中国人手足裂畸形患者中染色体10q24.3区域DNA重复突变的鉴定

目的鉴定一个中国人手足裂畸形（SHFM）家系的致病突变，揭示该家系中手足裂畸形发生的分子遗传基础。方法回顾家系（4代共5例患者）中3例患者已有X线检查资料，补拍畸形手足外观照片。采集其中2例患者外周血进行高分辨G显带核型分析。从现有4名家系成员（包括3例患者）外周血样品中提取基因组DNA。针对TP63基因全部16个外显子（包括外显子／内含子交界区）设计并合成引物，以1例患者基因组DNA为模板进行聚合酶链反应（PCR）扩增和产物直接测序。在已知的5个SHFM位点染色体区域选择微卫星标记，通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析家系成员的基因型。对染色体10q24．3区域SHFM3位点内微卫星标记的多态片段进行测序分析，比较患者和基因型相同的正常对照个体不同等位片段测序峰高度的差别。结果家系中现存3例患者双手均为桡侧指／掌骨缺失，2例患者双足表现中央轴趾／跖骨缺失，1例患者双足仅剩腓侧趾／跖骨，都符合典型手足裂畸形的临床表现。对患者进行高分辨G显带核型分析，未见染色体数目异常或结构畸变；对患者DNA进行TP63基因测序，未发现突变。通过检测微卫星标记进行基因型分析，发现患者在SHFM1、SHFM4和SHFM5三个位点不表现单体型共享，而在SHFM2和SHFM3两个位点则共享某一单体型，提示本家系中手足裂畸形表型可能由SHFM2或SHFM3位点的突变引起。进一步分析SHFM2和SHFM3两个位点微卫星标记的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果，发现患者在SHFM3位点的患者共享等位片段呈现信号增强现象。以相同基因型正常人为对照个体进行微卫星标记的比较测序分析，发现患者间共享等位片段的测序峰在患者中增高约1倍。以上结果表明，本家系患者发生了SHFM3位点内的DNA重复。结论、首次在中国人手足裂畸形患者中发现染色体10q24．3区域DNA重复突变。     

中国人遗传性并指畸形家系HOXD13基因突变鉴定

目的:研究一个中国人并指(趾)畸形(synpolydactyly,SPD)家系,检测家系成员中是否存在同源盒D13 基因(homeobox D13,HOXD13 )突变.方法:采集SPD 患者及其家系成员的外周血,提取基因组DNA,设计针对HOXD13 基因特异性引物,进行PCR 扩增,产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测,并进行测序鉴定.结果:本家系3代共23人, 6人患病,研究发现患者HOXD13 基因第一个外显子中多聚丙氨酸链由15个延长至22个,第二个外显子基因序列正常.结论:首次揭示中国人并指(趾)畸形家系HOXD13 基因存在多聚丙氨酸延展增加7个丙氨酸的突变形式,表明一定数目的丙氨酸延展可能是导致并指(趾)畸形的重要因素.     

3个新疆维吾尔族先天缺牙家系 AXIN2基因突变的检测

目的：探讨新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙患者标本中轴抑制基因-2（AXIN2）的突变位点,为研究维吾尔族人群中先天缺牙疾病的发病机制提供基因学参考和依据。方法通过临床先证者找到3个新疆维吾尔族非综合征型先天缺牙家系9例患者,在患者及其家属知情同意的情况下,采集家系成员颊黏膜拭子,提取目的基因组 DNA,采用聚合酶链反应技术,对分段纯化的 PCR 产物进行 DNA 双向测序检测患者的 DNA。结果3个维吾尔族家系的非综合型先天缺牙临床表型符合常染色体显性遗传规律,患者出现不同数量的缺失牙或同时伴发锥形牙。测序后检测出病例Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的 AXIN2基因在外显子2的第264位和第547位、外显子6的第162位与外显子11的第922位和第1141位有突变。结论AXIN2基因片段中某些编码基因的改变可能与维吾尔族单纯型先天缺牙存在相关性。     

新疆3个家系HCM基因突变检测分析

目的：研究家族性肥厚型心肌病（HCM）的主要致病基因β肌球蛋白重链（MYH7）突变位点。方法：对3个HCM家系成员的MYH7基因3~23外显子及附近上下游序列采用DHPLC及直接测序分析。结果：P、L、Y三个家系的先证者具有MYH7基因错义突变,测序结果显示：发现三个家系患者MYH7基因均有一定的突变。P家系21号患者MYH7基因测序结果分析发现外显子3存在密码子Thr63第三位密码子c〉t转换及19号内含子第90位的a〉g的转换。L家系发现外显子3存在Thr63第三位密码子c〉t转换,并且,第14外显子有单碱基突变,造成Thr 441M et,在中国人中是首次发现。Y家系其他成员测序结果发现携带有第8外显子最后一位碱基存在t〉c突变。结论：MYH7基因在HCM家系中具有较高的突变率,不同突变基因型以及基因突变携带个体在临床表型上有所差异。采取基因突变检测和分析,有利于对HCM家族成员的诊断、患病风险预测及疾病早期预防和治疗。     

PAX6基因R203X无义突变导致家族性先天无虹膜

目的探讨一个先天性无虹膜家系致病的分子基础。方法对一个先天性无虹膜家系进行全面的眼部检查,采集该家系的4例患者和两名健康成员外周静脉血,提取基因组DNA。采用DNA直接测序的方法分析无虹膜候选致病基因PAX6的14个外显子及其外显子-内含子拼接部的序列。结果该家系患者PAX6基因第8外显子存在一个杂合性突变c.C607T,导致编码蛋白在203位的精氨酸(p.R203X)处提前终止,产生一个变异蛋白;而家系正常成员未发现此突变,表型与突变位点呈共分离。结论 c.C607T(p.R203X)突变是PAX6基因导致无虹膜的突变热点之一,也存在于中国无虹膜家系中。     

迟发型先天性厚甲家系角蛋白17基因新突变位点的检测

目的探讨一迟发型先天性厚甲家系角蛋白17基因突变和临床表现的关系,为先天性厚甲的基因诊断和基因治疗奠定基础。方法用巢式PCR扩增了迟发型先天性厚甲家系中9例患者、1名正常人及与该家系无关的50名正常人外周血基因组：DNA角蛋白17基因第1外显子热点突变区,对PCR产物进行DNA序列分析。结果迟发型先天性厚甲家患者的角蛋白17基因第109位密码子由AAC突变为GAC,结果导致天冬酰胺由天冬氨酸替代(即N109D)。而该家系中的正常人及与该家系无关的50名正常人的DNA测序结果均未发现此突变。结论该家系存在角蛋白17N109D突变,为一新的错义突变。角蛋白17 1A区后半部的突变可表现为迟发型先天性厚甲Ⅱ型。     

先天性无虹膜家系致病基因的突变检测

目的 对一常染色体显性遗传的先天性无虹膜( AN)家系进行PAX 6基因突变筛查,以确定其致病基因及致病突变.方法 收集一常染色体显性遗传的AN家系,采集该家系患者、家族健康成员外周静脉血,提取基因组DNA,应用聚合酶链式反应( PCR)方法扩增PAX 6 基因exon 4 ~exon 13共11个外显子以及外显子-内含子拼接部,将纯化后的PCR扩增产物直接测序,运用DNAStar软件(综合性序列分析软件)对测序结果进行序列分析,检测PAX 6基因的突变类型,并与80名随机抽取的与该家系无血缘关系的健康人PAX 6基因序列进行比对. 结果 该家系患者PAX 6 基因exon 11存在一个杂合突变c. 949 C>T(P. R 317 X),导致第317位精氨酸的密码子CGA被终止密码子UGA替代,造成编码PAX 6蛋白的过早终止,而该家系其他健康成员及80名与该家系无血缘关系的健康对照组成员均未检测到该突变. 结论 PAX 6基因c. 949 C>T( P. R 317 X)突变导致PAX 6蛋白提前编码终止是该常染色体显性遗传先天性无虹膜家系的致病原因.     

转录因子GATA-4突变在心脏圆锥动脉干畸形患儿中的研究

目的：研究心脏圆锥动脉干畸形患儿新的分子病因。方法：收集48例圆锥动脉干畸形患儿和100例健康对照者外周血标本,使用血液基因组DNA抽提试剂盒抽提外周静脉血基因组DNA。应用聚合酶链反应扩增GATA-4基因6个外显子编码区和邻近序列后分别直接测序,借助BLAST程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对以识别基因突变。结果：在1例永存动脉干患儿GATA-4基因识别出1个错义突变,即第267位的密码子由GTG变为ATG,亦即c．799G〉A（P．V267M）。结论：转录因子GATA-4基因c．799G〉A（P．V267M）突变可能与圆锥动脉干畸形的发生有关。     

常染色体显性遗传性听神经病MPZ基因序列分析

目的:了解MPZ基因是否与1个常染色体显性遗传性听神经病中国家系的发病相关.方法:选择1个现存3代9人的常染色体显性遗传性听神经病家系为研究对象,用基因组DNA抽提试剂盒提取外周血DNA.首先.对所有家系成员DNA进行MPZ基因第3外显子的PCR扩增,扩增产物经纯化后直接测序;然后,采用相同方法对1名家系听神经病患者进行MPZ基因全部6个外显子的PCR扩增和测序分析.测序结果与标准序列对照进行突变检测.结果:所有研究对象的基因区域均扩增成功,序列分析在MPZ基因第3外显子上未检测到Thr124Met和Tyr145Ser 2个已知的突变,整个MPZ基因编码区也未见新的致聋突变.结论:该家系成员MPZ基因上未发现有意义的突变位点,提示新基因参与家系耳聋的发生.     

甘肃地区一个遗传性痉挛性截瘫家系spastin基因的突变分析

目的 对甘肃地区一个常染色体显性遗传性痉挛性截瘫(HSP)家系spastin基因突变进行分析.方法 应用聚合酶链反应一单链构象多态性结合DNA序列分析方法,检测该家系中9名患者spastin基因突变.结果 该家系中9名患者均出现异常单链构象多态性电泳带,经DNA测序证实为第8号外显子第1288位核苷酸存在碱基A被碱基G置换.结论 该家系HSP致病基因为spastin在第8号外显子第1 288位核苷酸发生错义突变,碱基A被碱基G置换,氨基酸改变K388R.     

颅内海绵状血管畸形CCM1基因突变的分析

目的探讨颅内海绵状血管畸形（ICM）患者CCM1基因突变的情况。方法收集经手术病理证实的ICM患者25例,均为汉族,其中家族性ICM7例。以30例正常健康人作为对照组。抽取两组对象的静脉血,提取基因组DNA、PCR,扩增CCM1基因8、9、11、12、13、15、16、17、18号外显子及部分两侧相邻的内含子、DNA测序,结果与GenBank比较。结果ICM患者中有11例被检测出7个新的CCM1基因突变,突变率为44％（11／25）。其中错义突变3个：12号外显子,1160A→C（Q387P）、1172C→T（S391F）;13号外显子,1405A→C（N469H）,插入突变2个：8号外显子,704insT（K246stop）;18号外显子,2138insG（T733stop）,内含子突变1个：IVS12-4C→T,同义突变1个：17号外显子,1875C→T（F625F）。除了1875C→T的同义突变可能为基因多态性以外,其他被发现的CCM1基因突变均导致编码KRIT蛋白的变化。对照组的CCM基因未检测出异常。家族性ICM的CCM1基因突变率高于散发性ICM,两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论国人ICM患者同样存在CCM1基因的突变,导致编码的KRIT1蛋白功能改变或缺失,这与ICM发病相关,是ICM发病的遗传学基础。     

家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变位点的检测

目的：探讨早老素－1基因突变在家族性阿尔茨海默病（FAD）发病中的作用。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）、变性高效液相（DHPLC）及DNA直接测序技术检测技术,对130人的阿尔茨海默病（AD）家系和50例正常对照组的早老素－1（PS－1）基因第4、5外显子进行了检测。结果：在早老素基因的第5外显子上发现除5例AD患者外,还有4例家系内正常人（Ⅳ－30、37、41、43）PCR－SSCP出现泳动异常。DHPLC检测进一步验证以上9例均表现双峰,提示可能有突变存在。DNA序列分析表明,这9例的早老素－1基因第5外显子的136号密码子发生了GCT→GGT错义突变,使氨基酸由丙氨酸变为甘氨酸（Ala136Gly);第4外显子未发现突变。家系内其他人及正常对照组的PS1基因第4、5外显子经以上检测均未发现异常。结论：PS1基因第5外显子的突变点可能为中国FAD患者早老素基因突变位点之一。     

Mutation analysis of p63 gene in the first Chinese family with ADULT syndrome

Background ADULT syndrome （acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth syndrome） is a rare ectodermal dysplasia disorder known as autosomal dominant inheritance. Recent studies have linked p63 gene mutation to the development of this disease. However, the genetic characteristics of ADULT syndrome were still not well understood. Methods Mutation analysis of p63 gene in the first Chinese ADULT syndrome family was performed using direct DNA sequencing. Results The sequence analysis of exon 8 of p63 gene disclosed a heterozygous G〉A substitution at nucleotide 893 （R298Q） in the proband. In addition, a single nucleotide polymorphism （SNP） rs16864880 in the downstream flanking region （DFR） of p63 exon 8 was also identified in this family. The proband and the paternal side including her father exhibited the C/G genotype at this position. The C/G variant frequency in the paternal was significantly higher as compared with the maternal （6/10 vs 0/6, P=0.034）. Conclusions ADULT syndrome may be caused by the p63 gene mutation, and it might have closer genetic association with the paternal side in this family.     

Wilson病ATP7B基因突变研究

目的：研究肝豆状核变性（WD）ATP7B基因常见突变种类和形式,以期建立WD的ATP7B基因突变热点的检测平台。方法：提取30名WD患者外周血基因组DNA,聚合酶链反应（PCR）扩增ATP7B基因第5、8、12号外显子,并进行DNA直接测序。结果：30例WD患者共检测到6种ATP7B基因突变,均为点突变,8号外显子检测到5种突变,突变频率40.00%;12号外显子检测到1种突变,突变频率23.33%;5号外显子未检测到突变。结论：ATP7B基因第8和12号外显子可能是WD基因突变热区,以Arg778Leu和Arg952Lys为高频突变位点,WD患者的基因突变检测应首选第8和12号外显子。     

R25G mutation in exon 1 of LMNA gene is associated with dilated cardiomyopathy and limb-girdle muscular dystrophy 1B

Background Mutations of the LMNA gene encoding lamin A and C are associated with dilated cardiomyopathy （DCM）, conduction system defects and skeletal muscle dystrophy. Here we report a family with a mutation of the LMNA gene to identify the relationship between genotype and phenotype. Methods All 30 members of the family underwent clinical and genetic evaluation. A mutation analysis of the LMNA gene was performed. All of the 12 exons of LMNA gene were extended with polymerase chain reaction （PCR） and the PCR products were screened for gene mutation by direct sequencing. Results Ten members of the family had limb-girdle muscular dystrophy （LGMD） and 6 are still alive. Two patients suffered from DCM. Cardiac arrhythmias included atrioventricular block and atrial fibrillation; sudden death occurred in 2 patients. The pattern of inheritance was autosomal dominant. Mutation c.73C〉G （R25G） in exon 1 encoding the globular domains was confirmed in all of the affected members, resulting in the conversion of arginine （Arg） to glycine （Gly）. Conclusions The mutation R25G in exon 1 of LMNA gene we reported here in a Chinese family had a phenotype of malignant arrhythmia and mild LGMD, suggesting that patients with familial DCM, conduction system defects and skeletal muscle dystrophy should be screened by genetic testing for the LMNA gene.     

Study of Mutation in Tyrosine Protein Kinase of Insulin Receptor Gene in Patients with Polycystic Ovarian Syndrome

Objective To explore the molecular mechanism of insulin resistance in the patients with polycystic ovarian syndrome (PCOS ) Methods Polymerase chain reaction, silver staining-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP ) and DNA direct sequencing were used to detect the mutation of insulin receptor (INSR) gene in exon 17～21 with the abdominal wall adipose tissue from 31 patients with PCOS (PCOS Group) and 30 patients with pure hysteromyoma in reproductive lift (Control Group).Results Twenty-two variant SSCP patterns in exon 17 of INSR gene were detected.Direct sequence analysis of exon 17showed that homozygous nonsense mutation was two alleles single nucleotide polymorphism (SNP) at the codon 1058 ( CAC→CAT). Exons 18～21 were not detected with any significantly mutation. The INSR gene His^1058C→T substitution collecting rate and insulin resistance were significantly higher in the PCOS group than in the control group (P=0. 0293, P＜0. 05, P＜0. 01).Conclusion It is suggested that the SNP in codon 1058 of the INSR gene might be related with the insulin resistance in PCOS patients, which has hereditary tendency.And the missense mutation,nonsense mutation and frameshi ft mutation at exons 18～21 in tyrosine protein kinase region of INSR gene for PCOS patients were not frequently observed.     

P53 Gene Mutations in Non-Hodgkin's Lymphoma

ＳｏｆａｒＰ５３ｇｅｎｅｉｓｓｔｉｌｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒ－ｔａｎｔｇｅｎｅｅｖｅｒｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｔｏｓｕｐｐｒｅｓｃａｎ－ｃｅｒ．Ｉｔｉｓｏｎｈｕｍａｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７Ｐ１３．１,ｅｎｃｏｄｅｓ５３ｋｕｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ...     

表皮松解性角化过度鱼鳞病COL7A1基因突变研究

目的探讨一个表皮松解性角化过度鱼鳞病家系基因的突变。方法提取表皮松解性角化过度鱼鳞病患者及家族成员的基因组DNA，采用PCR扩增COL7A1基因所有的外显子及其邻近的剪切点并进行双向直接测序，用PCR检测突变位点从而进一步确定家系的致病原因。结果发现患者COL7A1基因的一条等位基因第2号外显子上存在S48P的错义突变，而另一条等位基因第27号外显子上存在3625del 11缺失突变，造成编码区阅读框架的移位，最终导致蛋白终止密码（PTC）的生产。结论COL7A1基因的缺失突变和锆义突变引起该患者临床症状的特异突变。     

P53 gene mutations in non-Hodgkin’s lymphoma

Summary To understand P53 gene change of non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) and human malignant lymphoma cell lines, the exons 5–7 of 29 patients with NHL and 9 kinds of human malignant lymphoma cell lines were studied by silver staining PCR-SSCP technique. Three cases of P53 gene point mutation was found in 29 cases of NHL. Mutation developed in exon 5 in 2 cases, and in exon 6 in 1 case. They were all diffuse lymphoma. In mutation cases, B-cell lymphoma accounted for 2 cases and the other one was T-cell lymphoma. There was no P53 gene mutation in low-grade follicular lymphoma. Seven strains out of 9 kinds of lymphoma cell lines had P53 gene point mutation. One strain had the mutation in exon 5; 5 strains in exon 6 and 1 strain in exons 5, 6, 7. There was a high mutation rate in lymphoma cell lines and low mutation rate in NHL patients. P53 gene plays an important role in lymphoma cell line establishment, cell regeneration and disease evolution. This project was supported by national initiative programs for scholars coming back from other countries (No. 95–135).