冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和功能变化

目的:观察冠心病患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)数量和功能的改变.方法:选择冠心病患者和非冠心病患者各20例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白(fibronectin)包被培养板,培养7d后贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC.采用MTT比色法、改良的Boyden 小室和粘附能力测定实验,观察EPC的增殖能力和迁移能力及粘附能力.结果:冠心病患者外周血EPC数量明显减少(31.8±7.7 vs 59.5±10.6 EPCs/×200视野,P<0.05),且冠心病患者外周血EPC的粘附能力和迁移能力及增殖能力也明显受损.结论:冠心病患者外周血内皮祖细胞数量减少、功能减退.     

冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞功能的改变

目的:观察冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的改变。方法:选择30例冠状动脉造影证实为慢血流的患者为CSF组,冠脉造影血流正常的患者30例为NCF组。以校正TIMI帧数>27,诊断为冠状动脉慢血流。采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养1周,在显微镜下计数,并观察EPCs增殖能力、迁移能力、黏附能力。结果:CSF组外周血EPCs数量及增殖、迁移、黏附能力均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSF患者外周血EPCs功能降低可能参与CSF现象发生的病理生理过程中。     

不同时期糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞数量及功能的变化

目的观察不同时期糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞(EPC)数量及功能的变化。方法选择2012年11月至2014年4月河北省滦平县医院收治的糖尿病患者75例,根据眼底血管造影结果分为3组:无视网膜病变患者25例(A组)、非增生型网膜病变患者26例(B组)、增生型网膜病变患者24例(C组),并纳入同期健康体检者25例作为对照组。对比4组受检者的EPC数量及其黏附、迁移功能。结果对照组、A组、B组、C组的EPC数量分别为(0.018±0.005)%、(0.015±0.008)%、(0.012±0.010)%、(0.032±0.029)%,C组的外周血EPC数量均显著高于对照组、A组、B组(P<0.05)。黏附功能测定结果显示,对照组、A组、B组、C组的EPC数量分别为(0.331±0.042)个、(0.301±0.039)个、(0.220±0.040)个、(0.119±0.028)个,C组的EPC数量显著低于对照组、A组、B组,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell测定结果显示,对照组、A组、B组、C组的EPC数量分别为(25.2±5.3)个、(23.6±5.2)个、(16.8±4.5)个、(12.0±2.9)个,差异有统计学意义(P<0.05),C组的EPC数量显著低于对照组、A组、B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论增生型网膜病变患者的外周血EPC数量明显增多,糖尿病视网膜病变患者外周血EPC的黏附、迁移功能均受损。     

冠心病患者循环内皮祖细胞与基质细胞衍生因子-1α的变化

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)与血浆基质细胞衍生因子-1α(SPF-1α)在冠心病中的作用及其临床应用价值。方法将44例患者分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=12)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=14)、急性心肌梗死(AMI)组(n=11)及对照组(n=7)。采集患者外周血进行EPCs的分离培养,激光聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPCs的数量,测定EPCs的迁移和黏附能力。用酶联免疫吸附法检测各组血浆SDF-1α水平,比较其与循环内皮祖细胞的数量、迁移和黏附能力有无相关性。结果AMI组EPCs集落形成数是对照组的2.7倍,其迁移能力较其他3组升高(P<0.01),但其黏附能力与UAP组相比差异无统计学意义(P>0.05);UAP组患者EPCs数量及迁移能力较SAP组和对照组升高(P<0.01);SAP组患者EPCs数量及迁移、黏附能力均比对照组减低(P<0.05)。与对照组相比,UAP和AMI组患者血浆SDF-1α水平明显降低(P<0.01)。SDF-1α浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈负相关,与循环EPCs黏附能力无相关性。结论AMI(发病7d内)和UAP可引起循环EPCs数量增多,迁移和黏附能力增强,这种变化可能与冠状动脉粥样斑块不稳定、消耗循环SDF-1α有关。     

冠状动脉支架术后再狭窄发生机制的血管内超声观察

目的:应用冠状动脉造影(CAG)及血管内超声(IVUS)研究冠脉内支架术后再狭窄的发生机制. 方法:以成功留置冠脉内支架,于6 mo后进行复查的92名患者118处病变(其中前降支53处病变、回旋支32处病变、右冠状动脉33处病变)为对象,进行CAG及IVUS检查,以CAG直径狭窄率≥50%为支架内再狭窄. 根据冠状动脉造影结果将患者分为支架再狭窄组(39例)和无再狭窄组(79例),通过IVUS观察两组冠脉内支架术后及随访时参考段血管面积、最小支架截面积、最小血管内膜腔截面积、新生内膜面积、支架体积及新生内膜体积. 结果:两组支架置入术后即刻及随访时参考段血管面积、最小支架截面积、支架体积无显著性差异 (P>0.01),随访时再狭窄组最小血管内膜腔截面积较无再狭窄组明显减小[(2.3±1.1) mm2 vs (5.4±1.8) mm2, P＜0.01];而新生内膜面积及体积较无再狭窄组明显增大[(4.7±1.5)mm2 vs (1.6±0.8) mm2, (121.1±31.9) mm3 vs (54.3±11.4) mm3, P<0.01]. 结论:支架内再狭窄主要以内膜增生为主,而与血管重构及支架弹性回缩无明显关系.     

恒磁场对雷帕霉素作用下大鼠内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的 观察恒磁场对雷帕霉素作用下大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)增殖和迁移能力的影响.方法 密度梯度离心法获得SD雄性大鼠的骨髓EPC,无菌条件下培养6 d.实验分为5组:空白对照组、雷帕霉素(1 ng/ml)组及雷帕霉素+不同强度的恒磁场(0.1、0.5、1.0 mT)组.各组皆于24 h后收集标本,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖能力,改良的Boyden小室法测定EPC的迁移能力.结果 雷帕霉素组EPC增殖显著低于空白对照组(0.252±0.006 vs 0.328±0.025,P<0.05),EPC迁移能力显著降低(31±3 vs 48±5,P<0.05);0.5 mT和1.0 mT恒磁场组EPC增殖显著强于雷帕霉素组(0.278±0.008、0.280±0.010,P<0.05),EPC迁移能力显著高于雷帕雷素组(37±3、38±4,P<0.05).结论 0.5 mT和1.0 mT恒磁场有拮抗雷帕霉素的作用,可促进EPC的增殖和迁移.     

丹红注射液防治冠脉支架术后再狭窄的临床观察

目的探讨丹红注射液对冠心病患者冠脉支架植入术后再狭窄(in.stent restenosis,ISR)的影响。方法 78例实施经皮冠状动脉介入(percutaneous comnary inte nrernjon,PCI)治疗的冠心病患者,随机分为丹红治疗组(n=32)和对照组(n=46),对照组常规采用肠溶阿司匹林片和氯比格雷片口服,治疗组在此基础上静脉滴注丹红注射液,术后6个月常规行冠状动脉造影(cAG),比较两组支架植入术后再狭窄率的差别。结果 CAG示:治疗组冠脉支架术后再狭窄率明显低于对照组,两组相比差异有统计学意义(P<0.01),无论是普通支架亚组还是药物涂层支架亚组(DES)均有相似的结果(P均<0.01)。两组均无严重不良反应发生。结论丹红可明显降低冠脉支架术后再狭窄率,安全性良好。     

妊娠高血压综合征孕妇所生新生儿血清TNF-α水平与循环内皮祖细胞状态的相关性研究

目的分析妊娠高血压综合征患者所生新生儿血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与循环内皮祖细胞(EPC)水平的相关性。方法 2014年9月—2015年8月于华北石油总医院产科住院妊娠高血压综合征患者所生新生儿12例作为研究对象(观察组),同期入院的12例正常孕妇所生新生儿作为对照组。分别检测2组血清TNF-α水平及循环EPC数量;同时,分离外周血单个核细胞在体外进行诱导培养获得EPC,对其增殖、黏附和迁移能力进行检测。结果观察组新生儿血清TNF-α水平较对照组增高,而循环EPC数量则显著降低(t=2.68、1.68,P<0.05),并且TNF-α与EPC存在显著的负相关(r=-0.78,P<0.05);同时,观察组新生儿循环EPC的体外增殖、黏附和迁移能力较对照组均存在不同程度的下调(t=5.23、2.58、3.59,P<0.05),循环EPC的体外增殖、黏附和迁移能力均与其血清TNF-α水平呈现出明显的负相关(r=-0.76、-0.81、-0.73,P均<0.05)。结论妊娠高血压综合征患者体内高水平的TNF-α等炎性细胞因子能够进入胎儿体内,造成其循环EPC数量和功能的下调,从而影响其血管内皮的正常功能。     

丹酚酸B对离体内皮祖细胞黏附、趋化和增殖的影响*

[目的] 探讨中药单体丹酚酸B对离体内皮祖细胞(EPCs)黏附、趋化和增殖的影响.[方法] 密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs,免疫细胞化学法(CD34/CD133/)鉴定.丹酚酸B最佳药物浓度干预的EPCs,DiI染色法,Transewell小室与DAPI染色法和Brdu免疫细胞化学法测定EPCs的黏附、趋化和增殖能力.[结果]丹酚酸B组EPCs的黏附细胞数量为(37.00±3.27),24 h和48 h趋化的细胞数量分别为(26.32±2.66)和(53.41±3.85),增殖的细胞数量为(41.17±3.43),与对照组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).[结论] 丹酚酸B能够有效促进离体内皮祖细胞的黏附、趋化和增殖能力.     

脑出血急性期内皮祖细胞形态学和功能变化及其意义

目的 探讨高血压脑出血急性期患者外周血来源的内皮祖细胞动态形态学和功能变化及其意义.方法 分离、诱导分化高血压脑出血急性期患者和高血压患者外周血内皮祖细胞,动态观察两组内皮祖细胞形态学变化,检测两组患者内皮祖细胞集落和计数、黏附、增殖及迁移能力并进行对比研究.结果 高血压脑出血组内皮祖细胞集落计数为(5.87±0.55),细胞计数为(74.73±11.38),黏附能力为(26.13±5.13),增殖能力为(0.273±0.060),迁移能力为(15.83±2.02);高血压组内皮祖细胞集落计数为(1.73±0.24),细胞计数为(56.70±9.72),黏附能力为(19.97±3.07),增殖能力(0.192±0.058)而迁移能力为(10.33±2.30).两组相比,脑出血组内皮组细胞功能明显增强,具有显著性统计学差异(P<0.05或P<0.01).与高血压组相比,脑出血组内皮祖细胞和集落出现较早,集落体积较大和典型,细胞密度较大.结论 高血压脑出血急性期患者内皮祖细胞数目增多,黏附、增殖和迁移功能增强.这可能有助于血管损伤的修复和再生.     

Reduced number and activity of circulating endothelial progenitor cells from patients with hyperhomocysteinemia

BACKGROUND: Hyperhomocysteinemia (HHcy) contributes to atherosclerosis and coronary artery diseases by inducing endothelial cell injury and dysfunction. Recent studies provided increasing evidence that endothelial progenitor cells (EPCs) participated in ongoing endothelial repair. The changes of EPCs in patients with HHcy have not yet been elucidated. Therefore, we investigated the number and functional activity of EPCs in patients with HHcy. METHODS: Human EPCs were isolated and cultured from patients with HHcy (n = 30) and matched volunteers (n = 30). Circulating EPCs were enumerated as AC133+ KDR+ cells via fluorescence-activated cell sorter analysis. Additionally, EPC were expanded from human blood in vitro and identified by DiI-acLDL uptake and lectin staining by direct fluorescent staining under a laser scanning confocal microscope. EPC migration activities were determined by modified Boyden chamber assay. EPC adhesion assay was performed by replating cells on fibronectin-coated dishes and then counting adherent cells. RESULTS: A significant decrease was observed in circulating EPC (AC133+ KDR+ cells) numbers in patients with HHcy compared with control subjects (63.9 +/- 11.7 cells/mL vs. 91.5 +/- 14.2 cells/mL blood, p <0.01). In addition, the numbers of EPCs also decreased in patients with HHcy after ex vivo cultivation (36.1 +/- 6.5 vs. 51.5 +/- 8.3 EPCs/x200 field, p <0.01). Both circulating EPCs and differentiated EPCs were inversely correlated with total homocysteine levels. In addition, EPCs from patients with HHcy were significantly impaired in their migratory capacity and ability to adhere to fibronectin compared with controls. CONCLUSIONS: The present study demonstrated that EPC numbers and functional capacity were impaired in patients with HHcy.     

辛伐他汀影响内皮祖细胞数量、黏附及凋亡的研究

目的细胞水平观察不同浓度辛伐他汀对内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）功能的影响。方法采用密度梯度离心法从人外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板上,培养7天后,收集贴壁细胞,通过激光共聚焦显微镜鉴定,FITC—UEA—I和DiI—acLDL双染色阳性细胞为正在分化EPCs。以不同浓度辛伐他汀（分别为0．0001、0．001、0．01、0．1、1．0umol／L）和EPCs培养。分别采用黏附能力测定实验、碘化丙啶（PI）标记观察辛伐他汀对EPCs黏附与凋亡的影响。结果辛伐他汀显著提高了外周血EPCs的数量、黏附能力,并能抑制其凋亡。辛伐他汀浓度在0．01umol／L时对EPCs的数量、黏附功能和抗凋亡能力影响达到最大。随着药物浓度的继续增大,EPCs的上述功能反呈下降趋势,但0．1umoL／L组仍高于对照组。结论辛伐他汀能增加EPCs数量、黏附能力并能抑制其凋亡。     

循环中内皮祖细胞与原发性高血压的关系

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)数量和功能与原发性高血压的关系。方法对34例初诊原发性高血压患者以及30例健康人采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养7天后,收集贴壁细胞,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、粘附能力。结果原发性高血压患者循环中EPCs数量比治疗前明显减少(P<0.01),降压达标后原发性高血压患者EPCs数量增加,但与对照组相比,达标后原发性高血压患者EPCs数量仍然少(P<0.05)。原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损(P均<0.01);降压达标后的原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损没有完全恢复(P均<0.01)。结论原发性高血压患者循环EPCs数量减少,功能受损;血压增高是循环EPCs数量和功能改变的原因之一,循环EPCs数量和功能的改变可能还参与原发性高血压的发生和发展。     

两种内皮祖细胞修复兔颈动脉内膜损伤血管的对比研究

目的 观察比较外周血两种内皮祖细胞(EPC和EOC)移植对内膜球囊损伤血管的修复作用.方法 密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞(MNC).以不同的分离培养方法 ,获得兔外周血EPC和EOC.并将相同数量(5×105个)的EPC和EOC分别移植至兔内膜球囊损伤血管局部,对照组仅注入100 μl生理盐水.同时用亲脂性碳青染料标记两类细胞,进行细胞示踪.术后4周,处死动物,荧光显微镜下观察标记细胞的分布,并测量各组内膜损伤血管段再生内皮覆盖率和新生内膜增生程度.结果 术后4周,荧光显微镜下,在血管中膜、新生内膜层和内膜表面均可见荧光标记的细胞.EPC移植组和EOC移植组的再内皮化区域面积均显著大于对照组,差异有统计学意义(91.6%±3.6%、89.1%±6.3% vs 62.1%±7.5%,P＜0.01),但移植细胞组之间比较差异无统计学意义.结论 EPC移植或EOC移植均可显著加速内膜损伤血管的再内皮化,并减少新生内膜的形成,相等数量的两种内皮祖细胞移植表现出相近的效果.     

胰岛素对人脐血内皮祖细胞生物活性的影响

目的探讨胰岛素对人脐血内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,加入EGM-2培养液,接种于包被人纤连蛋白的培养皿中贴壁培养,收集48 h后的悬浮细胞重新贴壁培养至第7天,利用免疫荧光和流式细胞术鉴定。细胞随机分为对照组和不同浓度(0.1、1和10nmol/L)胰岛素处理组干预24 h,分别采用MTT比色法、Transwell法和细胞黏附实验来观察胰岛素对内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。结果与对照组相比,0.1、1、10nmol/L的胰岛素干预内皮祖细胞24 h能明显增强其增殖、迁移和黏附能力(P<0.05或P<0.01);其中胰岛素浓度为1nmol/L时增殖功能达到峰值,胰岛素浓度为0.1nmol/L时迁移和黏附功能达到峰值。结论生理浓度与较低浓度胰岛素能增强内皮祖细胞的增殖、迁移与黏附能力。     

冠通方对体外培养内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响

[目的]观察冠通方含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。[方法]将24只雄性Wistar大鼠随机分为冠通方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,加入各实验血清组培养液培养EPCs,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs,分别在不同作用时间（12h,24h,48h,72h）后,倒置相差显微镜下观察并比较各组EPCs的数量、增殖能力、迁移能力和粘附能力。[结果]与对照组相比,冠通方组可促进外周血EPCs扩增,并显著改善外周血EPCs的粘附、迁移和增殖能力。[结论]冠通方可增加EPC的数量并改善其功能,这可能是冠通方防治冠心病患者经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）加支架植入术后再狭窄的作用机制之一。     

老年性耳聋患者外周血EPCs数量及增殖变化研究

目的探讨老年性耳聋患者的外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量变化情况及增殖集落变化情况。方法测定老年性耳聋患者和听力正常健康老年人的外周血中内皮祖细胞数量及培养7 d后增殖集落数量。结果老年性耳聋组外周血中内皮祖细胞计数为(35.1±3.31)个/20万单个核细胞,听力正常健康老年人为(86.4±9.32)个/20万单个核细胞,EPCs增殖集落计数分别为(1.40±0.50)和(3.50±1.46)个/20万单个核细胞,两者比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论老年性耳聋患者内皮祖细胞数量及增殖集落数量较听力正常健康老年人降低,表明机体修复能力不能满足要求而导致血管损伤,从而引起耳聋等临床症状,人体内皮祖细胞改变对于研究老年性耳聋的治疗和研究均具有极大的促进作用。