EPC的变化与冠心病危险因素相关性的研究

目的观察冠心病患者外周血中提取的内皮祖细胞的细胞形态、数量、成集落数量与正常对照组的区别。并研究冠心病患者EPC的数量变化与冠心病危险因素的相关性。方法选择冠心病患者57例和对照组30例,从外周血获取单个核细胞,体外培养后进行细胞分析和计数。分析冠心病患者各种危险因素与EPC细胞数量和成集落的数量的相关分析。结果①冠心病患者外周血内皮祖细胞数量和细胞集落数较对照组明显减少;②将冠心病的危险因素与EPC的数量进行相关分析发现,年龄、吸烟、高血压及LDL升高与EPC的数量明显相关。结论冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和成集落的数量明显降低;冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量与冠心病危险因素相关。     

缺血性心脏病患者外周血中内皮祖细胞数量和功能的变化

目的:观察缺血性心脏病(ischemic heart disease, IHD)患者外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)数量及功能的变化.方法:IHD患者和对照者各23例,用密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,用流式细胞仪测量外周血中CD 细胞以鉴定EPCs.分别观察EPCs的粘附能力、迁移能力和体外生成血管能力.结果:IHD患者外周血中EPCs数量明显低于对照组,其粘附能力、迁移能力和体外生成血管能力也明显受损.结论:IHD患者外周血中EPCs数量降低且功能减退.     

脑出血急性期内皮祖细胞形态学和功能变化及其意义

目的 探讨高血压脑出血急性期患者外周血来源的内皮祖细胞动态形态学和功能变化及其意义.方法 分离、诱导分化高血压脑出血急性期患者和高血压患者外周血内皮祖细胞,动态观察两组内皮祖细胞形态学变化,检测两组患者内皮祖细胞集落和计数、黏附、增殖及迁移能力并进行对比研究.结果 高血压脑出血组内皮祖细胞集落计数为(5.87±0.55),细胞计数为(74.73±11.38),黏附能力为(26.13±5.13),增殖能力为(0.273±0.060),迁移能力为(15.83±2.02);高血压组内皮祖细胞集落计数为(1.73±0.24),细胞计数为(56.70±9.72),黏附能力为(19.97±3.07),增殖能力(0.192±0.058)而迁移能力为(10.33±2.30).两组相比,脑出血组内皮组细胞功能明显增强,具有显著性统计学差异(P<0.05或P<0.01).与高血压组相比,脑出血组内皮祖细胞和集落出现较早,集落体积较大和典型,细胞密度较大.结论 高血压脑出血急性期患者内皮祖细胞数目增多,黏附、增殖和迁移功能增强.这可能有助于血管损伤的修复和再生.     

普伐他汀对培养人内皮祖细胞药理作用的影响

目的观察普伐他汀对培养人内皮祖细胞（EPC）数量、增殖、迁移、黏附及一氧化氮（NO）合成能力的影响。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,贴壁筛选法培养内皮祖细胞,培养7d后收集细胞并分别加入普伐他汀10μmol／L及100μmol／L,干预48h,免疫组化、荧光显微镜和流式细胞仪鉴定内皮祖细胞,分别观察内皮祖细胞的数量、增殖迁移黏附能力、细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、mRNA的表达以及培养液中NO的水平。结果普伐他汀组促进外周血内皮祖细胞扩增,并显著改善外周血内皮祖细胞的黏附、迁移、增殖以及eNOSmRNA表达和NO合成的能力。结论他汀类药物可增加培养人内皮祖细胞数量并改善其功能。     

冠状动脉支架再狭窄患者循环内皮祖细胞数量及活性的变化

目的 观察冠状动脉支架再狭窄患者循环内皮祖细胞(EPC)数量及活性的变化.方法 根据复查冠脉造影的结果将既往行冠脉支架置入术的研究对象分为两组:再狭窄组(15例)及对照组(17例),采用密度梯度离心法获取外周血总的单个核细胞,接种到包被有人纤维连接蛋白的24孔培养板,7 d后通过免疫荧光显微镜鉴定细胞表面特异性抗原CD34和KDR,并通过激光共聚焦显微镜鉴定EPC摄取DiI-acLDL及结合FITC-UEA-Ⅰ的能力.通过倒置显微镜进行计数,通过划痕试验测定EPC的迁移能力,通过MTT比色法测定EPC的增殖能力,并通过黏附试验测定EPC的黏附能力.结果 再狭窄组的EPC数量明显低于对照组(4.97±1.42比17.2±3.90,P=0.001),再狭窄组的EPC增殖能力明显低于对照组(增殖倍数1.37±0.32比2.01±0.62,P＜0.05),再狭窄组的EPC迁移能力明显低于对照组,但两组之间的EPC黏附能力无明显的统计学意义.结论 冠状动脉支架再狭窄患者的EPC数量及增殖能力、迁移能力明显下降,可能参与支架再狭窄的发生机制.     

自发性高血压大鼠骨髓来源内皮祖细胞生物学特性研究

目的:观察14周龄自发性高血压大鼠(SHR)体外培养骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的变化。方法:随机将自发性高血压大鼠及正常血压WKY大鼠分为2组,每组各12只。以密度梯度离心法分离骨髓来源单个核细胞体外培养,差速贴壁法培养后收集二次贴壁细胞并行鉴定为骨髓来源内皮祖细胞,测定EPCs数量、增殖活力(CCK8法)、迁移、黏附能力和NO分泌功能。结果:14周龄SHR骨髓来源EPC数量与14周龄WKY大鼠比较明显减少(P<0.01),细胞增殖、迁移、黏附能力和NO分泌能力受损(P<0.01)。结论:14周龄SHR大鼠比Wistar大鼠骨髓来源内皮祖细胞数量减少,功能减退。     

内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力与端粒酶活性的关系

目的 观察体外培养外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移和黏附能力与EPCs端粒酶活性之间的关系.方法 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞(MNCs),接种至明胶包被的培养板上,培养7 d后进行细胞免疫组化鉴定EPCs,采用MTT比色法、Transwell小室和黏附能力测定实验,观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力.TRAP-PCR银染法检测EPCs端粒酶活性.结果 从人外周血能成功分离EPCs细胞.从冠心病患者分离的EPCs增殖、迁移、黏附能力较非冠心病患者下降.冠心病患者EPCs端粒酶活性较非冠心病患者低.结论 冠心病患者EPCs功能显著减弱.可能与EPCs端粒酶活性降低有关.     

降糖治疗对老年冠心病合并糖尿病患者外周血内皮祖细胞影响的研究

目的通过观察降糖治疗对老年冠心病合并糖尿病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的影响,为老年冠心病合并糖尿病患者的动脉粥样硬化治疗寻求新措施。方法以我院2012年4月-2013年1月接收诊治的47例老年冠心病合并糖尿病患者为降糖治疗组,45例健康者为对照组,采用流式细胞仪、DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I免疫荧光双染法和MTT比色法等进行鉴定计数、增殖功能、黏附功能和迁移功能检测,比较两组外周血内皮祖细胞数量与功能的差别,并且比较降糖治疗组治疗前后外周血内皮祖细胞的数量及功能的变化。结果降糖治疗组治疗前外周血内皮祖细胞数量和增殖、黏附和迁移功能均低于对照组,降糖治疗后与治疗前相比,CD34、CD133、VEGFR2、vWF、CD34/CD133细胞数量增加,增殖、迁移功能增强,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论老年冠心病合并糖尿病患者存在外周血内皮祖细胞数量减少及增殖、黏附和迁移功能的缺失,降糖治疗对体内受损的内皮祖细胞具有改善作用,有利于减缓冠状动脉粥样硬化进程。     

Klotho水平与小鼠月龄相关并抑制其骨髓源性内皮祖细胞衰老

目的 观察不同月龄小鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs) 数量和部分生物学功能以及外周血抗衰老蛋白klotho(Kl)表达水平,探讨Kl对体外培养的老龄小鼠EPCs数量和功能的影响.方法 采用Western-blot法测定不同月龄小鼠外周血Kl水平;以密度梯度离心法获取老龄小鼠单个核细胞与不同浓度的Kl孵育,分别采用acLDL-DiI 和 FITC-lectin 荧光双阳性细胞计数、MTT 分析和改良的 Boyden 小室法来检测其数量、增殖、迁移能力的变化.结果不同月龄小鼠EPCs数量和功能以及外周血Kl水平均与月龄呈负相关;不同月龄小鼠Kl表达水平与外周血EPCs数量及其增殖和迁移等生物学功能具有相关性;体外培养中Kl 可呈浓度依赖性上调EPCs的数量及其迁移能力、增殖能力.结论月龄增加可导致小鼠内皮祖细胞数量和功能下降,并下调肾脏和外周血Kl水平;Kl可增加体外培养的小鼠内皮祖细胞的数量,改善其功能.     

冠通方对体外培养内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响

[目的]观察冠通方含药血清对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响。[方法]将24只雄性Wistar大鼠随机分为冠通方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞,加入各实验血清组培养液培养EPCs,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为EPCs,分别在不同作用时间（12h,24h,48h,72h）后,倒置相差显微镜下观察并比较各组EPCs的数量、增殖能力、迁移能力和粘附能力。[结果]与对照组相比,冠通方组可促进外周血EPCs扩增,并显著改善外周血EPCs的粘附、迁移和增殖能力。[结论]冠通方可增加EPC的数量并改善其功能,这可能是冠通方防治冠心病患者经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）加支架植入术后再狭窄的作用机制之一。     

Reduced number and activity of circulating endothelial progenitor cells from patients with hyperhomocysteinemia

BACKGROUND: Hyperhomocysteinemia (HHcy) contributes to atherosclerosis and coronary artery diseases by inducing endothelial cell injury and dysfunction. Recent studies provided increasing evidence that endothelial progenitor cells (EPCs) participated in ongoing endothelial repair. The changes of EPCs in patients with HHcy have not yet been elucidated. Therefore, we investigated the number and functional activity of EPCs in patients with HHcy. METHODS: Human EPCs were isolated and cultured from patients with HHcy (n = 30) and matched volunteers (n = 30). Circulating EPCs were enumerated as AC133+ KDR+ cells via fluorescence-activated cell sorter analysis. Additionally, EPC were expanded from human blood in vitro and identified by DiI-acLDL uptake and lectin staining by direct fluorescent staining under a laser scanning confocal microscope. EPC migration activities were determined by modified Boyden chamber assay. EPC adhesion assay was performed by replating cells on fibronectin-coated dishes and then counting adherent cells. RESULTS: A significant decrease was observed in circulating EPC (AC133+ KDR+ cells) numbers in patients with HHcy compared with control subjects (63.9 +/- 11.7 cells/mL vs. 91.5 +/- 14.2 cells/mL blood, p <0.01). In addition, the numbers of EPCs also decreased in patients with HHcy after ex vivo cultivation (36.1 +/- 6.5 vs. 51.5 +/- 8.3 EPCs/x200 field, p <0.01). Both circulating EPCs and differentiated EPCs were inversely correlated with total homocysteine levels. In addition, EPCs from patients with HHcy were significantly impaired in their migratory capacity and ability to adhere to fibronectin compared with controls. CONCLUSIONS: The present study demonstrated that EPC numbers and functional capacity were impaired in patients with HHcy.     

冠心病患者内皮祖细胞与动脉弹性的相关性研究

目的 探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者内皮祖细胞(EPCs)数量及动脉弹性指数间的关系.方法 冠状动脉造影检查确诊的冠心病患者60例设为冠心病组.同期排除冠心病的健康体检者60名设为对照组.两组患者均采集外周血用密度梯度离心法获取单个核细胞,接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养贴壁后进行细胞化学分析.荧光显微镜鉴定异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-I)和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)双染色阳性细胞为正在分化的EPCs.进行EPCs水平测定,采用动脉弹性功能检测仪测定患者的大动脉弹性指数(C1)和小动脉弹性指数(C2).结果 冠心病患者EPCs数量及大、小动脉弹性指数分别为32.8±6.4、9.82±1.54、3.67±0.87,均低于对照组61.6±9.5、15.3±2.52、7.51±2.03,差异均有显著统计学意义(t19.48、14.37、13.47,均P＜0.01);冠心病患者EPCs水平与动脉弹性功能指数C1、C2呈正相关(r=0.94、0.98,均P＜0.01).结论 冠心病患者EPCs水平减低和动脉弹性指数下降是冠心病发病的一项独立危险因素,且两者之间呈正相关.     

冠心病患者循环内皮祖细胞与基质细胞衍生因子-1α的变化

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)与血浆基质细胞衍生因子-1α(SPF-1α)在冠心病中的作用及其临床应用价值。方法将44例患者分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=12)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=14)、急性心肌梗死(AMI)组(n=11)及对照组(n=7)。采集患者外周血进行EPCs的分离培养,激光聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPCs的数量,测定EPCs的迁移和黏附能力。用酶联免疫吸附法检测各组血浆SDF-1α水平,比较其与循环内皮祖细胞的数量、迁移和黏附能力有无相关性。结果AMI组EPCs集落形成数是对照组的2.7倍,其迁移能力较其他3组升高(P<0.01),但其黏附能力与UAP组相比差异无统计学意义(P>0.05);UAP组患者EPCs数量及迁移能力较SAP组和对照组升高(P<0.01);SAP组患者EPCs数量及迁移、黏附能力均比对照组减低(P<0.05)。与对照组相比,UAP和AMI组患者血浆SDF-1α水平明显降低(P<0.01)。SDF-1α浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈负相关,与循环EPCs黏附能力无相关性。结论AMI(发病7d内)和UAP可引起循环EPCs数量增多,迁移和黏附能力增强,这种变化可能与冠状动脉粥样斑块不稳定、消耗循环SDF-1α有关。     

冠心病患者PCI术前后循环内皮祖细胞变化

目的:研究冠心病患者经皮冠脉内介入治疗(percutaneous coronary intervention ,PCI)术前和术后外周血中循环内皮祖细胞(endothelial progenitors cells,EPCs)形态、数量的变化.方法:选择冠心病患者65例和对照组30例,分别在PCI手术前、术后即刻和术后4 d用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,用加入血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的RPMI-1640培养基培养细胞.用激光共聚焦显微镜初步鉴定DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素I双染色阳性细胞为EPCs,用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和KDR;相差显微镜下分析细胞形态数量变化和集落形成单位的数量.结果:冠心病患者PCI术后EPCs数目较术前明显增加,术后4 d开始下降;PCI术后即刻较术前有明显增强,术后4 d 有下降,但仍高于对照组,但PCI术前术后细胞集落形成单位的数量并无变化.结论:冠心病患者PCI手术可刺激EPCs数量的增加,在术后4 d逐渐回到术前状态.     

循环中内皮祖细胞与原发性高血压的关系

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)数量和功能与原发性高血压的关系。方法对34例初诊原发性高血压患者以及30例健康人采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养7天后,收集贴壁细胞,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、粘附能力。结果原发性高血压患者循环中EPCs数量比治疗前明显减少(P<0.01),降压达标后原发性高血压患者EPCs数量增加,但与对照组相比,达标后原发性高血压患者EPCs数量仍然少(P<0.05)。原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损(P均<0.01);降压达标后的原发性高血压患者EPCs的增殖、迁移、贴壁能力受损没有完全恢复(P均<0.01)。结论原发性高血压患者循环EPCs数量减少,功能受损;血压增高是循环EPCs数量和功能改变的原因之一,循环EPCs数量和功能的改变可能还参与原发性高血压的发生和发展。     

胎儿生长受限孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞数量与功能的变化

目的:观察胎儿生长受限(FGR)孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞(EPCs)数量与功能的变化.方法:选择FGR孕妇及新生儿15例和对照组健康孕妇及新生儿15例,密度梯度离心法收集外周血及脐血中单个核细胞(MNCs),接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导分化培养9 d后收集贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜下...     

sEHi对冠心病患者内皮祖细胞功能的影响

目的：观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor, sEHi)tAUCB对冠心病(CHD)患者外周血来源的内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells, EPCs)迁移、血管生成能力和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）表达的影响。方法：采用密度梯度离心法从CHD患者外周血获取单个核细胞培养7 d后,采用免疫荧光和流式细胞仪进行EPCs的鉴定;随后用不同浓度 (0, 10-6, 10-5, 10-4 mol/L) tAUCB干预24 h,分别用Transwell小室和Matrigel-Matrix管腔形成的体外模型检测其迁移、血管生成能力的变化,提取蛋白用Western印迹检测EPCs VEGF的表达。培养年龄性别匹配的健康对照者的EPCs作为对照组。 结果：与健康对照组相比,CHD患者EPCs的迁移及血管生成能力均显著下降 (P＜0.05);与处理前（0 mol/L tAUCB）相比,tAUCB呈浓度依赖性地显著增加CHD患者EPCs迁移、血管生成能力并促进CHD患者EPCs 表达VEGF。 10-6 mol/L tAUCB即明显增加CHD患者EPCs的上述功能并促进其VEGF的表达(P＜0.05)。结论：sEHi具有正向调节CHD患者EPCs功能的作用,其有望成为一类治疗CHD的新型药物。     

C反应蛋白对人外周血来源内皮祖细胞Notch信号通路表达影响的实验研究

目的观察C反应蛋白(cRP)对内皮祖细胞(EPC)中Notch信号通路表达的影响。方法密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞并培养,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染进行鉴定。取生长7～14 d EPC,分为对照组、10和20 mg/L CRP干预组,培养48 h后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力检测各组EPC增殖、迁移和粘附能力。采用RT-PCR检测不同浓度CRP对EPC中Notch信号通路mRNA的影响,Western blot检测各组Notch-1及其配体Jagged-1的蛋白基因表达。结果外周血分离获取的单个核细胞经体外培养后形成了典型的EPC集落,经荧光双染证实为EPC。CRP(10、20 mg/L)组EPC数量分别为(61±3)、(54±3)个,对照组EPC数量为(71±4)个。CRP各组EPC在490 nm吸光度值分别为0.287±0.046、0.211±0.042,对照组为0.386±0.044。与对照组相比,CRP各组EPC黏附数量和迁移数量均显著减少(P<0.05)。CRP处理48 h后EPC中Jagged-1和Notch-1 mRNA含量明显增加,其中10和20 mg/L组Jagged-1 mRNA分别升高了3.84和10.70倍,Notch-1 mRNA分别升高了2.97和3.58倍;差异均具有统计学意义(P<0.05)。10和20 mg/LCRP处理组Jagged-1和Notch-1蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论 CRP处理后EPC的Notch信号通路表达发生了显著的改变,提示该通路可能是CRP影响EPC生物学功能的机制之一。     

吡格列酮对外周血内皮祖细胞数量与增殖能力的影响

目的观察吡格列酮对外周血内皮祖细胞（EPCs）数量与增殖能力的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种于包被人纤维连接蛋白的培养板上,培养14d后收集贴壁细胞,加入不同浓度（10^-6、10^5、10^-4、10^-3mmol／L）UE格列酮分别培养24、48、72h,同时采用激光共聚焦显微镜鉴定,FITC—UEA—I和Dil—acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,并在倒置荧光显微镜下计数;后采用MTT比色法观察EPCs的增殖能力。结果在作用48h后,不同浓度的吡格列酮均增加了外周血EPCs数量和增殖能力;10^-5mmol／L毗格列酮作用48h时影响最为显著,EPCs数量和增殖能力（分别为54．0±2．9和0．593±0．033）明显高于对照组（分别为30．0±31和0．178±0.018）,差异均有统计学意义（均P〈0．01）.结论吡格列酮可增加EPCs数量并改善EPCs的增殖能力。