骨髓间充质干细胞的最佳时间是72小时，最佳浓度为10μg／mL。     

人类胎儿骨髓间充质干细胞的白细胞抗原表达特征

目的:对体外培养不同代数流产胎儿骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)的人类白细胞抗原Ⅰ类(human leukocyte antigen,HLA-Ⅰ)和HLA-Ⅱ类抗原表达情况以及经过不同浓度干扰素γ(IFN-γ)作用后HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达变化进行观察,为建立干细胞库进行细胞移植提供体外实验证据.本研究经北京大学医学部伦理委员会批准.方法:胎儿MSCs取自23～24周流产胎儿,体外培养后取第5和第12代的细胞,流式细胞仪分析HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达水平.经过终质量浓度为5 μg/L或50 μg/L的IFN-γ处理后,于24,48,72,96,120 h 检测HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达;并用RT-PCR方法定性分析第13代细胞HLA-E和HLA-G的mRNA表达.结果:胎儿骨髓MSC表达HLA-Ⅰ类抗原,几乎不表达HLA-Ⅱ类抗原.IFN-γ可以上调MSCs的HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原.流式细胞分析显示HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞占总细胞的比例超过50%,但HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞不到10%.经过50 μg/L的IFN-γ处理后,第5代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度与未经处理的细胞相比明显增加,且荧光强度随时间延长呈现递增趋势.第12代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度的上调幅度明显低于第5代细胞.相同浓度IFN-γ(50 μg/L)作用于第5代和第12代细胞均可上调HLA-Ⅱ类抗原,第5代细胞于48 h开始上调(59.9%),第12代细胞于72 h开始上调(48.1%).第12代细胞HLA-Ⅱ类抗原上调幅度低于第5代细胞.不同浓度IFN-γ(5 μg/L和50 μg/L)处理后,HLA-Ⅰ类抗原和HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞百分率均明显增加.RT-PCR结果显示,胎儿骨髓MSCs有HLA-E和HLA-G抗原的mRNA水平表达.结论:胎儿骨髓MSCs可以被IFN-γ诱导上调HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原表达.体外培养传代能减低IFN-γ作用后的抗原上调幅度.胎儿骨髓MSCs具有HLA-E和HLA-G抗原的mRNA的表达.     

同种异体胎颅骨结合碱性成纤维细胞生长因子移植治疗骨不连

目的寻找一种治疗骨不连接所需植骨材料,利用碱性成纤维细胞生长因子的活性诱导作用,促进骨修复.方法13例成人骨不连患者,选择4-10个月龄胎颅骨（FCB）作可吸收载体,结合碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）制备成复合碱性成纤维细胞生长因子胎颅骨（bFGF/FCB）,植入受骨区,以适当的内固定重新构建骨修复支架.结果所有患者均得到骨性修复,且成骨效应明显.结论胎颅骨作为植骨材料既可以起到植骨作用,增大植骨面,增加骨再生诱发点,屏蔽了骨断面,也避免了自体植骨的手术创伤;碱性成纤维细胞生长因子可以诱导和促进骨修复,二者复合物是治疗骨不连接的一种较好材料.